人胰液蛋白质组的双向电泳

目的建立优化的用于胰液蛋白质组研究的双向电泳方法。方法经内镜逆行胰胆管造影（ERCP）术收集纯胰液标本5例，分别进行多次双向电泳．比较不同标本保存时间、制备方法、泡胀液组成、固相pH胶条、等电聚焦条件及染色方案等因素对双向电泳图谱质量的影响。结果胰液标本在-80℃保存4个月做双向电泳对图谱没有明显影响。根据图谱质量比较，三氯乙酸／丙酮沉淀继以含硫脲的泡胀液复溶是优化的标本制备方法；应用窄范围固相pH胶条可以在增加标本上样量的同时改善分辨率：银染和兼容质谱的银染方案所获得的图谱同样具有良好的重复性和分辨率；不同病理状态的胰液标本的双向电泳图谱表现出一定程度的相似性。结论标本制备是胰液双向电泳的关键，优化的方法可以获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱，为不同病理状态下胰液蛋白质组学差异的研究奠定基础。     

双向凝胶电泳技术在胰腺癌蛋白质组学研究中的应用及条件优化

目的将双向凝胶电泳技术用于胰腺癌蛋白质组学研究并对其条件进行优化。方法对胰腺癌组织、癌旁组织、胰液等标本在组织研磨、裂解、蛋白抽提及双向凝胶电泳等各个环节进行调整和优化。结果液氮研磨法可得到更多的蛋白质点；超声方法去除组织中核酸效果较好；二硫苏糖醇（DTT）平衡时间12—15min，碘乙酰胺（IAA）平衡时间应等同或略长于DTT平衡时间时可得到高质量图谱；丙酮沉淀法可获得较多的胰液生物标志物蛋白点；将2—3根长度〈13cm的IPG胶条在1块凝胶上进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）的方法（Msoc）使双向电泳的重复性和通量显著提高。结论本研究成功建立了双向凝胶电泳技术平台，所获得的电泳图谱分辨率高、重复性好，能够较好地用于胰腺癌蛋白质组学研究。     

人胰腺组织及胰腺癌细胞株蛋白质组的双向电泳分析

目的建立具有高分辨率和稳定性的胰腺癌蛋白质组研究的双向电泳方法.方法取正常胰腺、胰腺癌手术标本和胰腺癌细胞株,分别制备组织、细胞匀浆,提取蛋白质组分,进行双向电泳.结果加大蛋白酶抑制剂,应用两性电解质,可以得到理想的胰腺组织、细胞的蛋白质组分,并获得清晰、重复性良好的双向电泳图谱.结论胰腺组织细胞蛋白质双向电泳中,样本的制备和双向电泳的条件是关键因素.     

结肠黏膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立与优化

目的为开展人类结肠黏膜组织的蛋白质组研究,建立并优化其蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法采用电子结肠镜直视下活检钳取结肠黏膜组织,对组织蛋白质的提取方法进行改进以达到考马斯亮蓝法染色所需的浓度,优化双向凝胶电泳的关键因素与环节,如第一向固相pH梯度(IPG)等电聚焦的上样量及电泳参数,第二向垂直平板SDS凝胶浓度等.结果以固相pH梯度-IPG胶条(pH=3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了人类结肠黏膜组织的双向凝胶电泳图谱.平均含333±36个蛋白点,匹配率85.56%.结论优化人类结肠黏膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术可以建立高分辨率和良好重复性的双向凝胶电泳图谱.     

