卵泡生长分化因子-9(GDF-9)在高胰岛素血症大鼠卵巢中的表达与意义

目的:探讨卵泡生长分化因子-9(GDF-9)在卵泡发育异常及激素水平变化等方面的作用机制。方法:①利用改良Poretsky方法建立高胰岛素血症动物模型(模型组,n=20):hCG×9d+胰岛素×22d。采用下列方法验证模型:测定空腹血糖、空腹胰岛素(FINS)、睾酮(T)、E2、LH、FSH,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA1-IR);测定大鼠体重及卵巢重量;HE染色方法观察卵巢病理变化。②采用免疫组化和RT-PCR法检测模型动物及正常对照组(n=20)卵巢组织GDF-9 mRNA及蛋白的表达。结果:①与对照组比较,模型组FPG、FINS、HOMA1-IR、T升高(P<0.05)。②组间体重无统计学差异,但模型组卵巢重量显著大于对照组(P<0.05)。模型组各发育阶段卵泡明显减少,但囊性扩张的卵泡和闭锁卵泡增多,卵泡膜细胞增生,卵泡间质明显增厚。③模型组卵巢组织GDF-9 mRNA和蛋白的表达均显著低于对照组(P<0.05)。结论:高胰岛素血症减弱卵巢组织GDF-9 mRNA和蛋白的表达强度;表达降低的GDF-9可能与PCOS卵泡发育异常及激素水平变化有关。     

生长分化因子-9及生长分化因子-9B与卵巢功能调节

生长分化因子-9及生长分化因子9B是转化生长因子的新成员,为由卵母细胞分泌的糖蛋白,两者结构基本相近。本文从其结构特点、在组织中的表达、对卵巢的生物调节作用,其在体细胞中的受体和信号通路进行了综述。     

生长分化因子-9与PCOS的卵泡发育异常

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种多起因、临床特征为多态性的综合征,卵泡发育异常为其重要特征。由卵母细胞所分泌的生长分化因子-9(GDF-9)是卵泡正常生长发育所必需的细胞因子,对早期卵泡正常生长、卵母细胞的有丝分裂、颗粒细胞的增殖、卵泡膜的形成均有促进作用,但GDF-9却在PCOS患者的卵巢中表达延迟、降低,因此,GDF-9在PCOS发生机制中所起的作用令人侧目。本文将在PCOS卵泡发育异常的基础上,综述PCOS与GDF-9的相关性研究。     

自然排卵、促排卵和超促排卵状态下小鼠卵巢组织中生长分化因子-9(GDF-9)的表达

目的:观察自然周期排卵、促排卵与控制性超促排卵(COH)状态下小鼠卵巢生长分化因子-9(growth differentiation factor,GDF-9)表达水平的变化情况。方法:成年雌性小鼠随机分为3组每组10只,分别为自然排卵组(对照组)、孕马血清(PMSG)促排卵组(PMSG组)、控制性超促排卵组(COH组),各组小鼠取排卵期卵巢组织,采用免疫组织化学方法检测GDF-9的表达与定位,并分别采用Western blottting和实时荧光定量PCR法,定量检测GDF-9蛋白与mRNA的含量。结果:各组小鼠卵母细胞与颗粒细胞中均检测到GDF-9的表达,PMSG组与COH组GDF-9蛋白与mRNA的表达水平均显著高于对照组(P<0.05),PMSG组的表达也明显弱于COH组(P<0.05)。结论:促排卵可促进小鼠卵巢GDF-9的表达,但COH降低促排卵小鼠卵巢GDF-9的表达。     

GDF-9及其受体在PCOS大鼠卵巢中的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)蛋白及其受体BMPR-ⅡmRNA在PCOS大鼠卵巢的表达。方法:皮下注射DHEA建立PCOS模型,用免疫组化法检测卵巢GDF-9表达;用RT-PCR法检测BMPR-ⅡmRNA的表达。结果:GDF-9主要于PCOS发育正常的初级、窦前、窦状卵泡卵母细胞胞浆中表达,表达强度与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。BMPR-ⅡmRNA相对含量则显著高于对照组(P<0.05)。结论:GDF-9是促进P- COS卵泡发育的主要原因;受体表达上调是诱导雄激素增高的原因之一。     

