宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性研究

目的:研究宽体金线蛭产茧后生长特性及主要消化酶活性,为产茧后亲蛭处理提供理论依据。方法:选择性成熟宽体金线蛭利用网箱进行人工繁殖,繁殖结束后在室内条件下开展为期20 d的养殖实验,实验分饥饿组和对照组,养殖期间定期测量体重和统计成活率,养殖结束后测定出干率和主要消化酶活性。结果:饥饿组在实验期间不断死亡,最后平均成活率为51.67%;对照组前期亲蛭少量死亡,实验中后期持续死亡,养殖平均成活率为65.00%,与饥饿组之间差异显著。饥饿组实验初期体重迅速增长,之后逐渐下降,最后基本恢复到实验前水平,实验期间体重平均增长率为-0.53%;对照组在实验前期体重增加后出现小幅下降,之后体重持续增加,最后恢复到产茧前水平,实验期间体重平均增长率为40.23%。产茧结束后亲蛭出干率为22.14%,饥饿实验结束后饥饿组和对照组出干率分别为13.30%和12.75%,二者之间差异不显著,但与亲蛭产茧结束时出干率之间差异极显著。宽体金线蛭胰蛋白酶活性高于淀粉酶和脂肪酶活性,饥饿处理引起宽体金线蛭胰蛋白酶活性增强、淀粉酶活性下降,二者在饥饿组和对照组中差异显著。结论:宽体金线蛭产茧后短期养殖体重可以恢复到产茧前水平。     

宽体金线蛭越冬保种技术研究和越冬蛭生产性能测定

目的:研究宽体金线蛭在土质和水质环境下越冬情况,为宽体金线蛭成蛭越冬提供方案,促进宽体金线蛭人工养殖持续发展。方法:将收集的野生宽体金线蛭成蛭分成带土越冬组和带水越冬组,每组设三个平行试验,统计越冬成活率及越冬产茧率,比较越冬蛭子代生长差异。结果:带土越冬组和带水越冬组越冬繁殖成活率分别为69.45%和78.73%,相对产茧率分别为11.37%和12.94%,二组之间无显著差异(P0.05);带土越冬组和带水越冬组产茧后亲蛭平均体重分别为6.46 g/尾和8.79 g/尾,0.5 kg蛭茧分别有593枚和518枚,二者之间差异显著(P0.05);带土越冬组宽体金线蛭子代生长速度快,与带水越冬组子代之间差异极显著(P0.01)。结论:宽体金线蛭在土质和水质环境下均能安全越冬,越冬后亲蛭均能正常繁殖,带土越冬宽体金线蛭子代生长性能更优。     

宽体金线蛭选育群体生产性状的选择效应

目的:为选育经济性状优良的宽体金线蛭新品种。方法:以江苏里下河地区野生宽体金线蛭为材料,以生长速度为指标,选择个体体重18.00 g以上构建宽体金线蛭选育群体,比较选育群体与普通群体繁殖及F1代养殖生产性状。结果:选育群体每10㎏亲蛭产茧1.81㎏,较普通群体提高了63.04%,卵茧规格较普通群体明显增大(P0.01),亲蛭体重下降率及卵茧平均出苗率选育群体与普通群体无明显变化(P0.05);选育群体F1养殖产量、均重及成活率较普通群体分别提高了55.69%、17.18%和33.17%,差异极显著,特定生长率及增重率明显高于普通群体(P0.01),而干物质比2个群体F1代差异不显著(P0.05)。结论:通过群体选育可以有效提高宽体金线蛭繁殖和养殖性能。     

不同基质和亲本密度对宽体金线蛭繁殖性能的影响北大核心

目的:探明不同基质和亲本密度对宽体金线蛭繁殖性能的影响,为促进宽体金线蛭规模化人工繁殖提供参考依据。方法:分别设置5种基质处理组:土壤组(A)、稻草组(B)、牛粪组(C)、土壤与稻草混合组(体积1∶1,D)、土壤与牛粪混合组(体积1∶1,E)和6个亲本密度处理组:30、60、90、120、150、180尾/m^(2),经过25 d的繁殖以及15 d的卵茧孵化后,观察其亲本存活率、产茧率、卵茧规格、卵茧的孵化率和孵化量等指标的变化。结果:不同基质对宽体金线蛭亲本存活率、产茧率、卵茧的孵化量有显著性影响(P<0.05),但对卵茧规格和卵茧的孵化率无显著性影响(P>0.05),其中基质D组亲本存活率(100.00%)和产茧率(3.70枚/尾)最高,基质B组卵茧的孵化量(32.2尾)最高。不同亲本密度对宽体金线蛭亲本存活率、产茧率有显著性影响,但对卵茧规格无显著性影响,其中,亲本密度30、60尾/m^(2)时,亲本存活率、产茧率最高(P<0.05)。结论:土壤与稻草(体积1∶1)混合基质是宽体金线蛭最适合的繁殖基质,稻草是其卵茧最适合的孵化基质。从经济效益角度考虑,宽体金线蛭亲本放养密度应以60尾/m^(2)较为适宜其人工繁殖。     

