Maspin在大肠癌中的表达及其启动子5'CpG岛甲基化状态的研究

目的探讨Maspin基因启动子5′CpG岛异常甲基化及蛋白表达与大肠癌及其临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫组织化学方法分别检测91例大肠癌组织及91例癌旁组织中Maspin基因的5′CpG岛甲基化和蛋白表达。结果大肠癌和癌旁组织中,Maspin蛋白表达率分别为72.5%,92.3%,CpG岛甲基化率分别为20.9%,9.9%,两者差异均有显著性(P<0.01,P<0.05)。肿瘤组织中的Maspin蛋白表达与大肠癌分化程度、Duke’s分期及浸润深度相关,Maspin甲基化与大肠癌的Duke’s分期及浸润深度相关。大肠癌Maspin蛋白阳性与阴性表达的组织之间,CpG岛甲基化率的差异有显著性(P<0.01)。结论Maspin基因异常甲基化是其蛋白表达缺失的主要原因之一,并在大肠癌的发生发展中起重要作用。     

膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因5''''CpG岛甲基化检测

目的探讨P16、P15、P14基因5'CpG岛在膀胱移行细胞癌中甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测40例膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因甲基化程度,χ2检验分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级分期间关系。结果膀胱移行细胞癌P16、P15、P14 5'CpG岛甲基化扩增阳性化率分别为27.5%、17.5%、35%,而正常膀胱组织中均未检测到三种基因5'CpG岛甲基化。P16、P14基因甲基化与膀胱癌病理分级分期有显著性差异(P<0.05),P15基因则没有显著性差异(P>0.05)。结论P16、P15、P14基因在膀胱癌组织中的甲基化率较高,三种抑癌基因5'CpG岛异常高甲基化,在膀胱癌的发生、发展中具有重要作用。     

VEGF和metastin在大肠癌组织中的表达

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)和KISS-1基因编码产物metastin在大肠癌组织中的表达情况及其与大肠癌临床病理因素特征之间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测70例大肠癌组织和癌周正常组织中VEGF和metastin的表达水平.结果 VEGF在大肠癌组织中的阳性表达率为48.6%(34/70),在癌旁正常组织中的阳性表达率为0.00%(0/70),两者比较有显著性差异(P＜0.01);metastin在大肠癌组织中的阳性表达率为28.6%(20/70),在癌旁正常组织中的阳性表达率为70.0%(49/70),两者比较有显著性差异(P＜0.01).VEGF表达水平与大肠癌组织学分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.01),metastin表达水平与大肠癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 同时检测大肠癌组织中VEGF与metastin表达水平,对判断大肠癌恶性程度和预后具有重要价值.     

PRL-3在结直肠癌中的表达及意义

目的 检测PRL-3在大肠癌、癌旁组织及转移癌组织中的表达,初步探讨其与大肠癌发生发展、侵袭转移的关系.方法 用免疫组化及荧光定量PCR方法检测大肠癌、淋巴结转移癌及相应癌旁组织中PRL-3在蛋白及转录水平的表达情况.结果 PRL-3蛋白在淋巴结转移癌中的表达高于原发灶及相应正常癌旁组织中的表达(P＜0.05),在大肠癌组织中PRL-3的表达与癌组织的浸润程度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05),癌组织与相应的癌旁组织相比差异则无显著性(P＞0.05),其表迭与癌组织分化程度差异也无显著性(P＞0.05),在mRNA水平的检测也得到了与上述结果一致的结论.结论 PRL-3的表迭与大肠癌侵袭转移关系较密切,其表达水平在一定程度上提示大肠癌的转移潜能,PRL-3蛋白可作为大肠癌诊断、治疗及预后判断过程中的一种较有价值的病理学指标.     

P-糖蛋白表达与大肠癌淋巴结转移之间的关系

目的:探讨大肠癌组织多药耐药基因(mdr1)表达与大肠癌病理学特性之间的关系.方法:使用免疫组化方法检测60例大肠癌和12例癌旁正常组织mdr1产物P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.结果:大肠癌组织中的mdr1基因产物P-gp表达39例,阳性率65%,明显高于癌旁正常组织,差异显著(P＜0.05).按照AJCC的TNxM分期,x≥2的病例与x＜2的病例P-gp表达阳性率之间有显著性差异(P＜0.05),而P-gp表达与分化程度、浸润深度、Dukes分期、大体类型之间均无相关性(P＞0.05).结论:大肠癌组织的P-gp表达阳性率高于癌旁正常组织.mdr1基因产物P-gp的表达与大肠癌淋巴结转移呈正相关.     

