HBV核心蛋白拮抗α干扰素抗病毒活性的初步研究

目的 探讨HBV核心蛋白（HBc）对α干扰素（IFN-α）抗病毒活性可能存在的拮抗机制。 方法 以表达抗黏液病毒A蛋白(MxA)的重组质粒pcDNA3.1-Flag-MxA （野生型）转染肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞,用ELISA和real-time PCR法分别检测转染后HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg和细胞外HBV DNA。HBc核心蛋白表达质粒（pHBc-EGFP）转染HepG2细胞后,RT-PCR法分析IFN-α抗病毒蛋白MxA、双链RNA激活的蛋白激酶（PKR）和2′,5′-寡腺苷酸合成酶（2′,5′-OAS）等mRNA水平。结果 转染MxA重组质粒的HepG2.2.15细胞能够表达MxA,转染48 h时HBsAg、HBeAg比空白对照组显著减少（P＜0.05）,HBV DNA无显著性差异。转染pHBc-EGFP的HepG2细胞,经1 000 IU/ml IFN-α处理后,抗病毒蛋白PKR和2′,5′-OAS mRNA水平未见明显改变,而MxA-mRNA水平显著降低（P＜0.05）。 结论 HBV核心蛋白可能通过抑制抗病毒蛋白MxA的表达,而发挥对IFN-α的拮抗作用。     

HepG2．2．15细胞培养上清液中HBVDNA及其抗原的检测

乙型肝炎病毒（HBV）是一种引起急性和慢性坏死炎症性肝病及肝细胞癌的DNA病毒。HBV具有特异嗜肝性、非细胞损伤与裂解、易发展为慢性等特征。HepG2．2．15细胞是能够表达HBV抗原和分泌完整HBV颗粒的肝胚瘤细胞系,也是目前用来研究HBV复制．肝细胞对干扰素（IFN）应答最为合适的细胞模型系统。     

外源性线粒体融合素基因-2转染对肝癌细胞体外生物学行为的影响

目的 研究外源性线粒体融合素基因-2(mitofusin-2 gene，mfn2)对肝癌细胞株HepG2体外生物学行为的影响。 方法 基因重组构建并鉴定mfn2真核表达质粒pEGFPmfn2，用脂质体将质粒转染培养人肝癌细胞株HepG2，经G418筛选阳性细胞克隆，逆转录-聚合酶链反应检测转染后细胞mfn2 mRNA的表达水平；Western-blot检测线粒体融合蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测mfn2对HepG2细胞增殖的影响，Annnexin-V/PI双标流式细胞术检测转染细胞凋亡的变化。结果 重组真核表达质粒pEGFPmfn2经限制性内切酶双酶切，电泳后显示约约2.3kp的mfn2片段和4.7kb的pEGFP-N2¬载体片段。RT-PCR及Western-blot显示转染组有mfn2基因mRNA及其蛋白表达。MTT实验提示转染mfn2基因后，HepG2细胞增殖受到抑制；流式细胞分析显示转染组与转染空质粒组和空白对照组相比可促进细胞凋亡。结论 成功构建了pEGFPmfn2真核表达质粒，外源性mfn2基因可抑制肝癌细胞的增殖，并可诱导肝癌细胞凋亡。     

缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响

背景:缺氧诱导因子1α是一种转录因子,缺氧环境下对哺乳动物细胞起重要的调控作用。然而缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株的放疗和化疗感受性的作用有待研究。目的:观察缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响。设计:观察对比实验。单位:首都医科大学附属北京朝阳医院。材料:口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5,和口腔鳞状上皮癌细胞株-6来自人口腔鳞状上皮癌细胞(由日本高知大学医学部口腔外科建株)。方法:本实验于2004-09/2006-08于首都医科大学附属北京朝阳医院完成。将口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5,和口腔鳞状上皮癌细胞株-6采用含小牛血清,左旋谷酰胺,青霉素,链霉素的改良DMEM培养液中培养。①从未处理和用30Gyγ射线,100μmol/L顺铂或100μmol/L5-氟脲嘧啶处理后的口腔鳞状上皮癌细胞株中提取细胞核蛋白。采用免疫印迹法检测缺氧诱导因子1α蛋白表达水平,同时采用定量PCR检测缺氧诱导因子1αmRNA的表达。②不同干预条件下细胞增殖抑制情况:将口腔鳞状上皮癌细胞株单细胞悬液以1×104/孔接种于96孔板中,每孔分别加入终浓度为100μmol/L的顺铂或5-氟尿嘧啶,或用30Gyγ射线处理细胞,培养48h后,采用用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制情况。③不同干预条件下细胞凋亡分析:口腔鳞状上皮癌细胞株细胞用30Gyγ射线,100μmol/L顺铂或100μmol/L5-氟脲嘧啶处理24h后,用Propidi-umiodide和AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪测定凋亡细胞数(仅分析γ射线,顺铂处理组)。④质粒构建和转染:将人缺氧诱导因子1αcDNA克隆至pcDNA3.1/V5-HisTOPO表达载体。用脂质转染法将缺氧诱导因子1αcDNA暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞。将缺氧诱导因子1αsiRNA(有义序列为5’CUGAUGACCAGCAACUUGAtt3’)暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞,设立空白对照,同时给予细胞增殖抑制情况观察,以及细胞凋亡分析(仅分析顺铂处理组),方法同前。主要观察指标:①不同口腔鳞状上皮癌细胞株缺氧诱导因子1α的mRNA和蛋白表达情况。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株增殖抑制及细胞凋亡情况。③缺氧诱导因子1α过表达或缺氧诱导因子1α基因敲除的转染细胞的蛋白水平检测。④转染细胞和对照口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制情况和细胞凋亡分析结果。结果:①不同口腔鳞状上皮癌细胞株间缺氧诱导因子1αmRNA和蛋白表达结果:口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞缺氧诱导因子1αmRNA的相对表达水平分别为1.0,2.2,4.3和4.0。缺氧诱导因子1α的细胞总蛋白和细胞核蛋白的表达在口腔鳞状上皮癌细胞株-2和口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞中较弱,而在口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞中较强。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制及被诱导凋亡情况:经γ射线,顺铂及5-氟脲嘧啶处理后,口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数分别下降至(39.5±3.2)%,(39.2±1.2)%和(47.9±3.6)%,口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞数分别下降至(53.9±6.6)%,(54.3±1.4)%,(54.8+3.8)%。口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数分别下降至(74.1±3.8)%,(76.5±9.1)%,(69.6±7.7)%,口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞数分别下降至(71.4±7.4)%,(84.4±8.8)%,(82.0±4.5)%。顺铂处理后,口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为(50.9±1.3)%,(67.3±2.2)%,(12.2±0.8)%和(38.6±0.9)%。γ射线处理后,口腔鳞状上皮癌细胞株-2,口腔鳞状上皮癌细胞株-4,口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为(21.2±1.1)%,(14.6±0.9)%,(9.7±1.0)%和(10.4±0.8)%。③不同干预条件下转染细胞增殖抑制及凋亡情况:经γ射线,顺铂及5-氟脲嘧啶处理后,转染了缺氧诱导因子1α表达载体的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数高于对照组(t=-4.693,-8.617,-6.721,P<0.01);转染了缺氧诱导因子1αsiRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数低于对照组细胞(t=5.800,5.595,4.253,P<0.05～0.01)。用顺铂处理24h后,转染缺氧诱导因子-1α的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞凋亡数为(34.0±1.9)%,低于空白对照[(49.6±3.4)%,t=6.937,P<0.01]。转染缺氧诱导因子1αsiRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞凋亡数为(27.7±2.3)%。高于空白对照[(11.4±2.1)%,t=-8.941,P<0.01]。结论:缺氧诱导因子1α表达与口腔鳞癌细胞对放、化疗感受性之间有负相关性。抑制癌细胞的缺氧诱导因子1α表达能增强癌细胞对放疗、化疗的感受性。     