微山湖地区宽体金线蛭的群体考察与产茧后药材质量评价

目的:建立科学的宽体金线蛭种蛭筛选原则,并对产茧后药材进行质量评价。方法:从微山湖地区采集野生宽体金线蛭1193条,对体质量和生殖环带发育等群体特征进行考察。将种蛭分为10、15、20 g 3个试验组,建立卵茧成熟度观察方法以判断适宜的挖茧时机,通过产茧数、茧体积、出苗数等指标考察体质量对宽体金线蛭繁殖性能的影响。依照2015年版《中华人民共和国药典》对产茧后水蛭药材的性状和抗凝血酶活性进行质量评价。结果:微山湖地区宽体金线蛭野生种群的体质量普遍较小,15 g及以上的种蛭仅占样本群体的19.53%;宽体金线蛭的繁殖性能随种蛭体质量的增加而显著提高,20 g试验组的产茧数(5.9个)和出苗数(37.3条)分别是10 g试验组的1.59倍和1.45倍。产茧后种蛭的死亡率和体质量损失率可高达37%和59%,药材厚度仅为产茧前的49%～72%,腥味散失严重、脆度下降,但产茧前后抗凝血酶活性变化不大,均为3～5 U·g~(-1)。结论:微山湖地区野生宽体金线蛭的种群有退化趋势,建议使用15 g及以上的种蛭进行繁殖生产。产茧后药材的商品规格和等级较低,不适宜作为饮片直接用于临床。     

水蛭(日本医蛭)繁殖性能的研究

目的:本研究探讨了人工养殖条件下水蛭(日本医蛭)的繁殖性能,以期为规模化繁殖水蛭提供基础资料。方法:以实验室养殖的水蛭亲蛭为实验材料,研究了水蛭产茧数、卵茧质量、幼蛭孵化数,以及亲蛭质量、亲蛭密度对水蛭繁殖性能的影响。结果:水蛭平均产卵茧数为0.9000±0.5525枚,最少为0枚,最大量为2枚,单枚卵茧孵化最少有3尾,最大量为21尾。卵茧质量绝大多数介于0.05~0.25 g之间,初孵幼蛭的体长分布为0.82~1.55 cm,平均体长为1.21±0.22 cm。亲蛭质量、密度以及卵茧质量与水蛭的繁殖性能有显著相关性。结论:水蛭繁殖性能较低,人工养殖情况下,应该仔细挑选适当质量和年龄的亲蛭,同时要选择合适的繁殖密度来提高水蛭的繁殖性能。     

饥饿胁迫下宽体金线蛭苗生长特性研究

目的:研究饥饿胁迫后宽体金线蛭苗生长特性。方法:将孵出的宽体金线蛭幼苗进行饥饿处理,测定了其在饥饿胁迫下体重变化规律;并在不同饥饿时间点给予足量适口饵料,观察其摄食后的生长特性。结果:持续饥饿胁迫下,宽体金线蛭苗体重逐渐下降,和饥饿胁迫时间成负相关关系,相对负增重率呈现出阶段性增大的规律。饥饿12天内投饵后,幼苗会以高于正常投喂组的生长速度补偿生长,但饥饿14天以后补偿生长基本消失,仍可以正常速度生长,但生长过程中晚投喂组体重无法赶上或超过正常摄食组。结论:宽体金线蛭耐饥饿能力较强,解除饿胁迫后可以部分补偿生长形式继续生长。     

