整合素β-1对绒毛膜癌细胞耐药的影响

目的:探讨耐药绒毛膜癌细胞粘附分子β-1整合素的表达以及其对细胞凋亡的影响,并寻找逆转耐药的途径.方法:采用人绒毛膜癌细胞株JER及耐足叶乙甙细胞株JEG,免疫组化方法检测绒癌细胞和耐药细胞β-1整合素的表达;MTT法、TUNEL法检测其对细胞凋亡的影响.结果:敏感细胞JER、耐药细胞JEG中均有β-1整合素的表达,但耐药细胞的β-1整合素表达总体水平高于敏感细胞(P<0.01);在敏感细胞及耐药细胞中加入纤维粘连蛋白FN其凋亡率与未结合FN的细胞相比有明显差异(P<0.01);在敏感细胞及耐药细胞中加入抗β-1整合素抗体阻断细胞与β-1整合素的结合,同时加入纤维粘连蛋白FN,其凋亡率与只加入FN时相比差异有显著性(P<0.01).结论:耐药绒癌细胞β-1整合素表达增加,成为耐药表型;其机制主要通过抑制细胞凋亡产生耐药;阻断其作用可以逆转肿瘤耐药.     

TGF-β1对人绒毛膜癌细胞上皮间质转化及其迁移能力的促进作用研究

目的 观察TGF-β1对人绒毛膜癌细胞肿瘤干性标记物CD133表达的促进作用,探讨其对上皮间质转化(EMT)相关标志物基因表达及迁移能力的影响.方法 体外培养人绒癌细胞系JEG-3,经不同浓度和不同时间TGF-β1作用后,采用Western blotting检测CD133表达情况,RT-PCR检测EMT相关标志物mRNA表达情况,并采用Transwell侵袭实验检测TGF-β1对绒癌细胞迁移能力的影响.结果 TGF-β1可促进绒癌细胞中肿瘤干性标记物CD133的表达,下调上皮细胞标志物E-cadherin mRNA的表达,上调间质细胞标志物N-cadherin mRNA的表达,并可增强绒癌细胞的迁移能力.结论 TGF-β1可增强绒癌细胞的干性特征,促进其上皮间质转化并提高其迁移能力.     

外源性白介素12逆转绒毛膜癌细胞JAR/MTX耐药的作用

目的探讨外源性白介素12(IL-12)对绒癌耐药细胞株JAR/MTX的逆转耐药效应。方法将体外培养的绒癌耐药细胞株JAR/MTX分为四组:(1)对照组;(2)化疗组;(3)细胞因子组;(4)化疗+细胞因子组。加药后培养12、24 h,用MTT法检测药物的细胞毒性,用RT-PCR及Western Blot法检测MDR1mRNA和P-gp的表达情况,用流式细胞术检测细胞内底物萤光值强度的变化。结果 (1)外源性IL-12对JAR/MTX的生长抑制作用明显强于甲氨蝶呤(MTX),两药联用后细胞对MTX的敏感性增强。(2)四组细胞MDR1mRNA及P-gp的表达量比较没有明显差别(P>0.05)。(3)加入外源性IL-12的细胞株,胞内底物荧光值强度显著增加(P<0.05)。结论外源性IL-12可通过下调细胞内P-gp的活性来逆转绒癌耐药细胞株JAR/MTX对MTX的耐药效应。     

