IFN-β基因诱导裸鼠胶质瘤Fas 表达上调及细胞凋亡的实验研究

 目的 研究β干扰素基因对人脑胶质瘤的诱导凋亡作用,以及能否诱导胶质瘤细胞Fas表达上调,并探讨了β干扰素基因诱导细胞凋亡及Fas表达上调之间的联系. 方法 建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将IFN-β基因的真核表达载体pSV2IFNβ注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、TUNEL染色,了解IFN-β基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的作用以及胶质瘤细胞Fas表达情况. 结果 IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡,胶质瘤细胞Fas表达明显高于对照组. 结论 IFN-β基因能够抑制人脑胶质瘤生长,并诱导胶质瘤细胞凋亡;IFN-β基因诱导胶质瘤细胞凋亡可能是Fas表达上调的结果.     

IFN-β基因诱导裸鼠胶质瘤Fas表达上调及细胞调亡的实验研究

目的研究β干扰素基因对人脑胶质瘤的诱导凋亡作用,以及能否诱导胶质瘤细胞Fas表达上调,并探讨了β干扰素基因诱导细胞凋亡及Fas表达上调之间的联系.方法建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将IFN-β基因的真核表达载体pSV2IFNβ注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、TUNEL染色,了解IFN-β基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的作用以及胶质瘤细胞Fas表达情况.结果 IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡,胶质瘤细胞Fas表达明显高于对照组.结论 IFN-β基因能够抑制人脑胶质瘤生长,并诱导胶质瘤细胞凋亡;IFN-β基因诱导胶质瘤细胞凋亡可能是Fas表达上调的结果.     

雷公藤红素对荷SHG44胶质瘤裸鼠的抑瘤试验

背景与目的：胶质瘤是颅内常见恶性肿瘤，治疗效果一直不令人满意，本文探讨雷公藤红素治疗人脑胶质瘤的丌丁行性。方法：建立BALB／c裸小鼠SHG-44胶质瘤同种移植动物模型，将34只荷瘤裸鼠随机分为5组，空白对照组、高、中、低剂量雷公藤红素作用组、阳性对照组，采用腹腔内注射给药方法。雷公藤红素按三种浓度4mg／kg、2mg／kg、1mg／kg分组给药，每日1次，每周5天；阳性对照顺铂组按2mg／kg给药，每周两次；空白对照组只喂养不做任何处理。共给药四周。全部荷SHG44胶质瘤裸鼠于给药后第28天断颈处死并剔出肿瘤，将肿瘤组织分块处置。定期观察肿瘤生长情况测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。结果：5组荷SHG44胶质瘤裸鼠的移植瘤体积（处死后测量）比较，差异显著（F=5．519，P=0．002）；与空白对照组相比。雷公藤红素4mg／kg组、雷公藤红素2mg／kg组均能抑制肿瘤生长（P〈0．05），其体积抑瘤率分别为35％、26．9％。结论：雷公藤红素能明显抑制荷SHG44胶质瘤裸鼠的移植瘤生长，并存在剂量依赖性。     

转染P~(53)基因对胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致癌性的作用研究

探讨转染野生型P~(53)（wt一P~(53)）和突变型P~(53)（mtP~(53)）基因，对人胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致瘤性的影响及意义。方法：采用质脂体介导法，分别将wt一P~(53)和mt一P~(53)基因导入人胶质瘤细胞株SHG44，体内外检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果：转染mt一P~(53)基因的细胞株，G418筛选细胞集落数、软琼脂平皿细胞集落数以及裸鼠瘤组织重量和体积，均显著高于对照组（P＜0．01）；而转染Wt一P~(53)基因的细胞株均显著低于对照组（P＜0．01），表明导入wt一P~(53)基因的细胞株，瘤细胞生长速度明显低于对照细胞株和导入。mt一P53基因的细胞株，即导入mt一P~(53)基因的细胞株瘤细胞生长速度最快，而导入Wt-P~(53)基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论：Wt一P~(53)基因能有效地抑制人胶质瘤细胞生长；mt一P~(53)基因则可以明显地促进瘤细胞生长。     

转染P53基因对胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致癌性的作用研究

 目的:探讨转染野生型P⁵³(wt-P⁵³)和突变型P⁵³(mtP⁵³)基因,对人胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致瘤性的影响及意义.方法:采用质脂体介导法,分别将wt-P⁵³和mt-P⁵³基因导入人胶质瘤细胞株SHG44,体内外检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性.结果:转染mt-P⁵³基因的细胞株,G418筛选细胞集落数、软琼脂平皿细胞集落数以及裸鼠瘤组织重量和体积,均显著高于对照组(P <0.01);而转染Wt-P⁵³ 基因的细胞株均显著低于对照组(P<0.01),表明导入wt-P⁵³基因的细胞株,瘤细胞生长速度明显低于对照细胞株和导入.mt-P53基因的细胞株,即导入mt-P⁵³基因的细胞株瘤细胞生长速度最快,而导入Wt-P⁵³基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢.结论:Wt-P⁵³基因能有效地抑制人胶质瘤细胞生长;mt-P⁵³基因则可以明显地促进瘤细胞生长.     