宽体金线蛭的特异性PCR分子鉴定

[目的] 实验旨在通过寻找宽体金线蛭单核苷酸多态性（SNP）位点,设计宽体金线蛭的特异性鉴别引物,建立宽体金线蛭特异性聚合酶链式反应（PCR）检测方法,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速鉴别。[方法] 通过比对宽体金线蛭与其常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I（COI）序列,寻找宽体金线蛭COI基因序列内SNP位点,设计特异性鉴别引物。[结果] 进行PCR后仅宽体金线蛭能够扩增得到149 bp的条带,混伪品不能扩增出明显目的条带。向扩增产物中加入SYBR Green I核酸染料染色,宽体金线蛭样品在紫外灯下显黄绿色荧光,混伪品不显荧光。[结论] 该方法能够准确快速鉴别宽体金线蛭与其常见混伪品,为中药材市场上宽体金线蛭的快速鉴别提供技术支持。     

宽体金线蛭5种提取方法的比较

宽体金线蛭５种提取方法的比较中国中医研究院基础理论研究所（北京１００７００）丁家欣，欧兴长，张秋海，张玲，刘振丽ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｍｏｎｇＦｉｖｅＤｉｆｆｅｒｅｎｔＥｘｔｒａｃｔｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓｏｆＷｈｉｔｍａｎｉａＰｉｇｒａＷｈｉｔｍａｎ￥...     

宽体金线蛭耗氧率与窒息点的初步研究

目的:研究宽体金线蛭的耗氧率和窒息点。方法:应用呼吸室法进行研究。结果:平均体重为10 g的宽体金线蛭,15~35℃变温下耗氧率为0.049~0.094 mg.g^-1.h^-1,耗氧量为0.44~0.67 mg.p^-1.h^-1,窒息点为0.9~1.51 mg.L^-1;20℃条件下耗氧率为0.044~0.058 mg.g^-1.h^-1,耗氧量为0.19~0.77 mg.p^-1.h^-1,窒息点为1.4~1.57 mg.L^-1。结论:宽体金线蛭的耗氧率随水温的升高而上升;窒息点与温度和体重呈负相关;体重与耗氧率呈负相关,与耗氧量呈正相关;耗氧率白天和夜晚的差异不大。     

四种不同品种水蛭生物活性的研究与比较

目的:应用3种酶活性抑制方法测定四种不同品种水蛭的生物活性,为评价水蛭药材质量提供科学依据。方法:分别采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶3种检测方法,测定了宽体金线蛭、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭样品的生物活性。结果:4种水蛭中,吸血水蛭具有更好的抗凝血酶活性;4种水蛭均具有较好的抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶生物活性。结论:3种酶活性抑制方法可作为水蛭类药材质量控制的依据。     

中国水蛭人工养殖的现行模式调研

为明确我国水蛭现有的人工养殖模式,历时近3个月的时间,对搜集的业内信息和网络宣传的重庆、湖北等9个省市的34个水蛭人工养殖基地实地考察。结果表明,水蛭的人工养殖基地主要分布在我国东南部江南水乡一带的江苏和安徽;以散户小面积养殖为主;养殖的品种以宽体金线蛭为主;养殖方式以“池塘+网箱”为主;“生产+收购+技术培训”是水蛭人工养殖基地的主要经营方式;预测未来一段时间内在全国各地会涌现更多以个体户小面积养殖为主的宽体金线蛭养殖基地。市场上流通的宽体金线蛭成品以水货主,并主要销往国内相关药企。江苏、安徽和湖北部分水蛭养殖基地的设施设备体系最完善,生产和研究实力相对最强。     

温度和体重对蚂蟥人工繁殖影响的研究

目的：确定蚂蟥的最佳产卵温度、体重以及孵化的最适温度。方法：在不同温度、体重条件下观察蚂蟥产卵和孵化。结果与结论：蚂蟥产卵和孵化的最适温度是25 ℃,产卵的最佳体重为20 g左右；温度能影响蚂蟥产卵前后的体重,而体重对其的影响不明显；当卵重在0.1～2.0 g时与孵出量成正比,当卵重大于2.0 g时孵出量反而有所下降。     

基于蛋白免疫印迹的水蛭抗凝活性成分研究

目的：建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法：本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western blot检测凝血酶-活性多肽复合体。结果：研究发现两种水蛭Native-PAGE-WB均检测到凝血酶-活性多肽复合体,且SDS-PAGE-WB检测到复合体变性后产生凝血酶条带。结论：建立的Native-PAGE-WB法可有效检出水蛭活性多肽和凝血酶相互作用产物,且发现同水蛭素类似,宽体金线蛭活性抗凝多肽与凝血酶在体外也能形成稳定的蛋白复合体。     