甲状腺素通过ERK1/2通路促进整合素αvβ3阳性分化型甲状腺癌进展的研究

目的探讨甲状腺素(T4)能否通过整合素αvβ3影响分化型甲状腺癌(DTC)细胞增殖、转移潜能及其分子机制。方法体外培养甲状腺乳头状癌TPC-1、K1及甲状腺滤泡状癌(FTC)133细胞株, 采用免疫荧光和流式细胞术分析细胞表面整合素αvβ3的表达水平。给予T4、四碘甲状腺乙酸(Tetrac)、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽单独或联合处理DTC细胞后, 应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法及Transwell小室迁移和侵袭实验检测细胞增殖和转移潜能的变化。通过小干扰RNA(siRNA)转染模型验证整合素αv或β3亚基沉默能否逆转T4对DTC细胞的作用。利用Western blot法检测下游信号蛋白磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)1/2、总细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的表达水平。应用丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)1/2的抑制剂GSK1120212阻断ERK1/2磷酸化, 检测其对T4处理细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。多组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用Tukey法。结果 TPC-1、K1和FTC133细胞整合素αvβ3表达均呈阳性, 相对平均荧光强度...     

人卵巢癌拓扑替康耐药细胞株SKOV3/TPT的建立及生物学特性的研究

目的建立人卵巢癌拓扑替康（TPT）耐药细胞株（SKOV3／TPT）,研究其生物学特性和耐药特点。方法模拟临床用药特点,采用大剂量TPT（2160ng／ml）冲击建成人卵巢癌SKOV3／TPT耐药细胞株。MTT法检测多药耐药性,流式细胞仪测定细胞周期、胞内药物的积聚及P糖蛋白（Pgp）表达,从生长曲线、光镜下形态、超微结构等方面比较耐药细胞和SKOV3细胞某些生物学特性的差异。结果成功建立了SKOV3/TPT耐药株,耐药指数为10．67,对喜树碱、米托蒽醌及长春新碱有明显的交叉耐药,对紫杉醇、顺铂、5氟尿嘧啶、足叶乙甙和甲氨蝶呤敏感。与SKOV3细胞相比,SKOV3/TPT耐药细胞倍增时间延长;G2＋M期的比例明显增加（P〈0．01）;细胞内TPT浓度明显减少（P〈0．05）;无Pgp过表达。结论SKOV3/TPT细胞株呈中等水平耐药,耐药性稳定,呈非典型的多药耐药特征;对TPT耐药的主要原因可能与细胞内药物浓度降低和细胞周期改变及凋亡有关,与Pgp的过表达无关。     

CMH为KBv_(200)耐药相关中性鞘糖脂

为了研究耐药细胞株KBv2 0 0 中性鞘糖脂表达的规律 ,采用改良的Hakomori法提取、纯化了KB及其耐药细胞株KBv2 0 0 的中性鞘糖脂 ,行高效薄层层析 ,分析其含量的异同 ;并以糖脂合成抑制剂PPMP抑制KBv2 0 0 中性鞘糖脂的合成 ,观察了其对KBv2 0 0 耐药性的逆转作用。结果发现 ,KBv2 0 0 的CMH和CDH表达较KB强 ,尤以CMH为著 ,PPMP能抑制KBv2 0 0 细胞CMH的合成 ,并能逆转KBv2 0 0 对长春新碱 (VCR)的耐药性。说明CMH为KBv2 0 0 耐药相关中性鞘糖脂 ,抑制耐药细胞CMH的合成可能是逆转肿瘤多药耐药的一种新方法。     

腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对逆转卵巢癌顺铂耐药的效果

 目的 探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达逆转卵巢癌顺铂耐药的效果。方法 采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流式细胞仪检测等方法,绘制顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3/DDP细胞感染重组病毒前后其顺铂的IC₅₀值、细胞凋亡形态及细胞各周期的分布。结果 (1)顺铂浓度与SKOV3/DDP细胞抑制率呈线性正相关,相关系数r=0.9862(P<0.05),顺铂IC₅₀为(13.93±0.37)μg/ml,耐药指数为1.79。(2)重组腺病毒感染后干扰ERCC1基因表达,SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性分别增加了11.1%、16.7%、26.4%、33.5%,呈剂量依懒性(r=0.9716,P<0.05),耐药指数降至1.19。(3)重组腺病毒联合顺铂作用后,SKOV3/DDP细胞株G₁期细胞比例增大,S期细胞比例增大,细胞凋亡率增高(P<0.05)。结论 干扰ERCC1基因表达可以通过诱导耐药肿瘤细胞SKOV3/DDP凋亡、调节细胞周期分布等途径逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药。     