多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟培养后生长分化因子-9的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵母细胞体外成熟及胚胎发育的关系。方法:采集PCOS患者自然周期月经未成熟卵母细胞,经体外成熟培养(IVM)后,免疫组化比较不同成熟度的卵母细胞及其周围颗粒细胞中GDF-9的表达差异;同时收集行IVM后受精的胚胎以及同期因输卵管因素行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的胚胎及未受精的卵子,免疫组化比较这些胚胎中GDF-9表达的差异。结果:①IVM后共获弃卵70个,其中MII期21个、MI期26个、GV期23个,染色结果显示GDF-9的表达在培养后成熟的卵母细胞MII期中表达较MI期、GV期增强,差异有显著性;而MI期、GV期两组间表达无差异;②共对343个卵子的颗粒细胞进行了免疫组化染色,MII期、MI期、GV期、退变卵周围颗粒细胞中GDF-9表达的阳性率随着卵母细胞成熟度的降低,逐渐降低,退变卵中最低。③共获IVF弃胚胎75个,GDF-9在各期胚胎中的表达均为阳性,且各期胚胎间的表达水平无差异。④对62个IVF中未受精的弃卵进行了染色,结果显示GDF-9的表达水平较IVF胚胎降低,差异有显著性。⑤共获IVM弃胚胎57个,各期胚胎间GDF-9的表达也无显著性差异,但IVF组胚胎中GDF-9的表达水平较IVM组高,差异有显著性。结论:GDF-9可能与人类卵母细胞的体外成熟及胚胎发育有关。     

生长分化因子-9和骨形态发生蛋白-15与卵巢反应性的相关性研究

目的 探讨生长分化因子-9(growth differentiation factor-9,GDF-9)和骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein 15,BMP-15)在卵母细胞和卵冠丘颗粒细胞(cumulus granulosa cell,CGC)的表达与人卵巢反应性的关系.方法 应用免疫荧光结合激光共聚焦显微术检测31例卵巢中反应患者的34枚、23例高反应患者的29枚未成熟生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞GDF-9蛋白的表达,33例中反应患者的37枚、29例高反应患者的34枚第一次减数分裂中期(metaphase I,MI)的卵母细胞BMP-15蛋白的表达;应用免疫细胞化学方法检测两种蛋白在34例低反应、41例中反应和36例高反应患者第2次减数分裂中期(MII)CGC的表达.结果 卵巢中、高反应组间卵母细胞GDF-9的表达差异无显著性,卵巢高反应组"卵母细胞"BMP-15表达强度为(39.19±8.84)显著高于中反应组(29.23±7.83,P＜0.01),并与获卵数中度正相关,(r=0.492,P=0.002);卵巢不同反应组间CGC中GDF-9和BMP-15蛋白表达强度无统计学意义,但两种因子的表达呈中度正相关关系,(r=0.415,P=0.000).结论 卵巢高反应与卵母细胞BMP-15的表达升高有关;GDF-9和BMP-15共表达于CGC中,且具有同步性,并可能存在协同作用.     

控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。     

补肾调经方、逍遥丸对小鼠卵母细胞GDF-9表达的比较研究

目的:观察补肾法、疏肝法对小鼠卵母细胞生长分化因子-9(growth differerntiation factor-9,GDF-9)蛋白及mRMA表达的影响。方法:将300只小鼠随机分为6组:补肾高、低剂量组;疏肝高、低剂量组;控制性超促排卵(COH)组和空白对照组,每组50只,应用Western blotting和Real-time PCR方法分别测定卵母细胞中GDF-9蛋白和mRNA的表达,并对比各组小鼠卵母细胞数量及优质卵泡率。结果:各治疗组卵母细胞中GDF-9蛋白及mRNA表达显著高于空白对照组及COH组,其中高剂量组优于低剂量组(P0.05),COH组的GDF-9蛋白及mRNA表达较空白对照组降低(P0.05);各治疗组及COH组卵母细胞数量高于空白对照组(P0.05),治疗组中高剂量组卵母细胞数量高于低剂量组(P0.05);各治疗组及空白对照组优质卵泡率优于COH组(P0.05),治疗组中高剂量组的优质卵泡率优于空白对照组(P0.05)。结论:补肾调经方、逍遥丸在促性腺激素应用的基础上能增加卵母细胞数量及优质卵泡率,其机制可能与调控卵母细胞中GDF-9的蛋白及mRNA表达有关。     