新疆哈萨克族食管癌患者金属硫蛋白3CpG岛甲基化的研究

目的探讨分析新疆哈萨克族食管癌患者食管癌组织及癌旁组织中金属硫蛋白3(metallothionein-3,MT-3)基因CpG岛的甲基化状态及其与食管癌发生的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)的方法,检测33例哈萨克族食管癌患者食管癌组织和癌旁组织中金属硫蛋白3(MT-3)基因启动子区CpG岛的甲基化发生状况。结果 33例哈萨克族食管癌患者癌组织和癌旁组织标本中MT-3基因启动子区CpG岛甲基化的发生率分别为66.7%(22/33)和27.3%(9/33);癌组织与癌旁组织甲基化率差异有统计学意义(χ2=10.28,P=0.001)。结论 MT-3基因的甲基化可能与食管癌的发生与发展有关。     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

p16、p53蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义

目的　探讨抑癌基因p16、p53蛋白的表达与大肠癌临床病理指标间的关系,为大肠癌预后判断提供依据。方法　运用免疫组织化学技术(ABC法)检测55例大肠癌手术切除标本中p16、p53蛋白。结果　55例大肠癌中,p16蛋白表达阳性率为70.91%,与癌组织分化程度呈正相关(P＜0.05),与癌组织浸润肠壁深度和Dukes分期呈负相关(P＜0.05),无淋巴结转移者p16蛋白表达阳性率明显高于有转移者,两者差异有显著性(P＜0.01)。p53的表达阳性率为56.4%,与癌组织浸润肠壁深度和Dukes分期呈正相关。结论　p16和p53蛋白两者联合检测可为大肠癌患者提供更多的预后信息。     

甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析方法在筛查人非小细胞肺癌组织中高甲基化修饰序列的应用

目的探讨甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析(MCA/RDA)方法在筛查人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中高甲基化修饰序列的应用。方法以92对NSCLC和癌旁对照组织DNA为研究对象,应用MCA/RDA方法筛查肺癌组织DNA中高甲基化修饰的CpG岛序列。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和甲基化特异性PCR(methylation-sensitive PCR,MSP)技术,分析胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-4)基因启动子区CpG岛的甲基化修饰与基因表达的相关性。结果获得5个经Slot Blot验证在肺癌组织中高甲基化修饰的CpG岛序列(IGFBP-4、KLK10、ADAM23、GADD45G和DUOX1)。甲基化抑制剂5-aza-2’-deoxycytidine处理NSCLC细胞可明显上调IGFBP-4基因的表达。在41例(44.6%)癌组织中检测到IGFBP-4表达水平显著低于癌旁对照组织。47例(51.1%)癌组织检测到IGFBP-4高甲基化显著高于癌旁组织的检出率(16.3%,15/92;P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与基因表达呈负相关(r=-0.396,P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与TNM分期(P=0.013)和淋巴结转移(P=0.022)相关。结论应用MCA/RDA方法筛查到5个在NSCLC组织中高甲基化修饰的CpG岛序列,并证实IGFBP-4启动子区CpG岛的高甲基化可能通过抑制基因的表达参与了NSCLC的发生。     

子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛甲基化状况的研究

目的 :检测子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况 ,分析其与临床病理特征之间的关系 ,探讨FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法 :采用甲基化特异的PCR方法对亚硫酸氢盐修饰过的 35例子宫内膜癌组织、癌旁组织及患者自身外周血白细胞DNA和 2 0例非癌患者子宫内膜组织DNA的FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况进行分析。结果 :癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化率为 2 5 .71 % ,癌旁组织和外周血中也存在相似的甲基化率。非癌患者的子宫内膜组织中FHIT基因的CpG岛无甲基化。癌组织与非癌患者子宫内膜组织的甲基化率之间的差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。DNA甲基化与临床病理特征之间无相关性。FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。结论 :子宫内膜癌组织中存在FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化 ,CpG岛的甲基化与临床病理特征之间无相关性。DNA甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。癌旁组织和外周血可用于癌相关基因启动子区域CpG岛甲基化的检测     