PPMP调控KBv_(200)细胞株mdr1基因表达逆转其多药耐药

为研究糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇 (DL threo 1 phenyl 2 palmitoylamino 3 morpholi no 1 propanol·HCl,PPMP)对人恶性肿瘤多药耐药细胞株KBv2 0 0 多药耐药mdr1基因的mRNA表达的调控 ,以及PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药性的逆转作用 ,作者应用体外细胞培养技术对细胞株KBv2 0 0 进行PPMP处理 ,用RT PCR技术分析PPMP处理前后细胞mdr1的mRNA表达 ,以流式细胞仪检测PPMP处理前后KBv2 0 0 及其敏感株KB细胞内罗丹明 12 3的药物浓度变化。结果显示 5 μmol/L、15 μmol/LPPMP可部分抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ,2 5 μmol/LPPMP可完全抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ;PPMP可增加KBv2 0 0 细胞内罗丹明荧光强度 ,随着PPMP浓度的增加 ,耐药细胞内的罗丹明荧光强度逐渐增大。提示PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药基因mdr1有抑制作用 ,并可以逆转KBv2 0 0 的多药耐药性 ,逆转作用与PPMP浓度呈正相关     

卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转前后HLA、B7表达的实验研究

目的 :探讨卵巢癌多药耐药 (multidrugresistance ,MDR)细胞的免疫逃逸机制。方法 :利用三苯氧胺 (TAM)和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,运用MTT法分析了TAM、ARP的逆转效应。采用流式细胞仪技术检测耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的HLA -Ⅰ、HLA -Ⅱ、B7-1、B7-2的表达。结果 :COC1/DDP和COC1均表达较强的HLA -Ⅰ类抗原 ,而HLA -Ⅱ、B7-1、B7-2的表达较较低。但COC1/DDP的B7-1、B7-2抗原的表达却高于COC1。经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,但HLA、B7的表达无明显变化。结论 :TAM、VRP可以逆转卵巢癌的MDR细胞 ,敏感株细胞和多药耐药细胞有着不同的免疫逃逸机制 ,与耐药株相比 ,敏感株细胞更易逃避机体的免疫反应 ,过继免疫疗法可用于耐药肿瘤     

缺血预处理对急性肾缺血再灌注细胞凋亡及ET-1表达的影响

目的：探讨缺血预处理对急性肾缺血再灌注细胞凋亡及ET-1蛋白表达的影响。方法：采用8min缺血＋5min再灌预处理方式;Wistar大鼠分为5组：正常（A）、假手术（s）、缺血（B）、再灌（C）、预处理（D）;检测凋亡和细胞增殖周期及肾皮、髓质ET-1蛋白表达。结果：与再灌注组相比,预处理组细胞凋亡率降低（P〈0．01）,ET-1表达降低（P〈0．01）,细胞增殖指数降低（P〈0．01）,G0／G1时段增加（P〈0．01）。结论：缺血预处理可通过降低ET-1蛋白的表达和调节细胞增殖周期而抑制肾缺血再灌注细胞凋亡。     

奥氮平对淀粉样β蛋白25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用机制。方法以Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率,应用Western blot检测Aβ25-35以及奥氮平对PC12细胞Bax、Caspase-3表达的影响,结果10^-14～10^-5mol／L的Aβ25-35减低PC12细胞存活率,50μmol／L及100μmol／I。奥氮平预处理24h可提高PC12细胞存活率,相同浓度Aβ25-35奥氮平预处理组与非处理组比较差异显著（P〈0．05）;0．01、2、20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Bax表达增加,50μmol／L奥氮平预处理使0．01μmol／L和20μmol／L Aβ25-35诱导的PC12细胞Bax的表达减低（P〈O．05）;2μmol／L及20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Caspase-3的表达增高,5μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高,与非预处理比较差异显著（P〈O．05）。结论奥氮平可对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达有关。     

