Ⅱ．胃癌细胞SGC-7901中乙酰肝素酶基因和CD44v6表达的关系

目的：探讨乙酰肝素酶（HPA）反义寡核苷酸（AS-ODN）对CD44v6表达的影响。方法：采用脂质体介导HPAAS-ODN转染人胃癌细胞株SGC-7901．RT-PCR检测HPA mRNA的表达，采用免疫细胞化学SABC法观察细胞内CD44v6表达的变化。结果：脂质体介导转染HPA AS-ODN48h后．SGC-7901胃癌细胞内HPA mRNA表达下降，CD44v6阳性表达率转染前69．4％，转染不同浓度的AS-ODN后分别为56．5％，54．1％，46．5％和41．3％。转染后细胞CD44v6表达明显减少（P〈0．01）。结论：HPA AS-ODN可以有效抑制胃癌细胞CD44v6的表达。     

胃癌细胞SGC-7901中乙酰肝素酶基因和CD44v6表达的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡核苷酸(AS-ODN)对CD44v6表达的影响。方法:采用脂质体介导HPAAS-ODN转染人胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR检测HPAmRNA的表达,采用免疫细胞化学SABC法观察细胞内CD44v6表达的变化。结果:脂质体介导转染HPAAS-ODN48h后MSGC-7901胃癌细胞内HPAmRNA表达下降MCD44v6阳性表达率转染前69.4%M转染不同浓度的AS-ODN后分别为56.5%,54.1%,46.5%和41.3%。转染后细胞CD44v6表达明显减少(P<0.01)。结论:HPAAS-ODN可以有效抑制胃癌细胞CD44v6的表达。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对胃癌细胞侵袭和转移的影响Ⅰ.乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的：探讨乙酰肝素酶（HPA）反义寡脱氧核苷酸（AS-OND）对人胃癌细胞株SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及组织金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响。方法：采用脂质体介导法将HPA AS-ODN转染SGC-7901细胞,用RT-PCR检测HPA-mRNA表达．用免疫细胞化学的方法检测细胞内MMP-2和TIMP-2的变化。结果：AS-ODN转染48h后,SGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降（P〈0．01）,MMP-2的表达量亦减少（P〈0．01）。结论：HPAAS-ODN可以有效地抑制胃癌细胞MMP-2的表达。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响

目的：探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响．．方法：采用脂质体介导乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染人胃癌细胞株SGC7901细胞,以逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后乙酰肝素酶mRNA、Fas mRNA和Bcl-2 mRNA表达的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果：脂质体介导转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸后,SGC7901胃癌细胞内乙酰肝素酶mRNA和Bcl-2 mRNA表达下降,FasmRNA表达上升,凋亡细胞比率由转染前的4．04％增加至转染后的16．00％。结论：转染后的乙酰肝素酶反义寡核苷酸可有效地诱导胃癌细胞发生凋亡。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响 Ⅰ.乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TMP-2表达的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡脱氧核苷酸(AS-OND)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响。方法:采用脂质体介导法将HPAAS-ODN转染SGC-7901细胞G用RT-PCR检测HPA-mRNA表达,用免疫细胞化学的方法检测细胞内MMP-2和TIMP-2的变化。结果:AS-ODN转染48h后GSGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降(P<0.01),MMP-2的表达量亦减少(P<0.01)。结论:HPAAS-ODN可以有效地抑制胃癌细胞MMP-2的表达。     

胃癌CD44v6和PTEN表达与转移和预后的关系

目的 探讨CD44v6和PTEN基因蛋白在胃癌中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学技术，对17例早期胃癌和78例进展期胃癌组织进行CD44v6和PTEN蛋白检测，并结合肿瘤的病理生物学行为和临床随访资料进行分析。结果 胃癌中CD44v6和PTEN蛋白表达阳性率分别为82．1％和48．4％。进展期胃癌CD44v6表达阳性率明显高于早期胃癌（P〈0．05），而PTEN表达阳性率则明显低于早期胃癌（P〈0．05）；CD44v6高表达和PTEN低表达与胃癌浆膜浸润，淋巴结转移和患者预后呈正相关（P〈0．05）。CD44v6表达与PTEN表达呈负相关（r=-0．48，P〈0．05）。结论 CD44v6和PTEN表达与胃癌转移和患者生存期密切相关，检测CD44v6和PTEN的表达可作为判断胃癌预后的参考指标。     