siRNA沉默β-catenin对人胶质瘤细胞系SHG44增殖和凋亡的作用

目的:探讨siRNA(small interferingRNA,siRNA)干扰β-catenin对人胶质瘤细胞系SHG44体外增殖和凋亡的影响。方法:利用脂质体将β-catenin siRNA干扰片段转染SHG44细胞,免疫印迹和免疫荧光共聚焦技术观察β-catenin表达及分布的变化;通过MTT法观察细胞增殖的变化;集落形成试验观察细胞增殖能力的改变;Annexin V/PI双染流式细胞术观察细胞凋亡情况。结果:β-catenin siRNA转染SHG44细胞可以有效抑制β-catenin的表达,并抑制其向核内的转移和聚集。与对照组相比,β-catenin siRNA转染组能够抑制细胞增殖,抑制细胞的集落形成能力,增加了细胞的凋亡,且均具有统计学意义,P<0.01。结论:通过β-catenin siRNA抑制SHG44细胞β-catenin的表达,可以抑制细胞增殖,促进其凋亡,表明β-catenin在胶质瘤的发生发展中发挥重要作用。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2蛋白表达下调

目的　探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl 2表达的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法　PTEN基因体外转染SHG 44细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl 2基因的表达。结果　PTEN基因转染的SHG 44细胞有PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪示细胞周期从G1 期到S期发生抑制 ,并且在G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (1 2 .9% ) ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl 2的表达也显著下调。转染空载体和未转染的SHG 44细胞无明显的凋亡表现。结论　PTEN基因可诱导SHG 44细胞凋亡 ,并下调bcl 2蛋白的表达 ,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一     

整合素与胶质瘤细胞凋亡

 目的　研究整合素 β1在胶质瘤细胞中的表达及在胶质瘤细胞增殖、生存方面的作用。 方法　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞整合素 β1的含量 ,以不同浓度的抗整合素 β1抗体处理在胶原蛋白I上培养的SHG4 4胶质瘤细胞 ,MTT法测定ID50 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞仪分析细胞周期改变。结果　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞表达整合素 β1,MTT曲线测定发现 ,2 0 μg/ml抗整合素 β1抗体处理SHG4 4胶质瘤细胞 4 8小时后 ,显著抑制SHG4 4胶质瘤细胞的增殖。流式细胞仪分析可检出凋亡峰。结论　整合素 β1在SHG4 4胶质瘤细胞中高表达 ,并与胶质瘤细胞增殖、生存密切相关 ,抑制整合素 β1的表达可促进胶质瘤细胞的凋亡及坏死。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀（SIM）对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法：用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐（MTY）测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测survivin和BaxmRNA表达的变化。结果：①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93．12％,IC50为（11．33±0．16）μg／ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,BaxmRNA表达逐渐升高。结论：SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀(SIM)对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin和Bax mRNA表达的变化。结果①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93.12%,IC_(50)为(11.33±0.16)μg/ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G_1-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,Bax mRNA表达逐渐升高。结论SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

胶质瘤细胞诱导分化后的凋亡现象

目的：研究胶质瘤细胞诱导分化后的去向,籽胶质瘤诱导化疗法提供理论基础。方法：采用MTT,免疫荧光等方法鉴定二甲基甲酰胺DMF诱导胶质瘤细胞系,SHG－44的分化,用形态学,吖啶橙／溴化乙啶活细胞染色（AO／EB）,流式细胞术,Annexin V检测凋亡。结果：DMF可以引起剂量依赖性的显著诱导分化作用,从细胞形态,AO／EB染色上可以观察到细胞经1％DMF诱导分化后发生了凋亡。经流式细胞术DNA图谱定量,诱导1,5天凋记细胞占3．5％,第3天占26．8％,用检测细胞膜不对称性的Annexin V凋亡检测发现,第1．5天即可观察到12．18％,的早期凋亡细胞,并排除坏死,结论：胶质瘤细胞系SHG－44经DMF诱导分化后,将逐渐凋亡。     

HSV—tk基因治疗人脑胶质瘤SHG44的实验研究

为了研究脑肿瘤的基因治疗，构建了含有ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，并成功地对人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞。经体实验证实，ＳＨＧＬＮＴＫ对阿昔洛韦（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ，ＡＣＶ）的杀伤敏感性高于ＳＨＧ４４约１０００倍，＾３Ｈ－ＴＤＲ掺入法证实，ＡＣＶ能够明显抑制ＳＨＧＬＮＴＫ的ＤＮＡ合成。体内实验证实，ＡＣＶ可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠全内的肿瘤形成，原位基因转 治疗裸     

