五株胰腺癌细胞株的PTCH和SMO mRNA表达

目的 研究胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988s、PANC-1、BxPC3、CFPAC中PTCH和SMOmRNA表达及相关关系。方法用 RT—PCR法测定5株胰腺癌细胞株和正常胰腺组织的PTCH和SMOmRNA表达。结果 正常胰腺组织无PTCH和SMOmRNA表达；胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988s、PANC-1、BxPC3有PTCHmRNA的表达；胰腺癌细胞株PaTu8988s、PANC-1、BxPC3有SMOmRNA表达，而SW1990无SMOmRNA表达；胰腺癌细胞株CFPAC无PTCH及SMOmRNA表达。结论 正常胰腺组织无PTCH和SMOmRNA表达；胰腺癌细胞株PTCH和SMOmRNA表达有差异，这可能与其生物学特性不同有关。     

胰腺癌细胞株中Elastase 3B基因启动子异常甲基化研究

目的 探讨Elastase 3B(ELA3B)基因在胰腺癌中低表达的分子机制.方法 应用RT-PCR方法检测2例正常胰腺组织和BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1、SW1990 5株胰腺癌细胞株ELA3B基因表达.利用去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞嘧啶(DAC)处理细胞株,再检测ELA3B基因表达,并用甲基化特异性PCR检测和测序进行验证.结果 ELA3B在正常胰腺组织中表达,而在BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1和SW1990 5株胰腺癌细胞株中均无表达.DAC处理后,BxPC、PaTu8988、PANC1和SW1990 4株胰腺癌细胞株表达ELA3B,而CFPAC仍不表达.正常胰腺组织和PANC1 ELA3B基因部分甲基化,而其他4株胰腺癌细胞株则高甲基化.结论 ELA3B基因启动子的高甲基化是导致该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一.     

胰腺癌细胞株原钙黏附蛋白8基因的甲基化状态

目的 分析原钙黏附蛋白8(protocadherin 8,PCDH8)基因在胰腺癌细胞株的甲基化状态.方法 抽提6株胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990和2例正常胰腺组织的总RNA,以甲基化特异性PCR(MSP)法检测PCDH8甲基化情况.应用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理6株胰腺癌细胞株,采用实时定量PCR法检测处理前后细胞的PCDH8 mRNA表达.结果 2例正常胰腺组织PCDH8基因未发生甲基化,PANC1、BxPC3、CFPAC胰腺癌细胞株PCDH8基因部分甲基化,而PaTu8988、ASPC1、SW1990细胞完全甲基化.PCDH8mRNA在PANC1、SW1990、PaTu8988胰腺癌细胞株中有表达,表达的相对值(RQ)分别为1.576±0.648、0.013±0.008、0.002±0.001;BxPC3、CFPAC、ASPC1细胞株无PCDH8 mRNA表达.5-Aza-dC处理后,胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990均有PCDH8 mRNA表达,表达量较处理前明显升高,相对表达量分别为7.463±2.628、10.696±1.539、7.852±2.762、421.815±1.493、118.595±4.089、6.690±1.884.结论 PCDH8基因启动子高甲基化是导致该基因在胰腺癌细胞株表达下降的主要原因之一.     

胰腺癌细胞株中Elastase 3B基因启动子异常甲基化研究

目的探讨Elastase 3B（ELA3B）基因在胰腺癌中低表达的分子机制。方法应用RT-PCR方法检测2例正常胰腺组织和BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1、SW1990 5株胰腺癌细胞株ELA3B基因表达。利用去甲基化试剂5-氮-2′-脱氧胞嘧啶（DAC）处理细胞株,再检测ELA3B基因表达,并用甲基化特异性PCR检测和测序进行验证。结果ELA3B在正常胰腺组织中表达,而在BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1和SW1990 5株胰腺癌细胞株中均无表达。DAC处理后,BxPC、PaTu8988、PANC1和SW1990 4株胰腺癌细胞株表达ELA3B,而CFPAC仍不表达。正常胰腺组织和PANC1 ELA3B基因部分甲基化,而其他4株胰腺癌细胞株则高甲基化。结论ELA3B基因启动子的高甲基化是导致该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一。     