流式细胞仪检测胃癌中CD44s及CD44v6表达

目的 探讨黏附因子ＣＤ４４ｓ和ＣＤ４４ｖ６的表达与胃癌生物学行为的关系。方法 应用流式细胞术对５８例胃癌及４０例胃良性病变的新鲜标本检测ＣＤ４４ｓ和ＣＤ４４ｖ６，并应用免疫组化测定ＰＣＮＡＬＬ。结果 胃癌组ＣＤ４４ｓ的阳性率（６２．１％，３６／５８）明显高于良性病变组（２７．５％），且与ＰＣＮＡＬＩ有关。胃癌组ＣＤ４４ｖ６的阳性率（５８．６％）高于良性病变组（３２．５％）且与肿瘤部位，淋巴结转移及     

胃癌及癌旁组织中CD44v6的表达

目的：探讨CD44v6在胃癌及癌旁组织中的表达规律及其与胃癌发生发展的关系。方法：采用免疫组化S-P法检测CD44v6在胃癌及癌旁组织中的表达。结果：CD44v6在正常胃粘膜无表达；在癌旁组织中仅有少部分呈弱阳性表达；在胃癌组织中CD44v6的阳性表达率为64.4%。并与胃癌的分化程度，浸润深度，淋巴结转移TNM分期相关。结论：CD44v6在胃癌的淋巴结转移及癌细胞的分化过程中起着重要作用。对早期预测癌细胞的转移潜能，判断胃癌的预后具有重要的临床意义。     

CD15s和CD44v6表达与胃癌转移和预后的关系

目的探讨CD15s和CD44v6基因蛋白表达与胃癌临床病理学行为和患者预后的关系。方法应用高敏感性的催化信号放大免疫组织化学技术，对17例早期胃癌和78例进展期胃癌组织进行CD15s和CD44v6蛋白检测，并结合肿瘤的病理学行为和I临床随访资料进行分析。结果胃癌中CD15s和CD44v6表达阳性率分别为86．3％和82．1％，CD15s和CD44v6表达阳性率在进展期胃癌明显高于早期胃癌（P〈O．05）；CD15s和CD44v6表达水平具有一致性，均与胃癌浆膜浸润，淋巴结转移和患者预后密切相关（P〈O．05）。结论CD15s和CD44v6表达与胃癌转移和患者生存期密切相关，检测CD15s和CD44v6表达可作为判断胃癌预后的参考指标。     

低氧时反义寡核苷酸对胰腺癌乙酰肝素酶表达及侵袭力的影响

目的 研究低氧对胰腺癌乙酰肝素酶（Hpa）表达的影响及与肿瘤细胞侵袭力的关系.方法 体外低氧培养细胞,观察低氧在不同时间胰腺导管癌细胞株BxPC-3细胞Hpa mRNA和蛋白表达的变化;以Tranwell侵袭小室实验观察低氧及应用反义寡核苷酸（AS-ODN）阻断Hpa表达后肿瘤细胞侵袭力的变化,明确低氧促进肿瘤细胞侵袭力增加是否与Hpa有关.结果 在常氧条件下,BxPC-3细胞Hpa mRNA和蛋白即有低量表达.在低氧条件下,Hpa mRNA和蛋白表达在3 h受到轻度抑制,在6 h、12 h、24 h和48 h表达明显升高,且mRNA和蛋白的表达水平一致.预先以Hpa AS-ODN序列阻断Hpa的表达,则低氧不能诱导Hpa mRNA和蛋白表达上调.低氧使穿过Transwell小室的BxPC-3细胞数量增加了96.2%（P〈0.01）,Hpa AS-ODN（400 nmol/L）对低氧诱导的侵袭细胞的抑制率为37.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 低氧可通过上调胰腺癌BxPC-3细胞Hpa mRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞侵袭力.     

