丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝脏Smads分子表达的影响

目的: 探讨丹芍化纤胶囊对大鼠实验性肝纤维化Smad2/3、Smad4和Smad7表达的影响,从而评价Smad分子作为抗纤维化靶点的应用价值。方法: 雄性Wistar大鼠48只分为正常组(n=16)、肝纤维化模型组(n=16)、丹芍化纤胶囊治疗组(n=16),除正常组外,其余采用CCl₄、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组予以丹芍化纤胶囊(1 g/kg)灌胃治疗8周。实验结束后测定肝脏指数、血清透明质酸(HA)及谷丙转氨酶(ALT),光镜下观察肝组织纤维化程度,检测尿羟脯氨酸(Hyp)排出量,同时用免疫组化SABC法、免疫印迹(Western blotting)和实时荧光定量PCR (qRT-PCR) 法检测肝组织中Smad2/3、Smad4和Smad7的蛋白及mRNA的表达。结果: 治疗组与肝纤维化模型组比较,肝脏指数、血清HA及ALT显著下降,肝纤维化程度显著减轻,尿Hyp排出明显增加。治疗组肝组织中Smad7的蛋白和mRNA的表达水平与肝纤维化模型组相比均显著增高,而Smad2/3、Smad4的蛋白表达与肝纤维化模型组相比则明显降低,但mRNA水平仅轻度下降,与肝纤维化模型组比较差异不显著。结论: 中药丹芍化纤胶囊治疗大鼠肝纤维化可能主要是通过调节Smad7的基因转录和蛋白质翻译,从而发挥其反馈性抑制TGF-β/Smad促纤维化信号转导作用,这可能是丹芍化纤胶囊抗肝纤维化的作用机制之一;Smad7可能是丹芍化纤胶囊作用的一个药物靶点。     

miR-200s在中药丹芍化纤干预大鼠肝纤维化过程中的表达变化

 目的：观察肝组织中微小RNA-200家族成员（miR-200s）在肝纤维化形成及中药丹芍化纤胶囊干预过程中的表达变化并探讨其机制。方法：雄性Wistar大鼠皮下注射四氯化碳（CCl4）制备肝纤维化模型,干预组在给予CCl₄造模同时给予丹芍化纤胶囊（0.5 g/kg）灌胃,分别在4周和8周处死大鼠,测定肝脏指数和血清谷丙/谷草转氨酶(ALT和AST)活性,观察肝组织病理改变,real-time PCR方法分别检测肝组织miR-200a、-200b、-200c、-141和-429表达变化。结果：模型组及干预4周组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组（P<0.01）,8周模型组肝纤维化明显,并且肝组织中miR-200a、-200b、-200c、-141和-429表达较正常组显著增加（P<0.05）。丹芍化纤胶囊干预8周组肝功能生化指标及病理学改变与对照组无明显差异,且肝组织中miR-200a、-200b、-200c、-141和-429表达均低于8周模型组。结论：miR-200s在肝纤维化形成及中药丹芍化纤胶囊干预过程中的表达变化,提示其参与肝纤维化的发生发展并可能是潜在的中药作用靶点。     

肝纤维化逆转和肝星状细胞凋亡的研究进展

肝纤维化是肝损伤的修复机制.肝星状细胞表型转换和增生在肝纤维化形成中起重要作用.通过TNF超家族受体Fas及P75、外周苯二氮卓类受体PBR、整合素受体介导激活的肝星状细胞凋亡而使其数量减少,细胞外基质和基质金属蛋白酶组织抑制因子明显下降,从而导致肝纤维化发生逆转.肝星状细胞的凋亡受到凋亡和抗凋亡基因、细胞因子等的调控.表明可通过调节肝星状细胞的凋亡为治疗肝纤维化寻找理想途径.     