干扰素信号传导相关蛋白和基因检测方法的初步建立和应用

目的：建立α—干扰素(IFN—α)信号传导蛋白和基因检测的方法。方法：收集慢性乙型病毒性肝炎、自愈性乙型肝炎病毒感染、健康对照的外周静脉血并分离外周血单核细胞(PBMC)，建立EB病毒(EBV)转化的B淋巴细胞系。体外分别用不同浓度的IFN—α(0、100、1000、10000IU／ml)刺激细胞，用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测IFN活化的干扰素刺激基因因子3(ISGF—3)和γ—干扰素活化因子(GAF)；设计特异的引物和探针，用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测IFN诱导抗病毒蛋白MxA、OASI、PKR的相对表达。结果：成功建立了EBV转化的B淋巴细胞系。建立了EMSA检测ISGF—3和GAF转录蛋白的方法，用实时荧光定量PCR能够准确地检测样本中MxA、OASI和PKR的表达。结论：建立了IFN信号传导蛋白和基因检测的方法，为进一步研究IFN治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效提供依据。     

缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响

背景：缺氧诱导因子1α是一种转录因子，缺氧环境下对哺乳动物细胞起重要的调控作用。然而缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株的放疗和化疗感受性的作用有待研究。目的：观察缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响。设计：观察对比实验。单位：首都医科大学附属北京朝阳医院。材料：口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5，和口腔鳞状上皮癌细胞株-6来自人口腔鳞状上皮癌细胞（由日本高知大学医学部口腔外科建株）。方法：本实验于2004—09／2006-08于首都医科大学附属北京朝阳医院完成。将口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5，和口腔鳞状E皮癌细胞株-6采用含小牛血清，左旋谷酰胺，青霉素，链霉素的改良DMEM培养液中培养。①从未处理和用30Gyγ射线，100μmol／L顺铂或100μmol／L5-氟脲嘧啶处理后的口腔鳞状上皮癌细胞株中提取细胞核蛋白。采用免疫印迹法检测缺氧诱导因子1α蛋白表达水平，同时采用定量PCR检测缺氧诱导因子1αmRNA的表达。②不同干预条件下细胞增殖抑制情况：将口腔鳞状上皮癌细胞株单细胞悬液以1&;#215;10^4／孔接种于96孔板中，每孔分别加入终浓度为100μmol／L的顺铂或5-氟尿嘧啶，或用30Gyγ射线处理细胞，培养48h后，采用用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制情况。③不同干预条件下细胞凋亡分析：口腔鳞状上皮癌细胞株细胞用30Gyγ射线，100μmol／L顺铂或100μmol／L5-氟脲嘧啶处理24h后，用Propidium iodide和Annexin V—FITC染色，用流式细胞仪测定凋亡细胞数（仅分析γ射线，顺铂处理组）。④质粒构建和转染：将人缺氧诱导因子1α cDNA克隆至pcDNA3．1／V5-His TOPO表达载体。用脂质转染法将缺氧诱导因子1α cDNA暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞。将缺氧诱导因子1α siRNA（有义序列为5’CUGAUGACCAGCAACUUGAtt3’）暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞，设立空白对照，同时给于细胞增殖抑制情况观察，以及细胞凋亡分析（仅分析顺铂处理组），方法同前。主要观察指标：①不同口腔鳞状上皮癌细胞株缺氧诱导因子1α的mRNA和蛋白表达情况。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株增殖抑制及细胞凋亡情况。⑧缺氧诱导因子1α过表达或缺氧诱导因子1α基因敲除的转染细胞的蛋白水平检测。㈤转染细胞和对照口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制情况和细胞凋亡分析结果。结果：①不同口腔鳞状上皮癌细胞株间缺氧诱导因子1αmRNA和蛋白表达结果：口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞缺氧诱导因子1αmRNA的相对表达水平分别为1、0，2．2，4.3和4．0。缺氧诱导因子1α的细胞总蛋白和细胞核蛋白的表达在口腔鳞状上皮癌细胞株-2和口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞中较弱，而在口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞中较强。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制及被诱导凋亡情况：经γ射线，顺铂及5-氟脲嘧啶处理后，口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数分别下降至（39．5&;#177;3．2）％，（39．2&;#177;1．2）％和（47．9&;#177;3．6）％，口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞数分别下降至（53．9&;#177;6．6）％，（54.3&;#177;1.4）％，（54．8＋3．8）％。口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数分别下降至（74．1&;#177;3．8）％，（76．5&;#177;9．1）％，（69．6&;#177;7．7）％，口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞数分别下降至（71.4&;#177;7．4）％，（84．4&;#177;8．8）％，（82．0&;#177;4．5）％。顺铂处理后，口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为（50．9&;#177;1.3）％，（67.3&;#177;2．2）％，（12．2&;#177;0．8）％和（38．6&;#177;0．9）％。γ射线处理后，口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为（21．2&;#177;1．1）％，（14．6&;#177;O．9）％，（9．7&;#177;1．0）％和（10．4&;#177;0．8）％。⑧不同干预条件下转染细胞增殖抑制及凋亡情况：经γ射线，顺铂及5-氟脲嘧啶处理后，转染了缺氧诱导因子1α表达载体的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数高于对照组（t=-4．693，-8．617，-6．721，P〈0．01）；转染了缺氧诱导因子1α siRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数低于对照组细胞（t=5．800，5．595，4．253，P〈0．05～0．011。用顺铂处理24h后，转染缺氧诱导因子-1α的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞凋亡数为（34．0&;#177;1．9）％，低于空白对照[（49．6&;#177;3．4）％，t=6．937，P〈0．01]。转染缺氧诱导因子1α siRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞凋亡数为（27．7&;#177;2.3）％。高于空白对照[（11．4&;#177;2．1）％，t=-8．941，P〈0．01]。结论：缺氧诱导因子1α表达与口腔鳞癌细胞对放、化疗感受性之间有负相关性。抑制癌细胞的缺氧诱导因子1α表达能增强癌细胞对放疗、化疗的感受性．     

