巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌

本文采用扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性片段的两对引物，用ＰＣＲ法检测伤寒沙门氏菌与非伤寒沙门氏菌，结果表明阳性符合率达１００％，且反应体系中达１０２ｃｆｕ／ｍｌ浓度时，伤寒沙门氏菌即可检出。检查伤寒确诊患者粪便标本４份，ＰＣＲ扩增均阳性。     

聚合酶链反应结合斑点杂交技术检测伤寒沙门氏菌的临床应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性的ＤＮＡ片断，再用地高辛标记探针与之杂交检测，并用非伤寒沙门氏菌作对照，结果仅伤寒沙门氏菌阳性。实验表明，当标本中伤寒沙门氏菌含量达１０ｃｆｕ／ｍｌ时，即可检出。在伤寒发病早期，当机体抗体水平尚处于低水平时，应用ＰＣＲ斑点杂交检测伤寒沙门氏菌可提高伤寒的诊断率；在伤寒病程后期，应用ＰＣＲ斑点杂交检测治疗后带菌状态具有重要价值。     

恙螨体内肾综合征出血热病毒基因的套式PCR检测

目的：检测恙螨体内微量肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）基因。方法：选择ＨＦＲＳＶ膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成两对引物，采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ，建立了反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法，扩增产物经凝胶电泳及点印迹杂交证实具有特异性。结果：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离恙螨５０只组，经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性；ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组，ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只、１０只和５只组，游离螨１０只和５只组均未见明显扩增带。进一步用ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ检测，在ＲＴ－ＰＣＲ未检测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，最低检出为５只螨组。并用核酸分子杂交技术进一步证实了上述结果。结论：ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点，可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，从分子生物学角度为恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了直接证据。     

青岛地区丙型肝炎病毒基因分型

对青岛地区８６例抗ＨＣＶ阳性肝炎患者血清，采用逆转录－套式基因扩增法（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶ，ＲＮＡ，并用多引物扩增进行基因分型，结果，ＨＣＶ·ＲＮＡ阳性５０例（５８．１％），其中ＨＣＶⅡ型４５例（９０．０％），Ⅲ型３例，Ⅱ／Ⅲ混合型２例。说明青岛地区ＨＣＶ基因以Ⅱ型为主，应据此设计预防和治疗措施。     

慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞中丙型肝炎病毒RNA正,负链的…

选择ＨＣＶ基因组５＇非编码区的两对引物，利用逆转录巢式ＰＣＲ技术对３５例慢性丙型肝炎患的血清中正链ＨＣＶ ＲＮＡ、ＰＢＭＣ中正、负莲ＨＣＶ ＲＮＡ进行检测。结果血清中正链ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为６２．９％（２２／３５），ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性率为５４．３％（１９／３５），负链ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性率为３４．３％（１２／３５）。同时对第２次ＰＣＲ的阳性产物进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦ     

基于ＴａｑＭａｎ探针三重荧光ＰＣＲ 检测沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌

摘要：目的　建立基于ＴａｑＭａｎ探针三重荧光ＰＣＲ 检测沙门菌（狊犪犾犿狅狀犲犾犾犪,Ｓａ）、肠炎沙门菌（ＳＥ）和鼠伤寒沙门菌（ＳＴ） 的方法。方法　根据沙门菌犪犮犲犃基因、肠炎沙门菌特异序列（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ３７０７０７．１）、鼠伤寒沙门菌的ＳＴＭ４５９９ 序列（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＥＲＶ０１００００２３．１）,分别设计引物和ＴａｑＭａｎ探针,在探针的５′端分别标记ＦＡＭ、ＶＩＣ、ｃｙ５,建立基于ＴａｑＭａｎ探针三重实时荧光ＰＣＲ 检测沙门菌的方法。结果　２９ 种不同血清型沙门菌均扩增出犪犮犲犃基因,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的引物和探针分别特异性地扩增出１５株肠炎沙门菌和１１株鼠伤寒沙门菌,而其他血清型沙门菌和１７株非沙门菌扩增结果阴性。犪犮犲犃、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的三重荧光ＰＣＲ 扩增效率分别为８９％、８７％、９０％,最低检测浓度分别达到２８０ｃｆｕ／ｍｌ、２６０ｃｆｕ／ｍｌ、３００ｃｆｕ／ｍｌ。结论　本研究建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的特异性检测。     

