神经生长因子对兔局灶性脑缺血再灌注神经功能修复的影响和MR影像学评价

目的:研究神经生长因子(NGF)对兔局灶性脑缺血再灌注损伤神经功能修复的影响,并利用MR成像技术进行评价。方法:采用兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,分别在缺血2h再灌注损伤后0、1、3和6h应用微量进样器将NGF立体定向导入梗死灶周,于再灌注72h,应用MR影像学、TTC染色和流式细胞术评价兔梗死体积、水肿体积、表观弥散系数(ADC)及神经功能缺损和凋亡状态。结果:缺血再灌注0h、1h、3h和6h灶周给予NGF,梗死体积分别比对照组下降50.1%、48.4%、37.6%和13.7%。同时再灌注3h内应用NGF水肿体积、神经功能缺损评分、灶周凋亡率及caspase-3含量明显下降,梗死中心区及灶周ADC比率(ADCR)升高;再灌注6h后给药,则无明显作用。相关分析显示各组灶周ADCR与灶周凋亡率具有明显负相关。结论:NGF对兔局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,抑制caspase-3活性的表达和细胞凋亡是其保护机制之一,MR影像学检查可作为定量评价基因疗效的可靠指标。     

神经生长因子的脑保护作用与Caspase-3表达的相关性

目的 研究神经生长因子(NGF)的脑保护时间窗与半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的相关性.方法 采用兔局灶性脑缺血再灌注损伤模型,分别于再灌注后0h、1h、3h和6h将NGF立体定向导入梗死灶周,再灌注72h观察神经功能、梗死体积、灶周凋亡率和Caspase-3表达.结果 再灌注0h、1h和3 h灶周给予NGF,梗死体积分别较对照组下降50.1%、42.5%和35.2%,相应的灶周凋亡率及Caspase-3表达明显下降,神经功能恢复较好,用药越早越明显;再灌注6h给药,则无明显作用.相关分析显示梗死体积变化与Caspase-3表达具有明显相关性(P＜0.05).结论 NGF脑保护治疗时间窗与Caspase-3表达相关,抑制Caspase-3表达可能是NGF介导神经保护作用的机制之一.     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的时间窗及其作用机制的探讨

目的　研究胶质细胞源性神经营养因子 (glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对脑缺血再灌注损伤保护作用的时间窗及其保护作用机制。方法　应用免疫组织化学方法观察 GDNF对缺血半暗带Caspase-3及 TNFα蛋白表达的影响 ;TTC染色测定梗死灶体积。结果　与对照组比较 (3 2 3 .1± 49.6) ,0 h及 1h给药组梗死灶体积减小 (193 .4± 53 .8,2 41.1± 57.5) ,0 h组 Caspase-3蛋白表达减少 (10 7.2± 9.5及 92 .3± 6.5) ,各组 TNFα蛋白的表达差异均无显著性。结论　 GDNF对脑缺血再灌注损伤保护作用的时间窗在 3 h之内 ,其作用机制可能与抑制 Caspase-3介导的细胞凋亡有关     

大鼠脑缺血再灌注后梗死体积的动态变化

目的观察大鼠大脑中动脉缺血再灌注后梗死灶体积的变化规律。方法线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察脑缺血2h再灌注3h、24h、3d、7d、14d及21d后的神经功能缺损评分及2％氯化三苯基四氮唑(TTC)标记的梗死体积。结果缺血2h再灌注3h组已经出现较明显的梗死灶(梗死体积占前脑体积14．4％),再灌注24h组梗死体积最大(24．3％),显著大于再灌注3h、7d、14d、21d组(P<0．05)。再灌注3d组梗死灶仍较大 (23．8％),再灌注7d组梗死体积缩小(5．0％),再灌注14d组梗死灶进一步缩小(1．2％),再灌注21d组梗死灶基本消失(0．2％)。大鼠神经功能缺损评分与梗死体积之间呈显著相关(r=0．61,P<0．01)。结论脑缺血再灌注后梗死体积于24h达最大,21d时基本消失。脑缺血再灌注后神经功能缺损评分与梗死体积之间显著相关。     