胰岛素抵抗及高胰岛素血症与多囊卵巢综合征发病关系的探讨

目的:了解胰岛素抵抗(IR)及高胰岛素血症(HI)与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的关系.方法:选择诊断为PCOS的患者97例,分为高胰岛素血症组(HI组)60例和非高胰岛素血症(NHI组)37例.检测记录两组患者年龄、身高、体重、腰围、臀围、Ferrimarr-Gallwey(F-G)评分、痤疮评分及体重指数(BMI);放射免疫法测定血清促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、脱氢表雄酮(DHEA)、雄烯二酮(A)、空腹血糖(FPG)和胰岛素(FINS);行口服糖耐量试验(OGTT)和胰岛素释放实验(IRT).结果:97例患者中有60例伴有HI,HI组患者腰围、臀围及BMI均高于NHI组(P＜0.05),HI组30分钟、60分钟及120分钟血糖、IRT各时点FINS值、胰岛素曲线下面积(AUC)、稳态模型指数(HOMA)均明显高于NHI组(P均＜0.05),而胰岛素敏感性指数(ISI)则明显低于NHI组(P＜0.01).结论:IR与HI可促进PCOS患者肥胖尤其腹型肥胖的发生,并与PCOS糖代谢紊乱密切相关.早期干预对预防PCOS远期并发症具有积极意义.     

卵母细胞分泌的生长分化因子-9和骨形成蛋白-15与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨卵母细胞分泌的生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)与卵母细胞发育潜能的关系。方法:收集因输卵管性不孕接受IVF-ET治疗患者的卵泡,每侧卵巢穿刺取卵时首先选择一个直径≥18 mm卵泡抽吸,对卵母细胞进行成熟度分型,并观察其受精、卵裂及胚胎评分情况。受精后按是否形成优质胚胎将将卵泡分为优质卵母细胞组和非优质卵母细胞组,采用Western blotting方法检测比较各组卵泡液中GDF-9和BMP-15的含量。结果:①优质卵母细胞组的GDF-9蛋白相对含量为2.498±0.133,非优质卵母细胞组为1.305±0.406,差异有统计学意义(P=0.008)。②优质卵母细胞组的BMP-15蛋白相对含量为3.379±0.482,非优质卵母细胞组为1.336±0.214,差异有统计学意义(P=0.003)。结论:在优质卵母细胞组卵泡液中GDF-9和BMP-15水平均较高,提示人卵泡液中GDF-9、BMP-15水平可以反映卵母细胞的发育潜能,GDF-9、BMP-15水平可以作为评价卵母细胞质量的指标。     

生长分化因子-9和骨形成蛋白-15对多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡的影响

目的探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达对卵丘细胞凋亡的影响。方法收集本院行卵胞质内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS组(n=30)和对照组(n=60)患者的卵丘细胞。TUNEL法及流式细胞术检测卵丘细胞凋亡;免疫组织化学方法检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15蛋白表达,运用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统对染色强度定量分析;Real-time PCR技术检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15、B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL)-2、BCL-2相关X蛋白(BAX)mRNA表达。结果 PCOS组穿刺卵泡数、获卵数高于对照组(P0.01);PCOS组卵丘细胞凋亡率高于对照组(P0.05);GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组卵丘细胞胞质中均呈阳性表达;PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15、BCL-2、BAX mRNA的表达低于对照组(P0.05),BAX/BCL-2比值高于对照组(P0.05)。Pearson相关分析结果显示PCOS患者GDF-9、BMP-15与BCL-2 mRNA表达呈正相关,与BAX mRNA的表达呈负相关。结论 PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15异常表达可能是卵丘细胞凋亡增加的原因之一。     

多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗/高胰岛素血症与子宫内膜癌

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是以排卵稀发、无排卵,高雄激素血症及胰岛素抵抗为特征的内分泌、代谢紊乱症候群。胰岛素抵抗及其伴随的高胰岛素血症是PCOS患者重要的病理生理改变。由于胰岛素具有促进内膜细胞增殖,抑制内膜细胞凋亡,促进胰岛素样生长因子及血管内皮生长因子生成,促进黄体生成素释放激素及促黄体生成素生成及降低体内脂联素水平等作用,可能是PCOS患者罹患内膜癌的危险因素,故对PCOS患者胰岛素抵抗/高胰岛素血症与子宫内膜癌的关系进行探讨。     