骨化三醇对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的骨化三醇在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）表型转化中的作用。方法体外传代培养NRK52E后按以下分组加入不同干预因素,骨化三醇终浓度为10-6mmol/L,AngⅡ终浓度为10-6mmol/L,①对照组：NRK52E培养液中不加入干预因素;②AngⅡ组：NRK52E培养液中加入AngⅡ;③骨化三醇组：NRK52E培养液中加入骨化三醇;④AngⅡ＋骨化三醇组：NRK52E培养液中加入AngⅡ和骨化三醇。经AngⅡ和骨化三醇干预12、24、48h后,应用细胞免疫化学染色法检测E-钙粘蛋白（E-cadherin）和α-肌动蛋白（α-SMA）的表达,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤维粘连蛋白（FN）的表达。结果①与对照组比较,AngⅡ作用48h后,E-cadherin的表达减弱（P〈0.05）,α-SMA的表达显著增强（P〈0.05）,同时加入AngⅡ和骨化三醇后,与AngⅡ组比较,E-cadherin的表达增强（P〈0.05）,α-SMA的表达减弱（P〈0.05）;②AngⅡ作用48h后,细胞上清液细胞外基质成分FN、ColⅠ含量在AngⅡ组较对照组明显升高（P〈0.05）,同时加入骨化三醇和AngⅡ后,与AngⅡ组比较,FN、ColⅠ分泌有明显减少（P〈0.05）。结论①骨化三醇能抑制AngⅡ诱导的NRK52E细胞的表型的转化;②骨化三醇能减少血管紧张素Ⅱ诱导的NRK52E细胞外基质FN、ColⅠ的分泌。     

CMH为KBv200耐药相关中性鞘糖脂

为了研究耐药细胞株KBv200中性鞘糖脂表达的规律，采用改良的Hakomori法提取、纯化了KB及其耐药细胞株KBv200的中性鞘糖脂，行高效薄层层析，分析其含量的异同；并以糖脂合成抑制剂PPMP抑制KBv200中性鞘糖脂的合成，观察了其对KBv200耐药性的逆转作用。结果发现：KBv200的CMH和CDH表达较KB强，尤以CMH为著，PPMP能抑制KBv200细胞CMH的合成，并能逆转KBv200对长春新碱（VCR）的耐药性。说明CMH为HBv200耐药相关中性鞘糖脂，抑制耐药细胞CMH的合成可能是逆转肿瘤多药耐药的一种新方法。     

阿托伐他汀通过激活PPARa信号通路抑制老年大鼠心肌IL-1β表达

目的：观察阻断老年大鼠心肌细胞过氧化物酶体增殖物激活型受体a（PPARα）信号通路对白细胞介素-1β（IL-1β）表达水平的影响。方法：将培养的老年大鼠心肌细胞分为空白对照组、溶剂对照组、阿托伐他汀组、PPAR拮抗剂GW6471＋阿托伐他汀组。分别加入细胞培养液、二甲基亚砜（DMSO）、阿托伐他汀、阿托伐他汀＋PPARa拮抗剂GW6471。用RT-PCR和western blot方法检测各组细胞IL-1βmRNA和IL-1β蛋白含量。结果：①与空白对照组相比,溶剂对照组大鼠心肌细胞IL-1βmRNA表达水平和蛋白含量均无显著差异（P〉0．05）;②与空白对照组相比,阿托伐他汀组IL-1βmRNA表达水平和蛋白含量均显著降低（P〈0．01）;③GW647l＋阿托伐他汀组IL-18mRNA表达水平及蛋白含量均显著高于阿托伐他汀组（P〈0．05）,但仍低于空白对照组（P〈0．05）。结论：阿托伐他汀抑制老年大鼠心肌细胞IL-1p表达的作用可能与其激活PPARα信号通路有关。     

