胰岛干细胞移植

胰岛细胞的替代治疗是糖尿病治疗的新方向，但由于受到供体来源的限制无法推广。利用干细胞移植分化成为胰岛功能细胞是目前的热门科研项目。本文综述了近年来从胚胎干细胞和成体干细胞分化为胰岛细胞的试验成果。     

损伤胰腺组织提取液诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的实验研究

目的：探讨胰岛损伤的胰腺组织提取液诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素样细胞分化的作用.方法：通过大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立1型糖尿病模型,6 d后剥离胰腺提取胰腺组织提取液,与SD大鼠骨髓间充质干细胞共同培养18 d,体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化,RT-PCR法检测诱导分化后细胞的胰岛细胞相关基因的表达,葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测诱导后细胞在高糖作用下分泌胰岛素的功能.结果：经损伤胰腺组织提取液诱导后,间充质干细胞在形态上由梭形变成多边、不规则形,且逐渐聚集成岛状.免疫荧光检测诱导细胞的胰岛素表达呈阳性,RT-PCR检测诱导细胞表达胰岛素1（Ins1）、胰岛素2（Ins2）、葡萄糖转运子2（Glut-2）、神经源素3（Ngn3）、胰腺十二指肠同源盒1（Pdx1）、同源框蛋白（Isl-1）及脑神经源性分化因子（NeuroD）等胰岛相关基因,且具备高糖诱导促进胰岛素分泌的功能.结论：在损伤胰腺组织提取液诱导下,骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞,并且具有表达胰岛相关基因和胰岛素分泌功能.     

临床细胞加工与细胞治疗

随着干细胞研究从实验室走向临床,临床细胞加工技术逐步成为热点.起源于造血干细胞移植的细胞加工技术,在发展中对条件与技术的要求越来越严格和规范.该文深入探讨了临床细胞治疗中的常见种类和方法,如应用免疫磁珠筛选外周血CD34 的造血干细胞;通过体外筛选、共培养和纯化技术改良淋巴细胞,防范移植物抗宿主或进行过继免疫治疗血液系统肿瘤或实体瘤;脐血造血干细胞移植的方法和优缺点;骨髓间充质干细胞的富集和体外扩增等加工技术及其诸多临床应用;树突状细胞体外激活后移植治疗肿瘤、胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病、角膜缘干细胞移植修复角膜、神经干细胞移植治疗脑外伤和帕金森等疾病的技术方法和现状.还明确了目前临床细胞治疗的潜力和价值,强调了规范治疗的必要性.     

干细胞分化为胰岛样细胞的研究近况

糖尿病是严重危害人类健康的疾病之一。胰岛移植是治疗糖尿病有效的方法,但供体来源问题限制了它的广泛应用。寻找新的细胞来源成为当务之急。干细胞研究为此开辟了一条新的途径。本文综述了近年来干细胞诱导分化为胰岛样细胞的研究进展,并对存在问题作了分析。     

Nestin阳性细胞的研究进展

胰岛干细胞移植有望能治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病。从胰腺组织分离得到的Nestin阳性细胞，可以转分化为胰腺的内、外分泌细胞和肝细胞，因而被认为是胰岛干细胞；但是也有研究表明Nestin阳性细胞不能转分化为胰岛细胞，主要与未成熟胰岛细胞向胰岛细胞过渡过程中的血管生成有关，并向未成熟胰岛细胞传递信号，促进胰岛细胞的成型(formation)并维持胰岛细胞的形态功能。本文就Nestin阳性细胞的研究进展进行综述。     

源于体外培养胰岛中表达Ngn3的细胞是胰腺内分泌前体细胞的新证据

目的 评估表达Ngn3的细胞对成体胰岛维护和更新的作用及其意义。方法 用6—8周龄的C57BL／6小鼠分离胰岛。胆总管内插管成功后,切除胰腺组织并用浓度为2．5mg／ml胶原蛋白酶V灌注消化。手工拣取胰岛后,置于60mm培养皿内,每个培养皿内含10—12个胰岛,用RPMI-1640(12．5mmol／L HEPES,5．2mmol／L葡萄糖和2％胎牛血清)培养液培养。用A6抗体,胰岛素抗体,胰高血糖素抗体,Nestin抗体,Ngn3抗体和5′—溴—2—脱氧尿嘧啶(5-bromo-2′-deoxy-uridine,Brdu)抗体进行胰岛细胞免疫荧光染色。结果 在增殖的胰岛细胞中,只有不到15％的细胞表达Ngn3,其中约有30％以上的细胞同时表达A6。在培养的胰岛细胞中存在表达Ngn3的细胞,这一结果与其他在胚胎发育和成体胰岛中的研究结果一致。本研究发现培养的胰岛细胞中存在同时表达A6和Ngn3的细胞。A6被认为是可分化为胆管上皮细胞的肝脏前体细胞的标记物。胰岛内表达A6的细胞可能来源于成体胰管,并迁移至胰岛内。细胞表达A6的同时表达Ngn3,表明这些细胞在胰岛内可分化为内分泌细胞。结论 培养的胰岛细胞中发现共同表达Ngn3和A6的细胞,表明胰岛内的4种内分泌细胞可能来源于成体胰岛中的同一内分泌细胞系。A6和Ngn3是对胰岛内成体干细胞研究很有帮助的标记物。这可以让我们进一步了解IPC的增殖和分化,并且有可能通过胰岛内成体干细胞来治疗糖尿病。     