血管内皮生长因子在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测80例大肠癌组织及12例癌旁正常组织中VFGF-D的表达,并分析其与大肠癌临床病理和预后的关系。结果80例大肠癌组织VFGF-D阳性表达率为45.4%明显高于癌旁正常组织中的表达(P<0.05)。大肠癌VFGF表达与大肠癌分化程度、淋巴结转移、Duke's分期及患者预后密切相关,差异均有显著性意义(P<0.05)。Duke's分期的C期和D期和有淋巴结转移的大肠癌组织VEGF阳性率明显高于Duke's分期A期和B期和无淋巴结转移的大肠癌组织。结论VEGF的高表达和大肠癌的Dukes分期、癌组织浸润、淋巴结转移和预后密切相关,并且可以作为指导大肠癌治疗方案以及判断预后的一个重要指标。     

妇科恶性肿瘤组织p16基因5''''CpG岛高甲基化及其临床意义

①目的探讨p16基因5'CpG岛高甲基化在妇科恶性肿瘤发生发展中的作用.②方法采用以PCR为基础的甲基化分析法,检测p16基因第1外显子5'CpG岛在34例子宫颈癌、40例子宫内膜癌和40例上皮性卵巢癌组织及其相应正常组织中的高甲基化情况.③结果正常组织中均未见p16基因第1外显子5'CpG岛的高甲基化,子宫颈癌、子宫内膜癌和上皮性卵巢癌组织中的高甲基化率分别为29.4%、30.0%和10.0%.子宫颈癌、子宫内膜癌的高甲基化率高于正常宫颈组织(χ2=5.40、4.33,P＜0.05).子宫颈癌和子宫内膜癌组织的高甲基化与临床分期和组织学分级有关(χ2=4.29～9.78,P＜0.05).④结论p16基因5'CpG岛的高甲基化在子宫颈癌和子宫内膜癌的发生发展中起一定作用.     

PTTG与P53在大肠癌组织中的表达

目的 探讨垂体瘤转化基因(PTTG)和P53蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义.方法 应用组织芯片技术、免疫组织化学(S-P)法检测60例大肠癌标本,20例癌旁正常组织中PTTG和P53蛋白的表达水平.结果 大肠癌组织和癌旁正常组织中PTTG和P53的阳性表达率分别为75%和61.7%,明显高于其在正常大肠组织中的表达,差异具有显著性(P＜0.01).PTTG的过度表达与大肠癌的淋巴结转移、浸润深度、肿瘤直径有相关性(P＜0.01,P＜0.05),而与大肠癌的分化程度无关(P＞0.05).P53的过度表达与大肠癌的分化程度、浸润深度、肿瘤直径无关(P＞0.05),仅与其淋巴结转移显著相关(P＜0.05).在大肠癌组织中PTTG与P53蛋白的表达呈正相关(r=0.495,P＜0.01).结论 PTTG与P53蛋白在大肠癌组织中呈高表达,二者表达呈正相关,且均与淋巴结转移与否密切相关,说明二者可以结合起来作为判断大肠癌是否有潜在淋巴结转移的一项分子指标.     

非小细胞肺癌CDH13及DAPK基因CpG岛甲基化的研究

目的：探讨非小细胞肺癌患者抑癌基因CDH13及DAPK基因CpG岛甲基化情况及其临床意义。方法采用甲基化特异性-PCR方法检测40例非小细胞肺癌患者（肺癌组）和30例肺良性病变患者（肺良性病变组）的抑癌基因CDH13及DAPK的CpG岛甲基化的情况。结果肺癌组织 CDH13、DAPK 基因 CpG 岛甲基化率分别为47．5％（19／40）、40．0％（16／40）,癌旁组织分别为27．5％（11／40）、30．0％（12／40）,肺良性病变组织均为0。癌组织、癌旁组织CDH13、DAPK的CpG岛甲基化率均明显高于良性病变组（P＜0．05）,但癌组织与癌旁组织间比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。鳞癌与腺癌组织CDH13、DAPK的CpG岛甲基化率比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论非小细胞肺癌组织存在CDH13、DAPK的CpG岛甲基化,其与非小细胞肺癌发生发展有着密切关系。     

膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因5＇CpG岛甲基化检测

目的 探讨P16、P15、P14基因5＇CpG岛在膀胱移行细胞癌中甲基化状态及其临床意义。方法 应用甲基化特异性PCR（methylation—specific PCR，MSP）方法检测40例膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因甲基化程度，χ^2检验分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级分期间关系。结果 膀胱移行细胞癌P16、P15、P14 5＇CpG岛甲基化扩增阳性化率分别为27．5％、17．5％、35％，而正常膀胱组织中均未检测到三种基因5＇CpG岛甲基化。P16、P14基因甲基化与膀胱癌病理分级分期有显著性差异（P〈0．05），P15基因则没有显著性差异（P〉0．05）。结论 P16、P15、P14基因在膀胱癌组织中的甲基化率较高，三种抑癌基因5＇CpG岛异常高甲基化，在膀胱癌的发生、发展中具有重要作用。     

DCC基因蛋白在大肠癌中的表达及意义

目的探讨DCC基因在大肠癌中的蛋白表达及其生物学行为的关系.方法应用免疫组化方法检测46例大肠癌及相应癌旁正常组织和41例正常人大肠组织的DCC基因蛋白表达.结果正常大肠粘膜组织全部表达,大肠癌组织部分表达,阳性率为28%(13/46),两组差异显著(P＜0.01),且与肿瘤浸润转移(Dukes分期)及分化程度有明显相关(P＜0.05),5例伴肝转移组织全部表达缺失.结论DCC基因与大肠癌的发生发展有关,与其浸润转移(Dukes分期)呈负性相关.DCC基因蛋白表达可作为形态学之外判断大肠癌生物学行为的一种指标.     

大肠癌中Survivin表达及其与bcl-2和P53基因表达的关系

目的:研究Survivin在大肠癌组织中的表达及其与bcl2和P53基因表达的关系。方法:应用免疫组织化学方法对74例大肠癌及相应癌旁正常大肠组织中Survivin、bcl2和P53蛋白的表达。结果:74例大肠癌中Survivin阳性表达率为71.6%,而在相应癌旁正常大肠组织中Survivin阴性表达。Survivin表达上调与患者性别、年龄无明显相关(P>0.05),而与大肠癌分化程度低、肿瘤浸润深度及临床分期晚相关(P<0.05)。大肠癌组织中bcl2表达阳性与阴性者中Survivin阳性表达率分别为75.0%和65.4%,两者比较无显著性(P>0.05);P53表达阳性与阴性者中Survivin阳性表达率分别为82.4%和47.8%,两者比较有显著性(P<0.05)。结论:Survivin在大肠癌组织中表达上调,提示该基因在大肠癌的发生发展过程中起重要作用,Survivin表达越高,大肠癌分化程度越低,侵袭性更强,临床分期愈晚。大肠癌中Survivin阳性表达与P53阳性表达密切相关。     

Fas在大肠癌及癌旁组织的不同表达及意义

目的研究Fas在人体大肠癌及癌旁组织中的表达. 方法应用SP免疫组化方法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法）对49例大肠癌及癌旁组织中的Fas基因的表达进行检测. 结果凋亡基因Fas在大肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）,且高分化腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）,但在不同分级的大肠癌及其癌旁组织之间的阳性率无明显差异. 结论分化低的大肠腺癌癌旁组织中的细胞凋亡活动较活跃,有利于肿瘤的浸润与破坏.     

SOCS-3基因在结肠癌中的表达及甲基化测定

目的通过对细胞因子信号转导抑制因子-3（suppressor of cytokine siganaling-3,SOCS-3）基因在结肠癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态的测定,探讨其与结肠癌发生、发展和转移等的关系。方法收集40例结肠癌患者的肿瘤标本,20例癌旁组织以及10例正常结肠组织．运用甲基化特异性PCR测定SOCS-3基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-3基因在结肠癌组织中的表达水平。结果40例结肠癌组织中有34例（85％）存在SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中为2例（10％）,而正常结肠组织中没有检测到SOCS-3基因呈CpG岛甲基化;结肠癌组织中SOCS-3基因CpG岛甲基化组与无甲基化组相比．其SOCS-3基因的相对表达量明显减少（P〈0．05）,表明SOCS-3基因CpG岛甲基化可导致SOCS-3基因表达降低。与患者临床资料结合分析,发现SOCS-3基因CpG岛甲基化与性别、年龄无关（P〉0．05）,而与肿瘤病理分级和TNM分期有关（P〈0．05）。结论结肠癌中存在SOCS-3基因CpG岛异常甲基化,且因CpG岛的甲基化导致其基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化可能参与了结肠癌的发生、发展和转移。