端粒酶与细胞周期、细胞凋亡及癌基因的关系

端粒酶是一种核糖核蛋白酶 ,能通过延长端粒而维持染色体的稳定性 ,并使得细胞永生化 ,是目前已知的最为广谱的肿瘤分子标记物 ;端粒酶活性随细胞周期运行而改变 ,并受细胞周期调节蛋白、癌基因和抑癌基因的调控 ,且与细胞凋亡的发生有着一定的相关性     

端粒酶与细胞周期及细胞凋亡关系的研究进展

端粒酶是一种依赖RNA的逆转录酶 ,能够延长染色体末端的端粒长度。它由端粒酶RNA亚单位 ,端粒酶蛋白催化亚单位及连接二者的端粒酶相关蛋白组成。端粒酶活化是细胞永生化和肿瘤形成的关键步骤 ,而端粒酶的活性表达及其调控机制与细胞周期及细胞凋亡基因密切相关 ,阐明端粒酶与细胞周期及细胞凋亡的关系 ,对深入了解恶性肿瘤的发病机制及肿瘤的预防、诊断和治疗均有重要意义。     

RNAi沉默HMGA1基因对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:筛选HMGA1基因沉默稳定转染肝癌细胞株,检测沉默后肿瘤细胞凋亡、周期和增殖的变化。方法:靶向HMGA1的RNAi载体转染肝癌细胞,G418筛选得到稳定转染细胞株并鉴定;MTT法和FACS检测细胞增殖、凋亡及细胞周期。结果:成功建立基因沉默HMGA1稳定细胞株;HMGA1基因沉默后,细胞凋亡百分率(29.46±3.04%)明显高于质粒对照组和空白对照组(1.96±0.76%和2.04±0.70%,P<0.01);G0-G1期细胞百分率(75.21±2.35%)明显高于质粒对照组和空白对照组(37.98±3.02%和39.23±3.63%,P<0.01),G2-S期(24.79±2.35%)显著低于质粒对照组和空白对照组(62.03±3.01%和60.77±3.63%,P<0.01);MTT检测显示,HMGA1沉默细胞增殖与质粒对照组和空白对照组相比显著降低(P<0.01或0.05)。结论:基因沉默HMGA1可促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

贮脂细胞凋亡与肝纤维化逆转

贮脂细胞经过激活、刺激性增殖、表型转换后分泌大量的细胞外基质和基质金属硫蛋白酶抑制剂 (TIMPs)而在肝纤维化中发挥了关键作用。但随着贮脂细胞的激活 ,其凋亡敏感性发生改变 ,通过Fas依赖途径发生凋亡 ,其数量明显减少 ,细胞外基质合成和TIMPs的表达快速下降 ,而使肝纤维化发生逆转。这一过程涉及贮脂细胞中凋亡和抑凋亡基因的表达变化。提示通过诱导激活的贮脂细胞凋亡 ,可能为肝纤维化的逆转治疗提供一新的乐观手段。     

白藜芦醇对铁超载大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的：研究白藜芦醇（RES）对铁超载大鼠肝星状细胞凋亡的影响。方法：体外培养大鼠肝星状细胞细胞系HSC-T6,使用25μmol/L的柠檬酸铁铵（FAC）刺激24 h建立铁超载模型,将细胞分为对照组、铁超载模型组（25μmol/L FAC）、低剂量RES(L-RES)组（3.12μmol/L RES+25μmol/L FAC）、中剂量RES(M-RES)组（6.25μmol/L RES+25μmol/L FAC）、高剂量RES(H-RES)组（12.5μmol/L RES+25μmol/L FAC）和去铁铵（DFO）组（50μmol/L DFO+25μmol/L FAC）。采用CCK-8法测定HSC-T6细胞活力;采用免疫荧光法测定细胞凋亡及活性氧（ROS）水平;通过普鲁士蓝染色观察HSC-T6细胞中铁含量的变化;通过ELISA法测定各组HSC-T6细胞上清液中金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)的表达水平;Western blot法检测HSC-T6细胞中I型胶原蛋白（Col-I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、caspase-3及Bax蛋白的表...     