新生鼠胰岛干细胞分离、培养和分化的实验研究

目的　探索新生鼠胰岛干细胞体外分离鉴定、培养以及体外分化的方法。方法　用胶原酶消化新生大鼠胰腺 ,将消化的组织碎片在pH7.4～ 7.6条件下经含血清RPMI 164 0及无血清RPMI164 0 (添加bFGF ,EGF ,N 2 )培养液中培养 ,观察形成类胰岛样细胞团的全过程。用胰岛素释放实验检测胰岛功能 ,免疫荧光法检测nestin的表达。结果　胰腺消化碎片培养 3 6h内 ,可见nestin阳性细胞贴壁 ,添加bFGF ,EGF ,N2后nestin阳性细胞快速增长 ,18～ 2 4d形成类胰岛样细胞团 ,并可表达胰岛素。结论　胰腺细胞中nestin阳性细胞具有胰岛干细胞特点 ,经体外培养可获得类胰岛样细胞团     

多潜能干细胞定向分化为胰腺β细胞的研究进展

近几年利用多潜能干细胞体外诱导分化为胰岛β细胞的研究进展迅速.本文主要讨论近几年来维甲酸、骨形态发生蛋白、成纤维生长因子家族在多潜能干细胞分化为胰岛β细胞过程中的作用及其可能机制方面的研究进展,以及多潜能干细胞于体外诱导分化为胰岛β细胞的不同阶段其表面抗原CD14、CD49e、CD238、CD24、上皮细胞表面黏附分子阶段特异型胚胎抗原1和 3的表达与分化的关系及组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导小分子1和2、间变性淋巴瘤激酶的抑制物1和2在分化中的作用.     

胰岛干细胞移植

胰岛细胞的替代治疗是糖尿病治疗的新方向,但由于受到供体来源的限制无法推广。利用干细胞移植分化成为胰岛功能细胞是目前的热门科研项目。本文综述了近年来从胚胎干细胞和成体干细胞分化为胰岛细胞的试验成果。     

多能干细胞来源的胰岛细胞及其在糖尿病治疗中的应用

干细胞体外定向分化技术的发展使体外再造可用于移植的胰岛细胞或组织成为可能,同时基于包囊等技术的辅助免疫调控方式为解决移植后的免疫排斥反应提供了方案,这些新技术的高速发展为糖尿病的细胞治疗奠定了基础。本文着重探讨人类胰腺发育过程与干细胞定向分化的关系、干细胞体外胰向分化系统的建立以及免疫调控技术在多能干细胞（PSC）胰岛移植中的应用。     

同种异体胰岛细胞和干细胞来源胰岛移植的现况与未来

同种异体胰岛移植为治愈糖尿病带来了希望。20世纪90年代以来，干细胞研究的迅速进展，为移植提供了新的移植物来源，用干细胞或祖细胞增殖分化获得足够数量和功能的胰岛进行移植，是未来胰岛移植的方向。     

PDX-1基因提高脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞能力的研究前景

1型糖尿病主要是由于胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏引起,胰岛β细胞无法再生,也不能进行异种移植,干细胞移植是治疗糖尿病的新型方法。已有研究证实了脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSC)能够被诱导分化成胰岛素分泌细胞,也有研究显示了胰十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)可诱导非胰岛分泌细胞如骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞等向胰岛素分泌细胞分化,提示PDX-1在改善胰岛β细胞再生和促进胰岛细胞恢复中有着巨大潜能。本文就当前PDX-1基因提高脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞能力的研究前景作一综述。     

成人胰腺干细胞分离及转分化为胰岛的研究

目的 通过对成人胰腺干细胞分离和转分化为胰岛过程的研究以便更进一步了解及改进胰腺干细胞分离、培养、鉴定方法。方法 成人胰腺组织以胶原酶消化，密度梯度离心法获得纯化的胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛。导管上皮细胞在体外共培养27d，观察细胞形态学变化及干细胞特异性转录基因PDX—1，CK—19蛋白等的表达。结果 上述方法可获得大量胰腺导管上皮细胞。体外培养第1天即可见PDX—1，CK—19阳性细胞，胰腺导管上皮细胞迅速分裂增殖并转变为有分化能力的干细胞继而转分化为三维结构的胰岛细胞。培养27d后，平均每克胰腺组织可生成760个胰岛。结论 用改进的方法可获得大量成人胰腺导管上皮细胞，并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛，可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新途径。     

Nestin阳性细胞的研究进展

胰岛干细胞移植有望能治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病。从胰腺组织分离得到的Nestin阳性细胞,可以转分化为胰腺的内、外分泌细胞和肝细胞,因而被认为是胰岛干细胞;但是也有研究表明Nestin阳性细胞不能转分化为胰岛细胞,主要与未成熟胰岛细胞向胰岛细胞过渡过程中的血管生成有关,并向未成熟胰岛细胞传递信号,促进胰岛细胞的成型(formation)并维持胰岛细胞的形态功能。本文就Nestin阳性细胞的研究进展进行综述。     