慢性丙型肝炎患者外周血单核细胞中丙型肝炎病毒RNA正、负链的检测

选择ＨＣＶ基因组５’非编码区的两对引物，利用逆转录巢式ＰＣＲ技术对３５例慢性丙型肝炎患者的血清中正链ＨＣＶＲＮＡ、ＰＢＭＣ中正、负链ＨＣＶＲＮＡ进行检测。结果血清中正链ＨＣＶＲＮＡ阳性率为６２．９％（２２／３５），ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶＲＮＡ的阳性率为５４．３％（１９／３５），负链ＨＣＶＲＮＡ的阳性率为３４．３％（１２／３５）。同时对第２次ＰＣＲ的阳性产物进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），进一步证实ＰＣＲ产物为ＨＣＶ特异性扩增产物，结果说明ＨＣＶ能在ＰＢＭＣ中存在或复制，即肝细胞并非ＨＣＶ感染与复制的唯一场所。ＰＢＭＣ可能作为病毒长期滞留场所，使病毒感染持续存在，是丙型肝炎易发生慢性化的原因之一。     

聚合酶链反应扩增HDV基因序列

用两对ＨＤＶＯＲＦ５区引物作逆转录套式ＰＣＲ，检测６例抗－ＨＤ阳性的慢性乙型肝炎患者血中ＨＤＶＲＮＡ．结果，５例在３５９ｂＰ处出现特异性扩增带，用地高辛标记的寡核苷酸探针杂交核实结果与溴化乙锭染色者一致，未发现有假阳性结果．提示用该法检测本地区ＨＤＶＲＮＡ可获得较理想的结果．     

我国部分地区1049例职业献血员庚型肝炎病毒感染状况的研究

应用庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）多肽抗原和ＰＣＲ引物，对我国部分地１０４９例职业献血员进行了ＨＧＶ抗体和ＨＧＶＲＮＡ检测。抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性率为３．５３％（３７／１０４９）。５条抗原多肽反应性不同，检测结果有交叉和重叠。其特异性较好，除ＳＰ２外，阻断率均在９０％以上。３７例抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性者中，ＨＧＶＲＮＡ阳性率为４３．２４％（１６／３７）。证明在我国职业献血员中存在着较高的ＨＧＶ感染率。     

DI—PAP检测伤寒患者血清及尿液中特异特抗原

目的 探讨伤寒患血清及尿液中特异性抗原的早期诊断。方法 应用斑点免疫试验结合过氧化物酶抗过氧化物酶（ＤＩ－ＰＡＰ）法检测伤寒患血清（微量取血法）及尿液中菌体“Ｏ”抗原及鞭毛“Ｈ”抗原。结果 该法检测７５例伤寒中层得血清及３０例尿液“Ｏ”、“Ｈ”抗原阳性率分别为６６例（８８％）、６１例（８１．３３％）、２２例（７３．３３％）、２０例（６０．５０％），与肥达反应４０例（５３．３３％）阳性相比较有显     

基因芯片在耳聋基因检测中的应用

目的:通过采用基因芯片的方法在耳聋人群中进行突变基因检测,探讨该方法在耳聋预防和阻断中的应用价值。方法:采用基因芯片方法进行突变位点的检测。采集29例沈阳市聋哑人的外周血,提取基因组DNA进行PCR扩增、杂交、扫描检测,其可以同时检测4种常见的耳聋相关基因中的9个热点突变,包括GJB2(35delG,176del16,235delC及299delAT)、GJB3(538C>T)、SLC26A4(IVS7-2A>G、2168A>G)和线粒体DNA12SrRNA(1494C>T,1555A>G)。结果:在29例耳聋患者中,基因芯片方法共检测出13例携带致聋突变(44.83%)。其中,GJB2基因突变6例(20.69%),包括235delC位点杂合突变型3例,235delC位点纯合突变型1例,299del AT位点杂合突变型2例,235delC和176del 16位点复合杂合突变型1例;SLC26A4基因突变10例(34.48%),包括IVS7-2A>G位点杂合突变型7例,IVS7-2A>G位点纯合突变型2例,2168 A>G位点杂合突变型1例,其中1例为GJB2基因235delC位点,299del AT位点和SLC26A4基因2168 A>G位点复合杂合突变。结论:基因芯片作为一种基因检测的方法,在预防"聋-聋"垂直传递,降低聋儿的出生率方面起到重要的作用。     

Expression of haemagglutinin gene

Antigenic drift of the haemagglutinin (HA) molecule of type A influenza viruses has been thought to occur by the accumulation of a series of point mutations in the antigenically important regions of the molecule. In order to study the antigenic sites on the HA molecule, an attempt was made to use the site-specific mutagenesis method.     