榄香烯诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：榄香烯是从姜科植物莪术中提取的抗肿瘤药物,我们应用榄香烯治疗神经胶质瘤取得了较为显著的疗效,本研究探讨榄香烯的抗胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡作用。方法：^3H-TdR掺入法检测榄香烯对鼠源性C6胶质瘤细胞及人源性SHG-44胶质瘤细胞的体外增殖抑制效应,Hoechst33258／PI荧光染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：榄香烯能有效抑制C6／SHG-44胶质瘤细胞的恶性增殖,^3H-TdR掺入法检测榄香烯处理不同时间(1～4天)的IC50,C6细胞为7．33--11．02mg／L,SHC-44细胞为13．29～27．16mg／L。在相同药物浓度下,C6细胞较SHG-44细胞敏感。经榄香烯作用后,C6／SHG-44胶质瘤细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成,DNA直方图观察到特征性亚倍体峰(Ap峰),DNA凝胶电泳出现有明显的梯状条带。结论：榄香烯有显著的抗胶质瘤细胞增殖作用,并能诱导胶质瘤细胞凋亡。     

榄香烯诱导神经胶质瘤细胞凋亡作用的剂量和时间依赖性研究

神经胶质瘤是目前最顽固的恶性肿瘤之一,我们应用榄香烯治疗胶质瘤取得了较为显著的疗效。在临床应用中,我们发现榄香烯的治疗效果与使用途径和用药剂量有很大关系。前期体外研究已经证实,榄香烯能抑制胶质瘤细胞的恶性增殖,并诱导凋亡。我们采用流式细胞分析方法,进一步探讨榄香烯诱导凋亡与药物浓度和作用时间的关系。     

苦参碱诱导胶质瘤C6细胞凋亡及其可能的基因机制

摘 要 目的: 探讨苦参碱诱导C6胶质瘤细胞凋亡的作用特点和可能的基因作用机制。 方法：MTT法测定不同浓度苦参碱对C6细胞增殖的抑制率，求出IC50值；倒置显微镜及透射电镜观察苦参碱诱导C6细胞凋亡的形态学改变；Annexin/FITC染色流式细胞术检测不同浓度苦参碱诱导C6细胞的凋亡率；实时定量PCR芯片（Realtime PCR Array）检测苦参碱作用后C6细胞凋亡相关基因的差异表达；免疫细胞化学及Western blotting方法检测苦参碱对C6细胞caspase3表达的影响。结果：苦参碱对C6细胞增殖的抑制率随着药物剂量的增加（0.1~1.0 mg/ml）而增加（P<005），其IC50为0.715 mg/ml。倒置显微镜观察显示苦参碱可诱导胶质瘤细胞出现凋亡改变，透射电镜观察显示苦参碱诱导胶质瘤细胞出现凋亡的超微形态改变，流式细胞术检测显示胶质瘤细胞的凋亡率随着药物剂量的增加（0.2~1.0 mg/ml）而增大[(3.56±0.73)%~(27.55±1.92)%](P<0.05)。胶质瘤细胞经苦参碱作用后出现显著表达差异基因共68个，其中57个基因表达明显上调、11个基因表达明显下调，其中有22个基因与诱导凋亡的死亡受体相关，15个基因与线粒体途径有关；ICC及Western blotting检测都显示苦参碱可诱导C6胶质瘤细胞caspase3表达的上调(P<0.05)。 结论：苦参碱能诱导C6胶质瘤细胞的凋亡，其机制与死亡受体途径和线粒体途径的众多基因有关。     

紫杉醇在TRAIL诱导脑胶质瘤干细胞凋亡中的增敏作用研究

目的:探讨体外试验中紫杉醇(PX)能否增强胶质瘤干细胞(GSCs)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的敏感性及其可能的机制.方法:悬浮培养法从U87细胞中培养出GSCs并鉴定.MTT法检测不同浓度的单药PX组、单药TRAIL组和PX与TRAIL联合给药组及序贯给药组对GSCs的抑制作用;流式细胞法检测不同给药方案对GSCs凋亡的影响,Western blot法检测细胞凋亡级联反应的相关蛋白表达变化.结果:TRAIL与PX对GSCs的增殖抑制作用均较低.两药同时联合应用未见协同作用;若PX与TRAIL先后序贯给药则出现协同作用(CDI=0.80).与单独用药组相比,PX与TRAIL序贯给药可显著提高GSCs的凋亡率(P＜0.001),提示PX可提高GSCs对TRAIL的敏感性.蛋白检测发现死亡受体(DR)4、半胱天冬酶(caspase)8和3表达明显上调(P＜0.01).结论:PX与TRAIL序贯给药后PX可能上调DR4的表达,提高GSCs对TRAIL的敏感性,并激活外源性凋亡途径caspase-8及caspase-3诱导细胞凋亡.PX与TRAIL序贯用药对GSCs有一定的诱导凋亡作用.     

