人肺腺癌干细胞对顺铂和卡铂的药物敏感度分析

目的:分析人肺腺癌干细胞(lung adenocarcinoma stem cell, LASC)对顺铂(cisplatin,DDP)和卡铂(carboplatin,CBP)的药物敏感度.方法:人肺腺癌细胞SPC-A1、AG及CPA-Y2经DDP和CBP作用后,应用CCK-8(cell counting kit-8)比色法检测细胞存活率,应用免疫荧光检测法测定药物生存细胞(drug surviving cell,DSC)的表型特征.通过磁性细胞分选技术分离肺腺癌干细胞,应用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)示踪技术检测DSC中的肿瘤干细胞,分析DSC对DDP和CBP的药物敏感度.结果:LASC具有细支气管肺泡干细胞(bronchioalveolar stem cell, BASC)表型(OCT4~+CCSP~+SP-C~+).将此类癌干细胞(CD221~+)与肺腺癌分化细胞(CD221~-)混合后检测DSC发现,后者具有OCT4~+BASC表型.DSC对铂类药物具有显著抗性.结论:肺腺癌干细胞对DDP和CBP具有显著耐药性,可能是化疗后肿瘤复发的根源.     

人肺腺癌干细胞源自肺脏细支气管肺泡干细胞的初步研究

背景与目的已有的研究提示肺腺癌源自肺脏细支气管肺泡干细胞(BASC)的恶性转化,但该假说在人体中尚未得到证实。本研究旨在对人肺腺癌干细胞的BASC特征进行分析。方法人肺腺癌干细胞经流式细胞纯化或无血清悬浮培养获得,所得细胞采用免疫荧光检测BASC特征性标志并经尾静脉注射至免疫缺陷小鼠观察肿瘤转移。结果人肺腺癌细胞A549和SPC-A1均表达Ⅱ型肺泡细胞标志SP-C,但少数细胞表达支气管非纤毛柱状细胞标志CCSP和胚胎干细胞基因OCT4,提示此类细胞属于BASC样癌干细胞。采用流式细胞分选技术纯化其中的CD24 CD22 肺腺癌干细胞后,发现此类细胞属于CCSP SP-C OCT4 细胞,其表型与BASC相同。此外,肺腺癌细胞在无血清培养条件下经EGF/IGF-1/FGF-10刺激能够形成悬浮生长的球体,这类肺球体细胞的特征也与BASC相同。肺球体细胞在含血清条件下培养2周即发生分化,表现为CCSP和OCT4表达丢失。动物实验揭示肺球体细胞具有高转移能力。结论人肺腺癌干细胞具有BASC特征并表达胚胎干细胞基因OCT4,此类肺癌细胞可能与小鼠肺腺癌一样,源自肺脏BASC的恶性转化。     

人肺腺癌干细胞的分离及鉴定

目的：从人肺腺癌细胞株中分离及鉴定具有干细胞特征的高致瘤性癌干细胞。方法：采用磁性细胞分选（magnetic activated cell sorting，MACS）技术将肺腺癌细胞分成多个亚群，然后应用流式细胞及RT-PCR技术检测干细胞相关标志表达，通过NOD-SCID小鼠移植评估其致瘤性。结果：在A549和SPC-A肺腺癌细胞中发现一个新颖的癌细胞亚群，此类癌细胞的表型特征为CD24^＋IGF-1R^＋，具有高侵袭性和高致瘤性，在NOD-SCID小鼠中仅需移植100个细胞即可形成肿瘤，其致瘤能力是上述标志阴性细胞的1000倍。此外，这些细胞表达胚胎干细胞标志（OCT4和Bmi-1）及肺干细胞标志（CCSP，SP-C，TTF-1和Gremlin），类似小鼠肺脏细支气管肺泡干细胞（bronchioalveolar stem cells，BASC），并具有自主生长特性，能够在无血清条件下长期培养。结论：人体肺腺癌中CD24^＋IGF-1R^＋细胞属于BASC样癌干细胞。     

