一起养殖场H5N1禽流感暴发疫情的现场处置报告

目的调查、分析和处置此次H5N1禽流感农场暴发疫情的流行情况,探讨有效防控措施。方法对养殖场的35018只鸡进行扑杀和无害化处理,对密切接触人员隔离和医学观察,采集职业暴露者的咽拭子标本,通过荧光RT-PCR方法检测,对疫点周围农民开展调查。结果 2012年3月27日-4月8日,控制住H5N1禽流感疫情,标本核酸检测为阴性,密切接触人员和疫点周围农民均无流感样临床症状。结论此次H5N1禽流感动物暴发疫情,通过卫生和农业两部门积极采取措施,疫情得到控制,方法有效,未发生人感染疫情。     

香港H5N1型禽流感病毒的由来

H5N1原是感染鸟类的流感病毒,但1997年在香港直接感染人类,造成18人感染6人死亡,病死率超过30％,超出想象。流行性感冒大都发生在冬季,但此型病毒感染却发生在流感的非流行期,引起大众的恐慌,担心此型流感的发展会大流行,造成人类的浩劫。幸好香港特区政府处理得宜,随即实施鸡只扑杀政策,终于成功遏制了H5N1流感病毒的流行。1999年香港有2位儿童感染H9N2型流感病毒,这种病毒在国内大陆、欧洲、中东、南非及美国的家禽间也曾经造成流行,香港的H5N1型禽流感病毒流行期间,从鹌鹑中分离到的H9N2非常接近从人类分离到的H9N2型流感病毒,H9N2与     

一例孕妇感染禽流感病毒(H5N1)死亡的调查

目的探讨2005年11月安徽省铜陵市人民医院报告的一例不明原因肺炎孕妇死亡的病因.方法访谈病例发病前后的相关知情人,查阅临床病志,对病例和病死禽的密切接触者进行医学观察.采集病例的气管吸取物,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时荧光定量PCR法,检测A/H5N1亚型特异的核酸片段,接种SPF鸡胚进行病毒分离.结果病例发病前4天有明确的病死禽直接暴露史,病例和病死禽的122名密切接触者经10天医学观察均健康.病毒性肺炎伴血白细 胞和淋巴细胞计数的显著下降,迅速进展的呼吸衰竭和多器官衰竭是其主要临床特征.病例的气管吸取物A/H5N1的HA和NA基因阳性,分离到的A/Anhui/1/2005（H5N1）的8个基因节段均为禽源的,血凝素抗原的受体链接肽仍为多个碱性氨基酸.结论该病例为首次报告感染禽流感病毒（H5N1）发病、死亡的孕妇.孕妇妊娠期间的免疫耐受状态可能是导致其感染,引起相应临床表现和进程的重要原因.     

北京市首例人禽流感H5N1病例的感染来源调查

目的 调查北京市首例人禽流感(H5N1)病例的感染来源.方法 通过对患者家属和其他关键人物访谈,检测患者标本以及流行病学关联的环境标本,对患者可能的感染来源进行追踪调查.结果 该患者在其发病前5天曾经接触过宰杀的鸭子(购自河北省燕郊某市场活禽摊位),采集该摊位及邻近活禽摊位的环境标本10份,经PCR方法检测有6份标本为H5N1亚型病毒核酸阳性,并通过鸡胚分离出5株H5N1亚型病毒.将从环境标本中分离的H5N1亚型病毒与患者体内分离的H5N1亚型病毒(禽源、属于Clade 2.3.4)进行全基因组序列比对,氨基酸同源性高达99.8%～100%.结论 流行病学和病原学双重证据表明,北京市首例人禽流感H5N1病例的感染来源为接触携带H5N1亚型禽流感病毒的鸭子.     

