应用噬菌体裂解法快速鉴定结核分支杆菌

目的 研究噬菌体裂解试验对结核分支杆菌快速鉴定的意义。方法 应用结核分支杆菌噬菌斑技术快速检测结核分支杆菌、非结核分支杆菌和非分支杆菌及肺结核患者痰标本。结果 结核分支杆菌H37Rv、牛分支杆菌和非洲分支杆菌噬菌体裂解试验均为阳性,10株常见非结核分支杆菌和7株非分支杆菌均为阴性;30株结核分支杆菌临床分离株本法检测结果全部阳性;20份涂阳培阳肺结核患者痰标本,本法阳性19份（95％）;21份涂阴培阳痰标本,本法阳性15份（71％）;19份涂阴培阴痰标本,5份阳性（26％）。结论 噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌,用其检测痰标本中的结核分支杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

结核分支杆菌耐利福平与rpoB基因

90年代初 ,全球结核病呈现死灰复燃趋势。到目前为止 ,结核病仍是造成成人死亡的感染性疾病中最常见的病因 ,全球 2 6 %的可避免死亡与结核病有关。我国约有 6 0 0万结核病患者 ,每年死于结核病者约 2 5万 ,为死于其他各类传染病人数总和的 2倍 ,每年由结核病带来的直接损失超过 35亿。结核病疫情恶化的原因主要有两方面 :一是耐药 ,尤其是耐多药结核 (ＭＤＲ ＴＢ)的出现 ;另一原因是人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ)感染的爆发流行。我国结核病具有耐药率高的特点 ,初治病人中耐药结核病占 2 8 1% ,复治病人中占 41 1%。耐药结核病中继发耐药占…     

利用噬菌体生物扩增法快速检测痰标本中结核分支杆菌

目的探讨噬菌体生物扩增（PhaB）法在快速检测痰标本结核分支杆菌（MTB）中的临床应用价值。方法应用PhaB法检测103例痰标本MTB,并与改良罗氏培养法检测结果进行比较。结果103例痰标本PhaB法与培养法检测MTB均阳性67例,均阴性25例,两法不相符11例。如以培养法结果为判断标准,则PhaB法检测痰标本MTB的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阳性预测值（NPV）及准确性分别为94.9%（67/71）、73.5%（25/34）、90.5%（67/74）、86.2%（25/29）、89.3%（92/103）。PhaB法对涂阳标本检出率为88.6/%（62/70）,对涂阳培阳标本检出率为93.9%（62/66）,对涂阴培阳标本检出率为100%（5/5）。33例涂阴痰标本PhaB法检测MTB阳性率（36.4%）高于培养法（15.2%）,差异显著（χ^2=5.14,P〈0.05）。结论PhaB法检测测痰标本MTB具有较高的敏感性和特异性,只需要2天时间,简便快速,不需要特殊仪器设备,费用低廉,可作为MTB检测快速筛选方法。     

结核分支杆菌利福平耐药的分子基础

结核分支杆菌利福平耐药的分子基础程绍基严碧涯马利福平（ＲＦＰ）的应用使结核病的疗程大为缩短，是当今短程化疗的基石。然而耐药性的出现严重削弱了其应有的作用［１］。近年来发达国家的结核病疫情呈回升趋势，而对包括异烟肼和ＲＦＰ耐药的多药耐药结核病的出现与...     

中国耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变特点

目的：为了阐明中国结核病耐利福平菌株rpoB基因突变特点。方法：对212株结核分支杆菌菌株包括rpoB基因核心区域81个碱基在内的588个碱基进行序列测定,其中利福平耐药株163株;利福平敏感株46株,及人工诱导的利福平耐药株3株。结果：有89．0％（145／163）的耐药株存在rpoB基因突变,而对照敏感株无突变。531位氨基酸突变率为49．1％;526位氨基酸突变率为17．8％;联合突变发生率为12．3％;还有2株细菌存在同义突变;未检测到发生缺失或插入突变的菌株。高耐药组（耐250μg/ml利福平）531位氨基酸的突变率显著高于低耐药组（耐50μg/ml利福平）,P＜0．05。结论：中国结核菌耐利福平菌株的rpoB基因突变的发生率约为90％,其中最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸,二者总体突变率是66．9％;利福平高耐药组531位氨基酸发生突变的几率高于低耐药组,插入和缺失突变在我国比较罕见;DNA序列分析对临床用药有指导意义。     

