ARDS状态下大鼠肺泡II型细胞水通道蛋白1表达变化的研究

[摘要] 目的　观察大鼠ARDS状态下II型细胞(水通道蛋白1)AQP1表达的变化,为ARDS发病机制的研究提供新的实验和理论依据。方法　运用免疫组化、Western Bloting和图像分析技术,对正常大鼠和ARDS大鼠II型细胞AQP1的表达水平进行对比观察,分析变化。结果　Western blot分析显示ARDS大鼠肺泡II型细胞AQP1蛋白条带较对照组明显减弱,免疫组化及Western blot经图像分析结果为ARDS状态下II型细胞上水通道蛋白1的表达较对照组有明显的下降。结论　ARDS状态下肺泡II型细胞AQP1的表达较对照组有显著的下降（P<0.05）,提示AQP1对呼吸系统水转运起到重要作用。     

油酸肺损伤时肺泡Ⅱ型上皮细胞钠水通道的研究

目的测定急性呼吸窘迫综合征（ARDS）状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）上AOPs的表达量以及全细胞钠电流的大小．以评估病理状态下ATⅡ细胞钠水主动转运能力的状况。方法急性分离纯化油酸ARDS模型大鼠的ATⅡ细胞．用免疫细胞化学、免疫电镜以及Western blotting方法测定AQ1l的表达;用膜片钳技术的全细胞模式测定全细胞钠电流并观察应用特布他林对它的影响。结果ARDS模型组ATⅡ细胞免疫细胞化学AQP1呈阳性,免疫电镜结果细胞膜上可见高电子密度阳性反应。Western blotting分析显示AQP1蛋白条带较对照组明显减弱。全细胞钠电流较对照组明显降低．但对特布他林仍旧敏感。结论ARDS状态下,ATⅡ细胞的钠水主动转运能力明显受损,但并未完全丧失,钠通道激动剂特布他林可以促进钠的转运。ATⅡ细胞钠水通道在肺水的清除中都起着重要的作用。     

水通道蛋白9在2型糖尿病大鼠肝脏中的表达变化

目的 探讨水通道蛋白9(Aquaporin-9,AQP9)在2型糖尿病(T2DM)鼠肝脏中的表达情况及其可能的调控机制.方法 采用高脂高糖饲养联合低剂量链脲霉素诱导T2DM模型;通过HE染色法检测不同组SD大鼠肝脏的形态学改变;免疫荧光染色法观察不同组大鼠肝脏中AQP9的分布情况;Western blot检测不同组大鼠肝脏中AQP9和MAPK蛋白水平的表达变化.结果 相较于对照组,HE染色显示,2型糖尿病鼠的肝脏细胞排列混乱,细胞间隙增宽,细胞水样变性显著,水肿明显,伴随大量炎性细胞浸润;免疫荧光显示,水通道蛋白9在对照组表达较少,而在糖尿病组大量表达,主要呈环形集中分布在肝细胞朝向肝血窦面的细胞膜上;Western blot分析表明,糖尿病组肝脏AQP9的表达水平明显升高(P＜0.05),p-JNK/JNK的表达升高(P＜0.05),p-p38/p38的表达下降(P＜0.05),p-ERK/ERK的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AQp9的表达水平在T2DM鼠肝脏中显著上升,高糖环境下p38-MAPK,JNK-MAPK可能对AQP9的表达具备调控作用.     

大鼠脑外伤诱导水通道蛋白4表达增强加重脑水肿

目的探讨大鼠外伤性脑水肿组织水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)的表达变化及其与血-脑脊液屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的关系。方法SD大鼠94只,用随机数字表法分为脑外伤组(包括脑外伤后1、6、24、48和168 h)、假手术对照组及空白组。复制大鼠自由落体脑损伤模型,用干质量湿质量法测定脑组织水含量,用IgG免疫组化染色法检测血-脑脊液屏障通透性的变化,用免疫组化染色法及Western blotting法检测神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和AQP4蛋白的表达并进行图像分析。结果大鼠脑外伤后,损伤侧脑组织水含量较假手术组增加,6 h时差异有统计学意义,24 h达高峰。与假手术组比较损伤侧脑组织IgG漏出在外伤后1 h差异有统计学意义,6 h达高峰。免疫组化染色显示损伤周围处星形胶质细胞上AQP4的分布极性发生改变,不仅毛细血管周围的星形胶质细胞足突上AQP4表达增加,而且星形胶质细胞胞体亦出现AQP4表达。AQP4表达变化的时间与脑组织水含量变化一致,晚于IgG漏出的变化。损伤周围处GFAP在损伤后1 h～7d表达持续增强。结论大鼠脑损伤后先出现BBB通透性增加,并引起AQP4表达增加,二者均促进了脑水肿的发生。     