胰岛细胞与骨髓间充质干细胞联合移植治疗糖尿病的进展

目的总结胰岛细胞与骨髓间充质干细胞联合移植治疗糖尿病的可行性与安全性。方法收集国内外有关胰岛细胞与骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病的文献并作综述。结果目前糖尿病的治疗方法主要为胰腺移植和胰岛细胞移植,其中胰腺移植的手术创伤大、死亡率高;胰岛细胞移植虽安全性较高,但排斥反应强,胰岛细胞在体内的长期存活时间不理想,严重影响其远期疗效。骨髓间充质干细胞与胰岛细胞联合移植能缓解排斥反应,延长胰岛细胞的存活时间,可以更有效地治疗糖尿病。结论胰岛细胞与骨髓间充质干细胞联合移植具有降低排斥反应、减轻炎症反应、延长胰岛细胞的存活时间及延长降血糖时间的效果,可能是新的治疗糖尿病的手段。     

免疫缺陷树突状细胞诱导异种胰岛细胞移植耐受

目的　研究受体来源免疫缺陷树突状细胞(dendriticcell, DC)诱导异种胰岛细胞移植的免疫耐受作用及其机制。方法　从BALB/C小鼠骨髓干细胞诱导分化免疫缺陷DC,负载Wistar大鼠MHC抗原。将上述DC通过尾静脉回输糖尿病小鼠体内(预处理组), 7d后分别将Wistar或SD大鼠胰岛细胞移植于受体鼠肾包膜下。观察移植物存活时间,检测T细胞增殖及TH1 /TH2细胞因子的表达。结果　与对照组相比,预处理组胰岛细胞存活时间明显延长(P < 0. 0 5 ),而以SD大鼠胰岛细胞作为供体的移植物存活时间无明显改变。免疫缺陷DC预处理受体鼠T细胞增殖反应微弱,且TH1 /TH2细胞因子表达明显下降。结论　负载异种MHC抗原的免疫缺陷型DC预处理受体可诱导抗原特异性T细胞无能,以及TH1 /TH2细胞因子的低表达,从而有效地延长异种胰岛细胞存活时间。     

脂肪间充质干细胞移植治疗1型糖尿病

1型糖尿病严重威胁人类健康,胰岛细胞移植可为机体提供正常的胰岛组织细胞,替代体内已被疾病破坏的胰岛细胞,从而维持正常的血糖水平,达到阻止或延缓并发症的发生,为胰岛素依赖的糖尿病带来新的治疗方案。随着干细胞研究的深入,间充质干细胞诱导后移植治疗1型糖尿病取得了进一步的发展,当然随着研究的深入发现了许多亟待解决的问题,即便如此,脂肪间充质干细胞诱导后移植为临床治疗1型糖尿病带来了新的希望,并指明了方向。     

肝脏胰腺成体干细胞的研究进展

肝脏、胰腺／胰岛移植是治疗终末期肝病及糖尿病最具有应用前景的方法之一，但由于供体来源不足等原因，大大限制了其临床应用。近年来。对肝脏、胰腺成体干细胞及其增殖分化潜能的研究，为解决此矛盾并为开辟治疗性细胞移植的新途径带来了希望，其中，肝脏成体干细胞与胰腺成体干细胞之间的同源性特征，为成体干细胞的可塑性及其应用研究提供了新的平台。     

胰岛β细胞的来源

传统观念认为,出生时人体就已拥有了终生的胰岛β细胞,β细胞是不能通过自我复制再生的,因而人们一直将胰腺内分泌细胞来源的研究焦点集中于寻找胰岛干细胞上。现有证据表明,β细胞群是动态变化的,终末分化的β细胞能够自我复制再生。了解β细胞的增殖再生机制,对糖尿病的防治有重大的指导意义。     

成人胰腺干细胞转分化为胰岛细胞过程中的形态学观察

目的：观察成人胰腺干细胞转化化为胰岛过程中的形态学变化，以便更深入了解有关机制。方法：人胰腺组织经胶原酶消化后，用梯度离心法将胰腺外分泌细胞和胰岛分离，混于外分泌组织中的导管上皮细胞即具有转分化潜能的干细胞。在体外经CMRL1066及不含血清的DMEM／F12加多种营养因子的培养液中培养27d，在培养的不同时间点取细胞作PDX－1、CK－19等单抗的免疫组化染色。光镜和电镜观察不同时间点的形态学变化。结论：上述方法可获得大量以往在胰岛分离时丢弃的胰腺导管上皮细胞。经体外一定条件的培养后，其形态学变化过程为：导管上皮细胞迅速分裂增殖转变为有分化能力的干细胞继而转分化为胰岛细胞。结论：成人胰腺的导管上皮具有干细胞潜能，并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛。用此方法获得大量的胰岛可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新的途径。