冷冻诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞发生凋亡的实验研究

目的：通过观察大鼠C6脑胶质瘤经冷冻后出现细胞凋亡，探讨冷冻对肿瘤的杀伤机制。方法：建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型，通过TUNEL法及流式细胞仪分别检测其冷冻后凋亡数目及凋亡率。结果：肿瘤经冷冻后，其中心出现坏死，而周边细胞呈现典型的凋亡形态学改变。TUNEL法检测冻后24、48和72h凋亡数目0．323、0．00167和0．037；流式细胞仪检测其冻后24、48和72h凋亡率与对照组相比，P值分别为0．0254、0．0064和0．031；冻后各时间点凋亡数目及凋亡率均显著高于对照组，P〈0．05。其中冻后48h改变尤其明显，P〈0．01，峰值时间出现在冷冻24～48h。结论：诱导细胞凋亡也是冷冻杀伤肿瘤细胞的重要机制之一，但其发生的分子机制有待于进一步深入研究。     

人参皂甙Rh2诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度人参皂甙Rh2(G-Rh2)对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用,并在分子水平探讨其作用机理。方法:细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的DNA组织含量变化,电镜下观察细胞的超微结构改变。结果:1)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L对C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;2)流式细胞术分析经G-Rh2作用72h的C6胶质瘤细胞的DNA组织直方图提示有凋亡发生;3)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L可使G0/G1期细胞比率下降(P<0.05,P<0.01),S期细胞比率明显升高(P<0.05,P<0.01),而G2/M期细胞相对稳定(P>0.05);4)电镜结果提示经4μmol/LG-Rh2作用72h的C6细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:G-Rh2对C6胶质瘤细胞有诱导凋亡作用,呈剂量依赖性抑制C6胶质瘤细胞增殖,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

人脑胶质瘤SHG—44cDNA文库的构建和鉴定

从人脑胶质瘤体外细胞系SHG－44中抽提总RNA，亲和纯化分离mRNA．逆转录合成cDNA，经重组连接，体外包装，感染大肠杆菌Y1090后建成的SHG－44cDNA文库，其库容量含9．25×105原代重组子，重组百分比94．9％，克隆效率为1．04×10pfu／μgcDNA．同时，以兔抗牛GFAP多抗为探针对该文库进行免疫筛选，得到了两个GFAP相关基因的cDNA克隆，在表达水平上，该cDNA文库含GFAP基因的频率为1．2×10-5，从而证实文库中有目的基因的有效表达，为与此相关的分子生物学研究提供了一个有用的工具。     

姜黄素对人脑胶质瘤细胞凋亡作用及其对Bcl-2与Caspase8诱导表达的影响

背景与目的:人脑胶质瘤是主要的颅内恶性肿瘤,其死亡率高且暂无有效的治疗和预防手段.姜黄素是从姜黄属植物根茎中提取的一种多酚类物质,前期研究发现其具有抗氧化、抗突变等药效.本研究中药姜黄素对人脑胶质瘤细胞SHG44中Bcl-2与Caspase 8差异性表达和促进其凋亡的分子机制.方法:体外培养人脑胶质瘤细胞SHG44:利用MTT比色法检测姜黄素对于SHG44的增殖抑制影响;利用流式细胞术(flowcytometry,FCM)分析药物处理前后SHG44的细胞周期变化;利用吖啶橙染色法鉴定药物处理前后SHG44形态学上的差异及凋亡程度;提取药物处理前后SHG44细胞总蛋白,利用Western印迹法检测Bcl-2与Caspase 8蛋白的表达情况.结果:姜黄素对SHG44细胞体外增殖抑制呈明显的剂量依赖性[IC50为(13.6±2.2)nmol/L,P<0.01];FCM分析SHG44细胞在姜黄素处理前后细胞周期均呈现明显的差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,其中药物组G0/G1>期比例为(57.2±0.8)%,空白对照组为(64.6+0.6)%,sub-G0峰明显(25.9±0.2)%(P<0.01).A0染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象,并伴少量细胞坏死现象,而在阴性对照组中细胞形态完好.Western印迹法检测发现(13.6±2.2)nmol/L(IC50剂量)的姜黄素处理SHG44细胞前后,Caspase 8的表达量为(96±23)%明显高于对照组(P=0.001 3),而Bcl-2的表达量为(33±8)%,则低于对照组(P=0.001 4),提示药物组细胞有进入凋亡途径的现象.结论:中药姜黄素可以调控体外培养的人脑胶质瘤细胞SHG44的周期进程,诱导Bcl-2及Caspase 8的差异性表达,并且具有显著抑制肿瘤细胞增殖及促凋亡的作用.