肺腺癌组织中OCT4表达与患者临床指标及预后的相关性

背景与目的肺腺癌发病率不断升高,而OCT4是调控干细胞自我更新的关键基因,在癌干细胞的增殖分化过程中起重要调节作用。本研究目的为检测肺腺癌组织中OCT4表达,并分析其与肺腺癌患者转移、化疗疗效及预后的相关性。方法采用免疫荧光方法检测肺腺癌组织OCT4表达。卡方检验OCT4表达与临床病理指标的关系,Kaplan-Meier生存曲线计算生存率,采用Cox分析评估各指标与患者生存之间的关系。结果 126例肺腺癌组织中,91例可观察到OCT4阳性细胞。OCT4表达与肺腺癌患者转移及化疗耐药密切相关,且与患者无病生存期和生存期呈明显负相关。结论 OCT4表达与肺腺癌患者的转移及化疗耐药相关,提示预后不良。     

DLL4、VEGF在肺腺癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

背景与目的 血管发生(angiogenesis)依赖于多种促进血管发生因子和抑制血管发生因子的综合交互作用调控.血管内皮生长因子(VEGF)和Notch信号传递途径(Notch signaling palhway)参与了此过程.本研究旨在探讨肺腺痛组织中Notch配体DLL4、VEGF的表达及其与肺腺癌血管生成的关系及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测80例肺腺癌(包括细支气管肺泡癌和普通肺腺癌)石蜡切片组织中DLL4、VEGF和CD34的表达.结果 DLIM、VEGF的表达与肺腺痛患者的肿瘤直径、临床分期、组织学分级.淋巴结转移密切相关,DLL4阳性表达病例中VEGF表达率明显比DLLA阴性表达病例高,DLL4、VEGF共表达时与微血管密度的相关性比DLL4单独表达更明显.DLL4的表达在普通肺腺癌中明显高于细支气管肺泡癌.结论 肺腺癌的预后与血管生成明显相关,DLL4的高表达与肺腺癌转移预后密切相关.     

miR-145通过下调OCT4基因抑制肺腺癌干细胞增殖

背景与目的 miR-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌"保护性"miRNA。本研究旨在探讨miR-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制。方法 miRNA芯片对肺腺癌患者瘤旁和正常组织进行表达谱分析;生物信息学软件预测miR-145潜在的靶基因;脂质体2000介导转染miR-145模拟物和阻遏物进入A549细胞株;实时定量PCR检测miR-145表达水平;Western blot检测OCT4蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-145是否作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位;细胞增殖实验检测miR-145对于A549细胞生长的作用;流式细胞术检测干细胞表型CD133+的表达。结果在肺腺癌组织中miR-145表达明显低于瘤旁正常组织;miRanda软件预测OCT4是miR-145潜在靶基因;与对照组相比,miR-145模拟物组和阻遏物组miR-145表达分别明显上调和下调;miR-145对A549细胞的生长有双向调节作用,过表达miR-145抑制细胞生长;过表达miR-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞表型CD133百分比,而抑制miR-145表达则明显增加OCT4蛋白水平及CD133百分比。双荧光素酶报告基因检测证明miR-145可作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位。结论 miR-145可通过下调OCT4基因表达抑制A549肺腺癌细胞株中干细胞的增殖,是一种潜在的肺癌"保护性"miRNA。     

milk-145通过下调OCT4基因仰制肺腺癌干细胞增殖

背景与目的 miR-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌保护性miRNA。本研究旨在探讨miR-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制。方法 miRNA芯片对肺腺癌患者瘤旁和正常组织进行表达谱分析;生物信息学软件预测miR-145潜在的靶基因;脂质体2000介导转染miR-145模拟物和阻遏物进入A549细胞株;实时定量PCR检测miR-145表达水平;Western blot检测OCT4蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-145是否作用于OCT4mRNA的3'UTR区预测靶位;细胞增殖实验检测miR-145对于A549细胞生长的作用;流式细胞术检测干细胞表型CD133+的表达。结果在肺腺癌组织中miR-145表达明显低于瘤旁正常组织;miRanda软件预测OCT4是miR-145潜在靶基因;与对照组相比,miR-145模拟物组和阻遏物组miR-145表达分别明显上调和下调;miR-145对A549细胞的生长有双向调节作用,过表达miR-145抑制细胞生长;过表达miR-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞表型CD133百分比,而抑制miR-145表达则明显增加OCT4蛋白水平...     