α-防御素抑制HepG2.2.15细胞HBV表达的初步研究

目的α-防御素抑制HepG2.2.15细胞HBV表达的体外初步探讨。方法不同浓度α-防御素于体外作用于HBV转染的HepG2.2.15细胞株模型,不同时间用免疫荧光法测定细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的量及HBV-DNA含量,并作出比较。结果作用24h后,α-防御素对HepG2.2.15细胞株HBV抑制更明显,且呈药物剂量依赖性。结论α-防御素在体外能有效地抑制HBV的表达,提示它在抗乙型肝炎病毒中有较大的应用前景。     

转染乙肝病毒基因的HepG2细胞Tooll样受体2的表达上调

目的:前期研究发现先天免疫分子TOU样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)与乙型病毒性肝炎的免疫损伤有一定的关系,现进一步观察瞬时和稳定转染乙肝病毒(HBV)基因的HepG2细胞TLR2表达的变化.方法:采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2在肝癌细胞株HepG2和HepG2.2.15上表达的平均荧光强度(MFI)及阳性细胞率,将前期试验获得的HBV全基因组.采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2在细胞上表达的MFI及阳性细胞率.结果:HepG2.2.15细胞上TLR2表达的MFI及阳性细胞率均明显高于HepG2(均P＜0.001),HepG2细胞于转染48 h后TLR2表达的MFI和阳性细胞率与空白对照组(转染HBVDNA剂量为O)相比均显著升高(均P＜0.05),并且MFI和阳性细胞率与转染剂量均呈显著正相关(均r=0.950,P＜0.001).结论:不管在瞬时和稳定转染HBV基因的HepG2细胞,都存在细胞TLR2的上调,提示HBV感染细胞后存在TLR2信号途径的激活.     

HIF-2α表达对低氧环境下胃癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探讨抑制缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达对人胃癌细胞株BGC823低氧状态下细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法利用氯化钴诱导的人胃癌细胞株BGC823作为研究对象,构建HIF-2α小干扰RNA(siRNA)特异性载体,转染低氧环境下的BGC823细胞,采用RT-PCR和免疫印迹法(Western blot)分别检测转染前后细胞中HIF-2αmRNA和蛋白表达,CCK-8法检测转染前后BGC823细胞增殖情况,流式细胞术检测转染前后BGC823细胞凋亡和细胞周期分布情况。结果低氧诱导下,BGC823细胞HIF-2α表达显著增多。低氧环境下,特异性转染HIF-2αsiRNA于BGC823细胞后,HIF-2αmRNA和蛋白表达水平均受到明显抑制,细胞增殖能力降低,凋亡率升高,分布于G2期细胞比例升高(P<0.05)。结论低氧环境下BGC823细胞表达HIF-2α增多,通过特异性HIF-2αsiRNA下调低氧环境下BGC823细胞中HIF-2α基因表达,能够抑制BGC823细胞增殖,改变细胞周期分布并诱导其凋亡,为胃癌分子靶向治疗提供新的证据。     