胰岛素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :研究胰岛素对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型 ,按胰岛素不同给药时间分为 4组 ,检测各组不同时限的血糖、神经功能缺陷评分以及梗死灶体积 ,并在电镜下对缺血边缘区进行超微结构观察。结果 :在 6h内给予胰岛素治疗 ,可使神经功能缺陷评分显著降低 ,梗死灶体积明显缩小 ,缺血边缘区超微结构损伤明显减轻。结论 :在有效治疗时窗内 (6h) ,胰岛素可明显减轻脑缺血再灌注损伤     

神经生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经生长因子 (NGF)对细胞凋亡的影响。方法　应用原位缺口末端标记 (TUNEL)法检测大鼠大脑中动脉线栓法阻断 2h ,再灌注 2 2h ,细胞凋亡情况及静脉注射NGF对细胞凋亡的影响。结果　缺血 2h ,再灌注 2 2h ,梗死区可见大量凋亡细胞 (2 4 8.4 2± 2 4 .37) ,静脉注射NGF后梗死区凋亡细胞明显减少 (190 .2 5± 2 5 .4 7) (P <0 0 1)。结论　局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡增加 ,静脉给予NGF可减少脑细胞凋亡     

神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对Bax表达的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对Bax表达的影响。方法采用栓线法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型,大鼠尾静脉注射NGF。应用免疫组化方法检测脑部神经细胞Bax表达,观察大鼠脑部病理改变。结果缺血再灌注组大鼠缺血侧半球皮质及纹状体Bax阳性细胞数为115.25±15.07,NGF组Bax阳性细胞数为70.00±12.77,两组比较差异有极显著性(P<0.01);光镜及电镜观察发现NGF组梗死区病理变化明显轻于缺血再灌注组。结论NGF对脑缺血再灌注损伤具有明确的保护作用,可减轻脑组织的损伤程度,并可减少缺血脑神经细胞Bax表达。     

白细胞介素8单克隆抗体对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

脑缺血再灌注损伤与炎症反应关系密切,白细胞介素8(IL8)作为一种中性粒细胞趋化因子,在脑缺血后炎症损伤中有重要作用[1]。我们设想IL8单克隆抗体(简称IL8单抗)可能对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,在建立脑缺血再灌注模型基础上,侧脑室注射IL8单抗,通过观察脑梗死表1各组大鼠脑梗死灶体积及TUNEL、Bcl2及Bax阳性细胞数分组鼠数梗死灶体积(mm3)TUNELBcl2Bax生理盐水对照组6210.26±25.5845.82±7.0322.97±5.6470.16±8.54IL8单抗0.5μg组6207.25±28.5944.92±7.1124.46±6.3868.26±8.43IL8单抗1μg组6166.29±31.7338.87±7.1…     

神经营养因子在大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤中的变化及丹参乙酸镁的影响

目的观察丹参乙酸镁对局灶性脑缺血-再灌注后大鼠神经行为、梗死体积、组织形态及缺血半暗带神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨丹参乙酸镁的神经保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠36只随机分为3组,Ⅰ组(假手术+安慰剂组);Ⅱ组(缺血-再灌注+安慰剂组);Ⅲ组(缺血-再灌注+药物组)。用线栓法建立动物模型,各组在术后48h断头取脑,处死前行神经功能评分,用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色计算脑梗死体积,用HE染色观察组织学形态,用免疫组织化学染色观察NGF、BDNF的表达。结果Ⅰ组在神经功能评分、梗死体积、组织形态及大脑皮层相应部位NGF、BDNF阳性细胞数均正常。与Ⅱ组相比,Ⅲ组的神经功能评分和梗死体积明显降低(P<0.05);光镜下,Ⅲ组缺血性病理改变较轻,缺血半暗带NGF、BDNF阳性神经元数显著增加(P<0.01)。与Ⅰ组相比,Ⅱ组缺血半暗带NGF、BDNF阳性神经元数显著增加(P<0.01)。结论丹参乙酸镁对脑缺血-再灌注损伤有一定的神经保护作用,其机制可能是通过增加缺血半暗带NGF、BDNF的表达而实现的。     