FN及其受体整合素α5在小鼠肾小体发育过程中的表达

目的 观察细胞外基质的重要成分纤维粘连蛋白(FN)及其受体整合素α5在小鼠肾小体发育过程中的表达,探讨它们在肾小体发育过程中的作用和相互之间的关系.方法 选取胚龄(E)12、14、16、18d和生后日龄(P)1、3、7d共7组小鼠,每组8只.E12d组小鼠取全胚,其余各组小鼠取左侧肾脏经固定、脱水、定向包埋等步骤后制备石蜡切片,行免疫组织化学染色和体视学分析.取各组小鼠右侧肾脏液氮速冻后,-80℃保存,用免疫印迹方法 检测FN和整合素α5的含量.结果 免疫组织化学染色结果 显示,FN表达于除逗号小体以外的各期肾小体基膜.整合素α5在不同胚日龄小鼠肾小体的上皮细胞和内皮细胞都有一定程度表达.体视学测量结果 显示FN表达的面密度值和整合索α5表达的体密度值都随着肾脏的发育逐渐增大.免疫印迹结果 显示,FN和整合素α5蛋白的含量都随肾脏的发育而逐渐增加.结论 FN和整合素α5在小鼠肾小体的发育和成熟过程中具有一定的时空性表达,对肾小体基膜的发育起一定作用.     

辐射促进多药耐药反义寡核苷酸逆转耐药的实验研究

目的探讨辐射促转染的多药耐药基因（mdr1）反义寡核苷酸（ASON）逆转肿瘤细胞KBv200的耐药效果。方法应用MTT法比较脂质体介导的ASON直接转染与联合辐射转染的情况下KBv200细胞对长春新碱（VCR）的半数抑制量（IC50），再利用RT-PCR方法和流式细胞仪检测两种不同的转染方法对KBv200细胞的mdr1-mRNA及其表达产物P-糖蛋白（P-gp）的调控情况。采用耐药细胞株KBv200移植于裸鼠皮下，肿瘤局部2Gy^60Coγ射线照射后1h，瘤内注射脂质体介导的mdr1ASON，经VCR联合化疗。结果联合照射的ASON组明显优于未照射组（P〈0．05）。KBv200细胞的IC50、mdr1-mRNA的表达水平及P-gp的阳性率，均明显低于未照射组（P〈0．05）。联合照射组与未照射组肿瘤体积和肿瘤重量差异有统计学意义（P〈0．01）。结论辐射促转染的mdr1 ASON对肿瘤细胞具有较强的耐药逆转作用。     

Smac基因过表达对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响

目的探讨转染Smac基因过表达对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响,寻求改善宫颈癌放疗疗效的新途径。方法将Smac基因转染入宫颈癌HeLa细胞株,G418筛选获得亚克隆细胞,RTPCR、Westernblot法检测癌细胞Smac基因表达。X射线照射后,采用MTT比色法检测癌细胞体外生长活性;透射电镜、AnnexinV-FITC和碘化丙啶双染色流式细胞仪法检测癌细胞凋亡及比率;Westernblot、比色法检测细胞内Caspase-3蛋白表达和活性水平。结果RTPCR和Westernblot证实所获宫颈癌亚克隆细胞HeLaSmac的SmacmRNA、蛋白表达水平均显著高于HeLa(P<0.01)。8GyX射线照射后,HeLaSmac细胞生长活性较HeLa细胞减弱10.19%(P<0.01),透射电镜下可见部分HeLaSmac细胞发生典型凋亡形态学改变,凋亡率为16.4%,显著高于对照组HeLa细胞(凋亡率为6.2%,P<0.01)。与HeLa细胞比较,HeLaSmac细胞内Caspase3表达显著增加(P<0.01),活性水平提高3.42倍(P<0.01)。结论稳定转染外源性Smac基因使其在宫颈癌细胞株中过表达,能提高癌细胞中Caspase3的表达和活性,增强放疗对癌细胞的诱导凋亡作用,有望成为改善宫颈癌放疗效果的新途径。     