丽水市红嘴相思鸟H5N1禽流感病毒核酸检测报告

目的:检测丽水市红嘴相思鸟标本禽流感病毒。方法:荧光定量PCR方法检测禽流感病毒H5N1、H7和H9亚型核酸。结果:标本禽流感病毒H5N1核酸检测阳性,H7、H9亚型检测阴性。结论:冬春季是禽流感的多发季节。候鸟禽流感在本市存在。迁徙禽类禽流感的发生预示禽流感不再是某个区域的现象。     

中国大陆首例人感染禽流感病毒(H5N1)的调查与确认

目的确认2005年10月湖南省湘潭县发生的一起家庭聚集性（姐弟二人）不明原因肺炎病例的病因.方法访谈病例发病前后的相关知情人,重现病家暴露环境及发病时间序列,查阅临床病志,对病例和病死禽的密切接触者进行医学观察.采集病例咽拭子,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时荧光定量PCR法,检测A/H5N1亚型特异的核酸片段,接种SPF鸡胚进行病毒分离.应用马血球血凝抑制试验和微量中和试验检测患者急性期和恢复期血清抗A/H5特异性抗体滴度.结果姐（病例1）弟（病例2）二人分别在其家鸡开始死亡2天和4天后出现发热和肺炎症状,病例1死于急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭,病例2痊愈.病例1病后第8天的血清A/H5抗体阴性,病例2急性期和恢复期血清抗体滴度呈4倍以上升高.192名密切接触者中,仅1名（接诊过病例1的医生）出现上呼吸道症状,但血清标本经微量中和试验阴性.结论病例2为中国大陆第一例感染禽流感病毒（H5N1）的确诊病例,病例1为临床诊断病例.二者发病最可能是感染了相同家庭环境中病死禽传播的H5N1病毒,调查中未发现两病例之间有互相传播的证据.     

广西禽流感H5N1亚型病毒HA基因序列分析

目的了解广西禽流感H5N1亚型病毒的基因特性.方法2011年在广西农贸市场采集污水、笼具涂抹、粪便标本,经H5亚型特异实时荧光定量PCR方法(Real-time fluorescence quantitative RT-PCR)检测,阳性样本进行病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因扩增后对产物直接测序,测序结果与已知参考毒株进行序列比对及系统进化分析.结果对阳性样本病毒HA基因测序获得6份HA序列,均分布在进化分支2.3.2的Ⅱ-1分支下.广西的6序列无论是氨基酸还是核苷酸的都是高度同源的,其核苷酸同源性在99.5%~100%,氨基酸同源性在99.5%~99.8%;序列测定的结果同时表明无论是受体特异性还是连接肽都是禽源的.结论2011年广西农贸市场流行的禽流感H5N1亚型病毒主要以进化分支2.3.2Ⅱ-1为主,均为禽源性的病毒.     

1例人感染高致病性禽流感（H5N1）死亡的调查

目的探讨2006年2月4日湖南省邵阳市中心医院报告的1例不明原因肺炎死亡病因。方法访谈病例发病前后相关知情人,了解病例活动情况以及所在地家禽死亡情况,查阅临床病志,对密切接触者进行医学观察,采集病例的鼻咽分泌物、气管吸取物、肺穿刺物、唾液,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR法(Real-timePCR)检测A/H5N1亚型特异的核酸片段。结果病例发病前6d有宰杀鸡鸭史,对103例密切接触者经7d的医学观察,没有发热和异常情况,病例主要表现为双肺渗出性病变伴白细胞计数显著下降迅速进展为呼吸循环哀竭,病例气管分泌物、肺穿刺液H5N1禽流感病毒核酸均为阳性,咽拭子、唾液检测阴性。结论该病例是一起“禽-人”感染禽流感病毒致死的病例,正常家禽有可能携带H5N1禽流感病毒,应引起高度重视。     

禽流感病毒H5N1血凝素蛋白的重组牛痘病毒表达

目的研究H5 I151F和H5 I151F＋A134V＋E186D两种氨基酸变异对血凝素蛋白（HA）亲人受体结合的影响,并获得该HA。方法构建载体pRB21’,共感染／转染vp37^-牛痘病毒vRB12和pRB21’,基因同源重组牛痘病毒表达HA,Western免疫印迹法鉴定。结果获得了克隆有H5HA全长基因片段的载体pRB21’,构建了2种重组牛痘病毒re-VV H5 I151F和re-VV H5 I151F＋A134V＋E186D,且能在被感染细胞膜表达这两种HA。结论首次通过构建重组牛痘病毒成功表达了禽流感病毒H5N1的H5HA,为进一步研究禽流感病毒人传人的可能性奠定了基础。     