siRNA抑制人肝癌细胞MDM2表达及细胞增殖的研究

目的探讨siRNA对人肝癌HepG2细胞MDM2基因表达的抑制作用及对增殖的影响。方法体外合成针对MDM2基因的siRNA质粒,转染HepG2细胞株;应用RT-PCR和western blot方法检测siRNA对MDM2和P53基因和蛋白表达的影响,并用MTT法检测siRNA对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期。结果和空白组比转染siMDM2-1,2的HepG2细胞的MDM2基因和蛋白表达减低,而P53基因和蛋白表达增加。阴性对照质粒组的基因表达未见明显改变。转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,转染siMDM2-1,2和阴性对照质粒后的抑制率分别是46.3%、56.1%和3%。和对照组比较,转染siMDM2-1,2的hepG2细胞的细胞周期发生明显改变,而转染对照质粒的hepG细胞周期未发生明显变化。结论 siRNA MDM2可以有效抑制HepG2细胞株中MDM2的表达,促进P53的表达,同时可以使细胞周期发生变化,这可能是其抑制肿瘤细胞增殖的主要机制之一。     

Anti-tumor effect of volatile oil from Houttuynia cordata Thunb. on HepG2 cells and HepG2 tumor-bearing mice

The aim of this paper is to study the anti-tumor mechanism of volatile oil from Houttuynia cordata Thunb. (sodium new houttuyfonate, SNH). In vitro, SNH exhibited a concentration-dependent cytotoxic effect against four human cancer lines (HepG2, A2780, MCF-7, SKOV-3). SNH treatment with different concentrations induced HepG2 cells to exhibit varying degrees of morphological changes in apoptotic features, such as round shape, cell shrinkage and formation of apoptotic body. It was observed that SNH caused the decrease in Bcl-2 mRNA expression and triggered the apoptosis of HepG2 cells. Wound healing assay and RT-PCR results showed that the decrease in the expression level of MMP9 and VEGF was observed in HepG2 cells after treatment with SNH for 48 h, suggesting that the extracellular matrix pathway degradation was involved in the HepG2 cells migration. Moreover, we got an insight into the binding mode of SNH into the MMP9 active site through 3D pharmacophore models. Docking study and molecular dynamics (MD) simulation analysis sheds light on that SNH was completely embedded into the MMP9 active site and formed hydrogen bonds with key catalytic residues of MMP9, including Ala191, His190, Ala189 and Glu227. The prediction of SNH binding interaction energies in the MMP9 was almost in good agreement with the original inhibitor EN140. In vivo experiments, both SNH and cyclophosphamide significantly reduced tumor weights and their tumor inhibitory rates were 50.78% and 82.61% respectively. This study demonstrated that SNH was an apoptosis inducer in HepG2 cells. SNH has four possible functions, that it could induce apoptosis by mitochondria pathway in HepG2 cells, inhibit the tumor growth, regulate Bcl-2 family mRNA expression and effectively subdue migration of hepatocellular carcinoma cells by decreasing the expression of MMP9 and VEGF. Therefore, SNH might be a potential candidate drug for the treatment of hepatocellular carcinoma, which could provide a reference for further clinical research.

The cytotoxicities of the volatile oil from Houttuynia cordata Thunb. against four human tumour cell lines were evaluated.     

青蒿琥酯诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制

目的探讨青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,对细胞凋亡的影响。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组、青蒿琥酯不同浓度组(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml),对HepG2作用48h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,同时采用瑞氏染色法观察细胞凋亡;用RT-PCR检测caspase-3mRNA的表达,采用灰度分析比较表达的变化。结果青蒿琥酯(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml)处理HepG2细胞48h,呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,且当青蒿琥酯浓度在6.25μg/ml以上时,各组凋亡率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),瑞氏染色后光镜下可见处理组细胞发生凋亡形态学改变。与对照组比较,各实验组caspase-3的表达显著增加(P<0.01)。结论青蒿琥酯能显著诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与增强凋亡相关基因caspase-3的表达有关。     

