输出小管-睾丸网注射提高小鼠精原干细胞移植效率

目的:探讨小鼠精原干细胞移植的关键技术,寻求有效可行的精原干细胞移植方法。方法:选用4-5周龄雄性BALB/c小鼠45只腹腔内注射40 mg/kg的白消安建立受体模型,消化分离新生绿色荧光小鼠睾丸精原细胞作供体细胞。在三维显微注射系统下分别采用睾丸网注射法(n=15),输出小管注射法(n=30),经输出小管注射失败后的补救方式为经输出小管-睾丸网注射,将供体细胞注射到受体小鼠左侧睾丸精曲小管内,右侧睾丸作为对照。观察注射后精曲小管的充盈度和外漏的情况;移植后2个月观察受体小鼠的生精功能恢复情况。结果:经睾丸网注射成功率仅为35.7%(5/14),其中9只因睾丸网穿破、细胞悬液外漏到间质而失败。经输出小管注射成功率为72.4%(21/29),失败的主要原因为穿刺过程中穿破输出小管,进一步采用经输出小管-睾丸网注射补救,总成功率提高为93.1%(27/29),注射成功后可见70%-80%的精曲小管被蓝染的细胞悬液充盈,均无外漏现象。移植后2个月,体视荧光显微镜下可见移植侧睾丸包含多段绿色阳性克隆;组织学染色示移植侧睾丸大部分精曲小管恢复正常生精。结论:经输出小管和经输出小管-睾丸网显微注射技术是小鼠精原干细胞移植的有效方法。     

睾丸高表达蛋白质HSD-14对小鼠精子发生的影响

目的 研究睾丸高表达基因HSD-14及其编码蛋白质对小鼠精子发生的影响.方法 利用本实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD-14基因.纯化原核表达的HSD-14蛋白,并制备兔多克隆抗体.通过HE染色观察腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后小鼠睾丸组织的生精变化,并进行TUNEL凋亡检测.结果 电子克隆获得HSD-14基因,在原核表达系统中表达成功.小鼠腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后,均发现曲细精管中生精细胞大量脱落,生精细胞的层次紊乱,管腔内有时可见成团脱落的生精细胞,附睾中几乎观察不到成熟精子.TUNEL凋亡检测结果表明,抗体注射组小鼠曲细精管中生精细胞(以精母细胞为主)凋亡程度较正常小鼠睾丸和免疫前血清注射组明显,且多数细胞停留在精母细胞甚至精原细胞的阶段.结论 HSD-14通过诱导精母细胞凋亡抑制小鼠精子发生.     

雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能变化及p63的表达

目的 研究雄激素受体（AR）敲除小鼠睾丸生精功能及p63在曲细精管中表达的改变.方法 采用雄性Flox-AR小鼠与雌性ACTB-Cre小鼠交配,并敲除胚胎中AR,筛选AR敲除（AR敲除组）和AR未敲除（对照组）雄性小鼠各10只,对比睾丸曲细精管生精功能及p63的表达.结果 两组小鼠曲细精管内径、管周膜厚度、管壁生殖细胞层数、生殖细胞成熟度评分及总Makler评分之间差异均有统计学意义（P＜0.05）,p63的阳性表达主要位于精原细胞及精母细胞,精子细胞及成熟精子中表达呈阴性,且AR敲除组表达阳性率及HSCRE评分均显著低于对照组（P＜0.01）.结论 AR表达与小鼠睾丸曲细精管p63表达关系密切,AR敲除小鼠睾丸曲细精管生精功能受损、p63表达下调,p63调控生殖细胞的早期分化.     

白消安诱导小鼠无精子症模型

目的 采用白消安诱导建立小鼠无精子症模型。方法 采用腹腔内单次注射白消安(40mg／kg)，对白消安的毒性、模型的形态学变化，小鼠的生育能力以及免疫功能进行了观察。结果 白消安单次注射可造成半数的小鼠死亡，用药后4周，睾丸曲细精管呈唯支持细胞样表现，3个月有20％的曲细精管恢复生精，存活小鼠中半数小鼠的生育力正常，模型小鼠的免疫学功能正常。结论 该小鼠无精症模型用作生精干细胞移植的受体模型是可行的。     

表皮生长因子受体在小鼠睾丸内免疫组织化学定位

采用生物素—抗生物素蛋白DCS体系(biotin-avidin DCS system)间接免疫荧光新技术,以176小鼠抗人A431细胞的表皮生长因子受体McAb进行表皮生长因子受体在小鼠睾丸内免疫组织化学定位的研究。在体实验结果显示,小鼠睾丸曲细精管的精原细胞和支持细胞内可见斑点状荧光,其它各级生精细胞均未见荧光。离体实验结果显示,体外培养的小鼠支持细胞内有相当强的荧光。证明精原细胞和支持细胞是表皮生长因子的靶细胞。     

