IL—10对大鼠佐剂性关节炎的治疗及免疫机理探讨

形成佐剂性关节炎的动物模型，研究ＩＬ－１０的抗炎作用及其机理，结果表明，经腹腔注射ＩＬ－１０后能改善ＡＡ大鼠病情，用ＩＬ－１０治疗取得显效后，ＡＡ大鼠血清及关节液内炎症细胞因子ＩＬ－１，６，８，ＴＮＦ水平均明显下降，腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞分泌细胞因子的能力均受到抑制。表明ＩＬ－１０是通过抑制炎症细胞因子的产生而发挥治疗作用的。此研究为用ＩＬ－１０治疗人风湿性关节炎等难治性炎症性疾病提供了理论和实     

内毒素诱导器官损伤中炎症性细胞因子的表达及药物治疗探讨

了解炎症性细胞因子在内毒素诱导的器官损伤中的表达，并探讨地塞米松和异丁苯丙酸的治疗作用。方法观察人内毒素血症体外全血中地塞米松、异丁苯丙酸对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）α的蛋白及ｍＲＮＡ表达的量效关系；同时用酶联免疫吸附和狭缝杂交法观察内毒素诱导的大鼠肺损伤组织中，两药对ＴＮＦα、白细胞介素１（ＩＬ－１）β、吞噬细胞炎症蛋白１（ＭＩＰ－１）α蛋白与ｍＲＮＡ表达的抑制作用。结果内毒素刺激体外培养的人全血ＴＮＦα浓度明显增加；地塞米松（＞１０－８ｍｏｌ／Ｌ）对其具有明显抑制效应；异丁苯丙酸浓度在１０－９～１０－７ｍｏｌ／Ｌ时有抑制效应，浓度＞１０－４ｍｏｌ／Ｌ时为刺激效应。注射内毒素后鼠肺组织中ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＭＩＰ－１α的ｍＲＮＡ含量随内毒素剂量增大而增加，峰值分别在２、６、１２小时。两药能明显降低肺组织中伊文斯蓝含量（ｔ分别为２．８０和７．３１，Ｐ均＜０．０５），对这些炎症性细胞因子的ｍＲＮＡ均有明显抑制作用。结论ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＭＩＰ－１α是内毒素介导的炎症反应中的重要介质，地塞米松、异丁苯丙酸通过抑制这些细胞因子表达，对内毒素诱导的器官损伤起防护作用。     

hIL—10基因转导抑制大鼠心肌细胞诱生炎症细胞因子

目的：观察人白细胞介素１０基因转导对脂多糖（ＬＰＳ）诱导大鼠心肌细胞（ＣＭＣ）的炎症细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法：通过重组逆转录病毒载体ｐＬＸ（ＩＬ－１０）ＳＮ将人ＩＬ－１０基因导入大鼠ＣＭＣ,应用ＰＣＲ,ＲＴ－ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ;（１）检测ＩＬ－１０基因的整合和表达;（２）观察ＩＬ－１０基因转导对ＬＰＳ诱导的ＣＭＣ肿瘤坏死因子－α的ｍＲＮＡ表达及白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）和ＴＮＦ－     

白细胞介素—10对大鼠肾小球系膜细胞炎症效应的拮抗作用

探讨白细胞介素（ＩＬ）－１０对肾小球系膜细胞炎症效应的调节作用。方法采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法与细胞计数，观察系膜细胞的增殖反应，以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交观察ＩＬ－１与肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）的基因表达；生物活性检测法评估ＩＬ－１与ＴＮＦα的产生；细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达，用细胞ＥＬＩＳＡ法。结果ＩＬ－１０（２５ｎｇ／ｍｌ）抑制５％胎牛血清与ＩＬ－１诱导的系膜细胞增殖，抑制率分别为３９％和５２％。ＩＬ－１０也抑制脂多糖（ＬＰＳ）刺激的系膜细胞ＩＬ－１与ＴＮＦα生物活性的产生（抑制率分别为４８％与６８％）和基因表达，同时它还抑制ＩＬ－１诱导的系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１。结论ＩＬ－１０是一种对肾小球系膜细胞炎症效应具有抑制作用的细胞因子。     