肺腺癌组织中IGF-IR表达与患者临床病理因素及预后的相关性

背景与目的 肺腺癌发病率不断升高,而胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor Ⅰ receptor,IGF-IR)是多种生长因子的调控枢纽,在肿瘤细胞的分化、增殖过程中起重要调节作用.本研究旨在为检测肺腺癌组织中IGF-IR表达,并分析其与肺腺癌患者临床病理因素及预后的相关性.方法 采用免疫组化方法检测肺腺癌组织IGF-IR表达.卡方检验分析IGF-IR表达与临床病理因素的关系,Kaplan-Meier生存曲线计算生存率,采用Cox分析评估各指标与患者生存期之间的关系.结果 126例肺腺癌组织中,89例可观察到IGF-IR阳性细胞.IGF-IR表达与肺腺癌患者肿块大小及T分期相关,而与年龄、性别、吸烟史、病理分期、分化及CEA等因素及患者的疗效及生存期无明显相关.结论 肺腺癌患者表达IGF-IR,与患者的肿块大小和T分期有关,而与预后无关.     

RPS4X在肺腺癌患者中的表达情况及临床意义

目的 探讨RPS4X在肺腺癌患者中的表达及其潜在的临床意义。方法 从cBioPortal、TCGA数据库分析差异表达基因;收集肺腺癌组织,采用qRT-PCR检测RPS4X的表达水平;结合临床资料论证RPS4X的表达情况、临床意义,并采用Kaplan-Meier曲线分析患者的总生存期,采用Cox模型分析单因素和多因素指标。结果 RPS4X在肺腺癌中高表达,且在女性肺腺癌患者中明显高于男性患者。进一步分析发现,与肿瘤大小≤3 cm组比,RPS4X在>3 cm组中呈高表达;与低分化组比,RPS4X在中分化、高分化组中呈低表达;与无淋巴结转移组比,RPS4X在有淋巴结转移组中高表达;高表达RPS4X的肺腺癌患者较低表达RPS4X患者预后差,可作为患者预后的独立预测因素。结论 RPS4X在肺腺癌患者中表达显著升高,且与性别、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移有关,可作为诊治肺腺癌潜在的新靶标。     

TTF-1、EGFR肿瘤浸润性树突状细胞在肺腺癌中的表达情况及其临床意义

目的 探讨甲状腺转录因子-1(TTF-1)、表皮生长因子受体(EGFR)、肿瘤浸润性树突状细胞(TIDC)在肺腺癌中的表达情况及其临床意义.方法 回顾性收集肺腺癌患者100例,比较肿瘤组织和癌旁组织中EG-FR、TTF-1、TIDC表达水平,同时分析肿瘤组织中EGFR、TTF-1、TIDC与肺腺癌患者肿瘤分化程度和TNM分期的关系.结果 肿瘤组织中TIDC数密度、MHC-Ⅱ阳性DC、CD54阳性DC均明显低于癌旁组织,TTF-1阳性率、EGFR突变率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01);肿瘤细胞为中低分化及TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者TIDC数密度、MHC-Ⅱ阳性DC、CD54阳性DC均低于高分化患者及Ⅰ~Ⅱ期患者,TTF-1阳性率、EGFR突变率均高于高分化患者及Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 TIDC在肿瘤组织中表达水平较低,且多为不成熟的调节性DC细胞,TTF-1在肺腺癌中表达水平较高,EGFR突变率增高.EGFR、TTF-1、TIDC均与临床分期和肿瘤细胞分化程度有关.     