胰腺癌细胞系血管紧张素Ⅱ 1型受体蛋白表达的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1)在胰腺癌细胞中的表达.方法用免疫细胞化学染色检测胰腺癌细胞系SW1990、PaTu 8988s和PANC-1中AT1蛋白的表达.结果胰腺癌细胞系SW1990、PaTu 8988s和PANC-1中均有AT1蛋白的表达.结论 AT1在胰腺癌细胞生长中可能发挥重要作用,应用AT1拮抗剂对防治胰腺癌似乎有一定意义.     

人类真核翻译延长因子1A2在胰腺癌的表达研究

目的 研究人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)及其表达产物eEF1A2蛋白在人胰腺癌细胞株和组织标本中的表达.方法 收集人胰腺导管腺癌病理标本15例,人正常胰腺组织标本8例.运用RT-PCR、Realtime-PCR、Western blot以及免疫组化等技术检测人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3、PaTu8988和胰腺癌组织标本中EEF1A2的表达水平.结果 人胰腺腺癌细胞株PaTu8988、SW1990和BxPC3中,EEF1A2 mRNA和eEF1A2蛋白表达水平与正常胰腺组织相比,均明显上调.8例癌旁正常胰腺组织标本中仅1例胰腺导管细胞内eEF1A2呈弱阳性表达,而15例胰腺导管腺癌病理标本中,胰腺导管腺癌细胞内eEF1A2均呈中至强阳性表达,两者比较有显著差异(P ＜ 0.05).结论 EEF1A2在胰腺癌中呈异常高表达.EEF1A2的致癌机制可能与加速蛋白质翻译速度、抑制凋亡以及改变细胞骨架有关.EEF1A2有可能成为胰腺癌一个有效的诊断标志物和基因治疗靶点.     

运动相关蛋白Fascin在胰腺癌的表达及其临床意义

目的 探讨运动相关蛋白Fascin在胰腺癌的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用RT-PCR法检测SW1990、Patu8988、BxPC3、CfPAC1 4株胰腺癌细胞株Fascin mRNA表达;采用免疫组化方法 检测54例胰腺癌及42例相应癌旁胰腺组织Fascin蛋白表达.结果 胰腺癌细胞株SW1990、Patu8988、CfPAC1有Fascin mRNA表达,BxPC3无表达;54例胰腺癌组织Fascin蛋白表达阳性35例,占64.8%,42例癌旁胰腺组织中均无阳性表达.Fascin蛋白表达与肿瘤分化程度(P<0.01)和淋巴转移(P<0.05)呈显著正相关,但与肿瘤大小及远处转移无相关性(P>0.05).结论 Fascin蛋白在胰腺癌组织中有较高的阳性表达率,检测其表达有助于胰腺癌的诊断,并有助于判断胰腺癌恶性程度.     

胰腺癌细胞株HOXA7基因表达及其启动子区甲基化状态

目的 检测HOXA7 mRNA在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,探讨两者的相关性.方法 采用RT-PCR法检测人胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA的表达水平.采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态.应用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株,检测处理前后细胞HOXA7 mRNA表达和甲基化状态的变化.结果 胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1和SW1990细胞均表达HOXA7 mRNA,而PANC1细胞不表达HOXA7 mRNA.CFPAC1、BxPC3、PANC1和SW1990中HOXA7启动子甲基化率分别为93.16%、90.65%、90.09%、52.30%,SW1990细胞的HOXA7甲基化率较其他三株细胞均明显降低(P值均＜0.01).经5-aza-dC处理后,PANC1细胞的HOXA7 mRNA重新表达,BxPC3的HOXA7 mRNA表达增强;而CFPAC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA在5-aza-dC处理前后无明显变化.结论 胰腺癌细胞株BxPC3和PANC1细胞的HOXA7mRNA表达与启动子区甲基化状态密切相关,而CFPAC 1和SW1990细胞两者无明显相关性.     