胃癌患者血清中可溶性黏附分子CD44v6含量和组织中CD44v6蛋白表达的研究

目的:研究胃癌患者外周血清中可溶性黏附分子sCD44v6含量/CD44v6蛋白表达,及其与临床病理参数之间的关系。方法:应用定量酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测胃癌患者(术前和术后)及健康对照组血清中sCD44v6含量,并以免疫组化S-P法测定相应组织中CD44v6蛋白的表达。结果:70例胃癌患者血清中sCD44v6含量(2.15±0.78)ng/ml,明显高于16例正常对照组(1.18±0.43)ng/ml;14例根治性手术后血清中sCD44v6含量(1.21±0.39)ng/ml,比术前(2.67±0.83)ng/m明显下降(P<0.01);而6例非根治性手术后(3.29±0.41)ng/ml比术前(3.61±0.49)ng/ml下降不明显(P>0.05)。而胃癌组织中CD44v6蛋白表达在肠型和弥漫型中差异显著,不同的浸润深度、有无淋巴结及远处转移也差异显著。结论:胃癌患者外周血清中sCD44v6含量及组织中CD44v6蛋白表达的变化与转移、临床分期、病理分期有关,sCD44v6含量升高可作为胃癌患者淋巴结转移,尤其是早期转移的监测指标。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:用4条乙酰肝素酶反义寡核苷酸及1条无关寡聚核苷酸(N-ODN)分别体外培养、转染食管癌EC9706细胞。用上述细胞注射到模型左前腿腹侧皮下,构建裸鼠食管癌动物模型,饲养5周后采用免疫组化SP法对裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白的表达进行了检测。结果:4条乙酰肝素酶反义寡核苷酸(20mol/L)影响裸鼠体内食管癌移植瘤中VEGF蛋白表达表现出不同程度的抑制作用,实验组中VEGF蛋白表达与N-ODN转染组、未经转染的空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶反义寡核苷酸通过影响裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白表达,从而抑制肿瘤的浸润转移。     

Ezrin和CD44v6在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨细胞骨架蛋白Ezrin及细胞黏附分子CD44v6在胃癌中的表达及其意义。方法:采用免疫组化方法检测53例胃癌患者癌组织石蜡包埋标本及20例正常胃黏膜标本中Ezrin及CD44v6的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:①Ezrin在胃癌组织及正常胃黏膜中的阳性表达率分别为56.6%和30.0%。CD44v6在胃癌组织中阳性表达率为58.5%,而在正常胃黏膜中无表达。②Ezrin的表达程度与胃癌的分化程度有关(P<0.05),与临床分期、淋巴结转移及远处转移显著相关(P<0.01)。CD44v6的表达程度与胃癌的分化程度无关,与临床分期、淋巴结转移及远处转移显著相关(P<0.01)。③胃癌组织中Ezrin及CD44v6的表达之间呈显著正相关(rs=0.740,P<0.01)。结论:胃癌组织中Ezrin及CD44v6的高表达与胃癌的临床分期、淋巴结转移及远处转移有关,两者的联合检测有可能成为预测胃癌转移及预后的重要指标。     

胃癌患者血清中可溶性CD44v6含量和组织中CD44v6蛋白表达的研究

目的:研究胃癌患者外周血清中可溶性CD44v6(sCD44v6)含量/CD44v6蛋白表达,及其与临床病理参数之间的关系。方法:应用定量ELISA方法检测胃癌患者(术前和术后)及健康对照组血清中sCD44v6含量,并以(S-P)免疫组化法测定相应组织中CD44v6蛋白的表达。结果:70例胃癌患者血清中sCD44v6含量(2.15±0.78 ng/ml)明显高于16例正常对照组(1.18±0.43 ng/ml),14树根治性手术后血清中sCD44v6含量(1.21±0.39 ng/ml)比术前(2.67±0.83 ng/ml)明显下降(P<0.01),而6例非根治性手术后(3.29±0.41ng/ml)比术前(3.61+0.49 ng/ml)下降不明显(P>0.05)。而胃癌组织中CD44v6蛋白表达在肠型和弥漫型中有显著差异,不同的浸润深度、有无淋巴结及远处转移也有显著差异。结论:胃癌患者外周血清中sCD44v6含量及组织中CD44v6蛋白表达的变化与转移、临床分期、病理分期有关,sCD44v6含量升高可作为胃癌患者淋巴结转移(尤其是早期转移)的监测指标。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响

目的:观察乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响.方法:以空白组和无关序列(N-ODN)组为对照,设计、合成4条ASODN链(ASODN-t1,t2,t3和t4,脂质体包埋后分别以10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L N-ODN和ASODN转染A375细胞,台盼蓝排斥试验检测细胞增殖情况,免疫组织化学法检测乙酰肝素酶蛋白表达的变化.结果:转染72 h后,各ASODN组A375细胞计数较对照组、N-ODN组均减少(P均=0.000);每条链的10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L 3个浓度组相比,差异均有统计学意义(P均=0.000);30 μmol/L ASODN-t2组与其他各组相比,差异均有统计学意义(P均＜0.05).转染48 h后,30 μmol/L ASODN-t2组乙酰肝素酶蛋白的表达较对照组、N-ODN组下调(P均=0.000).结论:乙酰肝素酶ASODN可抑制A375细胞增殖,下调乙酰肝素酶蛋白的表达.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对胰腺癌细胞基质金属蛋白酶的影响