早期非小细胞肺癌伽玛刀治疗预后影响因素分析

目的:分析早期非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)伽玛刀治疗的疗效及预后影响因素。方法:收集不能或不愿手术的早期NSCLC患者150例。其中鳞状细胞癌104例,腺癌32例,其他病理类型肺癌14例。利用γ射线立体定向放射治疗系统放疗150例,每次剂量4~5Gy,50％剂量线覆盖PTV为参考剂量,1次/d,共10次,总剂量40~50Gy。Kaplan-Meier法和Log-rank法比较生存率,Cox回归分析法进行多因素分析。结果:全组中位生存时间36个月,总1、3、5年生存率分别为87.7％、43.9％、22.7％。单因素分析显示:不同Karnofsky评分(χ2=18.82,P=0.000)、临床分期(χ2=8.78,P=0.004)、肿瘤直径(χ2=8.09,P=0.009)、近期疗效(χ2=14.62,P=0.000)对生存影响差异有统计学意义。多因素回归分析显示放射治疗前Karnofsky评分(χ2=11.35,P=0.001)和肿瘤直径(χ2=4.84,P=0.027)是影响早期NSCLC患者预后的独立因素。结论:放疗前Karnofsky评分、肿瘤直径对早期NSCLC患者γ-刀放射治疗的预后可能产生明显影响。     

非小细胞肺癌中肿瘤微环境细胞的表达特点及其与临床生存概率的相关性

目的:探究常见的肿瘤微环境细胞在非小细胞肺癌中的表达特点及其与临床生存概率的相关性。方法:我们首先从TCGA数据库中获取肺腺癌、肺鳞癌的基因表达数据和相应的临床信息；接着通过非参数检验分析了几种常见肿瘤微环境细胞在癌组织和癌旁肺组织之间的表达差异，以及细胞浸润程度与非小细胞肺癌生存概率之间的关系,并进行了多因素生存分析。结果:在肺腺癌中，CD4+、CD8+T细胞、内皮细胞、巨噬细胞低表达，B细胞、肿瘤相关成纤维细胞（cancer associated fibroblasts，CAFs）高表达，生存概率与CD4+T细胞呈正相关；在肺鳞癌中，内皮细胞、巨噬细胞低表达，CAFs高表达，生存概率与CD8+T细胞呈正相关。结论:在肺腺癌、肺鳞癌肿瘤微环境中，浸润细胞的表达量各不相同，且与临床生存概率相关。     

肺癌患者化疗前后免疫细胞格局的改变及其临床意义

目的〖HT5"SS〗：研究肺癌患者化疗前后免疫细胞数量、亚群比例、细胞表型及功能的改变,并探讨其临床意义。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗 对23例次肺癌患者化疗前后的白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数,以流式细胞术对CD3+、CD4+及CD8+T细胞亚群比例以及记忆样表型T细胞进行检测和分析;体外以PHA刺激外周血淋巴细胞,培养48 h后检测对K562靶细胞的杀伤效应。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗化疗后外周淋巴细胞数量迅速减少,1周左右达最低水平,此后逐渐恢复至化疗前水平;淋巴细胞恢复过程中, CD3+、CD8+T细胞亚群比例升高,记忆样表型T细胞（CD44high,CD62Llow）比例增加;增生期淋巴细胞在体外以PHA刺激后对K562细胞的杀伤能力没有下降,个别患者的杀伤能力还有所增强。〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗肺癌患者化疗后不仅没有降低免疫功能,反而可增强其免疫效应,该结果为临床肿瘤患者化疗后开展免疫生物治疗提供了实验依据。     