人类真核翻译延长因子1A2在胰腺癌的表达研究

目的研究人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)及其表达产物eEF1A2蛋白在人胰腺癌细胞株和组织标本中的表达。方法收集人胰腺导管腺癌病理标本15例,人正常胰腺组织标本8例。运用RT-PCR、Realtime-PCR、Western blot以及免疫组化等技术检测人胰腺癌细胞株SW1990、Bx-PC3、PaTu8988和胰腺癌组织标本中EEF1A2的表达水平。结果人胰腺腺癌细胞株PaTu8988、SW1990和BxPC3中,EEF1A2mRNA和eEF1A2蛋白表达水平与正常胰腺组织相比,均明显上调。8例癌旁正常胰腺组织标本中仅1例胰腺导管细胞内eEF1A2呈弱阳性表达,而15例胰腺导管腺癌病理标本中,胰腺导管腺癌细胞内eEF1A2均呈中至强阳性表达,两者比较有显著差异(P<0.05)。结论EEF1A2在胰腺癌中呈异常高表达。EEF1A2的致癌机制可能与加速蛋白质翻译速度、抑制凋亡以及改变细胞骨架有关。EEF1A2有可能成为胰腺癌一个有效的诊断标志物和基因治疗靶点。     

全反式维甲酸对多种胰腺癌细胞的诱导凋亡作用

目的 观察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否诱导人胰腺癌细胞的凋亡.方法 分别将人胰腺癌细胞SW1990、PaTu8988、BxPC3和ATRA共同孵育后,用MTT法检测细胞活性,分别用流式细胞仪检测、TUNEL和透射电镜观察细胞的凋亡.结果 MTT法显示,ATRA对3株人胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988和BxPC3的生长均有明显的抑制作用(P ＜ 0.05).流式细胞仪的检测、TUNEL和电镜的观察结果均证实ATRA诱导后,3株胰腺癌细胞株凋亡率均高于对照(P ＜ 0.01),并随诱导时间延长而增加.结论 ATRA在体外能显著抑制多株胰腺癌细胞株的生长,并促进其凋亡.     

骨肉瘤组织中XIAP mRNA、Caspase-9 mRNA的表达变化及意义

目的观察X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XiAP）mRNA和Caspase-9 mRNA在骨肉瘤中的表达变化及其与骨肉瘤临床病理指标的联系。方法采用原位杂交技术检测51例骨肉瘤组织中XIAP mRNA和Caspase-9 mRNA,并以10例骨软骨瘤（骨良性病变）组织为对照（对照组）。结果在51例骨肉瘤中XIAPmRNA和Caspase-9 mRNA的表达水平与骨肉瘤的临床病理特征无明显关系,XIAP mRNA的阳性表达率显著高于对照组（P〈0．05）;Caspase-9 mRNA则显著低于对照组（P〈0．05）;XIAP mRNA与Caspase-9 mRNA的表达呈等级负相关（r=-0．467,P〈0．05）。结论XIAP、Caspase-9 mRNA可能与骨肉瘤的发生、发展有关。以XIAP和Caspase-9为靶点进行诱导骨肉瘤细胞凋亡的治疗,将可能成为临床提高保肢手术成功率及患者生活质量的新治疗思路。     

氟化物对成骨细胞OPGL mRNA和M-CSF mRNA表达的影响

目的探讨氟对成骨细胞的骨保护蛋白配体(OPGL)mRNA和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA表达的影响.方法应用酶消化法分离小鼠乳鼠成骨细胞,取第3代成骨细胞,加入不同浓度的氟6 h,提取细胞总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,观察成骨细胞分泌的OPGL和M-CSF表达的变化.结果在氟的作用下,成骨细胞的OPGL mRNA和M-CSF mRNA的表达呈上升趋势,但未达到统计学差异水平.结论氟有可能通过上调OPGL和M-CSF的表达,提高破骨细胞的骨吸收活性.     