高胰岛素血症在多囊卵巢综合征发病中的作用及抗胰岛素的治疗

目的探讨高胰岛素（ＩＮＳ）血症在多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）发病中的作用及二甲双胍对ＰＣＯＳ的治疗效果。方法将２３例ＰＣＯＳ病人分为肥胖组（１２例）和非肥胖组（１１例）,于服二甲双胍前及服二甲双胍８～１２周后,应用放射免疫法测定基础状态下雄激素、黄体生成素（ＬＨ）、性激素结合球蛋白及促性腺激素释放激素激动剂（ＧｎＲＨａ）刺激后,血１７α羟孕酮（１７ＯＨＰ）和ＬＨ的水平、口服糖耐量试验（ＯＧＴＴ）中血ＩＮＳ水平。结果用药后肥胖组空腹血ＩＮＳ水平和非肥胖组ＯＧＴＴ时血ＩＮＳ反应曲线下面积均明显下降;两组基础状态下的血１７ＯＨＰ、雄烯二酮（Ａ）、睾酮（Ｔ）水平均显著下降、性激素结合蛋白水平显著增加;ＬＨ基值及ＧｎＲＨａ刺激后的ＯＨＰ和ＬＨ值均无明显变化。结论高ＩＮＳ血症在ＰＣＯＳ的高雄激素血症起重要作用,二甲双胍可用于ＰＣＯＳ的治疗     

脂联素与多囊卵巢综合征高胰岛素血症的相关性研究

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清脂联素水平与高胰岛素血症(HI)的关系。方法将2003年12月至2004年6月郑州大学第三附属医院确诊的40例PCOS患者,根据空腹血胰岛素水平将其分为PCOS-HI组(INS>15mU/L)22例,PCOS非HI组(INS≤15mU/L)18例,并选择25例健康者为对照组。采用酶联免疫吸附法测定3组空腹血脂联素水平,化学发光法测定胰岛素、性激素,葡萄糖氧化酶法测定血糖。计算3组胰岛素敏感指数(ISI),评价胰岛素抵抗程度。结果PCOS-HI组血清脂联素水平(1.80±0.48)mg/L,PCOS非HI组(2.79±0.50)mg/L,明显低于对照组的(3.94±0.66)mg/L,且PCOS-HI组低于非HI组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS-HI组ISI(-4.41±0.32),PCOS非HI组(-3.97±0.40),明显低于对照组的(-3.21±0.43),差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS-HI组空腹胰岛水平(19.88±5.62)mU/L,PCOS非HI组(10.63±4.50)mU/L,明显高于对照组的(8.03±3.98)mU/L,且PCOS-HI组高于非HI组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS-HI组空腹血糖(5.24±0.58)mmol/L,PCOS非HI组(5.10±0.62)mmol/L,对照组(5.07±0.59)mmol/L,3组比较差异无显著性意义。PCOS患者血清脂联素水平与INS呈显著负相关,与ISI呈正相关。结论PCOS患者血清脂联素水平降低与INS呈显著负相关,提示脂联素影响PCOS-HI的发生和发展。     

GDF-9和BMP-15在PCOS患者卵母细胞和卵冠丘细胞的表达研究

目的探讨卵源性因子生长分化因子-9(GDF-9)和骨形态发生蛋白-15(BMP-15)在行体外受精-胚胎移植PCOS患者卵母细胞和卵冠丘颗粒细胞(cumulus granulosa cell,CGC)中的表达情况.方法按1∶4比例收集因男方因素行ICSI后废弃的PCOS患者和对照组患者未成熟生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞或第一次减数分裂中期Ⅰ(metaphase Ⅰ,MⅠ)期卵母细胞.运用免疫荧光结合激光扫描共聚焦显微镜(LCSM)对GV期卵母细胞GDF-9蛋白的表达进行检测,对MI期卵母细胞进行BMP-15蛋白表达的检测;应用免疫细胞化学方法检测两种因子在MⅡ期CGC的表达.结果GDF-9和BMP-15在PCOS患者和对照组患者卵母细胞的表达差异无显著.GDF-9在PCOS患者CGC的表达强度为5.01±0.83,显著低于对照组患者的8.88±1.52,P＜0.05.BMP-15在PCOS患者CGC的表达与照组患者比较差异无显著.结论PCOS患者促排卵治疗后卵母细胞GDF-9和BMP-15表达无差异,而CGC GDF-9表达低提示促排卵治疗改善了PCOS卵泡的生长,但可能导致过早黄素化.     