负载肺癌干细胞膜微粒的 DC －CIK 对耐药肺癌细胞的靶向杀伤作用及对肺癌干细胞凋亡的影响

目的：探讨负载肺癌干细胞膜微粒的 DC －CIK 细胞对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞的杀伤作用及对肺癌干细胞凋亡的影响机制。方法：无血清悬浮细胞培养法富集 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞 A549、H292干细胞样细胞,RT －PCR 检测干细胞标志物,裸鼠成瘤实验鉴定致瘤性。超滤和差速离心法获取肺癌干细胞膜微粒。流式细胞术分别测定共孵育组和常规培养组 DC 成熟标志 CD86和 CD83,测定两组 DC －CIK 细胞表型CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋、CD3＋CD4＋;形态观察及 MTT 法分别测定不同效靶比两组 DC －CIK 对A549、H292的杀伤效应;ELISA 法分别检测两组 DC －CIK 上清中 IL －2、IFN －γ、TNF －α分泌水平;流式细胞术分别测定两组 DC －CIK 对肺癌干细胞凋亡的影响。结果：富集培养获得的 EGFR －TKI 耐药肺癌干细胞样细胞高表达干细胞标志物 Sox2和 Oct4,并具较强裸鼠致瘤性。负载膜微粒的 DC 成熟标志 CD86和 CD83较常规 DC 表达显著升高;负载膜微粒的 DC －CIK 较常规 DC －CIK 细胞表型 CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋、CD3＋CD4＋升高,对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞杀伤效应高于常规 DC －CIK,并具有显著提高的靶向趋向性;负载膜微粒的 DC －CIK 分泌因子对 EGFR －TKI 耐药肺癌干细胞样细胞凋亡的影响与常规 DC －CIK 不同。结论：与常规培养 DC －CIK 相比,负载膜微粒的 DC －CIK 活性提高,对 EGFR －TKI 耐药肺癌细胞的体外特异靶向杀伤效应显著提高。细胞分泌因子可显著上调耐药肺癌干细胞的细胞凋亡率。     

含梭形／巨细胞肺癌28例临床病理特征及预后分析

目的：探讨含梭形／巨细胞肺癌（lung carcinoma with spindle ／giant cells,LCSG）的临床病理特征和预后。方法：回顾性总结分析1985年9月至2009年7月就诊的28例 LCSG 的临床和组织病理学资料。利用生存曲线进行生存分析,Cox 风险比例模型分析影响预后的因素。结果：LCSG 患者男女比例为11∶3,年龄33～73岁,中位年龄60岁;pTNM分期：Ⅰ期8例,Ⅱ期7例,Ⅲ期11例,Ⅳ期2例;病理类型：含梭形细胞癌11例,其中单纯梭形细胞癌2例,梭形细胞癌伴鳞癌5例、伴腺癌3例和伴腺鳞癌及大细胞癌1例;含巨细胞癌17例,其中单纯巨细胞癌13例,巨细胞癌伴鳞癌1例、伴腺癌3例。单纯肉瘤样细胞型患者的中位生存期较混合有上皮样细胞型者长（22．8个月 vs 8．0个月,P ＝0．022）。单因素分析显示,年龄（P ＝0．002）、肿瘤大小（P＝0．005）、组织学类型（P ＝0．001）、pTNM分期（P ＝0．015）、T 分期（P ＝0．008）、淋巴结转移（P ＝0．013）和 M分期（P ＝0．000）是影响 LCSG 患者预后的因素。结论：混合有上皮样细胞型的 LCSG 预后较单纯肉瘤样细胞型差;年龄、肿瘤大小和组织学类型是影响 LCSG 患者预后的因素。     

Coexpression of actin-related protein 2 and Wiskott-Aldrich syndrome family verproline-homologous protein 2 in adenocarcinoma of the lung.