序列分析重庆地区耐利福平结核分支杆菌的rpoB基因突变

目的　研究重庆地区结核分支杆菌对利福平 (R)的耐受与rpoB基因突变的关系。方法　PCR扩增 6 7株分离自重庆地区肺结核患者的耐R结核分支杆菌的rpoB基因片段 (319bp) ;测定扩增片段的序列 ,并与野型株序列作对比分析。 结果　 6 7株临床分离的耐R株中 ,8株 (12 % )无变异 ,5 9株 (88% )有突变 ,突变涉及 8个氨基酸位点。突变有 14种类型 ,4 9株(83% )的突变为单个密码子取代 ,9株为双密码子取代 ,1株为 3个碱基 (一个密码子 )插入 ,未检出碱基缺失。突变高发位点为 5 31位 (37/ 5 9)密码子 ,其次为 5 16位 (13/ 5 9)和 5 2 6位 (7/ 5 9)。 3株菌在 4 77位的谷氨酸 (Glu) ,天冬氨酸 (Asp)突变为首次发现。结论　重庆地区结核分支杆菌耐利福平的发生与rpoB基因的突变密切相关 ,突变的类型与国外的报告基本相似。PCR扩增和产物测序将是临床检测结核分支杆菌耐利福平和耐多药的一种迅速、准确的方法     

噬菌体在结核分支杆菌研究中的应用

从 1 947年第一个分支杆菌噬菌体被分离到现在 ,陆续发现的分支杆菌噬菌体超过 2 50种。分支杆菌噬菌体是一种ＤＮＡ病毒 ,因对分支杆菌有特异性而得名。 1 947年 ,Ｇａｒｄｎｅｒ首次分离并命名了分支杆菌噬菌体。之后 ,不同种分支杆菌噬菌体陆续被分离 ,迄今为止 ,从不同来源的标本中分离的分支杆菌噬菌体已超过 2 50种。随着人类对噬菌体结构和功能的不断了解 ,噬菌体作为一种研究工具的功能正逐步被开发 ,一些相关机制正逐步被阐明。分支杆菌噬菌体Ｌ5、Ｄ2 9的全基因序列已被阐明 ,必将对噬菌体研究领域产生重要影响[1 ] 。分支杆菌噬…     

利用发光自显影技术快速筛选结核杆菌的利福平耐药性

目的　利用发光自显影技术建立一种快速、简便的结核分支杆菌利福平耐药性筛选方法。方法 利用重组的分支杆菌噬菌体可在活菌内增殖的原理,来检测结核杆菌在含利福平液体培养基中的生长状况;采用发光自显影方法检测发光强度并确定活菌数,对43份结核杆菌样本进行快速检测,并与L-J培养基检测结果进行对比。结果 发光自显影方法与L-J培养法相比,阳性率和真阴性率分别为95.7%、90%,最佳检测的细菌浓度为10⁷～10⁸CFU/ml,最佳药敏试验的利福平浓度为1mg/ml,利福平与结核分支杆菌孵育48小时后即可进行发光自显影分析。结论 生物发光方法可用于快速筛选结核分支杆菌的利福平耐药性,是一种简单、快速、灵敏、实用的利福平药敏筛选方法。     

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性

目的 应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)对利福平和异烟肼的耐受性,评价其临床应用价值。方法 应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增-基因芯片杂交的方法检测经常规药敏实验证实的30株Mtb利福平和异烟肼敏感株和50株耐利福平和异烟肼分离株的rpoB基因及katG和inhA基因突变,同时以PCR-直接测序法为对照。结果 应用PCR-基因芯片与基因测序方法检测30株Mtb利福平敏感株rpoB基因和异烟肼敏感株katG基因和inhA基因均为野生型。50株Mtb利福平耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析3株rpoB基因均为野生型,41株均为突变型;6株PCR-基因芯片与基因测序结果不一致。50株Mtb异烟肼耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析16株katG基因和30株inhA基因均为野生型,31株katG基因均为315位密码子突变,7株inhA基因均为15位突变型,其中2株为katG和inhA双重突变;3株katG和13株inhA PCR-基因芯片与基因测序结果不一致。结论 应用PCR-基因芯片方法可快速、有效地检出大多数Mtb耐多药分离株,指导临床用药。     