Bak基因对Hela细胞的细胞周期和细胞凋亡的调控作用

目的 研究Ｂｃ１－２基因家族促凋亡蛋白Ｂａｋ在细胞凋亡细胞周期调控中的作用,评价它们作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法 采用一种可诱导性表达系统,（ＭＴ－Ⅱ调节系统）,在外加锌离子（ＺｎＳＯ４,１００μｍｏｌ／Ｌ）的条件下诱导Ｂａｋ基因表达。以Ｈｅｌａ细胞系作为靶细胞,获得表达Ｂａｋ基因的稳定转染子。结果 可诱导性Ｂａｋ基因过表达的Ｈｅｌａ细胞出现广泛死亡。ＴＵＮＥＬ染色证实细胞核碎片化,提示     

大鼠含抗肝纤维化中药的血清对肝星状细胞的作用

目的：观察抗肝纤维化中药复方“肝纤方”(本单位自拟科研方)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及其胶原合成的影响, 并探讨中药抗肝纤维化研究中的一些血清药理学实验方法。方法： 以16倍、8倍、4倍成人剂量肝纤方水煎液给大鼠灌胃, 于0.5、1、2、4 h后制备两类血清－门静脉血清和下腔静脉血清, 将之作用于从SD大鼠肝脏分离培养的HSC, 以[³H]TdR和[³H]Pro同位素掺入试验测定其对HSC增殖、胶原合成量的影响。结果：灌胃0.5、1、2 h后制备的门静脉和下腔静脉含药血清均能减少[3H]TdR的掺入量(P<0.05);以16倍和8倍成人剂量灌胃制得含药血清的作用强于4倍者(P＜0.05), 但前二者间无明显差异(P＞0.05);灌胃给药后1h制得的含药血清作用最强(P＜0.05)。门静脉含药血清亦能减少[³H]Pro的掺入量, 情况类似于上述对[3H]TdR的作用(P＜0.05);但下腔静脉含药血清无此作用(P＞0.05)。结论： 肝纤方能抑制HSC增殖、减少其胶原合成, 可能是其抗肝纤维化的一些具体作用。     

雷公藤内酯醇诱导人淋巴细胞凋亡的作用与细胞周期的关系

目的：通过观察雷公藤仙酯醇诱导淋巴细胞发生凋亡与细胞周期的关系。探讨该化合物导致细胞凋亡作用的机制。方法;以人外周血Ｔ细胞为研究对象,选择流式细胞分析术,ＤＮＡ凝胶电泳及ＤＮＡ片段测定等作为检测细胞凋亡的方法。结果;雷公藤内酯醇只能造成活化的Ｔ细胞发生细胞凋亡,且与雷公藤内酯醇的浓度正相关;雷公藤内酯醇诱导活化Ｔ细胞发生细胞凋亡的作用与细胞活化的程度密切相关;     

蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及凋亡的影响

目的:研究蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及细胞凋亡的影响。方法:MTT法测定蓝萼香茶菜乙素对AGZY的细胞毒作用;PI染色、流式细胞术观察蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞的IC50为0.11mmol/L,且随着蓝萼香茶菜乙素剂量增加对AGZY细胞抑制作用增强;蓝萼香茶菜乙素可以降低AGZY细胞G2/M期细胞数量,阻止细胞分裂。结论:蓝萼香茶菜乙素可阻滞AGZY细胞的生长,阻滞细胞进入G2/M期,并诱导AGZY细胞凋亡。     