南昌市家禽养殖环境及人群H5N1禽流感监测分析

摘要:目的　了解南昌市家庭内禽类养殖人员及养殖环境H5N1禽流感病毒感染状况。方法　应用 one-step RT PCR 监测环境标本中 H5N1 禽流感病毒,应用单扩溶血试验和马血球血凝抑制试验监测人血清样品中 H5N1 禽流感病毒抗体。应用描述性分析方法对数据进行分析。结果　2009-2013年共采集640份环境标本,阳性率1.4%。仅2009年在禽类污染的污水中检出9份H5N1禽流感病毒阳性样本,其他年份环境标本中无阳性样本检出;共检出血清H5N1禽流感抗体阳性标本共5份,占监测人群的1%,家禽散养户2例,家禽规模养殖场2例,家禽屠宰加工厂1例,分别占相关人群的0.80%、0.69%和1.72%。其中2009年4份,2011年1份。结论　禽类职业暴露人群中存在H5N1禽流感病毒的隐性感染者,提示禽类职业人群在工作中应加强个人防护工作,同时应限制家庭内禽类散养。     

H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速诊断试剂的改进与初步评价

H5N1病毒高度变异,为确保本中心研制的H5N1禽流感病毒抗原快速诊断试剂对不同变异分支的H5N1病毒,特别是实时流行株的高度检测准确性,本研究根据抗原活性变异情况对中心开发的第一代H5抗原快速诊断试剂进行了改进。改进后的第二代H5抗原快速诊断试剂(H5-Dot-2nd)对25株代表亚洲地区流行的不同进化分支的H5N1禽流感病毒检测均为阳性,其中12株检测下限达到0.01HA;而对20株32HA滴度的非H5亚型流感病毒株检测均为阴性;不同机构的评价结果显示,H5-Dot-2nd的灵敏度比国外同类试剂高出10～1000倍,对非H5现场标本特异性达到99.0%(399/403)。上述结果提示,H5-Dot-2nd对历年来特别是当前流行株均具有很好的检测灵敏度,能更好地满足流感疫情监控的需要。     

禽流感病毒H5N1抗原基因克隆及体外转录

目的通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒抗原基因的RNA全长片段,为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)及基质蛋白M(M)的基因克隆引物,RT-PCR从病毒RNA获得相应片段,分别连接至pGEM-T Easy质粒并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度,RT-PCR验证。结果获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M全长基因序列的RNA片段,并可准确定量其拷贝数,质量浓度HA为503.9 ng/μL、NA为379.2 ng/μL、M为437.8 ng/μL。结论获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。     

云南省边境地区禽流感H5N1亚型病毒遗传多样性分析

目的 了解云南省边境地区禽流感H5N1亚型病毒遗传多样性.方法 2009-2011年7月在云南省边境地区采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品,经H5/Nl亚型特异性多重RT-PCR检测,阳性样品进行病毒HA基因扩增,克隆至pMD 18-T载体测序,并与已知参考毒株进行序列比对及系统发育分析.结果 36份阳性样品病毒HA基因测序获得15种HA序列,存在2个不同进化分支(2.3.2、2.3.4),2.3.2进一步可划分为3个进化小分支(Ⅱ-1～Ⅱ-3),2.3.4进一步可划分为2个进化小分支(Ⅰ-1和Ⅰ-2).2.3.2Ⅱ-1、Ⅱ-2毒株是新出现的H5N1亚型病毒变异株.结论 2009- 2011年7月云南省边境地区H5N1亚型病毒具有遗传多样性,病毒经历了多分支(2.3.2、2.3.4)至单一支(2.3.2)的进化过程.     