手工MGIT法检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药的效果评价

目的 评价MGIT手工荧光判读法在检测结核分枝杆菌耐药的基层应用价值。方法 以常规L-J比例法为参照方法,比较分析手工荧光MGIT液体药敏法检测300株临床结核分离株异烟肼和利福平药敏效果。结果 手工MGIT液体药敏法检测异烟肼和利福平灵敏度和特异度分别为94.7%和92.6%、95.6%和98.8%。两种药敏方法的异烟肼符合率95.7%,利福平符合率97.7%,两种方法检测异烟肼和利福平敏感性的差异无统计学意义(P>0.05)。液体药敏阳性报告时间平均7.6 d,比传统比例法报告时间提前20.4 d。结论 手工MGIT液体药敏法与常规L-J比例法检测异烟肼和利福平敏感性结果一致性高,能快速、准确检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药,适合基层推广。     

噬菌体生物扩增法与改良罗氏比例法在结核杆菌药敏检测中的比较

目的　采用噬菌体生物扩增法 (PhaB法)与传统比例法对结核分枝杆菌临床株进行利福平、异烟肼药物敏感试验,建立一种快速、敏感、特异、价廉的结核杆菌药敏试验方法。方法 分别采用噬菌体生物扩增法和改良罗氏比例法检测 52株结核分枝杆菌临床株对利福平、异烟肼的敏感性,将二者结果进行比较。结果 比例法检测结果为利福平耐药株的 34株中,噬菌体生物扩增法检测结果为 32株耐药,2株敏感 ;18株敏感株中噬菌体方法检测结果为 17株敏感,1株耐药。噬菌体方法检测结核菌对利福平的灵敏度为 94.1%(32/34),特异度为 94.4%(17/18),符合率为 94.2%(49/52)。比例法检测为异烟肼耐药的 38株菌中,噬菌体方法检测 35株耐药,3株敏感;14株异烟肼敏感株中,噬菌体方法检测 11株敏感,3株耐药。噬菌体方法检测异烟肼敏感性的灵敏度为 92.1%(35/38),特异度为 78.6%(11/14),符合率为 88.5%(46/52)。结论 用噬菌体生物扩增法可快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性,灵敏度高,与WHO推荐使用的比例法符合率高,可在 48h得到结果。异烟肼耐药性检测用噬菌体方法的特异度不如利福平,有待进一步探讨其原因。     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌方法学研究

目的建立噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件.方法应用分枝杆菌噬菌体感染结核分枝杆菌,比较各种检测条件对测定结果的影响,并将所建方法用于痰标本检测,结果与BIOTEC Lab公司产品比较.结果 1×109噬菌斑形成单位(PFU)/ml的噬菌体,37℃感染 60 min可检出200～500条/ml结核分枝杆菌.杀毒剂100 mmol /ml,室温作用5 min可完全灭活受试噬菌体.指示细胞浓度在1×108条/ml 时,形成的噬菌斑清晰,便于计数.加热灭活的细菌和指示细胞不被噬菌体感染.H37Rv、H37Ra和牛分枝杆菌参考菌株检测结果均为阳性,7种非分枝杆菌和16种常见非结核分枝杆菌检测结果为阴性,4种非结核分枝杆菌(偶然、胞内、金色、草分枝杆菌)在高浓度时(>1×105条/ml)检测结果为阳性.重复试验结果表明,本法批间和批内变异系数均<15%.痰标本氢氧化钠-半胱氨酸液化方式的阳性检出率为94%(49/52),显著高于氢氧化钠液化结果的62%(32/52,χ2＝15.06,P<0.01);预培养1 d的阳性检出率为65%(51/78),显著高于未预培养结果的40%(31/78,χ2＝18.05,P<0.01).临床标本检测结果表明,我们的试剂与进口试剂检测结果基本相同.结论噬菌体生物扩增法快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆菌的快速检测,但是测定条件的选择极为重要.     