人胰腺组织及胰腺癌细胞株蛋白质组的双向电泳分析

目的建立具有高分辨率和稳定性的胰腺癌蛋白质组研究的双向电泳方法。方法取正常胰腺、胰腺癌手术标本和胰腺癌细胞株，分别制备组织、细胞匀浆，提取蛋白质组分，进行双向电泳。结果加大蛋白酶抑制剂，应用两性电解质，可以得到理想的胰腺组织、细胞的蛋白质组分，并获得清晰、重复性良好的双向电泳图谱。结论胰腺组织细胞蛋白质双向电泳中，样本的制备和双向电泳的条件是关键因素。     

脊髓组织蛋白质组分析中双向电泳技术应用效果观察

目的观察脊髓组织蛋白质组分析中双向电泳技术的应用效果。方法以大鼠脊髓为研究对象,应用以固相pH梯度等电聚焦为第一向、均一水平十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向的双向电泳体系进行组织蛋白质组分析。结果获得了质量较好的脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱。结论脊髓组织蛋白质分析中双向电泳技术应用效果满意。     

钉螺肝脏蛋蛋白质双向电泳方法的建立

目的建立针对钉螺肝脏蛋白质组阵列分离的双向电泳方法。方法分析裂解液、细胞破碎、沉淀方法对钉螺肝脏蛋白质提取的影响,并优化双向电泳参数,建立钉螺肝脏蛋白质的提取方法和双向电泳条件。结果LysisⅢ（8mol/L尿素,4%CHAPS,65 mmol/L DTT,40 mmol/L Tris,0.5%IPG Buffer）提取钉螺肝脏总蛋白,2-D Clean-up试剂盒处理纯化总蛋白,等电聚焦参数为8000 v,50000 vh,成功获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,凝胶经EMBL银染,可分辨蛋白质斑点数约430个。结论建立了钉螺肝脏蛋白质双向电泳技术,为开展钉螺蛋白质组学研究奠定了良好基础。     

CA125阴性卵巢上皮性肿瘤患者血清相关蛋白及意义

目的 探讨CA125阴性卵巢上皮性肿瘤患者血清相关蛋白及意义.方法 取CA125阴性卵巢上皮性肿瘤和卵巢良性肿瘤、盆腔良性病变和正常妇女血清,采用双向电泳技术分离和鉴定生理状态与病理状态的差异表达蛋白,对有差异性表达的蛋白质运用MALDI-TOF-TOF串联质谱分析.结果 成功获得重复性好的双向电泳图谱,CA125阴性卵巢上皮性肿瘤患者血清蛋白质表达谱发生了改变,综合分析得到CA125阴性时的蛋白质有8种,分别为结合珠蛋白α1、prostasin、calgranulin A、calgranulin B、溶血磷脂酸、增殖细胞核抗原、HSP60和HSP90.结论 双向电泳-质谱法对卵巢上皮性肿瘤患者血清蛋白获得重复性好的结果,上述8种蛋白能为卵巢上皮性肿瘤提供早期诊断指标.     

不同蛋白沉淀方法对尿蛋白双向电泳结果的影响

目的观察不同蛋白沉淀方法对尿液蛋白双向电泳结果的影响。方法采用丙酮沉淀法、乙腈（ACN）／0．1％三氟乙酸（TFA）沉淀法及三氯乙酸（TCA）／丙酮沉淀法沉淀尿液标本中的蛋白质,采用固相pH梯度干胶条（IPC）对沉淀蛋白进行双向电泳,观察双向电泳的蛋白质点数及质量。结果采用TCA／丙酮沉淀法沉淀后,尿液标本双向电泳蛋白质点数较丙酮沉淀法、ACN／0．1％TFA沉淀法多,蛋白质谱较清晰。结论TCA／丙酮沉淀法能够提高尿液标本双向电泳蛋白的检出敏感度,提高检测效果。     

乙型肝炎肝纤维化组织双向电泳技术的优化

目的:建立并优化乙型肝炎肝纤维化组织蛋白质组研究所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率和重复性.方法:外科手术获取乙型肝炎肝纤维化组织,提取肝组织总蛋白.利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,考马斯亮蓝染色后分析凝胶图像.对2-DE中的关键因素与环节,如样本处理、上样量、电泳参数等各步条件进行了一系列优化.结果:优化条件后的乙型肝炎肝纤维化组织双向凝胶电泳图谱水平拖尾减少、斑点分辨率改善、斑点检出数量增加(246±33→729±83).结论:该双向凝胶电泳技术可应用于乙型肝炎肝纤维化组织的蛋白质组学研究.