乳黄制剂对肝硬化模型大鼠肝组织脂多糖结合蛋白mRNA、CD14 mRNA及Toll样受体4 mRNA的影响

目的:研究乳黄制剂对肝硬化大鼠肝组织LBP(脂多糖结合蛋白)mRNA、CD14 mRNA、TLR4(Toll样受体-4)mRNA的影响.方法:SPF级雄性Wister大鼠88只随机分为6组:正常组、模型组、预防组、预防对照组、模型治疗组、模型治疗对照组.采用CCl4复合因素法制造肝硬化模型.用乳黄制剂进行预防和治疗,并与乳果糖对照药进行比较,分别检测大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA的表达水平.结果:治疗组大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达水平明显低于模型组(P＜0.05),预防组大鼠肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达水平与正常组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:乳黄制剂能有效抑制内毒素调节蛋白及其相关受体的表达,从而减少内毒素血症的发生.     

Hormone-induced increase in levels of functional mRNA and alpha-amylase mRNA in barley aleurones

Incubation of barley aleurone cells with gibberellic acid produces a progressive increase in the RNA content of the cells. The activity of poly(A)-containing RNA, measured in an in vitro wheat germ protein-synthesizing system, reaches a maximum ≈12 hr after hormone addition and declines thereafter. The structurally intact functional mRNA content in these cells, measured as poly(A)-RNA with 5′ “caps,” also shows a maximum at 12 hr and correlates with the translational capacity of poly(A)-RNA. Activation of mRNA by guanylylation or methylation after addition of gibberellic acid is ruled out. Available evidence indicates that gibberellic acid stimulates protein synthesis by increasing the synthesis of mRNA. Studies with cycloheximide suggest that the induction of synthesis of α-amylase mRNA by gibberellic acid requires protein synthesis after hormone addition.     

氯沙坦协同辛伐他汀对心力衰竭大鼠心室基质金属蛋白酶2、9及其组织抑制因子1、2基因表达的影响

目的 探讨心力衰竭(心衰)时心脏基质金属蛋白酶2(MMP-2)、9(MMP-9)及其组织抑制因子1(TIMP-1)、2(TIMP-2)基因表达及其与心肌纤维化的关系.方法 用降主动脉缩窄术建立心衰模型.SD大鼠随机分成6组.分别在氯沙坦5 mg/kg、辛伐他汀2 mg/kg以及两药合用(联合投药组)投药后1、3,5周动态测定左室舒张末期内径、左室收缩末期内径及左室后壁厚度、左室短轴缩短率.ELISA法检测B型利钠肽浓度.Masson染色观察心肌胶原情况.RT-PCR法检测心室MMP-2、MMP-9和TIMP-1、TIMP-2基因表达.结果 投药后5周各组胶原容积分数比较差异有统计学意义(P<0.01),投药各组较降主动脉缩窄(模型)组下降(P<0.05),尤其联合投药组下降更明显(P<0.01).MMP-2 mRNA和MMP-9 mBNA在投药各组与模型组差异无统计学意义(P>0.05);但TIMP-1 mRNA和TIMP-2 mRNA在投药各组明显低于模型组(P<0.01),联合投药组降低更明显(P<0.05).结论 心衰模型大鼠MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA、TIMP-2 mRNA表达升高可能是压力负荷大鼠心肌胶原含量增加的分子机制之一,氯沙坦、辛伐他汀以及联合投药均能下调TIMP-1 mRNA、TIMP-2 mRNA水平,缓解心肌重构,尤其联合投药组效果更明显.     

丹黄方对大鼠肝再生过程中PC3、c—fos、LRF—1影响的实验研究

目的：探讨丹黄方对大鼠肝切除肝再生模型中促肝细胞再生的作用机制。方法：采用肝部分切除肝再生模型，用丹黄方进行干预，通过RT-PCR、电泳凝胶等方法检测与肝再生密切相关因子PC3 mRNA、c-fos mRNA、LRF-1 mRNA的表达，观察丹黄方对肝细胞再生的影响。结果：丹黄方对肝再生模型大鼠肝组织PC3 mRNA、c-fos mRNA的表达有增强作用，与模型比较，差异有显著性意义；对肝组织LRF-1 mRNA表达的影响不显著。结论：丹黄方可能是通过增强肝组织PC3 mRNA、c-fosmRNA的表达而促进肝细胞的增殖。