遗传性耳聋基因芯片在新生儿耳聋基因筛查中的应用

目的:探索应用遗传性耳聋基因芯片对新生儿进行常见耳聋基因的筛查,为辅助临床诊断提供遗传咨询。方法:采集2085例新生儿足跟血,制成干血斑,提取血斑中淋巴细胞基因组DNA,用9项遗传性耳聋基因检测试剂盒检测中国人常见的4个耳聋基因的9个突变位点。结果:共检出73例突变,总突变率3.5%。其中GJB2突变28例,线粒体突变5例,SLC26A4突变34例,GJB3突变5例,三杂合突变1例(235delC杂合突变299delAT杂合突变IVS7-2AG杂合突变)。结论:正常人群也会携带常见的遗传性耳聋突变基因,在新生儿期,检测出耳聋基因突变对遗传性耳聋的早期发现、预防及治疗有很大帮助。     

SRY和maspin基因对胎儿游离DNA的检测效率

目的:探讨应用非性别依赖的表观遗传学标记代替SRY基因检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性。方法:分别以SRY基因和不同甲基化状态的maspin基因序列为标记对孕妇和非妊娠女性血浆中的游离DNA进行PCR和甲基化PCR检测,并对结果进行统计学分析。结果:孕男胎孕妇血浆DNA标本中SRY基因的检出率为93.9%。u-maspin(maspin基因的非甲基化序列)仅在妊娠组中被检测出,检出率88.3%。两检出率间的差异不具有统计学意义。m-maspin(maspin基因的甲基化序列)在妊娠组和非妊娠组中的检出率无差异。结论:u-maspin基因可作为非性别依赖的胎儿DNA特异性标志物,相对于以SRY基因作为标志物有助于扩大非创伤性产前诊断的临床应用范围。     

维生素D受体和雌激素受体的基因与骨质疏松

骨质疏松症是以低骨量和骨组织微结构退化为特征的全身性疾病,与众多因素有关,而遗传是其中的重要决定因素。在目前研究的若干侯选基因中,维生素D受体基因与雌激素受体基因最受瞩目。该文就维生素D受体基因,雌激素受体基因与骨质疏松的关系及这两个基因之间的协同作用进行综述,从而阐明维生素D受体基因与雌激素受体基因在骨质疏松症发病机制中的作用。     

Increasing the power of identifying gene x gene interactions in genome-wide association studies

In this paper we investigate the power to identify gene x gene interactions in genome-wide association studies. In our analysis we focus on two-stage analyses: analyses in which we only test for interactions between single nucleotide polymorphisms that show some marginal effect. We give two algorithms to compute significance levels for such an analyses. One involves a Bonferoni correction on the number of interactions that are actually tested, and one is a resampling procedure similar to the one proposed by [Lin (2006) Am. J. Hum. Genet. 78:505-509]. We also give an algorithm to carry out approximate power calculations for studies that plan to use a two-stage analysis. We find that for most plausible interaction effects a two-stage analysis can dramatically increase the power to identify interactions compared to a single-stage analysis based on simulation studies using known genetic models and data from existing genome-wide association studies.     

Reporter gene expression in dendritic cells after gene gun administration of plasmid DNA

Dendritic cells (DC) play an integral role in plasmid DNA vaccination. However, the interaction between plasmid DNA and DC in vivo is incompletely understood. In this report, we utilise the sheep pseudoafferent cannulation model to examine the interaction between plasmid DNA encoding enhanced green fluorescent protein (pEGFP) and afferent lymph DC (ALDC) following gene gun administration. The results show that peaks of fluorescent ALDC tended to appear around days 1-4 and 9-13, then erratically thereafter for up to 2 months. Phenotypic analysis showed that EGFP+ ALDC expressed MHC class II, WC6, CD1b, and SIRPalpha markers. Plasmid, detected by PCR, was found in lymph cells and cell-free plasma on a daily basis, and was present variably for up to 2 months. Plasmid was also detected in purified CD1b+ ALDC, but the presence of plasmid did not correlate with EGFP expression by ALDC. Free EGFP in afferent lymph plasma was detectable by luminometry only after three administrations of the plasmid. The results show that gene gun administered pEGFP persisted for extended periods after a single administration, leeching out of skin on a daily basis. The plasmid was associated with both the cellular and fluid components of afferent lymph. EGFP protein appeared in afferent lymph in a pulsatile manner, but associated only with ALDC.