抑制素-卵泡抑素-激活素系统与多囊卵巢综合征高胰岛素血症的相关性分析

高胰岛素血症(HIS)是许多肥胖和非肥胖多囊卵巢综合征(PCOS)患者的一个显著临床表现，据不完全统计，PCOS患者约50%～60%伴有HIS。HIS在PCOS的发病中起着重要作用。近年来，国外研究发现，抑制素-卵泡抑素-激活素(INH-FS-ACT)系统参与PCOS的发生，但对该系统与PCOS合并HIS的关系尚无定论。抑制素B（INHB)和激活素A(ACTA)分别是排卵前卵泡中INH和ACT的主要形式，本研究测定了38例PCOS患者INH-FS-ACT系统的变化，现将结果报道如下。     

多囊卵巢综合征患者卵泡发育不良与干细胞因子表达水平的相关性研究

目的:研究辅助生殖治疗的多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵泡中干细胞因子(SCF)、生长分化因子-9(GDF-9)和骨形态发生蛋白-15(BMP-15)的表达水平与卵泡发育异常的关系。方法:收集30例PCOS患者和40例正常对照者的卵泡液和颗粒细胞。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测卵泡液中SCF、GDF-9和BMP-15的表达水平,采用免疫荧光染色法测定颗粒细胞中SCF的表达水平。结果:PCOS患者(n=30)卵泡液中GDF-9、BMP-15和SCF的浓度均明显低于正常对照组(n=40),差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,PCOS患者颗粒细胞中SCF的表达水平显著下降(P0.05)。结论:PCOS患者卵泡液中GDF-9、BMP-15和SCF的表达均明显降低,并且PCOS患者颗粒细胞中SCF的表达也显著下降,这可能与其卵泡发育不良有关。     

输卵管积水处理前后窗口期子宫内膜人白血病抑制因子（LIF）和白介素-2（IL-2）的表达

目的探讨输卵管积水预处理对改善窗口期子宫内膜的意义。方法选择输卵管积水患者17例为A组,输卵管积水处理（包括输卵管切除术及输卵管根部切断术）后的患者9例为B组,应用免疫组化法测定两组患者窗口期子宫内膜人白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）和白介素-2（IL-2）的表达情况。结果LIF在A组患者的窗口期子宫内膜的表达明显低于B组（P〈0.05）,而IL-2在A组患者的窗口期子宫内膜的表达明显高于B组（P〈0.05）。结论输卵管积水的患者窗口期子宫内膜LIF的低表达及IL-2的高表达可能是影响输卵管积水患者IVF-ET结局的因素之一。     

层粘连蛋白、基质金属蛋白酶-9在卵巢粘液性肿瘤中的表达及其意义

目的 :探讨层粘连蛋白 (LN)、基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在卵巢粘液性肿瘤中的表达以及与临床病理因素和预后的关系。方法 :应用免疫组织化学方法检测 43例卵巢粘液性肿瘤LN、MMP 9的表达情况。结果 :LN、MMP 9的表达 ,在卵巢粘液性肿瘤从良性、交界性到恶性发展中 ,LN的表达级别和MMP 9的表达阳性率逐渐增高 ;LN的表达程度与卵巢粘液性囊腺癌的组织学分级有关 (P =0 0 0 0 ) ;MMP 9的表达与卵巢粘液性囊腺癌的组织学分级 (P =0 0 48)、FIGO分期 (P =0 0 47)、术后复发和死亡 (P =0 0 30 )有关。在卵巢粘液性囊腺癌中 ,LN的表达程度在MMP 9阳性组与MMP 9阴性组之间差异有显著性 (P =0 0 0 8) ,并呈正相关。结论 :LN、MMP 9在卵巢粘液性肿瘤的浸润转移中起重要作用 ,是卵巢粘液性肿瘤的恶性指标之一 ,可望作为交界性粘液性囊腺瘤及粘液性囊腺癌的诊断和分级的客观指标 ;MMP 9可协助临床估计预后。