槲皮素抑制肝癌HepG2细胞的增殖及促凋亡机制的研究

目的观察槲皮素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法人肝癌HepG2细胞系,分为6组,A～E组加入终浓度分别为12.5,25.0,50.0,100.0,200.0μmol/L槲皮素,F组为空白对照组,加入等量营养液。采用MTT法及流式细胞检测技术检测各组人肝癌HepG2细胞对槲皮素的敏感性,应用免疫细胞化学技术检测细胞中Bcl-2及Bax蛋白的表达情况。结果槲皮素对肝癌HepG2细胞的增殖呈浓度依赖性的抑制作用,作用48h后,A～E组抑制率与凋亡率高于F组,差异均有统计学意义(P<0.05);槲皮素作用HepG2细胞24h后,D组G1期细胞比率高于F组,差异有统计学意义(P<0.05),S和M期细胞比率差异无统计学意义(P>0.05);作用48h后,D组Bcl-2和Bax表达灰度值与F组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素对肝癌HepG2细胞具有生长抑制作用,并通过激活线粒体凋亡途径来促进细胞凋亡。     

人参皂苷Rh2诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的研究人参皂苷Rh2（G-Rh2）对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法用终浓度为5、10、20 mg/L的G-Rh2作用于HepG2细胞,于24 h、48 h及72 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;72 h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果 MTT法检测显示,G-Rh2对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;流式细胞仪检测显示G-Rh2作用后,细胞被阻滞于G0/G1期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加。RT-PCR结果显示,G-Rh2下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达。结论 G-Rh2在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断G-Rh2诱发肝癌细胞凋亡的作用与其对survivin基因表达的抑制有关。     

过氧化氢作用HepG2对NF-κB途径和细胞敏感时相的相关研究

背景低剂量活性氧可以促进正常细胞和肿瘤细胞增殖、分化,但目前对此过程中所涉及的信号途径及其与细胞敏感时相的关系尚认识不足.目的通过阻断细胞内NF-κB途径和诱导不同细胞时相,观察过氧化氢促进HepG2细胞增殖与NF-κB途径和细胞敏感时相的关系,为抑制、干预肿瘤细胞的生长及改善患者预后功能提供理论依据.设计完全随机实验研究.单位解放军第四军医大学预防医学系毒理学教研室.对象实验于2004-04/2004-08在解放军第四军医大学预防医学系毒理学教研室完成,对象为人肝癌细胞株HepG2细胞,由解放军第四军医大学基础部病理学教研室惠赠.方法以不同剂量过氧化氢直接作用于培养的HepG2细胞,筛选能够促进HepG2细胞增殖的过氧化氢浓度.用50μmol/L的过氧化氢分别处理经NF-κB抑制剂(PDTC)预处理的HepG2细胞和用胸腺嘧啶核苷同步化得到的G1,G2/M,S期HepG2细胞.主要观察指标细胞分别经过氧化氢处理1,24,48 h后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞吸光度值,比较细胞增殖活性.结果50 μmol/L的过氧化氢作用HepG2细胞24 h后,MTT实验所测吸光度值与对照组相比显著升高(t=0.001,P＜0.01).20 μmol/L PDTC预处理HepG2细胞2 h后,给予50μmol/L过氧化氢作用细胞,MTT实验所测吸光度值与对照组相比差异无显著性意义(t=0.211,P＞0.05).50 μmol/L的过氧化氢作用G期HepG2细胞24 h后,MTT实验所测吸光度值与对照组相比显著升高(t=0.031,P＜0.05).结论低剂量过氧化氢可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;过氧化氢诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.此结论将为肿瘤干预和改善其预后提供实验学数据.     