活性维生素D对肾病大鼠的肾脏保护作用

目的观察转化生长因子-β1（TGF-β1）、α3β1整合素在Heymann肾病鼠肾小球的表达以及活性维生素D1,25-（OH）2D3对两者表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常对照组（NC）和Heymann肾病模型组;后者经腹腔注射肾小管刷状缘抗原诱导肾病模型,再随机分为Heymann肾病组（HN）和1,25-（OH）2D3治疗组（HT）。HT组皮下埋置渗透性微量泵,给予1,25-（OH）2D3,3ng/（100g.d）,连用4周。检测大鼠血清中的肌酐（Cr）、钙（Ca）、磷（P）、甲状旁腺素（PTH）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,尿蛋白（UP）、尿足细胞（UPC）。电镜观察每视野足细胞数、足突平均宽度。逆转录-聚含酶链反应法检测肾小球TGF-β1,α3整合素mRNA表达水平的变化。蛋白印迹检测肾小球TGF-β1,α3整合素蛋白的表达。结果与NC组相比,HN组大鼠Cr、P、PTH、AngⅡ明显升高,Ca降低;UP、UPC排泄明显增多;足细胞数目减少,足突宽度增加;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平明显增加,而α3整合素mRNA和蛋白表达明显降低。与HN组相比,HT组Ca无显著差异,PTH、AngⅡ明显降低;UP、UPC排泄明显减少;足细胞数目增加,足突宽度变窄;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达下调,α3整合素表达上调。结论1,25-（OH）2D3可能是AngⅡ的负向调节因子,可减少Heymann肾病鼠尿蛋白及尿足细胞的排泄,下调肾小球TGF-β1的表达,增加α3β1整合素的表达,从而减少足细胞脱落,维持肾小球足细胞数量。     

放射性核素标记RGD序列多肽与整合素αvβ3受体显像的研究进展

整合素主要介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质(ECM)之间的相互黏附,对细胞的黏附、增殖、分化、转移、凋亡起到重要的调控作用,在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用.成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官系统中,整合素αvβ3受体表达缺乏或几乎不能被探及,但其在新生血管内皮细胞中有强烈表达,精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽是整合素αvβ3受体的特异性识别位点,因此,将放射性核素标记到含有RGD序列的肽类化合物上,用于整合素αvβ3受体显像,对于肿瘤早期和高特异性定位、定量诊断及治疗都具有重要意义.近年来国内外对RGD肽的标记方法和αvβ3受体显像进行了研究.     

实时荧光定量RT—PCR检测胃癌细胞中MRP2、MRP3及MRP5mRNA的表达

目的研究多药耐药相关蛋白2（MRP2）基因及MRP3、MRP5基因在正常胃细胞系GES-1、胃癌细胞株（BGC-823）及胃癌耐药细胞株BGC-823／ADM的表达差异,并探讨其在胃癌耐药中的意义。方法分别提取GES-1、BGC-823及BGC-823／ADM细胞的总RNA,逆转录cDNA,利用实时荧光定量PCR,根据标准品绘制标准曲线,检测MRP2、MRP3、MRP5基因的表达水平。结果MRP2基因在胃癌耐药细胞株BGC～823／ADM细胞中的表达量明显高于在胃癌细胞株（BGC-823）的表达,而与其在正常胃细胞系GES-1的表达没有显著性差异;MRP3、MRP5基因表达量在三种细胞中均有显著性差异。结论MRP2可能参与了胃癌的内在性耐药,而MRP3、MRP5可能与胃癌的获得性耐药有关,实时荧光定量方法是一种灵敏度高,特异性强,重复性好的定量检测方法。