肾癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的活化

目的: 探索体外诱导DCs活化的方法和制备肾癌树突状细胞(DCs)瘤苗。方法: 制备肾癌细胞冻融抗原；取健康人新鲜血分离外周血单个核细胞(PBMC),应用GM-CSF+IL-4刺激，诱导PBMC为iDCs,然后进行分组，采用不同因子刺激iDCs转化为mDCs,其中Ａ组:冻融抗原负载；Ｂ组: TNF-α+冻融抗原负载；Ｃ组: IL-1β+冻融抗原负载；Ｄ组: TNF-α+IL-1β+冻融抗原负载。 结果:各组均可诱导iDCs的成熟,并高表达CD86、CD80和HLA-DR；相对于其它组，D组DCs 更显著上调CD83和CD54表达(P<0.05)和IL-12分泌(P<0.01)，且D组mDCs更有效地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05)。 结论: TNF-α+IL-1β与肾癌细胞冻融抗原协同可有效促进DCs成熟、增强诱导淋巴细胞活化的能力。     

通过肿瘤致敏的DCs活化的CD8+ T细胞可有效地杀死肿瘤细胞

目的：探索肿瘤裂解物负载的DCs诱导活化的初始T细胞介导细胞免疫及活化的T细胞杀死肿瘤细胞的能力。方法:应用黏附法分离外周血中的淋巴细胞和单核细胞,应用GM-CSF+IL-4刺激单核细胞并诱导为iDCs,然后进行分组，应用相应的细胞因子等刺激iDCs转化为mDCs,其中肿瘤裂解物冲击DCs组:冻融抗原负载+TNF-α+IL-1β; 无肿瘤裂解物冲击组: TNF-α+IL-1β。再分别用上述DCs与淋巴细胞进行混合培养以刺激混合淋巴细胞中的T细胞转化为细胞毒性T细胞, 并进行分组, 肿瘤裂解物冲击DCs组: 肿瘤裂解物冲击DCs+IL-2+IL-7；无肿瘤裂解物冲击DCs组: 无肿瘤裂解物冲击DCs+IL-2+IL-7；对照组: IL-2+IL-7。结果:成功获得iDCs,并高表达CD86、CD80和HLA-DR；相对于其它组，肿瘤裂解物冲击DCs组mDCs更显著上调CD83，且更有效地刺激淋巴细胞增殖； 肿瘤裂解物冲击DCs组的CTLs也高表达CD95(Fas)且TNF-α和IFN-γ的表达水平显著提高(P<0.05)。结论: 肿瘤裂解物冲击DCs可有效促进T细胞活化、增殖；并显著增强相应CTLs的杀死靶细胞的能力，这为发展DCs+CTLs的免疫治疗肿瘤提供了一种新而且简便的生物治疗模式。     

同种异型抗原冲击不成熟CD8α+DCs抑制T细胞增殖的体外实验

目的: 探索同种异基因抗原体外冲击后小鼠优势不成熟CD8α⁺树突状细胞(DCs)体外抑制T细胞增殖的最佳条件。方法: 取SPF级C57BL/6(H-2b)小鼠的骨髓细胞,GM-CSF +IL-4 +SCF +Flt3L诱导制备优势不成熟CD8α⁺DCs,于培养最后1 d加入梯度蛋白浓度(0、2.5、5、10和20 mg/L)同种异基因(H-2d)小鼠脾细胞抗原冲击DCs。经抗原冲击后的DCs分别与同系T细胞按1∶ 1、2∶ 1、4∶ 1比例共培养,MTT法观察T细胞增殖情况。ELISA法检测上清中细胞因子(IFN-γ和IL-10)的含量。以GM-CSF +IL-4 +TNF-α诱导的成熟DCs作为对照。结果: 优势不成熟CD8α⁺DCs与T细胞1∶ 1共培养时不能有效刺激T细胞增殖,与2∶ 1及4∶ 1组相比刺激能力最弱(P<0.05);上清中IFN-γ的分泌明显低于成熟DCs对照组,且经小剂量抗原(＜2.5 mg/L)冲击时IL-10的分泌高于对照组。结论: 经小剂量(2.5 mg/L)同种异基因抗原冲击后的优势不成熟CD8α⁺DCs,与T细胞1∶ 1混合,是抑制T细胞增殖的最佳条件。     

细胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性研究

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的生物学特性。方法:健康人非贴壁单个核细胞用含IFN-γ、IL-1β、IL-2、CD3单抗诱导CIK细胞。以LAK细胞作为对照。流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测细胞表型特征;乳酸脱氢酶释放法分析细胞毒活性。结果:诱导2周后,CIK细胞的增殖率达到高峰,CD3⁺细胞占95％以上;第3周细胞生长进入平台期。诱导15d时,CD3⁺CD56⁺NKT亚群占16.5％,比例在2-4周区间内无明显变化。LAK细胞增殖缓慢,显著低于同期CIK细胞增殖率(P＜0.01)。不同效:靶比例CIK细胞对肝癌细胞BeL-7402的特异性溶解率显著高于LAK细胞(P＜0.01)。免疫细胞化学染色结果显示,CIK细胞高度表达HLA-DR和CD54抗原,NKT细胞体积较CD3⁺CD56^-细胞略大,细胞表面有大量伪足。结论:CIK细胞具有高度增殖能力,其体外杀瘤活性明显优于LAK细胞。诱导14-21d,CIK细胞增殖率和CD3⁺CD56⁺阳性细胞率均达到高峰,此时期的CIK细胞适合临床应用。     

干扰素-α联合GM－CSF诱导慢性髓性白血病细胞向树突状细胞分化

目的：研究干扰素-α（IFN-α）对慢性髓性白血病（CML）骨髓单个核细胞来源的树突状细胞（DCs）发育的影响。 方法： 12例初发慢性期CML患者的骨髓单个核细胞，分别与含如下细胞因子,RPMI-1640培养液共育：rhGM-CSF 1×106U/L联合rhIFN-α 2×106U/L（IFN-α组）、rhGM-CSF 1×10⁶U/L联合rhIL-4 5×10⁵U/L（IL-4组）、单用rhGM-CSF 1×10⁶U/L和单用rhIFN-α 2×106U/L，培养7 d；于第8-10 d，部分孔加入rhTNF-α 5×10⁴U/L。形态学（Wright染色、倒置显微镜）、免疫学（CD80、CD86、CD83、CD1a、HLA-DR）检测；磷脂酰丝氨酸（PS）转位检测 DCs凋亡情况；荧光原位杂交（FISH）对1例CML进行细胞遗传学分析；混合淋巴细胞反应（MLR）检测刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。 结果： CML骨髓单个核细胞经上述细胞因子诱导7 d后，IFN-α组和IL-4组均呈现树突状细胞的典型形态；免疫学鉴定，IFN-α组DCs CD80、CD86、CD83、HLA-DR的表达显著高于IL-4组（P<0.05），经5×104U/L rhTNF-α作用后，两组DCs CD80、CD86、CD83、HLA-DR进一步上调，其中IFN-α组DCs CD80、CD86、CD83、HLA-DR的表达显著高于IL-4组（P<0.05）；经FISH证实来源于白血病细胞；两组DCs均具有刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力，IFN-α组刺激淋巴细胞增殖的能力明显高于IL-4组(P<0.05)。 结论： IFN-α可促进CML骨髓单个核细胞来源的树突状细胞的分化、活化。这可能是IFN-α在CML中的治疗机制之一。     