细胞外信号调节激酶在实验性脑缺血损伤皮层区的动态时空变化

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在局灶性脑缺血/再灌注损伤梗死灶周皮层区的动态时空变化及其作用机制。方法建立兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化检测ERK1在脑缺血2h再灌注不同时间灶周皮层的动态表达规律,同时应用免疫组化和流式细胞术检测细胞凋亡状态的动态变化。结果免疫组化分析显示,缺血2h再灌注灶周皮层区1hERK1表达开始增多,6h数目明显增多,3d达高峰,然后逐渐下降,14d回落到基线水平,其阳性细胞数分别为0.22±0.02、0.25±0.02、0.42±0.04、0.14±0.02。其表达时程变化与灶周皮层凋亡的变化相一致。结论脑缺血损伤诱导ERK表达增强,ERK在介导神经细胞凋亡和缺血性损伤中起重要作用。这为脑缺血治疗提供了新的思路。     

Reduction of copper, zinc-superoxide dismutase in knockout mice does not affect edema or infarction volumes and the early release of mitochondrial cytochrome c after permanent focal cerebral ischemia

Copper,zinc-superoxide dismutase (SOD1) was shown to be highly protective against ischemia/reperfusion injury in the brain. We have recently reported that SOD1 prevents the release of mitochondrial cytochrome c and subsequent apoptosis after ischemia/reperfusion in mice. To investigate its dose dependent effect on permanent focal cerebral ischemia, we examined neurological deficit scores, infarction volume, and the amount of hemisphere enlargement after 24 h of focal cerebral ischemia in both knockout mutants of SOD1 (Sod1 -/+ and Sod1 -/-) and wild-type littermates. We also examined the release of cytochrome c and subsequent DNA fragmentation after ischemia. There were no differences in the neurological deficit scores, infarction volumes and edema formation. There was also no difference of the amount cytosolic cytochrome c at 2 h and of the amount of DNA fragmentation at 24 h after focal cerebral ischemia. The results indicate that the SOD1 enzyme does not appear to affect cerebral infarction, cerebral edema nor the mitochondrial signaling pathway for apoptosis following permanent focal cerebral ischemia where there is no reperfusion injury.     

Therapeutic time window for the neuroprotective effects of NGF when administered after focal cerebral ischemia

In the present study, we evaluated the neuroprotection time window for nerve growth factor (NGF) after ischemia/reperfusion brain injury in rabbits as related to this anti-apoptosis mechanism. Male New Zealand rabbits were subjected to 2 h of middle cerebral artery occlusion (MCAO), followed by 70 h of reperfusion. NGF was administered after injury to evaluate the time window. Neurological deficits, infarct volume, neural cell apoptosis and expressions of caspase-3 and Bcl-2 were measured. Compared to saline-treated control, NGF treatment at 2, 3 and 5 h after MCAO significantly reduced infarct volume, neural cell apoptosis and expression of caspase-3 (P < 0.01), up-regulated the expression of Bcl-2 and improved functional recovery (P < 0.01). However, treatment at latter time points did not produce significant neuroprotection. Neuroprotection treatment with NGF provides an extended time window of up to 5 h after ischemia/reperfusion brain injury, in part by attenuating the apoptosis.     

经颅重频磁刺激对大鼠脑缺血再灌流损伤早期运动皮层兴奋性和神经功能的影响

目的 观察经颅重频磁刺激（rTMS）对大鼠脑缺血再灌流损伤早期运动皮层兴奋性和神经功能的影响。方法测定Wistar大鼠右后肢运动阚值（MT）．制作左侧大脑中动脉栓塞（MCAO）再灌流模型．给予rTMS（1次／d）。再灌流72h处死取脑。比较大鼠MCAO再灌流损伤不同时间MT、神经功能评分，脑梗死体积的变化及rTMS的影响。结果MCAO再灌流损伤使大鼠出现局灶性梗死灶，MT升高；神经功能障碍且其程度随损伤时间延长而愈加明显．表现为功能评分升高；rTMS可改善大鼠MCAO再灌流损伤72h的MT和功能障碍程度。减小梗死体积。尤其改善神经功能障碍的程度与对照组比较差异有显著性（P=0．004）。结论rTMS可能对早期缺血脑组织有保护作用．对缺血性脑卒中有进一步研究、应用前景。     