Nifuroxazide ameliorates lipid and glucose metabolism in palmitate-induced HepG2 cells

Inflammation constitutes an important component of non-alcoholic fatty liver disease. STAT3 is a direct target of inflammatory cytokines, but also mediates glycolipid metabolism in the liver. As a potent inhibitor of STAT3, the effect of Nifuroxazide (Nifu) on glycolipid metabolism in liver has not been reported. In this study, we used palmitic acid (PA)-induced HepG2 cells to examine the expression of inflammatory factors and apoptosis-related proteins and the content of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), and glycogen. The expression of hepatic lipogenic proteins (ACCα, SREBP-1c, FAS), gluconeogenesis enzymes (PEPCK, G6Pase, and IRS2), the IL-6/STAT3/SOCS3 inflammatory axis, and the insulin signaling pathway was determined. Our study shows that Nifu significantly improves lipid metabolism disorders in the PA-induced HepG2 cells, whereas, it remarkably reduced intracellular free fatty acid (FFA), TG, and TC content, suppressed lipid synthesis, and increased lipid decomposition. Our results also showed that Nifu significantly improved dysregulated glucose metabolism in the PA-treated HepG2 cells, increased glycogen content, and inhibited gluconeogenesis. Further research indicated that Nifu markedly inhibited activation of the IL-6/STAT3/SOCS3 signaling pathway. Finally, due to anti-inflammatory stress, Nifu enhanced insulin signaling in the PA-induced HepG2 cells. Therefore, Nifu can improve glucose and lipid metabolism in the PA-induced HepG2 cells, which provides new evidence that Nifu has a positive effect on PA-induced cellular hepatic steatosis and improves glucose metabolism in HepG2 cells, providing a new perspective for studying drug treatment of glucose and lipid metabolism disorders.

Inflammation constitutes an important component of non-alcoholic fatty liver disease.     

乙型肝炎病毒感染HepG2细胞模型的构建

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)感染的细胞模型.方法:将携带1.2拷贝HBV基因的重组腺病毒感染HEK293细胞进行包装、扩增并分离纯化.将扩增得到的HBV感染HepG2细胞,用ELISA法检测感染后第4天培养上清中的HBsAg,Real-time RT-PCR检测HBV mRNA.结果:ELISA检测结果显示,HepG2细胞感染HBV后上清液中HBsAg呈阳性.Real-time RT-PCR可以检测到HBV mRNA.结论:HBV能在HepG2细胞中表达复制和表达.HBV感染的HepG2细胞模型构建成功.     

低浓度放线菌素D诱导HepG2细胞周期G2阻滞的分子机制研究

目的:探讨低浓度放线菌素D处理导致HepG2细胞周期G2阻滞的分子机制。方法:应用低浓度放线菌素D处理HepG2细胞不同时间,然后应用流式细胞仪检测HepG2生长周期变化;免疫荧光观察核磷蛋白B23(NPM)定位的变化;免疫印迹法检测NPM及其细胞周期相关蛋白P53和P21表达水平。结果:低浓度放线菌素D能够抑制HepG2细胞生长并使细胞周期阻滞于G2期;在放线菌素D作用下,NPM蛋白表达水平没有明显改变,但出现定位改变,即从核仁移位到核浆;放线菌素D处理引起P53和P21蛋白表达水平上调。结论:低浓度放线菌素D作用HepG2细胞导致细胞周期G2阻滞,其机制可能与NPM移位促使其相互作用靶蛋白P53和P21蛋白水平上调有关。     

肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO2放射敏感性体外实验研究

目的：探讨体外培养的人肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞株LO2的放射敏感性。方法采用6-MVX线分次照射细胞,进行克隆形成实验,流式细胞仪测细胞凋亡。结果 HepG2的细胞存活曲线较陡峭,细胞凋亡率升高幅度较达。结论 HepG2与LO2有不同的放射生物学特性,相比而言HepG2的放射敏感性较高。     

促甲状腺激素受体抗体对人肝癌细胞HepG2凋亡和增殖的影响

目的 格雷夫斯病(Graves disease,GD)患者肝功能损害发病率高,可能与升高的促甲状腺激素受体抗体(TRAb)相关,探讨TRAb对肝细胞损伤的机制.方法 用含不同浓度TRAb的GD患者血清、正常人血清及胎牛血清的DMEM培养基处理人肝癌细胞株HepG2细胞,采用异硫氰酸荧光素(annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidiumiodide,PI)及MTT法分别检测细胞的凋亡和增殖状况.结果 5％、10％及20％ TRAb的GD血清能促进HepG2细胞增殖,且HepG2细胞凋亡较对照组增高明显,以中晚期凋亡为著.结论 TRAb能诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡,参与肝细胞损伤的发生.