siRNA沉默P21表达对细胞周期解偶联和细胞凋亡的影响

目的： 利用RNAi技术探讨P21蛋白表达对HeLa 细胞周期解耦联和细胞凋亡的影响。方法： 丝裂霉素刺激HeLa细胞后可诱导P21蛋白高表达，采用脂质体转染技术将p21 siRNA 载体转染至HeLa细胞48 h后给予MMC刺激，利用流式细胞术检测HeLa细胞的P21蛋白表达、 细胞倍体的形成和细胞凋亡的改变。结果： p21 siRNA 载体可有效干扰经MMC诱导的HeLa细胞中P21蛋白表达, MMC刺激后24 h和48 h细胞2倍体百分数明显少于对照组(P<0.01)，4倍体和8倍体细胞百分数明显多于对照组(P<0.01)。p21 siRNA沉默HeLa细胞p21后，凋亡细胞百分率明显高于空质粒对照组(P<0.01)。结论： p21 siRNA可有效沉默HeLa细胞P21蛋白表达，在P21蛋白低表达的情况下，HeLa细胞可通过p53非依赖途径诱导细胞死亡，可能与细胞周期解偶联和p53非依赖的细胞凋亡有关。     

肝复康对PDGF介导的肝星状细胞信号转导的分子机制

目的：通过观察中药肝复康含药血清对肝星状细胞（HSC-T6）细胞株Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA基因表达的影响。探讨其抗纤维化的作用机制。方法: 常规方法制备肝复康含药血清，并用不同浓度肝复康含药血清干预HSC-T6细胞株，以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察分析Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达的变化。以Western blotting检测ERK蛋白在不同干预情况下的表达。结果: 经肝复康含药血清处理，可下调HSC-T6细胞株Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达以及ERK蛋白表达水平，不同浓度含药血清作用强度也有所不同。结论: 中药肝复康对肝纤维化具有明显的抑制作用，其作用机制可能是通过非特异性干扰PDGF功能，抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA的转录，以达到抗纤维化的作用。     

miR-375对人结肠癌细胞株HCT116活性、细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨微小RNA-375(microRNA-375,miR-375)对人结肠癌细胞HCT116活性、细胞周期及凋亡的影响。方法:Real-time PCR检测不同结直肠癌细胞中miR-375的表达情况。脂质体转染法将miR-375模拟物(mimics)转入HCT116细胞,用real-time PCR法检测miR-375及AEG-1 mRNA的表达情况;MTT法检测细胞活性的改变情况;流式细胞技术检测miR-375对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:Real-time PCR结果显示HCT116在4个结直肠癌细胞株中miR-375的表达量最低;miR-375 mimics组中miR-375表达量较对照组明显上调;miR-375高表达可以显著抑制AEG-1 mRNA的表达水平。miR-375 mimics组细胞活性明显受到抑制,同时细胞凋亡率明显增加,G1期所占细胞数增加,而S期所占细胞数减少。结论:miR-375可以抑制结肠癌HCT116细胞的活性,介导细胞周期阻滞并促进其凋亡。miR-375作为一种抑癌因子,在结肠癌中可能通过抑制AEG-1发挥抑癌作用。     

植物中药IHA-01抑制人肺癌GLC细胞增殖和诱导凋亡的实验研究

目的初步探讨植物中药IHA-01抑制人肺癌GLC细胞增殖及诱导其早期凋亡的作用。方法人肺癌GLC细胞经不同浓度(0.01、0.1、1、10、100μg/ml)IHA-01作用24、48、72h,以MTT法进行IHA-01有效作用浓度筛选并确定IHA-01工作浓度(1/2IC50);透射电镜观察IHA-01细胞超微结构;流式细胞术进行DNA倍体分析和TUNEL分析,检测IHA-01对肺癌GLC细胞周期及早期凋亡的影响。结果IHA-01工作浓度(1/2IC50)为0.7μg/ml,且不同浓度IHA-01作用不同时间对GLC细胞增殖的抑制作用呈时效和量效依赖关系;透射电镜发现IHA-01实验组部分细胞出现细胞连接消失,微绒毛消失,胞质密度增加,可见细胞早期凋亡改变,具有诱导细胞分化和早期凋亡的作用;流式细胞术显示肺癌GLC细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞减少;流式细胞术TUNEL法检测结果显示,细胞凋亡和坏死同时存在。结论IHA-01具有抑制肺癌GLC细胞增殖,诱导凋亡的作用,具有深入研究的价值。     