目的研究低氧状态下乙酰肝素酶（heparanase,Hpa）反义寡核苷酸（antisenseoligodeoxynu—cleotide,AS—ODN）对胰腺癌高转移细胞株MIAPaCa-2细胞基质金属蛋白酶．2（matrixmetalloproteinase．2,MMP-2）和MMP-9的影响。方法以HpaAS—ODN预先阻断MIAPaCa-2细胞Hpa表达并低氧培养,观察MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白表达的变化,明胶酶法检测MMP-2和MMP-9活性的变化,观察阻断Hpa对MMP-2和MMP-9表达及活性的影响。结果低氧培养条件下,MIAPaCa-2细胞MMP-2mRNA及蛋白表达略有上调,但是与常氧条件下培养对比,在6、12和24h差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。以ASODN阻断Hpa后,MMP-2mRNA及蛋白表达均无明显变化。低氧后6hMMP-9mRNA及蛋白表达开始升高,12h（P〈0．05）和24h（P〈0．01）更加明显。阻断Hpa表达后,MMP-9mRNA及蛋白表达在各时间段均有下降,而在24h下降明显,差异具有统计学意义（P〈0．01）。低氧后12h和24h,活化型的MMP-2和MMP-9均显著增强,当Hpa表达被抑制后,于12h（P〈0．01）和24h（P〈0．01）活化型的MMP-9活性受到明显抑制,而各时间内,活化型的MMP-2活性均不受HpaAS—ODN的影响（P〉0．05）。结论低氧可刺激MIAPaCa-2细胞MMP-9mRNA及蛋白的表达,增强酶活性。预先阻断Hpa表达在12h和24h可抑制MMP-9mRNA和蛋白的表达,降低MMP-9的活性,而对MMP-2则无明显影响。     

胃癌前病变及癌组织中CD44v6的表达

目的：探讨CD44v6蛋白表达与胃癌发生发展的关系。方法：采用免疫组化SP法检测CD44v6蛋白在各级胃粘膜病变和胃癌组织中的表达。结果：CD44v6蛋白阳性表达率胃癌组织高于胃炎及不典型增生病变组织（P＜0．05）,进展期胃部显著高于早期胃癌组织（P＜0．05）,伴淋巴结转移和肝转移的胃癌组织明显高于无转移的胃癌组织（P＜0．05）。结论：CD44v6蛋白表达与胃癌的发生发展密切相关,其检测有助于胃癌的早期诊断,转移预测和预后判断。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠人肺癌细胞皮下移植瘤的抑制作用

目的 探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(HPSE ASODN)对人肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE ASODN,以阳离子脂质体Lipofectamine包埋后转染人肺癌A549细胞进行培养.实验分ASODN组、脂质体组和对照组,采用Western-blotting检测各组A549细胞HPSE蛋白的表达;将反义寡核苷酸(ASODN)转染成功的人肺癌A549细胞注射于裸鼠皮下复制移植瘤模型(ASODN组),绘制移植瘤生长曲线,以免疫组织化学方法检测移植瘤肿瘤微血管密度(MVD),比较3组间肿瘤体积和MVD的差异.结果 与对照组和脂质体组比较,ASODN组A549细胞HPSE蛋白的表达受到明显抑制,差异有统计学意义(P ＜0.01);ASODN组裸鼠成瘤时间晚,移植瘤体积明显小于脂质体组和对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).ASODN组、脂质体组和对照组移植瘤的MVD计数分别为(13.5±1.8)、(24.3±2.5)和(24.7±2.6),与脂质体组、对照组比较,ASODN组MVD计数明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HPSE ASODN明显抑制棵鼠人肺癌移植瘤的生长和血管生成,有希望成为一种有效的肺癌基因治疗方法.     

混合型组织学类型胃癌组织中CD44v6表达与侵袭和转移的关系

目的　研究CD4 4v6在不同组织学类型的胃癌和混合型组织学类型胃癌中表达与侵袭和转移的关系。方法　 4 0例经外科手术切除的胃癌石蜡包埋组织 ,选用CD4 4v6单克隆抗体 ,采用sABC法 ,进行免疫组织化学检测。结果　中分化腺癌常伴有粘液腺癌 ;低分化腺癌多伴有印戒细胞癌。CD4 4v6在中分化腺癌伴粘液腺癌组织中的表达率为 33 3% ;而在低分化腺癌伴印戒细胞癌组织中的表达率为 6 6 7%。结论　低分化腺癌伴有印戒细胞癌中CD4 4v6的高表达率可能说明在侵袭和转移方面高于中分化腺癌伴有的粘液腺癌。