IL—1β和IL—2对培养的大脑皮质神经元Glu和GABA免疫反应？…

为了研究细胞因子白细胞介素－１（ＩＬ－１）和白细胞介素－２（ＩＬ－２）对神经系统兴奋性的调节作用，将ＩＬ－１β和ＩＬ－２分别作用于培养的大鼠大脑皮质神经元，然后观察其对谷氨酸（Ｇｌｕ）和ｒ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应神经元的影响，并对实验结果进行了图像分析和统计学处理，结果显示：ＩＬ－１β（１０＾５ｕ／Ｌ）作用于培养的神经元后，Ｇｌｕ免疫反应神经元增加（Ｐ〈０．０１），但不引起ＧＡＢＡ免疫反应神     

哮喘中IL—5和IL—10基因表达及其相关性研究

３１只健康豚鼠分为哮喘组、地塞米松干预组及对照组。测定各组豚鼠肺泡灌洗液细胞成分,应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测支气管组织白细胞介素－５（ＩＬ－５）和白细胞介素－１０（ＩＬ－１０）ｍＲＮＡ表达强度。结果显示,哮喘组豚鼠肺泡灌反。ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达与ＥＯＳ百分比呈正相关,而与ＩＬ－１０ｍＲＮＡ表达呈负相关。说明ＥＯＳ,ＩＬ－以正相关参与了哮喘发病。哮喘时ＩＬ－１０表达受抑制,这可能是炎症细胞因子ＩＬ－５     

地塞米松和环孢菌素A对IL-4、IL-5合成的抑制作用

为研究淋巴细胞在哮喘发病中的作用及地塞米松（Ｄｅｘ）、环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）治疗哮喘的机理,用ＥＬＩＳＡ法检测哮喘患者和对照组的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）在植物血凝素刺激下合成白细胞介素４（ＩＬ－４）、白细胞介素５（ＩＬ－５）水平,以及Ｄｅｘ和ＣｓＡ对哮喘患者的ＰＢＭＣ合成ＩＬ－４、ＩＬ－５的抑制作用。结果表明,哮喘组的ＩＬ－４、ＩＬ－５水平较对照组高（Ｐ＜０．０５）;１０－６ｍｏｌ／Ｌ的Ｄｅｘ和ＣｓＡ均能抑制哮喘组ＰＢＭＣ合成ＩＬ－４、ＩＬ－５,增大药物浓度至２×１０－６、３×１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,ＣｓＡ对ＩＬ－５合成的抑制作用逐步增强;Ｄｅｘ对ＩＬ－５合成的抑制作用较ＣｓＡ强（Ｐ＜０．０５）。提示糖皮质激素和ＣｓＡ抑制ＩＬ－４、ＩＬ－５的合成是其治疗哮喘的机理之一。     

咳喘落协同地塞米松抑制哮喘大鼠白细胞介素4，5mRNA表达

目的 探讨咳落协同地塞米松拮抗支气管哮喘气道变应性炎症作用的分子机制。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量地测定了不同剂量的咳喘落对哮喘大鼠肺组织和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＩＬ－４ｍＲＮＡ、ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达的影响。结果 哮喘时大鼠肺组织和ＰＢＭＣ中ＩＬ－４ｍＲＮＡ与ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达均增强，显然高于空白对照组（Ｐ〈０．０１），经大剂量咳落治疗后，其表达同时显著降低（Ｐ〉     

中药咳喘落对哮喘大鼠肺组织白细胞介素-4,5mRNA影响及相关性研究

目的探讨中药咳喘落拮抗支气管哮喘气道变应性炎症作用的分子机理。方法采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法半定量地分析了哮喘大鼠肺组织 ＩＬ－４ ｍＲＮＡ和 ＩＬ－５ ｍＲＮＡ表达水平的变化及二者的相关性。结果哮喘时大鼠肺组织中 ＩＬ－４ ｍＲＮＡ与 ＩＬ－５ ｍＲＮＡ表达均增强,其相对表达量分别为 ０．４４２±０．０５２和０．６００±０．２２０,显著高于空白对照组（Ｐ＜０．０１）,经大剂量咳喘落治疗后,其表达同时显著降低（Ｐ＜０．０１）,治疗前后ＩＬ－４ｍＲＮＡ和ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达水平分别呈显著正相关（ｒ＝０．７７２,０．８６８,Ｐ＜０．０１）。但小剂量咳喘落只对ＩＬ－４ｍＲＮＡ有下调作用（Ｐ＜０．０５）。结论咳喘落能够同时降低哮喘大鼠肺组织中ＩＬ－４和ＩＬ－５基因转录,减少其生物合成,进而抑制嗜酸性粒细胞的聚集、活化,发挥其抗气道炎症的作用。     