Propriocidal apoptosis of mature T lymphocytes occurs at S phase of the cell cycle

We found that mature nontransformed CD4⁺ and CD8⁺ T lymphocytes could be made susceptible to T cell receptor(TcR)-mediated apoptosis by pretreatment with interleukin-4 (IL-4) or interleukin-2 (IL-2). The degree of susceptibility to death could be correlated with the level of cell cycling as measured by thymidine incorporation, cell doubling times, or the number of cells incorporating bromodeoxyuridine during S phase. However, using pharmacologic cell cycle blocking agents, we found that progression through the cell cycle was not required for cell death. Rather, we found that cells must be in a certain phase of the cell cycle to be susceptible to TcR-mediated death. Cells blocked in G1 phase were resistant to T cell receptor-induced apoptosis, whereas cells blocked in S phase were susceptible. These observations suggest that an important feature of growth lymphokines is their ability to drive T cells into portions of the cell cycle where they are sensitive to antigen receptor-induced apoptosis. Furthermore, these results provide additional evidence that the T cell growth lymphokines IL-2 and IL-4 may participate in the down-regulation of T cell responses by apoptosis a pathway we have termed “propriocidal regulation”.     

大鼠肝纤维化程度与门脉压力的关系

为证实肝纤维化在肝硬化门脉高压形成中的作用,我们用半自动图象分析仪测定了大鼠CCl_4肝硬化的肝脏胶原含量,同时用检压计测定了同组动物的门脉压力,分析了两者的相关件。结果表明,正常大鼠肝内胶原面积为3206.30±864.62μm~2,肝硬化大鼠为32390.16±11879.98μm~2,差异极显著(P<0.001)。前者与参考面积的比值为1.58±0.43%,后者为15.97±5.86%。正常鼠肝脏胶原面积与门脉压力梯度没有相关性,肝硬化鼠血管周围面积(r=0.44,P<0.05)、肝小叶内胶原面积(r=0.79,P<0.01)及肝内胶原总面积(r=0.76,P<0.01)均与门脉压力梯度呈显著正相关。结果提示,在CCl_4肝硬化大鼠,肝纤维化是导致门脉高压的重要原因之一,支持门脉高压形成的后向血流学说。     

Juniperus communis extract induces cell cycle arrest and apoptosis of colorectal adenocarcinoma in vitro and in vivo

Juniperus communis (JCo) is a well-known traditional Chinese medicinal plant that has been used to treat wounds, fever, swelling, and rheumatism. However, the mechanism underlying the anticancer effect of JCo extract on colorectal cancer (CRC) has not yet been elucidated. This study investigated the anticancer effects of JCo extract in vitro and in vivo as well as the precise molecular mechanisms. Cell viability was evaluated using the MTT assay. Cell cycle distribution was examined by flow cytometry analysis, and cell apoptosis was determined by the terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) assay. Protein expression was analyzed using western blotting. The in vivo activity of the JCo extract was evaluated using a xenograft BALB/c mouse model. The tumors and organs were examined through hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistochemistry. The results showed that JCo extract exhibited higher cytotoxicity against CRC cells than against normal cells and showed synergistic effects when combined with 5-fluorouracil. JCo extract induced cell cycle arrest at the G₀/G₁ phase via regulation of p53/p21 and CDK4/cyclin D1 and induced cell apoptosis via the extrinsic (FasL/Fas/caspase-8) and intrinsic (Bax/Bcl-2/caspase-9) apoptotic pathways. In vivo studies revealed that JCo extract suppressed tumor growth through the inhibition of proliferation and induction of apoptosis. In addition, there was no obvious change in body weight or histological morphology of normal organs after treatment. JCo extract suppressed CRC progression by inducing cell cycle arrest and apoptosis in vitro and in vivo, suggesting the potential application of JCo extract in the treatment of CRC.