流感病毒抗原快速检测与real-time RT PCR的比较

目的介绍一种可同时检测甲型、乙型流感病毒的快速方法,便于及早确诊流感病原体。方法采用快速抗原法对2014年1月—2015年12月收集的632份流感样患者标本进行甲型、乙型流感病毒抗原检测,并对其中102份进行real-time RT PCR检测。结果快速抗原法检测到样本中甲型流感病毒阳性14例,乙型流感病毒阳性10例。real-time RT PCR法检测到甲型流感病毒阳性15例,乙型流感病毒阳性12例。快速抗原法针对甲型流感病毒诊断灵敏度93.3%,特异度100.0%;针对乙型流感病毒,诊断灵敏度83.3%,特异度100.0%,耗时15 min,明显少于real-time RTPCR法的3 h。结论采用快速抗原法可及早筛查甲型、乙型流感标本。     

数株我国主要流行的流感病毒血凝抑制试验抗原性变异的分析

本文报道用血凝抑制试验对部分世界范围内流行的流感病毒株进行了抗原变异性分析。1993～1994年的三价流感灭活疫苗A/Beijin/32/92(H3N2),A/Texas/36/91/(H1N1),B/Panama/45/90株与其他前流行株之间有明显抗原变异。1989年中国分离的三株甲3型之间也有抗原变异,提示在国内不同流行区可能应使用不同的三价疫苗。流感病毒的分离监测,国内应推广使用MDCK细胞系。实验结果对流感监测,疫苗应用有一定参考价值     

遮盖法与药物抑制法治疗单眼弱视的疗效比较

目的 比较遮盖法与药物抑制法治疗单眼弱视的疗效.方法 66例年龄在3～7岁的弱视患儿分成2组,每组33例.通过常规遮盖治疗和阿托品抑制治疗,对这些患儿进行了为期3.5年的临床治疗和观察.结果 2组的疗效无显著性差异（P＞0.05）.结论 常规遮盖治疗和阿托品抑制治疗疗效接近,根据儿童具体情况选择使用.     

三种流感病毒检测方法的比较

目的对胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR法等3种检测流感病毒方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR检测法对2012年深圳市龙岗区流感监测哨点医院采集的流感样病例样本进行检测,比较检测结果。结果荧光定量RT-PCR的流感病毒核酸检测阳性率为70.8%,其中98份为季节性H3N2流感病毒,51份为B型Victoria株,4份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为46.3%,分离出61株季节性H3N2流感病毒,35株B型Victoria株,4株B型Yamagata株;胶体金法检出率为3.7%。3种方法中,荧光定量RT-PCR的阳性率最高,病毒分离培养法次之,胶体金法阳性率最低。结论与病毒分离培养法和RT-PCR法相比,胶体金法并不适合单独用于诊断流感病毒感染,病毒分离培养法费时费力,荧光定量RT-PCR法有较高的敏感性和特异性,适用于流感疫情的病原学快速诊断。     

双黄连抑制流感病毒甲_1型基因的研究

目的建立实时荧光定量RT-PCR检测流感病毒甲1型多聚酶蛋白（PA）基因,了解双黄连作用病毒的效应。方法采用实时荧光定量RT-PCR法标准曲线测药物抑制甲1型PA病毒基因效应。结果以实时荧光RT-PCR法,重复测7次取平均值,对照组病毒基因为3.62×10^6±0.90拷贝数/mg,试验组病毒基因为4.57×10^5±1.23拷贝数/mg。发现病毒对照组基因明显高于试验组（P〈0.001）。结论提示双黄连可抑制流感病毒甲1型基因。     