PKC抑制剂Ro31－8220对大鼠肝产生IL－6和纤维蛋白原的作用

目的：研究重组人白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）对原代培养大鼠肝细胞分泌纤维蛋白原（Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ，Ｆｇｎ）的影响及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｒｏ３１－８２２０对枯否细胞分泌ＩＬ－６的作用。方法：以酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）测定Ｆｇｎ；测定Ｉ－６采用［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入增殖法。结果：大鼠肝细胞（３×１Ｏ６／ｍｌ）与ｒｈＩＬ－６（０～１００ｋＵ／Ｌ）孵育２４ｈ，刺激肝细胞分泌Ｆｇｎ增加；Ｒｏ３１－８２２０（０．１～１０μｍｏｌ／Ｌ）显著抑制枯否细胞释放ＩＬ－６。结论：提示ＩＬ－６是调节纤维蛋白原合成的重要细胞因子，推测ＰＫＣ抑制剂可通过抑制枯否细胞分泌ＩＬ－６来降低Ｆｇｎ的分泌。     

活血接骨膏验方抗炎镇痛作用的实验研究

目的探讨活血接骨膏验方抗炎镇痛作用的疗效及其作用的可能机制。方法建立完全弗氏佐剂诱导大鼠关节炎模型（AA）,以活血接骨膏为治疗组,伤科接骨片为对照组,通过关节炎指数,足趾容积,病理学检查,血清细胞因子测定进行疗效观察。结果活血接骨膏能明显抑制弗氏完全佐剂性关节炎大鼠关节肿胀及病理学改变,降低关节炎指数,降低关节炎模型大鼠血清中异常升高的白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平（P〈0.05）。结论活血接骨膏具有明显抑制炎症细胞因子,控制炎症反应。     

7,3′-二甲氧基橙皮素对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响

目的研究7,3’-二甲氧基橙皮素(DMHP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠免疫功能的影响。方法弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型,从造模第12天开始灌胃给予DMHP(22、44、88 mg/kg),连续12 d,MTT法检测刀豆蛋白A诱导的脾淋巴细胞增殖反应;酶联免疫吸附法测定脾淋巴细胞产生白介素-2(IL-2)的水平以及腹腔巨噬细胞(PMΦ)分泌的IL-1、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;RT-PCR检测PMΦIL-1、IL-10、TNF-αmRNA的表达。结果 DMHP(44、88 mg/kg)能明显纠正AA大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应和脾细胞IL-2的产生;各剂量DMHP能不同程度地从基因和蛋白水平降低AA大鼠PMΦ产生过高的IL-1、TNF-α水平,同时上调AA大鼠PMΦ产生过低的IL-10水平。结论 DMHP体内给药能改善AA大鼠异常免疫功能,恢复细胞因子网络平衡,这可能是其治疗AA大鼠的机制之一。     

Effects and mechanisms of Cryptotanshinone on rats with adjuvant arthritis

Background  Cryptotanshinone (CT) is the major active constituent of Salvia miltiorrhiza Bunge. The present study was carried out to investigate the effects of CT on rats with adjuvant arthritis (AA).

Methods  AA was induced by the metatarsal footpad injection with complete Freund’s adjuvant in male Sprague-Dawley rats. The secondary inflammatory reaction was evaluated by hind paw swelling and the polyarthritis index. Activity of interleukin-1 (IL-1) was detected by the concanavalin A-induced thymocytes proliferation assay. The lymphocytes proliferation and IL-2 production were assayed by 3-(4,5-2dimethylthiazal-2yl)2,5-diphenyltetrazoliumbromide (MTT) and activated mouse splenocytes proliferation, respectively.

Results  Intragastric administration of CT (50 and 100 mg/kg) significantly decreased secondary inflammatory reactions and increased the spleen and thymus index. There was a marked immunologic and inflammatory response in the AA model, which was accompanied by the decrease of thymocyte proliferation and IL-2 production as well as the increase of IL-1 production. CT apparently enhanced thymocyte proliferation and decreased IL-1 production in AA rats.

Conclusion  These results indicate that CT may exert its anti-inflammatory and immunoregulatory effects through inhibiting lymphocyte proliferation and production of pro-inflammatory mediators.