高龄小鼠来源精原干细胞长期培养体系的建立

目的 建立高龄小鼠精原干细胞(SSC)体外长期培养体系。方法 将5只8月龄昆明白小鼠用于本实验,组织形态学技术评估睾丸生精状态;优化睾丸体细胞去除流程、原代和传代中饲养层与生长因子组合条件,观察小鼠SSC克隆形成、增殖与传代;细胞生物学与分子生物学技术检测小鼠SSC克隆的干细胞特征。结果 高龄小鼠睾丸精曲小管存在生精损害,PLZF^POS精原细胞数量增加;优化实验条件后富集的精原细胞数量增加,体外成功培养传代高龄小鼠SSC克隆6个月;高龄小鼠SSC克隆具有AKP活性并表达THY-1、PLZF、OCT-4等精原干细胞标记物。结论 本研究通过优化消化、富集、原代和传代培养的多个环节,成功建立高龄小鼠SSC体外长期培养体系。     

胚胎至性成熟小鼠睾丸中的碱性磷酸酶及亮氨酸氨基肽酶的研究

对胚胎至性成熟小鼠睾丸中的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）及亮氨酸氨基肽酶（ＬＮＡｓｅ）的分布进行了研究。发现胚胎期ＡＬＰ位于原始生殖细胞，体细胞则呈阴性反应；生后２０ｄ至性成熟，ＡＬＰ位于曲细精管的基膜，曲细精管生精细胞及支持细胞则为阴性。ＬＮＡｓｅ于胚胎期位于原始生殖细胞及支持细胞；生后及性成熟期原始生殖细胞及支持细胞也都显示较强阳性。酶的这些表现提示其与生殖细胞的增殖与分化关系密切。     

小鼠生精细胞体外长期培养及超微结构分析

目的初步探讨新生小鼠睾丸组织中生精细胞在体外培养条件下的增殖分化条件,建立有效的生精细胞体外成熟模型。方法用酶法和Percoll不连续密度梯度法分离纯化新生小鼠睾丸生精细胞,获取富精原细胞层,采用自制小鼠睾丸组织培养液对分离纯化后的细胞进行体外培养。用电子显微镜观察培养的细胞超微结构。结果新生小鼠生精细胞在用成年小鼠睾丸组织提取液配制的培养基中存活达194d。电子显微镜观察可见,培养后的细胞中含有精子细胞顶体样结构。结论采用小鼠睾丸组织制备的培养液培养的小鼠生精细胞可体外长期培养并显示出一定的分化趋势。     

精原干细胞移植受体鼠模型的建立

目的通过对4周龄昆明白小鼠腹腔内单次注射白消安来制作精原干细胞移植受体鼠模型。方法将实验动物分为4组,A、B、C组注射白消安的剂量分别是30 mg/kg4、0 mg/kg5、0 mg/kg体重,D组为对照组。注射后每天记录小鼠的存活情况,注射白消安后的20 d3、0 d4、0 d称量睾丸重量、测定血常规、制作并观察睾丸组织学切片、统计曲细精管的中空率。结果A、B、C、D组的死亡率分别是25.00%3、1.58%、80.00%、0.00%,注射白消安后30 d各组小鼠曲细精管中空率分别是45.25%、75.25%、1.50%、0.00%,白细胞、红细胞、血小板数量等血常规指标均恢复正常。结论腹腔内单次注射30 mg/kg或40 mg/kg剂量的白消安,死亡率较低(25.00%、31.58%),30 d后曲细精管中空率较高(45.25%7、5.25%)、血常规指标恢复正常,适合做精原干细胞移植受体。     

氯化锰对小鼠睾丸组织形态学的影响

目的研究锰对小鼠睾丸组织形态学的影响,探讨其时间-效应关系和剂量-效应关系。方法将雄性小鼠随机分为3个染锰组和1个对照组,分别给予腹腔注射7.5、15.0、30.0mg/kg氯化锰和生理盐水,于染锰第3、7、14、28、56天处死小鼠5只/组。观察小鼠睾丸组织学的变化和染锰56d各计量组曲细精管横截面积及生精上皮细胞数量。结果与对照组比较睾丸组织的损伤随染锰剂量的增加和时间的延长而逐渐加重;染锰56d与对照组比较,曲细精管横截面积和生精上皮细胞数差异均有统计学意义(P<0.01)。结论各剂量的MnCl2对雄性小鼠睾丸组织形态结构均有损害作用,以染锰56d,30mg/kg对小鼠的损害最为严重,染锰56d,7.5mg/kg对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞明显减少,证实7.5mg/kg的锰对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞有明显的损害。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。