阿司匹林促进大鼠缺血脑组织脑源性神经营养因子的表达

目的:探讨不同剂量阿司匹林(Asp)对脑缺血/再灌注(CI/RP)损伤大鼠的神经保护作用及其对脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉CI/RP模型,对CI/RP后大鼠进行肢体神经功能缺损评分:1~3分的48只大鼠入选。入选大鼠分为对照组、Asp小剂量组(20 mg.kg-1)、Asp中剂量组(80 mg.kg-1)和Asp大剂量组(320 mg.kg-1),于CI/RP术后每日腹腔注射Asp或溶媒,并进行神经功能缺损评分,72 h后处死,测定脑梗死体积和BDNF免疫组化检测。结果:CI/RP后24、48和72 h各Asp组大鼠与对照组相比,神经缺损评分明显降低(P<0.05或P<0.01),梗死灶体积显著减小(P<0.01),缺血区域BDNF表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。对BDNF表达的作用Asp大剂量组的作用并不优于Asp小剂量组和中剂量组。结论:Asp可以减少CI/RP大鼠的脑梗死体积;促进内源性BDNF的表达可能是其神经保护的机制之一,Asp对BDNF表达的作用并非随Asp剂量的加大而增强。     

动员自体骨髓干细胞对大鼠脑缺血／再灌注损伤及细胞凋亡的影响

目的 探讨应用G-CSF动员自体骨髓干细胞对大鼠脑缺血／再灌注损伤及细胞凋亡的影响。方法 应用线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞／再灌注(MCAO／R)模型，应用粒细胞集落刺激因子(G-GSF)刺激自体骨髓干细胞分裂增殖，并用5-溴脱氧尿核苷(Brdu)标记。观察大鼠神经病学评分，HE染色和免疫组化检测脑缺血区病理改变及CD34和Brdu阳性细胞，原位末端标记法(TUNEL法)观察细胞凋亡。结果 模型动员组大鼠脑缺血／再灌注后24h，大量炎症细胞浸润。再灌注后48h，缺血区可见CD34和Brdu阳性细胞；72h后CD34阳性细胞消失，而Brdu阳性细胞持续存在；模型未动员组缺血区无CD34和很少Brdu阳性细胞表达。48h缺血区新生毛细血管密度明显高于对照组。再灌注后24h细胞凋亡显著，1周时达高峰；与模型非动员组比较，模型动员组48h后细胞凋亡改善明显。结论 自体骨髓干细胞经G-CSF动员后可向大鼠脑缺血区趋化并可分化为神经元前体细胞，显著促进脑缺血区血管再生，降低脑神经功能评分，降低细胞凋亡率。     

三七三醇皂苷对脑缺血再灌注大鼠的保护作用

目的 通过对局灶性脑缺血大鼠不同再灌注时段的动态观察．探讨三七三醇皂苷(PTS)对大鼠局灶性脑缺血／再灌注动物模型的神经行为学和脑梗死体积的保护作用。方法 采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MACO)2h、再灌注不同时间段(3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d)的大鼠短暂局灶性脑缺血模型。动物随机分假手术组、生理盐水对照组、三七三醇皂苷(PTS)组。用Zea Longa5分制评分和TTC染色法评价神经行为学和脑梗死体积。结果 神经行为学评分除72h组有明显改善外．其余各组与生理盐水对照组比较无显著性差异。脑梗死体积除再灌注3h、6h外．其余各组与生理盐水组比较差异均有显著性意义。结论 三七三醇皂苷对大鼠局灶性脑缺血及再灌注损伤有一定的保护作用。