IL-34 对类风湿关节炎髓系树突状细胞表型的影响

目的:探讨IL-34 对类风湿关节炎(RA)患者单核细胞向髓系树突状细胞(DC)分化的诱导作用,及其在分化过程中对细胞表型的影响。方法:采集RA 患者外周血,Ficoll 密度梯度离心法获得PBMC,培养4 h 后将贴壁细胞分别用GM-CSF+IL-4、IL-4、IL-4+IL-34 刺激3 d,流式细胞术检测CD83、CD86 和CD14 的表达水平;再将GM-CSF+IL-4 刺激3 d 后的细胞加入TNF-α和(或)IL-34 培养4 d,流式细胞术检测CD83、CD86 和(或)CD14 的表达水平。结果:(1)IL-34+IL-4 诱导后CD83、CD86 表达水平较IL鄄4 单独作用明显上调(P<0.01),CD14 表达无差异(P>0.05);IL-34+IL-4 诱导CD86、CD14 表达水平较GM-CSF+IL-4 刺激组下降(P<0.05),CD83 表达无差异(P>0.05)(2)GM-CSF+IL-4+IL-34 诱导CD83、CD86 表达水平较GM-CSF+IL-4+TNF-α组低(P<0.05),但与GM-CSF+IL-4 刺激组对比CD83、CD86 表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。(3)GM-CSF+IL-4+TNF-α+IL-34 诱导DC CD83 表达水平较GM-CSF+IL-4+TNF-α刺激组低(P<0.05),但两组CD86、CD14 表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-34 在不成熟DC 诱导过程中发挥一定作用,效应略弱于GM-CSF;IL-34 对成熟DC诱导作用不显著,但参与了不成熟DC 的维持。     

固相MHCI类相关抗原A刺激的NK细胞对树突状细胞活性的影响

目的:观察固相MHCI类相关抗原A(iMICA)刺激的NK细胞对树突状细胞(DCs)活性的影响.方法:首先取新鲜分离及受固相MICA刺激的异体NK细胞,或IL-2、及IL-2联合iMICA刺激的自体NK细胞与未成熟DCs(iDCs)按5:1比例孵育24 h后,用流式细胞术(FCM)分析HLA-DR+或CD86+频率的DCs.然后取自体NK细胞以iMICA刺激后,按1:5的比例与iDCs孵育24 h后,FCM检测DCs上HLA-DR、CD86的表达.最后在NK细胞与DCs的共培养体系中加人抗IFN-γ抗体,观察DCs上HLA-DR、CD86表达的变化.结果:当NK细胞与iDCs孵育比例为5:1时,异体新鲜分离的与自体活化的NK细胞均能杀伤iDCs;而MICA无协同作用.当NK细胞与iDCs孵育的比例为1:5时,iMICA刺激的NK细胞可促进DCs表达HLA-DR和CD86;而加人抗IFN-γ抗体可抑制 NK细胞诱导DCs表面HLA-DR和CD86表达的上调.结论:异体新鲜分离的或自体活化的NK细胞杀伤iDCs时,无需iMICA的刺激;但当NK细胞的数目明显低于iDCs时,iMICA可刺激NK细胞分泌IFN-γ促进DCs成熟.     

固相MHC Ⅰ类相关抗原A刺激的NK细胞对树突状细胞活性的影响

目的:观察固相MHC I类相关抗原A(iMICA)刺激的NK细胞对树突状细胞(DCs)活性的影响。方法:首先取新鲜分离及受固相MICA刺激的异体NK细胞,或IL-2、及IL-2联合iMICA刺激的自体NK细胞与未成熟DCs(iDCs)按5∶1比例孵育24 h后,用流式细胞术(FCM)分析HLA-DR+或CD86+频率的DCs。然后取自体NK细胞以iMICA刺激后,按1∶5的比例与iDCs孵育24 h后,FCM检测DCs上HLA-DR、CD86的表达。最后在NK细胞与DCs的共培养体系中加入抗IFN-γ抗体,观察DCs上HLA-DR、CD86表达的变化。结果:当NK细胞与iDCs孵育比例为5∶1时,异体新鲜分离的与自体活化的NK细胞均能杀伤iDCs;而iMICA无协同作用。当NK细胞与iDCs孵育的比例为1∶5时,iMICA刺激的NK细胞可促进DCs表达HLA-DR和CD86;而加入抗IFN-γ抗体可抑制NK细胞诱导DCs表面HLA-DR和CD86表达的上调。结论:异体新鲜分离的或自体活化的NK细胞杀伤iDCs时,无需iMICA的刺激;但当NK细胞的数目明显低于iDCs时,iMICA可刺激NK细胞分泌IFN-γ促进DCs成熟。     