化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠水通道蛋白1和水通道蛋白3影响

目的:探讨化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白3(AQP3)蛋白表达的影响。方法:72只雄性大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,化瘀通便汤低、中、高剂量组,西药对照组,每组12只,采用大黄粉灌胃制造慢传输型便秘模型,计算各组大鼠碳末推进率,Western blot法检测大鼠近端结肠AQP1和AQP3蛋白(相对灰度值)的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组碳末推进率明显降低,大鼠结肠AQP1和AQP3表达升高,均有显著统计学意义(P0.01);与模型对照组比较,化瘀通便汤中、高剂量组,西药对照组碳末推进率明显升高,各治疗组大鼠结肠AQP1和AQP3表达降低,均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:慢传输型便秘大鼠便秘的发生可能与结肠组织中AQP1和AQP3的表达升高有关,化瘀通便汤治疗慢传输型便秘的机制可能通过降低结肠组织中AQP1和AQP3的表达来实现。     

分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型细胞中水通道蛋白-4的表达

目的观察经分离纯化的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白-4(AQP4)的表达。方法对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化，绎过特殊染色及电镜鉴定，用免疫细胞化学及免疫电镜方法检测水通道蛋白-4存该单细胞上的表达。结果大鼠肺泡Ⅱ型细胞免疫细胞化学水通道蛋白1—4呈强阳性，免疫电镜结果细胞膜上可见高电子密度阳性反应。结论水通道蛋白-4存存于分离的大鼠肺泡Ⅱ型细胞膜上，对呼吸系统水转运可能起到重要作用。     

高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4表达的变化及意义

目的探讨高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4(AQP4)表达的变化及意义。方法 16只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为缺氧水肿组和对照组,每组8只,制作大鼠高原缺氧损伤模型。检测2组大鼠脑组织水含量,并采用实时定量聚合酶链反应、免疫组织化学法、Western blot测定大鼠脑组织高原缺氧损伤24 h后AQP4 mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组比较,缺氧水肿组大鼠脑组织水含量增加,水肿明显,AQP4 mRNA和蛋白表达量上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP4在高原缺氧脑水肿的形成过程中发挥了重要作用,提示对AQP4的干预可减轻高原脑水肿损伤。     

星形胶质细胞气压损伤后钠-钾-氯共转运体及促分裂原活化蛋白激酶对AQP4表达的影响

目的：探讨大鼠星形胶质细胞气压损伤后,钠-钾-氯共转运体（ NKCC）、促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）对水通道蛋白-4（AQP4）表达变化的影响和相关机制。方法原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞。实验分为正常对照组、气压损伤组、布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂（ SB203580）处理组。布美他尼和p38-MAPK抑制剂均预处理星形胶质细胞30 min后再进行气压损伤。损伤后3 h观察细胞水肿情况,并对AQP4的表达情况进行Western blot检测。结果光学显微镜下观察到气压损伤后的星形胶质细胞较正常对照组细胞明显肿胀,布美他尼和p38-MAPK抑制剂处理组星形胶质细胞水肿较气压损伤组减轻。 Western blot检测发现布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂处理组的AQP4表达均较气压损伤组低（P＜0.05）。结论星形胶质细胞气压损伤后,AQP4表达上调受NKCC的影响,以及p38-MAPK信号途径的调节。通过抑制NKCC的活性和p38-MAPK信号途径的激活,可降低气压损伤引起的星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞水肿。     

禁水大鼠肾脏与尿液水通道蛋白2表达的改变及意义

目的　研究禁水大鼠肾脏及其尿液AQP2 (aquaporin2 )水通道蛋白量的改变 ,阐明尿液AQP2蛋白与抗利尿激素 (ADH)的关系及其在监测机体水平衡中的作用。方法本实验通过建立禁水大鼠模型 ,用免疫组化和Western印迹分析法测定肾脏内髓及尿液AQP2的含量 ,并比较禁水组大鼠尿液AQP2含量与对照组的差别。结果禁水组大鼠肾脏AQP2蛋白表达量较正常对照组明显增加 ,且AQP2蛋白可在尿液中检测到 ,禁水时尿液AQP2含量明显增多 (P <0 0 1)。结论AQP2是机体缺水时维持机体水平衡的关键蛋白质之一 ,检测尿液AQP2含量是监测机体重吸收状况的一种较好的方法。     

椎间盘退变过程中软骨终板AQP3的表达变化

目的 阐明水通道蛋白3(AQP3)在椎间盘退变时表达变化特点及其与椎间盘退变的相关性.方法 建立大鼠椎间盘退变的动物模型,影像学观察模型建立的可靠性,采用RT-PCR的方法检测AQP3 mRNA表达的变化,Western blot进行AQP3蛋白的检测.结果 成功建立了大鼠椎间盘退变模型,AQP3 mRNA和蛋白的表达...     