如何进行人感染禽流感H5N1病例的感染来源调查

为了给参与禽流感病例现场流行病学调查的专业人员提供参考,本研究对我国2005年以来确诊的40例禽流感病例的调查结果进行汇总分析,结果显示3例(7.50%)暴露史不详,21例(52.50%)有直接或间接接触病死禽史,14例(35.00%)有活禽市场或禽类制品暴露史,2例(5.00%)有与同类病例接触史。有病死禽暴露史的病例主要与居住在农村(95.24%)、住家或附近环境(85.71%)、成年人(66.67%)、女性(66.67%)和家务劳动(61.90%)等线索有关;有活禽市场或禽类制品暴露史的病例主要与成年人(85.71%)、居住在城市(78.57%)和饮食习惯(50.0%)等线索有关。既往现场调查经验提示,任何一例禽流感新发病例均可能具有与既往病例完全不同的特点,开展感染来源调查应结合实际情况灵活运用调查方法。     

美批准使用H5N1型禽流感病毒快速检测技术

新华社信息华盛顿4月7日电（记者任海军）美国食品和药物管理局7日批准使用一种H5N1型禽流感病毒快速检测技术，用这种技术可以在40分钟内检测出人是否感染了H5N1型禽流感病毒。     

浙江省2002-2006年禽流感H5N1病毒基因特性与进化重组分析

目的 对近年来浙江省禽流感病毒H5N1分离株的基因特性与进化重组特征进行分析.方法 通过对2002-2006年浙江省禽与人的H5N1病毒株进行全基因序列测定,采用Mega 3.0生物信息学软件分析病毒株基因特性并与相关基因型标准病毒株进行系统进化分析.结果 2002-2006年浙江省HSNl病毒株HA序列裂解位点序列含多个碱性氨基酸,符合高致病性禽流感病毒特征;与Gs/Guangdong/1/96相比,除Dk/Zhejiang/2/02和Ck/Zhejiang/8/03株外其他病毒株均在NA蛋白茎区缺失20个氨基酸.全基因系统进化分析表明,2002-2003年的分离株遗传基因基本属于当年流行的B、W、X、Y、z等基因型,但部分病毒株不同基因片段属于不同基因型.结论 浙江省禽类中也广泛存在H5N1的基因片段重组现象,2005年后的Ck/Zhejiang/24/05株及人H5N1 Zhejiang/16/06株各遗传基因基本上稳定于近年大陆流行的FJ-like基因型.     

中国香港发现一只鹊鸲带有H5N1禽流感病毒

<正>2010年1月4日消息:香港特区政府渔农自然护理署4日表示,较早前于八仙岭鹤薮捡获的鹊鸲经多项测试后,证实对H5N1禽流感病毒测试呈阳性反应。据介绍,该野鸟的尸体于去年12月29日在八仙岭郊野公园近鹤薮管理站的位置被发现及捡走。鹊鸲是香港常见的留鸟。     

长沙市家禽市场环境中H5N1亚型禽流感病毒传播风险研究

目的 对长沙市家禽市场职业暴露人群进行禽流感病毒（AIV）H5N1亚型抗体水平和环境AIV核酸检测,并对环境中AIV H5N1亚型的血凝素（HA）基因进行测序分析。方法 抽取长沙市1个区和1个县,各选择2个城区或乡镇家禽市场进行职业暴露人群H5N1抗体和环境AIV核酸检测。利用单放射免疫扩散溶血实验（SRH）对102份家禽市场职业暴露人员血清标本进行H5N1抗体检测,real-time PCR方法检测160份家禽市场环境标本（污水、禽类粪便、羽毛和禽类笼具表面涂抹标本）AIV核酸,对4份污水H5N1亚型AIV核酸阳性标本进行HA基因RT-PCR扩增和TA克隆测序,测序结果利用Lasergene和Mega 5.0软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果AIVH5N1抗体监测结果显示,家禽市场职业暴露人群血清H5N1抗体阳性率为25.5%（26/102）,其中乡镇和城区家禽市场职业暴露人群阳性率分别为50.0%（9/18）和25.4%（17/67）,乡镇家禽市场职业暴露人群阳性率高于城区。长沙市家禽市场环境中H5亚型AIV核酸阳性率为31.3%（50/160）,其中乡镇家禽市场阳性率为37.3%（31/83）,高于城区家禽市场24.7%（19/77）;不同标本H5亚型AIV核酸阳性率不同：污水（50.0%,24/48）、羽毛（44.5%,4/9）、禽类粪便（29.8%,14/47）和禽类笼具表面涂抹（14.3%,8/56）;差异均有统计学意义（P＜0.01）。TA克隆测序得到4个AIVH5N1亚型HA基因序列,进化树显示4个AIVH5N1亚型HA基因与中国内地和香港禽来源的AIV分离株为同一分组,属于欧亚分支;4个AIV H5N1亚型HA基因受体结合位点氨基酸序列仍然为禽源（QSG）、HA1和HA2蛋白之间连接肽为多个碱性氨基酸序列（RERRRKK或RERRGKK）,与入源AIV H5N1亚型具有相同的受体结合位点和高致病性的分子特征。结论 长沙市家禽市场环境中存在较多数量的AIVH5N1亚型,是导致职业暴露人群抗体阳性率达25.5%的原因之一;环境中存在的AIVH5N1亚型HA基因表现出来的高致病性分子特征,增加了家禽市场环境中发生AIV传播的风险。     