     

Effects of cryptotanshinone on immune functions in rats with adjuvant arthritis

Background Cryptotanshinone （CT） was originally isolated from the dried roots of Salvia militorrhiza, an herb that is used extensively in Asian medicine and the extracts of this herb have been used in the treatment of several pathologies, including cardiovascular diseases, hematological abnormalities, hepatitis, and hyperlipidemia, but no studies had been carried on the treatment for rheumatic diseases with it. This study aimed to investigate the effects of cryptotanshinone on immune functions in rats with adjuvant arthritis （AA）. Methods Complete Freund＇s adjuvant was used to induce AA in rats. Thymus and spleen was aseptically taken from normal rats and the AA rats. Then a thymus lymphoid cell suspension, splenic lymphoid cell suspension and peritoneal macrophage cell suspension were prepared. After adding CT （0.1 ug/ml, 1.0 ug/ml, 10 ug/ml, 100 ug/ml, 1000 ug/ml） into the suspension, T and B lymphocytes proliferation was determined by 3-（4,5-2 dimethylthiazal-2yl）2,5- diphenyltetrazoliumbromide （MTT） assay. And the activities of interleukin-1 （IL-1） and IL-2 were measured by the mouse lymphocytes proliferation assay. Results Thymic T and splenic B lymphocyte proliferation of the AA rat was significantly lower, and could be stored through using CT in vitro. CT （100ug/ml and 1000ug/ml） increased T or B lymphocytes proliferation in vitro （P 〈0.01）. In AA rats, the levels of IL-1 released by abdominal PMφ significantly increased whereas the level of IL-2 released by T cells decreased in vitro. CT （1000 pg/ml） decreased the production of IL-1 and promoted production of IL-2 in vitro （P 〈0.05）. Conclusions CT can ameliorate the abnormal immunological functions in AA rats.     

新风胶囊对佐剂关节炎大鼠外周血血小板活化因子及白细胞介素6和17表达的影响

目的：观察佐剂关节炎大鼠外周血血小板活化因子（platelet-activating factor,PAF）、白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素17（interleukin-17,IL-17）水平的变化及新风胶囊对其的影响。方法：将40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、模型对照组以及甲氨喋呤（methotrexate,MTX）、雷公藤多苷片（Tripterygium Wilfordii polycoride Tablet,TPT）和新风胶囊治疗组,每组8只。除正常对照组外,大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL诱发大鼠关节炎。模型成功后,各组采用相应药物治疗30d。采用酶联免疫吸附法检测每组大鼠外周血PAF、IL-6和IL-17的含量,并观察各组大鼠体质量的变化,计算足跖肿胀度和关节炎指数。结果：与正常对照组相比,模型对照组大鼠外周血PAF、IL-6、IL-17含量,足跖肿胀度,关节炎指数显著升高（P〈0.01）。与模型组相比,各治疗组大鼠PAF、IL-6、IL-17含量,足跖肿胀度,关节炎指数显著降低（P〈0.01）。与MTX组、TPT组相比,新风胶囊组大鼠体质量显著升高,外周血PAF含量显著降低（P〈0.05）。佐剂关节炎大鼠外周血PAF含量与外周血IL-6、IL-17含量,足跖肿胀度,关节炎指数呈正相关（P〈0.01）。结论：佐剂关节炎大鼠外周血PAF含量升高,并与IL-6、IL-17水平,足跖肿胀度,关节炎指数具有相关性。新风胶囊通过下调PAF的水平,抑制血小板活化引起的炎症反应,降低IL-6、IL-17,从而降低佐剂关节炎大鼠的足跖肿胀度、关节炎指数。     

二甲双胍改善佐剂性关节炎大鼠骨破坏的作用和机制研究

目的:探讨二甲双胍治疗类风湿性关节炎(rheumatoidrthritis arthritis,RA)骨破坏的作用及机制.方法:采用Freund完全佐剂诱导佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型.全身评分评价不同剂量二甲双胍对AA大鼠炎症的作用;对各组大鼠踝关节和足部通过X射线成像进行检查;...     

苦参碱对角叉菜胶诱导的关节炎大鼠炎症反应及血小板中精氨酸酶和腺苷核苷酸水解酶活性的影响

目的:研究苦参碱对角叉菜胶诱导的关节炎大鼠炎症反应及血小板中精氨酸酶和腺苷核苷酸水解酶活性的影响.方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物对照组(0.2 mg·kg-1地塞米松)、苦参碱(低、中、高剂量)(20 mg·kg-1、40 mg·kg-1、80 mg·kg-1)组.采用连续7 d关节内注射20 μL的1％...     