模拟失重条件对大鼠肾小管水通道蛋白2表达影响的研究

目的 探讨模拟失重条件下大鼠肾小管水通道蛋白2(AQP2)表达的变化.方法 采用尾部悬吊法建立失重模型.48只健康雄性Wistar大鼠分为对照组及尾吊3d组、尾吊5d组、尾吊7d组、尾吊2周组、尾吊4周组.分别于观察终点处死各组大鼠,处死前留取血尿标本,分别检测肾功能和尿渗透压.剥离肾脏组织,分离肾皮质和髓质.电镜观察肾小管超微结构.Western blot方法检测AQP2的表达.ELISA检测血清中抗利尿激素(ADH)的水平.结果 ①电镜下尾吊组大鼠肾脏均表现为肾小管不同程度受损,尾吊5d组大鼠肾小管损伤最严重.②Western blot显示尾吊组AQP2的表达较对照组均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),其中尾吊5d组大鼠肾脏AQP2表达最明显(P＜0.01).③尾吊5d组尿渗透压显著升高,与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.01).各组间ADH及肾功能指标差异无统计学意义.④AQP2蛋白表达量与尿渗透压呈正相关性(r =0.468,P=0.003).结论 模拟失重条件能引起大鼠肾小管AQP2表达上升,以尾吊5d组升高最明显.     

大鼠溺死时肺组织水通道蛋白1的变化

目的 观察溺死大鼠肺组织中水通道蛋白1(aquaporin AQF1)的变化。方法 取对照组、实验组大鼠肺组织,用免疫组织化学法和免疫电镜胶体金法,观察及定位肺组织中水通道蛋白1。结果 免疫组化显示溺死时肺间质的毛细血管内皮、支气管上皮及肺泡上皮AQP1的阳性表达,积分光密度值差别有统计学意义。免疫电镜显示肺泡(型上皮细胞AQP1的胶体金数的差别有统计学意义。结论 AQP1在大鼠溺死时肺组织中表达有阳性意义且定位在Ⅰ型上皮细胞膜上。     

大鼠油酸性急性肺损伤初期水通道蛋白4在肺水代谢的实验研究

目的 测定油酸造成急性肺损伤(ALI)初期损伤程度及肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)上水通道蛋白4(AQP-4)的表达量以评估病理状态下ATⅡ细胞水通道水转运能力的状况.方法 血气分析、观察肺组织病理学、用重力法测定血管外肺水(EVLW)含量检测早期肺损伤的程度;急性分离纯化大鼠油酸ALI模型的ATⅡ细胞,显微镜及电子显微镜观察形态病理变化:免疫组化了解肺组织AQP-4的表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的m-RNA表达的情况.结果 血气分析、光镜下肺损伤评分及EVLW油酸组严重程度显著高于对照组,显微镜下肺泡Ⅱ型上皮细胞的数量较对照组无明显减少,但电镜下细胞的超微结构改变,板层小体排空,线粒体损伤等改变;肺组织免疫组化观察到AQP-4明显表达增强,肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的m-RNA表达增多,AQP-4由胞浆向胞膜转运,胞膜的表达增多(P<0.05).结论 在肺损伤初期就有了肺损伤水肿的病理生理的改变,AQP-4在肺泡Ⅱ型上皮细胞上m-RNA及细胞膜的表达上调.很大程度调节肺泡腔及肺泡上皮细胞的水转运,在钠通道功能下降的情况下发挥了重要的代偿作用.     

分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型细胞中水通道蛋白-4的表达

目的 观察经分离纯化的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白-4(AQP4)的表达。方法 对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,经过特殊染色及电镜鉴定,用免疫细胞化学及免疫电镜方法检测水通道蛋白-4在该单细胞上的表达。结果 大鼠肺泡Ⅱ型细胞免疫细胞化学水通道蛋白-4呈强阳性,免疫电镜结果细胞膜上可见高电子密度阳性反应。结论 水通道蛋白-4存在于分离的大鼠肺泡II型细胞膜上,对呼吸系统水转运可能起到重要作用。     

水通道蛋白-4在急性高眼压大鼠眼组织的表达变化

目的观察急性离眼压时水通道蛋白-4（AQP4）在大鼠眼组织的表达变化,以探讨AQP4与某些眼压畀常性疾病的关系。方法前房加压灌注法制作大鼠急性高眼压模型;应用免疫组化和原位杂交法观察AQP4庭其mRNA在眼组织的表达变化,并进行半定量分析。结果与对照组相比,AQP4及其mRNA在急性高眼压大鼠视网膜上的表达明显增强,主要集中在节细胞层、内核层。结论急性高眼压状态下,AQP4反其mRNA在视网膜上的表达增加,提示AQP4可能参与了高眼压所致视网膜损伤的病理生理过程。     