肿瘤抗原联合CD40L致敏树突状细胞诱导CTLs杀伤K562细胞的实验研究

目的：以健康人外周血单核细胞为前体细胞，体外诱导为树突状细胞（DCs），负载K562细胞冻融抗原，并联合CD40L诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）对K562细胞的杀伤作用。方法:密度梯度离心法、贴壁法分离健康人外周血单核细胞，应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α等细胞因子诱导扩增，培养DCs，用K562细胞冻融抗原联合rhsCD40L致敏DCs。实验分4组：K562细胞冻融抗原致敏DCs为实验组A，联合CD40L致敏DCs为实验组B，未致敏DCs为对照组A，单核细胞+异体淋巴细胞组为对照组B，观察CTLs对K562细胞的杀伤效应。结果:培养出具有典型特征的DCs，表达CD40最高达96%、CD86达97%、CD80为77%、CD1a为 69%，体外能诱导强烈的同种异体混合淋巴细胞增殖反应。在效靶比为 20∶1 时，实验组A对K562细胞的杀伤率为71.3%，实验组B为86.9%，对照组A为37.6%，对照组B为21.1%。实验组均显示高水平杀伤率，与对照组比较差异显著（P＜0.05），实验组B加CD40L杀伤率高于实验组A（P＜0.05） 。结论：K562细胞冻融抗原冲击致敏DCs能有效诱导T细胞特异性抗白血病作用，联合CD40L能增强其CTL的杀伤作用。     

大鼠胶原诱导性关节炎关节滑膜Treg/Th17 平衡及TNF-α拮抗剂的影响

目的: 探讨胶原诱导性关节炎(CIA)关节滑膜Treg/Th17平衡状态以及TNF-α拮抗剂TNFR-Fc对Treg/Th17的影响。方法: 建立CIA模型,观察踝关节组织病理变化,ELISA检测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α),免疫荧光双标法检测关节滑膜Treg/Th17的表达。结果: CIA组TNF-α较正常对照组及TNFR-Fc治疗组显著升高(P<0.01),TNFR-Fc治疗组与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05);CIA组滑膜组织的CD4⁺Foxp3⁺Treg/CD4⁺细胞比例与正常对照组比较无明显差异(23.12%±4.93% vs 24.66%±5.82%,P>0.05),而TNFR-Fc治疗组则升高明显(33.07%±5.14%);CIA组CD4⁺RORγt⁺Th17/CD4⁺细胞比例显著增高(9.74%±2.23% vs 正常对照组1.00%±0.59%,TNFR-Fc治疗组5.63%±1.76%,P<0.01)。结论: CIA大鼠关节滑膜存在Treg/Th17分化失衡;TNFR-Fc可能通过抑制关节滑膜Th17细胞分化,诱导Treg细胞生成/聚集,使得病变关节的Treg/Th17平衡得以恢复。     

肝血窦壁细胞的研究进展

肝窦壁细胞是肝脏的非实质细胞 ,对于肝脏的生理和病理都具有非常重要的作用。本文就肝窦壁细胞的形态、功能及其与肝脏的病理生理的关系进行了简要的概述 ,并就肝窦壁细胞的研究进展作一综述 ,以期为这方面的研究提供一些线索     

T cells as antigen-presenting cells

Human T cells express major histocompatability complex (MHC) class II antigens and adhesion molecules characteristics of antigen-presenting cells (APCs), and recent in vitro and in vivo evidence supports and antigen-presenting function for T cells. In this guise, T cells provide downregulatory signals for the immune response by inducing anergy in T cells that have already been activated and cytotoxicity in resting T cells. Here, Werner Pichler and Tony Wyss-Coray suggest that this may represent an important negative mechanism for T-cell homeostasis.     