110株结核分支杆菌对喹喏酮类药物的药敏试验分析

目的　分析110株结核分支杆菌对环丙沙星(CPLX)、氧氟沙星(OFLX)、左氧氟沙星(LVFX)、司帕沙星(SPFX)的药敏试验结果。方法 采用2倍稀释法,改良罗氏培养基进行药敏试验。结果 49例初治病人耐药率:CPLX4%,OFLX8%,LVFX2%,SPFX6%;52例耐多药菌株耐药率:CPLX52%,OFLX44%,LVFX22%,SPFX10%;110株结核分支杆菌总耐药率:CPLX26.2%,OFLX24.7%,LVFX10.5%,SPFX7.2%。交叉耐药率23.6%。结论 (1)初治结核病人,抗炎治疗尽量避免使用喹喏酮类药物;(2)复治结核病人要选择合理治疗方案,避免假联合用药;(3)应用喹喏酮类药物,剂量要足,疗程要够;(4)建议将喹喏酮类药列入结核分枝杆菌常规药敏试验中。     

结核分枝杆菌利福平基因型药敏和表型药敏检测结果不一致原因分析

目的: 探讨荧光PCR探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)与微孔板法检测利福平药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果不一致的原因,为临床基因型与表型药敏结果不一致提供解释。 方法: 收集2019年8月至2020年9月西安市胸科医院收治的分枝杆菌培养阳性的结核病患者资料,共2562例,筛选同时进行利福平熔解曲线法耐药基因检测和微孔板法表型药敏试验且结果不一致的菌株1294株。通过对rpoB基因测序,分析不一致结果与rpoB基因突变位点的相关性。 结果: 54例(4.17%,54/1294)熔解曲线法与微孔板法检测结果不一致的患者中,45例为熔解曲线法检测突变型而微孔板法检测敏感,8例为熔解曲线法检测野生型而微孔板法检测耐药,1例熔解曲线法检测出异质性耐药,未纳入分析。其中rpoB基因在507~512位密码子发生突变时,其与微孔板法结果不一致率最高,为70.59%(24/34),且不一致的菌株在微孔板法中最低抑菌浓度(MIC)的测定值多分布在≤1μg/ml。Leu511Pro是观察到不一致菌株最多的突变位点,占45.28%(24/53),其次观察到较多的突变位点是Leu533Pro,占所有不一致菌株的15.09%(8/53),Asp516Tyr 和His526Asn突变率均为5.66%(3/53)。8例熔解曲线法检测敏感而微孔板法检测耐药的菌株进行测序,结果显示rpoB基因区域未发生突变。结论: rpoB基因Leu511Pro、Leu533Pro、Asp516Tyr和His526Asn位点突变是造成临床结核分枝杆菌基因型与表型药敏结果不一致的主要原因,但其是否与低水平耐药机制有关还需要进一步研究。     

四种方法检测结核分枝杆菌耐药性结果的比较及方法评价

目的：比较噬菌体生物扩增法（PhaB）及分枝杆菌快速侦测系统（BacT—ALERT）测定结核杆菌（MTB）药物敏感度结果，研究其临床应用价值。方法：应用PhaB、BacT-ALERT检测200株MTB对异烟肼（INH）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）和利福平（RFP）的耐药性，并以传统的耐药性测定方法作为金标准，评价其敏感度、特异度和准确度。结果：以绝对浓度法结果为判断标准：PhaB检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为95．2％、88．3％和89．0％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为95．1％、97．5％和98．0％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、94、4％和94．5％，检测RFP的敏感度、特异度和准确度分别为95．7％、97．4％和97．0％；BacT—ALERT检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、97．2％和97．5％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为92．7％、94．3％和94．0％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、99．4％和99．5％，检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为87．0％、93．5％和92．5％。以比例法结果为判断标准：PhaB检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为58．3％、99．4％和94．5％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为88．1％、96．8％和95．0％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、94．4％和94．5％，检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为88．0％、96．7％和94．5％。BacT—ALERT检测INH的敏感度、特异度和准确度分别为83．3％、97．7％和95．5％，检测SM的敏感度、特异度和准确度分别为88．1％、94．9％和93．5％，检测EMB的敏感度、特异度和准确度分别为100．0％、98．8％和99．0％，检测RFP敏感度、特异度和准确度分别为78．0％、96．0％和91．5％。结论：PhaB法和BacT—ALERT法检测MTB耐药性均具有较高的敏感度、特异度和准确度，可作为MTB耐药性的快速检测方法。     

比例法测试结核分支杆菌药物敏感性的探讨

探讨在我国应用比例法测试结构分支杆菌药物敏感性的可行性以及与以往资料的可行性。方法用比例法和绝对浓度法测试了３６０株结核分支杆菌对四种抗结核药物的敏感性,对１９株结果有判别的菌株进行了ＭＩＣ测试,用国产和Ｓｉｇｍａ公司结核药对３０株分支杆菌分别进行了耐药性测定。