大鼠附睾9型水通道表达

目的：观察大鼠附睾9型水通道（aquaporin 9,AQP9）的表达。方法：取12周龄大鼠的附睾头部和尾部提取总RNA和总蛋白进行AQP9 Northern blotting分析和Western blotting分析。结果：12周龄大鼠附睾存在AQP9的表达,且附睾头部表达强于尾部。结论：12周龄大鼠附睾头部AQP9表达强于尾部,反映附睾不同部位对水的重吸收功能的差异。     

AQP-5在干燥综合征小鼠颌下腺中的表达

目的初步探讨水通道蛋白-5(AQP5)在干燥综合征(SS)小鼠颌下腺中的表达分布.方法用免疫组化方法和Western blot分析SS小鼠颌下腺AQP5表达变化特点.结果对照组AQP5在腺泡的顶膜、侧膜和导管等处均有较强表达;实验组 AQP5表达减少或消失,AQP5在SS残存的腺泡部位,顶膜表达减少,相应基侧膜的表达增强,而且主要分布在导管部位.Western blot检测显示各组均出现分子量为27×103的条带,实验组AQP5的表达量显著减少(P<0.01).结论 AQP5表达量减少和异位表达增强与SS口干病相关.     

异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水肿及水通道蛋白-4表达的影响

目的 探讨异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水肿及水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法 原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞.分别用氯化铵(5 mmol/L)共培养细胞6、12、24、48 h;二甲亚砜及异丙酚(10 μmol/L)预处理细胞30 min后与氯化铵共培养24 h,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测星形胶质细胞AQP4蛋白表达,光学显微镜观察细胞形态,3-4,5-二甲基噻唑-2,5-二酚四唑溴化物(MTT)检测各组细胞活性.结果 氯化铵处理星形胶质细胞12 h后AQP4表达开始上调,一直持续到48 h,其中24 h时AQP4表达上调最为明显,异丙酚预处理组AQP4表达较NH4Cl-24 h组明显降低(P<0.05);光学显微镜观察发现NH4Cl-24 h组细胞较正常组和异丙酚预处理组细胞肿胀明显;MTT检测显示异丙酚预处理组细胞活性较NH4Cl-24 h组和二甲亚砜组明显增高(P<0.05).结论 异丙酚预处理能抑制氯化铵引起的大鼠脑皮质星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞肿胀程度,提高星形胶质细胞活性.     

脾阳虚证大鼠回肠水通道蛋白4表达变化研究

目的：通过对脾阳虚大鼠回肠水通道蛋白4（AQP4）表达的检测,探讨脾阳虚证状态下大鼠水液代谢的影响。方法：对正常组、脾阳虚模型组、中药反证组分别行免疫组织化学、RT-PCR及Western blot的方法检测AQP4在回肠的表达及分布情况。结果：①脾阳虚状态下,大鼠回肠上皮细胞细胞膜的AQP4分布量显著减少,经温补脾阳中药治疗后,其分布量有所回升,但仍低于正常组。②脾阳虚模型组AQP4 mRNA及蛋白表达量均明显低于正常组（P〈0.05）。中药反证组AQP4 mRNA表达量均明显高于模型组（P〈0.05）,蛋白表达虽然有所提高,但却没有统计学意义（P〉0.05）。结论：脾阳虚证状态下大鼠回肠AQP4表达下调,导致回肠对水分的吸收出现障碍,提示可能与脾阳虚证的病理机制有关。     

压力对培养人眼小梁细胞水通道蛋白1mRNA表达及蛋白质合成的影响

目的研究人眼小梁细胞水通道蛋白1(AQP1)在不同压力下mRNA表达及蛋白质合成的变化,探讨AQP1在青光眼发病中的作用。方法培养人眼小梁细胞,分别给予20、40、60及80mmHg(1mmHg=0.133kPa)的压力,以不加压组为对照组,用RT-PCR和Western blot对小梁细胞AQP1mRNA和蛋白质含量变化进行定性及定量观察。结果压力持续48h后,人眼小梁细胞中AQP1mRNA及蛋白质含量随压力增高先增高后下降。压力20mmHg与40mmHg组AQP1mRNA及蛋白质含量较对照组逐渐增多,压力60mmHg和80mmHg组AQP1mRNA及蛋白质含量较对照组逐渐减少,各组AQP1mRNA及蛋白质与对照组比较差异均有统计学意义(F=251.95,P<0.01;F=447.23,P<0.01)。组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论压力改变培养人眼小梁细胞AQP1mRNA表达及蛋白质合成,可能成为导致或加重青光眼的因素之一。