Antigen-presenting cells for unprimed T cells

The triggering requirements of T cells differ for primed and unprimed cells: primed T cells can be triggered to produce lymphokines without viable antigen-presenting cells (APCs), apparently by crosslinking the T-cell receptor (TCR). Unprimed T cells do, however, require viable APCs and here Jonathan Sprent and Mary Schaefer review what type of cells can carry out this function, with particular reference to APCs for unprimed CD8+ cells.     

T cells,dendritic cells and epithelial cells in intestinal homeostasis

The mucosal immune system of the intestinal tract is continuously exposed to both potential pathogens and beneficial commensal microorganism. A variety of mechanisms contribute to the ability of the gut to either react or remain tolerant to antigen present in the intestinal lumen. Antigens of the gut commensals are not simply ignored, but rather trigger an active immunosuppressive process, which prevents the outcome of immunopathology. The aim of this review is to provide an update on the mechanism of intestinal homeostasis, with particular focus on the complex crosstalk between T cells, dendritic cells and intestinal epithelial cells.     

抗原致敏DC与CIK共培养体外抗肾癌效应的研究

目的： 探讨肾癌(RCC)抗原致敏树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养后的DC-CIK细胞对RCC的杀伤活性。 方法： 将健康成人外周血单个核细胞（PBMC）来源的DC经RCC(786-0细胞株)抗原致敏后与同源CIK细胞共培养，实验分3组：RCC抗原致敏DC与CIK共培养组（A组），未致敏DC与CIK共培养组（B组），单纯CIK组（C组）。流式细胞仪检测DC及CIK免疫表型。MTT法检测3组效应细胞对786-0细胞杀伤活性。 结果： 效靶比 20∶1 时，A、B、C组对786-0细胞杀伤活性分别为（70.64±8.26）%、（53.40±7.33）%、（46.64±6.01）%，各组比较差异显著（P<0.05）；以前列腺癌PC3细胞作靶细胞对照，A组对786-0及PC3细胞的杀伤活性有显著差异（P<0.05）。 结论： RCC抗原致敏DC与CIK共培养后的DC-CIK细胞可明显提高CIK细胞对RCC的杀伤特异性和杀伤活性。     

干细胞：许旺细胞的新来源****△

背景：许旺细胞对神经系统损伤的修复与再生有着重要作用。然而,许旺细胞不易直接获取,使其在临床上的应用受到限制。 目的：综述神经损伤及修复过程、许旺细胞的作用以及各种干细胞分化为许旺细胞的潜能。 方法：使用计算机检索Pubmed数据库2000/2011有关许旺细胞参与神经损伤的修复、干细胞分化为许旺细胞验证及应用的文献,检索词为“Schwann cells,nervous system,stem cells”。排除重复性研究,对资料进行初审,并查看每篇文献及其引文。根据纳入标准,收集到29篇相关文献。 结果与结论：许旺细胞通过分泌各种细胞因子和营养因子为受损的神经营造了适于修复与再生的微环境,从而促进轴突再生;同时通过增殖及分化等机制围绕新生轴突形成髓鞘。神经修复需要大量许旺细胞的参与,而许旺细胞不易直接获取。研究表明,各种干细胞,包括胚胎干细胞、间充质干细胞、神经嵴干细胞和嗅鞘细胞,能在一定诱导条件下分化为许旺细胞样细胞,为神经系统损伤的治疗带来了新的希望。其中,间充质干细胞的研究备受关注。 关键词：许旺细胞;神经系统;再生;修复;干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.040