PURPOSE: Highly invasive and metastatic cancer cells, such as adenocarcinoma of the lung cells, form irregular protrusions by assembling a branched network of actin filaments. In mammalian cells, the actin-related protein 2 and 3 (Arp2/3) complex initiates actin assembly to form lamellipodial protrusions by binding to Wiskott-Aldrich syndrome (WASP)/WASP family verproline-homologous protein 2 (WAVE2). In this study, colocalization of Arp2 and WAVE2 in adenocarcinoma of the lung was investigated to elucidate its prognostic value. EXPERIMENTAL DESIGN: Immunohistochemical staining of Arp2 and WAVE2 was done on mirror sections of 115 adenocarcinomas of the lung from pathologic stage IA to IIIA classes. Kaplan-Meier disease-free survival and overall survival curves were analyzed to determine the prognostic significance of the coexpression of Arp2 and WAVE2. RESULTS: Immunoreactivity for both Arp2 and WAVE2 was detected in the same cancer cells in 78 (67.8%) of the 115 lung cancer specimens. The proportion of cancer cells expressing both Arp2 and WAVE2 was significantly higher in cases with lymph-node metastasis (P = 0.0046), and significantly lower in bronchioloalveolar carcinomas (P < 0.0001). The patients whose cancer cells coexpressed them had a shorter disease-free survival time (P < 0.0001) and overall survival time (P < 0.0001). Multivariate Cox regression analysis revealed that coexpression of Arp2 and WAVE2 is an independent risk factor for tumor recurrence. CONCLUSIONS: Coexpression of Arp2 and WAVE2 is correlated with poorer patient outcome, and may be involved in the mechanism of cancer metastasis.     

Carbonic anhydrase IX expression is associated with tumor progression and a poor prognosis of lung adenocarcinoma

Carbonic anhydrase (CA) IX catalyzes the hydration of carbon dioxide into carbonic acid and participates in a variety of physiological and biological processes. The aim of this study was to evaluate the prognostic significance of CA IX expression in patients with lung adenocarcinoma. Standard immunohistochemical techniques were used to study CA IX expression in 134 patients who underwent curative resection for adenocarcinoma of the lung at our hospital between January 1995 and December 1996. We evaluated the correlations between CA IX expression levels on cancer cells and clinicopathological factors. CA IX expression was not observed in normal lung tissue or specimens from non-invasive adenocarcinomas. CA IX immunostaining was detected in 33 (24.6%) invasive adenocarcinoma cases. Poor differentiated histological phenotype (p=0.0015), pathological stage (p=0.0400), vascular invasion (p=0.0009) and lymphatic permeation (p=0.0050) were significantly related to CA IX expression. On univariate analysis, CA IX positive cases showed significantly shorter overall survival (p=0.0083) and disease-free survival (p=0.0122). In particular, the overall and disease-free survivals in stages I+II were significantly shorter in the CA IX positive than in the CA IX negative cases (p=0.0269 and 0.0011, respectively). Our results suggest that CA IX expression is strongly associated with tumor progression and indicates a poor prognosis for patients with stages I+II lung adenocarcinoma.     

RANTES expression is a predictor of survival in stage I lung adenocarcinoma.

PURPOSE: The presence of an active lymphocytic response (ALR) in non-small cell lung cancer (NSCLC) tumors has previously been associated with a more favorable prognosis. The purpose of this study was to identify differences in global gene expression profiles between stage I NSCLC tumors with ALR (ALR+) and those without ALR (ALR-). EXPERIMENTAL DESIGN: Sixty-three stage I lung adenocarcinomas were analyzed for gene expression using Affymetrix oligonucleotide microarrays. Tumors were stratified into ALR+ and ALR- groups and compared for statistically significant differences in gene expression. Identified candidate genes were validated using both ELISA and immunohistochemistry. Follow-up data for these patients were collected and used to assess patient prognosis. RESULTS: Of the 63 tumors studied, 27 were ALR+ and 36 were ALR-. A total of 303 genes showed significant differences in gene expression between the two populations (t test, P < 0.02). Three of the genes overexpressed by ALR+ tumors were the chemokines: small inducible cytokine A4 (MIP-1beta), RANTES, and interferon inducible protein 10 (IP-10). Immunohistochemistry analysis showed that the tumor cells expressed these cytokines. ELISA showed that MIP-1beta and RANTES were overexpressed at the protein level by ALR+ tumors. Univariate Cox proportional hazards analysis showed that RANTES was a predictor of survival in stage I lung adenocarcinomas (P = 0.002). CONCLUSION: When tested in the Cox univariate proportional hazards model, RANTES expression by lung adenocarcinoma cells is a predictor of survival in stage I NSCLC patients and may be useful as a prognostic factor in lung cancer.