反向血凝法与ELISA法测定HBsAg方法学比较

<正> HBsAg测定方法比较多,目前常用的有薄膜ELISA法、ELISA法、放射免疫法及反向血凝法等。我单位有幸参加92年省肝炎流行病学调查,对我院职工进行了检测,其中对HBsAg检测分别用了反向血凝法及ELISA法进行了对比,发现了一些问题。现将结果报道如下: 材料与方法 1、测定对象:本院职工及个别家属。其中男61人,女139人。年龄最大58岁,最小10岁。 2、器材:微量血凝板、玻璃滴管、微量稀释棒、微量加样器等。     

荧光定量RT—PCR快速检测A、B型流感病毒的研究

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A、B型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因和B型流感HA基因的相对保守序列,分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化单一和双重反应体系后,利用10倍稀释法对已知滴度的流感病毒进行梯度稀释,检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线。结果A、B型流感病毒双重反应的灵敏度为分别为2·56×10-5和5·0×10-5TCID50,标准曲线相关系数分别为0·997和0·998,扩增效率分别为114·1%和107·8%,说明双重反应中A、B型的引物、探针、模板之间无相互干扰,具有很好的稳定性和重现性。结论研究建立的荧光定量RT-PCR技术可以准确同时检测A、B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

RT—PCR法制备NGFcDNA

本研究直接以新生１８￣２１天龄的小鼠脑的全ＲＮＡ（含ＮＧＦｍＲＮＡ）为底物，进行逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），制备出了神经生长因子（ＮＧＦ）的ｃＤＮＡ片段。用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序分析表明，所制备的ＮＧＦ ｃＤＮＡ片断为３６３ｂｐ，与编码成熟ＮＧＦ的ｍＲＮＡ碱基顺序相对应。直接利用全ＲＮＡ进行ＲＴ与ＰＣＲ一步联合反应，不仅简化了实验步骤，而且最大程度地减少了样品的需要量，减小了样品     

4株甲型流感病毒的分离鉴定

从24份(人)上感患儿咽拭中,分离到4株甲_3型(H_3N_2)流感病毒,按新命名法定为A/桂医/1/83(H_3N_2)、A/桂医/2/83(H_3N_2)、A/桂医/3/83(H_3N_2)和A/桂医/4/83(H_3N_2)株.经电镜及免疫电镜检查,形态与标准株基本一致;血抑试验鉴定能被甲_3型A/京科/2/79(H_3N_2)株的免疫血清抑制,血抑效价最高5120,最低1280,而不被甲_1型A/津防/78/77(H_1N_1)株及乙型B/湘防/2/74株的免疫血清抑制.证明新分离毒株是甲_3型(H_3N_2)流感病毒.用交叉血抑试验,比较各毒株间抗原性关系,以抗原比表示,A/桂医/2/83(H_3N_2)株与A/京科/2/79(H_3N_2)株无明显差异,而其他各株间则有大小不等的差异,表明不同亚型病毒株抗原性差异大,同一亚型毒株间抗原性差异小.     

实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的应用研究

目的应用实时荧光RT-PCR快速检测2009～2012年河池市流感病毒核酸,为流感的预防控制提供科学依据。方法采集河池市哨点医院的流感样病例和暴发疫点现患病例的咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法进行流感病毒核酸检测分型。结果以实时荧光RT-PCR法检测2 090份标本,流感病毒核酸阳性801份,总阳性率为38.28%。其中甲型H1N1流感468份,B型126份,季节性流感H1亚型14份,季节性流感H3亚型109份。结论实时荧光RT-PCR法检测流感病毒具快速、操作方便、特异性强、灵敏度高等优点,值得推广应用。     

荧光定量RT-PCR快速检测A型流感病毒的研究

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与传统的血凝抑制法进行比较。结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2.56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为108.5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法只有很好的稳定性、重现性和特异性。结论本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