湖南省2006--2009年人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)分子特征研究

目的 分析湖南省2006-2009年4例人感染高致病性禽流感病例感染病毒的可能来源、基因重配情况以及分子特征.方法 鸡胚分离核酸检测H5N1病毒阳性标本,获得高致病性H5N1病毒,对病毒进行全基因组序列测定,采用BLAST和MEGA4.0进行同源性比对、基因进化分析和各基因分子特征分析.结果 4株病毒的基因片段均为禽源,并未发现与人季节性流感病毒之间发生重配,且与当地禽类中分离的病毒高度同源.全基因组进化树分析显示,4株病毒在分支2.3.4中,2株为基因型V、2株为新的基因型.分子特征分析显示,4株病毒的血凝素(HA)分子裂解位点均为PLRERRKR/G,均出现A160T位点突变,神经氨酸酶(NA)分子49～68位均出现20个氨基酸(aa)缺失,非结构蛋白1(NSI)分子80～84位均出现5个aa的缺失.在HA分子大部分位点,4株病毒仍然表现出与禽类受体的亲和性,HN/1/09和HN/2/09出现可能使病毒对α-2,6连接的唾液酸人类受体的亲和性增强的T192I突变.HN/1/08的PB2基因出现增加小鼠致病力的D701N改变.耐药性基因片段分析显示,4株病毒对金刚烷胺和奥司他韦均敏感.结论 2006-2009年湖南省4株人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)为禽源,但存在多种基因型,而且发生了部分位点的突变.

Abstract：

Objective To understand the possible origins,genetic re-assortment and molecular characterization of 4 highly pathogenic avian influenza A(H5N1)viruses isolated from humans in Hunan province,between 2006 and 2009,Methods H5N1 PCR test-positive specimens were inoculated in embryonated eggs while H5N1 virus was isolated and genomes sequenced.Genome homology and genetic molecular characterization were analyzed by BLAST and MEGA 4.0.Results All gene segments of the 4 viruses were avian in origin.No re-assortment was found between avian influenza A(H5N1)viruses and human seasonal influenza viruses.Virnses that isolated from domestic poultry shared high similarity with the 4 human viruses in gene homology.Data from the whole genome phylogenetic analysis showed that the 4 viruses were in clade 2.3.4,while 2 viruses belonged to genotype V,and another 2 were new genotypes.Results from molecular characterization showed that amino acid sequences of HA cleavage site of the 4 viruses were PLRERRKR/G.All 4 viruses had A160T mutation in HA,a 20 amino acid deletion in the neuraminidase(NA)stalk at position 49-68,and a 5 amino acid deletion in the non-structural protein 1(NS1).Most sites in the HA molecules showed that the viruses preferentially bound to avian influenza virus receptor.However,T192I mutation that might enhance the α2,6-linked sialic acid human influenza receptor binding had emerged in HN/1/09 and HN/2/09.D701N mutation of PB2 that increased the virulence in mice was found in HN/1/08.Analysis on drug resistance gene amino acid showed that all 4 viruses were sensitive to amantadine and oseltamivir.Conclusion Highly pathogenic avian influenza A(H5N1)viruses isolated from humans in Hunan province from 2006 to 2009 were avian in origin,and the 4 viruses belonged to different genotypes.Some mutations that related to virulence and receptor binding positions had emerged in some of the strains.     

研究发现H5N1禽流感病毒可感染人类上呼吸道

2007年2月5日消息：香港大学医学院日前公布的一项研究结果发现，H5N1禽流感病毒除了可感染人类下呼吸道外，也可感染人类上呼吸道的表皮细胞。[第一段]