三七总苷对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响

[目的]研究三七总苷（PNS）对佐剂性关节炎（AA）大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮（NO）的影响。[方法]大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠AA模型,采用硝酸还原酶法检测AA大鼠腹腔巨噬细胞释放的NO。[结果]体外给药PNS0．4mg／ml,作用4h时,增加AA大鼠NO释放（P〈0．05）;体外给药PNS0．2mg／ml及0．4mg／ml,作用8h时,抑制AA大鼠NO释放（P〈0．05,P〈0．01）;体外给药PNS0．8mg／ml及PNS1．6mg／ml,作用24h时,增加AA大鼠NO释放（P〈0．01,P〈0．05）。[结论]PNS体外给药随浓度及作用的时间变化,对AA大鼠释放NO有双向调节作用,PNS抑制AA大鼠腹腔巨噬细胞释放NO可能在AA治疗中起一定的作用。     

MRP8/MRP14诱导腹腔巨噬细胞释放炎性细胞因子

目的 探讨MRP8/MRP14诱导小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子表达效应及其作用机制.方法 Luminex xMAP液相芯片系统检测重组MRP8/MRP 14蛋白诱导腹腔巨噬细胞6种细胞因子/趋化因子的水平变化;MRP14不同结构域融合蛋白刺激细胞,检测TNF-α、IP-10和IL-6表达;Western blot检测MRP8/MRP14刺激细胞p38MAPK、JNK和ERK激酶磷酸化变化;细胞预先用p38MAPKs、JNK、ERK激酶抑制剂、TLR4和RAGE受体拮抗剂预处理,之后给予MRP8/MRP14蛋白刺激,检测TNF-α、IP-10和IL-6表达.结果 MRP8/MRP14能显著诱导TNF-α、IP-10和IL-6的表达,与对照组相比,蛋白表达水平分别升高约98.2、378.6和6.3倍(P＜0.01),MRP8/MRP14不能诱导IL-2、IL-5和IFN-g的表达;MRP14全长及其结构域EFhand-1、EFhand-2及EFhand-1+2融合蛋白能够诱导TNF-α、IP-10和IL-6的表达(P＜0.01),CT末端结构域不具有诱导活性;MRP8/MRP 14刺激细胞后1 h p38 MAPK、JNK及ERK激酶发生显著磷酸化变化,持续至2h;与单纯MRP8/MRP 14组相比,p38MAPK抑制剂SB203580显著抑制TNF-α、IP-10和IL-6的表达(P＜0.05);JNK抑制剂SP600125显著抑制TNF-α和IP-10的表达(P＜0.05),对IL-6的表达无影响;ERK及其上游MEK1/2的抑制剂PD98059和U0126显著抑制IL-6的表达(P＜0.05);TLR4抑制剂TAK242抑制了MRP8/MRP14诱导的TNF-α、IP-10和IL-6的表达(P＜0.05),而RAGE中和性抗体仅部分抑制MRP8/MRP14诱导的IL-6的表达(P＜0.05).结论 MRP8/MRP14能够诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IP-10和IL-6的表达;MRP蛋白以包含有钙离子结合基序的结构域具有诱导细胞因子表达的活性;TNF-α和IP-10的表达与TLR4受体及其下游的p38MAPKs、JNK通路有关,IL-6的表达则同时由TLR4和RAGE受体介导,继而激活下游的p38MAPKs和ERK信号通路.     

三七总皂苷对佐剂性关节炎大鼠的抗炎及免疫调节作用

目的：研究三七总皂苷（panaxnotoginsengsaponins,PNS）对佐剂性关节炎（rheumatoidarthritis。AA）大鼠的抗炎及免疫调节作用。方法：大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠AA模型,进行多发性关节炎评分,放射免疫法检测大鼠血清肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor。TNF）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）含量,同时对脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）诱导的AA大鼠腹腔巨噬细胞（peritonealmacrophages,PM）产生的TNF、IL-1β进行检测。结果：大鼠免疫后2周,PNS腹腔注射给药2周,可降低AA大鼠多发性关节炎指数（P〈0．05）,抑制血清TNF（P〈0．01）、IL-1β（P〈0．05）产生;PNS体外分别恰药0．8,0．4．o．2mg／ml,作用24h,可不同程度抑制LPS诱导的AA大鼠PM产生TNF（P〈0．05,P〈0．01）和及IL-1β（P〈0．05）。结论：PNS可能通过抗炎及抑制血清、PM释放炎性细胞因子TNF、IL—1β对AA大鼠发挥治疗作用。