B型流感病毒斑点金免疫渗滤法的建立和临床应用

目的制备和鉴定B型流感病毒单克隆抗体（McAb）,建立斑点金免疫渗滤法（DIGFA）,用于B型流感病毒的临床检测。方法以B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备McAb,利用胶体金标记技术对抗体进行标记,建立快速检测B型流感病毒抗原的斑点金免疫渗滤法,并对实验条件进行探讨。用建立的DIGFA法与酶联免疫吸附试验（ELISA）同时检测128例患者鼻咽部分泌物,比较敏感性、特异性,以评价检测效果。结果 DIGFA法与ELISA法对比检测了128例样本中B型流感病毒抗原,本方法的敏感性为94.4%,特异性为96.4%,两法总符合率为96.1%。结论 DIGFA法操作简单、方便、快速、特异、灵敏,在B型流感病毒感染的辅助诊断中具有较好的应用价值。     

547例患者流感病毒胶体金法快速检测结果及临床分析

目的总结胶体金免疫层析法(GICA)快速检测流感样病例的结果并对其临床情况进行分析。方法对2013年1月11～31日547例流感样病例进行GICA快速病原学检测,分为阳性组与阴性组,对比分析两组患者一般情况、临床特点及疗效。60例同时进行GICA和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测,评价两种检测方法的符合率。结果 547例患者GICA检测总阳性率为40.8%。阳性组的流行病学史、咳嗽、咽痛、全身酸痛、奥司他韦和抗菌药物使用情况与阴性组比较,差异有统计学意义(P﹤0.05);两组一般情况,临床症状中的咯痰、头痛、腹泻、鼻塞、流涕,白细胞检查结果的差异均无统计学意义(P﹥0.05)。RT-PCR与GICA快速检测流感结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对流感样病例的诊疗中除了重视临床表现、流行病学史外,结合GICA快速检测流感技术,可更有针对性地对患者进行临床诊治。     

泰州地区流感病毒病原学检测分析

目的研究泰州地区近期流感病毒的流行情况，为制定防治决策提供实验室依据。方法在流感监测点和爆发点采集流感样病例鼻咽拭子，用狗肾传代细胞培养技术对采集标本进行病毒分离培养，用“O”型人血红细胞检测培养物的血凝活性，血凝试验阳性且滴度大于1：8的毒株送江苏省疾病预防控制中心确认和分型。结果从泰州145份流感样病例鼻咽拭子标本中成功分离出21株流感病毒，分离率为14．5％。经江苏省疾控中心鉴定H1N1型9株，B型12株。结论泰州市流感流行毒株型别与江苏省内其他监测点相符；病毒分离培养是流感实验室监测中敏感且准确的方法之一。     

双重荧光定量RT-PCR快速检测流感病毒H1、H3亚型的研究

目的 利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测流感病毒H1、H3亚型的方法.方法 根据H1、H3亚型流感病毒HA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立优化反应体系后,将荧光定量RT-PCR的产物采用10倍稀释法,即107～100 copies/μl,再次用荧光定量PCR方法检验建立体系的灵敏度和重复性,并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性.结果 H1和H3亚型流感病毒的检测灵敏度为102 copies/μl,扩增效率分别为101.35％和113.28％,标准曲线相关系数大于99％,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增.结论 本研究建立的双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确地检测H1、H3亚型流感病毒.     

新疆部分地区一般人群流行性感冒抗体水平监测分析

目的了解新疆南、北疆两地区不同人群的流行性感冒（流感）流行状况，为预防和控制疫情提供依据。方法2006年10月在南疆地区喀什市及北疆地区伊宁市共采集一般人群血清430份，应用新疆2005～2007年度流感监测所分离病毒作为抗原，以微量半致敏血凝抑制方法进行抗体检测。结果人群对H1N1及H3N2亚型毒株的抗体阳性率明显高于B（Yamagata）及B（Victoria），其中H1N1抗体阳性率为82．79％，H3N2抗体阳性率为86．74％，B（Yamagata）为55．81％，B（Victoria）为57．91％。且H1N1、H3N2、B（Yamagata）、B（Victoria）抗体阳性率及保护率在各年龄纽及地区间均有显著性差异。结论加强流感病毒抗原变异株和人群流感抗体水平的监测。