生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究

 目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法。方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算。结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的。结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义。生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充。     

温度对蚂蟥生长及摄食规律影响的初步研究

目的：观察蚂蟥在不同温度下的生长情况及其摄食规律。方法：比较在不同温度条件下不同体重蚂蟥生长情况,以及蚂蟥在24 h之内的摄食规律。结果与结论：蚂蟥生长的适宜温度是15～25 ℃,其饱食量随着体重增大和温度的升高而增加。摄食率随个体增大而有所降低。在24 h之内蚂蟥有2个摄食高峰。     

水蛭抗凝血活性成分的研究

目的：研究水蛭的抗凝血成分。方法：以血浆复钙时间为指标，应用Sephadex DEAE A-50阴离子交换树脂色谱、Sephadex G-25和Sephadex LH-20凝胶过滤色谱及反相高压液相色谱技术分离纯化。结果：得到3个抗凝血活性多肽，其中化合物1，2在自然条件下互相转化，它们的相对分子质量分别为7 100和5 531；采用HPLC及SDS-PAGE鉴定了化合物3的纯度，采用MALDI-TOF-MS法测定出其相对分子质量为8 608，并测定了其氨基酸组成。结论：推测化合物3为首次分离得到的抗凝血多肽，命名为蚂蟥多肽(whitmanin)。     

广东菲牛蛭生长和生殖的研究

目的研究室内菲牛蛭生长动态和生殖,为人工饲养菲牛蛭提供基础资料.方法在同一个卵袋产下的幼蛭,放入盛有天然水的80 cm×60 cm×50 cm的玻璃缸内饲养,每10 d称牛蛭体重1次,每天记录水温,每月换水一次,每次在野外采回的水要检测10种化学成分.在活兔身上吸血,每次称出吸血量.观察生长发育变化、记录交配产卵过程.结果从孵化出的幼蛭经14个月时间,吸血5,6次,生长发育达到性成熟,第1,2,3次吸血为幼体阶段,第4次吸血后进人亚成体阶段,第5次吸血后,部分个体达到性成熟,有的个体第6次吸血后进人性成熟.生长动态曲线是一跳跃曲线.记录了交配、产卵过程.结论阐明牛蛭生长动态和生殖过程.在室内饲养牛蛭成功.     

中华鲟软骨抗肿瘤活性的实验研究

目的：探讨中华鲟软骨制剂的抗肿瘤作用。方法：应用丙酮沉淀和超滤法枯提和分离中华鲟软骨制剂,通过鸡胚绒毛尿囊膜实验分析中华鲟软骨体外抑制血管生成的作用,采用荷结肠癌裸鼠模型在体内观察中华鲟软骨对肿瘤生长的影响。结果：中华鲟软骨溶液平均主血管数a组（21．52±3．64）和C组（7．16±1．31）与生理盐水组（33．84±3．14）差异显著（t=4．92和2．47,P均〈0．05）;b组平均主血管数（28．414-2．13）与生理盐水组差异不显著（t：2．03,P〉0．05）;中华鲟软骨溶液a腹腔注射组平均瘤重（O．41±0．06）和灌喂组平均瘤重（0,53±0．03）与生理盐水腹腔注射组平均瘤重（0．52±0．08）和灌喂组平均瘤重（0．56±0．04）比较,腹腔注射组差异显著（t=2．61,P〈0．05）;溶液c腹腔注射组和灌喂组的平均瘤重分别为（0．31±0．09）和（0．53±0．05）,与生理盐水腹腔注射组和灌喂组的平均瘤重比较,腹腔注射组有显著性差异（t=3．55,P〈0．05）;溶液b腹腔注射组和灌喂组的平均瘤重分别为（O．464-0．07）和（O．59±0．06）与生理盐水组比较无显著性差异（P均〉0．05）。结论：中华鲟软骨制剂具有抗肿瘤的作用,活性成分分子量在5,000—100,000之间。     

宽体金线蛭不同炮制品抗炎作用及使用方法的药理研究

比较了宽体金线蛭3种炮制品,对小鼠急性炎症模型的抗炎作用、免疫吞噬能力。以体内、外抗凝及体内抗栓作用为指标,比较了供试品不同使用方法的活血作用,为全面认识宽体金线蛭的药理作用及合理使用方法,提供了初步实验依据。