微RNA-22在甲状腺乳头状癌中的表达及与化疗敏感性的关系

目的 研究微RNA(miRNA,miR)-22在甲状腺乳头状癌组织、血清和细胞系中的表达及其与化疗敏感性的关系.方法 收集21例临床确诊为甲状腺乳头状癌病例资料、组织、血清样本,同时收集21例健康体检者和21例甲状腺结节患者血清样本作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应的方法检测miR-22在癌组织、癌旁组织、血清、人甲状腺正常细胞系和人甲状腺乳头癌细胞系中的表达并进行统计学分析,利用生物信息学软件预测miR-22的靶基因及参与的信号通路.结果 miR-22在癌组织中的表达显著低于癌旁组织,在癌患者血清中的表达显著高于健康体检者和甲状腺结节患者,在癌组织中的表达与血清中表达呈负相关(r=-0.851,P＜0.01).miR-22在T3～T4期癌组织中的相对表达量为0.45±0.08,低于T1～T2期的0.61±0.18(t=-2.809,P＜0.01),在N-期癌组织中的相对表达量为0.64±0.16,高于N+期的0.48±0.10 (t=2.789,P＜0.01);在T3～T4期患者血清中的相对表达量为12.76±1.60,高于T1～T2期的9.91±2.74(t=2.806,P＜0.01);在化疗高敏感组患者癌组织中的相对表达量为0.71±0.14,高于化疗低敏感组的0.42±0.13(t=4.575,P＜0.01).利用生物信息学软件预测SIRT1和HMGB1为miR-22的靶基因,其参与细胞内吞作用、肌动蛋白细胞骨架调节、丝裂原活化蛋白激酶和癌症等多个信号通路.结论 miR-22在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中的表达量显著降低,且与肿瘤T、N分期和化疗敏感性有关,但在血清中的表达量显著升高;miR-22参与多个信号通路,可能通过靶向调控SIRT1和HMGB1影响甲状腺乳头状癌的发生发展.     

ERCC1,p53和bcl-2表达与晚期非小细胞肺癌铂类化疗疗效的关系

目的研究核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1),抑癌基因p53(p53)和B细胞淋巴瘤因子2(bcl-2)基因的表达水平与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者铂类化疗疗效的关系。方法收集晚期NSCLC患者的肿瘤组织并制备组织芯片,进行ERCC1,p53和bcl-2基因的免疫组织化学染色,检测其在NSCLC组织中的表达情况;同时采集患者外周血检测其血清中ERCC1,p53和bcl-2蛋白的表达情况。根据RECIST肿瘤化疗疗效的评价标准评价患者的疗效,分析影响NSCLC患者铂类化疗疗效的因素及3种基因的表达情况和疗效的关系。结果 ERCC1阴性表达和阳性表达时的化疗有效率分别为55.81%和25.58%(P<0.01);bcl-2阴性表达和阳性表达时的化疗有效率分别为45.28%和25%(P<0.05);p53阴性表达和阳性表达时的化疗有效率分别为53.85%和29.79%(P<0.05)。以ERCC1阴性,同时bcl-2阴性和p53阳性表达的患者人数为最多,与其他各组相比差异有统计学意义(P<0.05),而其他各组人数差异无统计学意义(P>0.05);以ERCC1阴性表达同时bcl-2阳性表达和p53阴性表达的患者采用铂类化疗的有效率为最高,与其他情况相比差异有统计学意义(P<0.05);而ERCC1,bcl-2和p53基因均为阳性表达时的化疗有效率最差,与其他情况相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ERCC1,p53和bcl-2基因的表达水平可以作为预测NSCLC患者铂类化疗疗效和预后的指标。     

eIF4E在肺癌中的蛋白表达进展

真核翻译起始因子是帽依赖性翻译的限速因子。eIF4E在多种人类肿瘤中呈过表达,并且与促进细胞转化,肿瘤发生和转移有关。研究表明在肺癌中eIF4E蛋白的过表达在维持高水平癌蛋白中起着重要作用,可能是一个有效的分子标志之一。     

宫颈鳞状上皮癌化疗前后Bcl-2、eIF-4E和VEGF的变化

目的宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,严重威胁患者的生命安全.近年来随着分子生物学技术的发展,以癌基因的激活、抑癌基因的失活以及其相关蛋白表达异常在发病机制方面的研究日益受到重视并取得很大的进展.本实验目的在于探讨宫颈鳞状上皮癌(SCC)化疗效果与组织标本中的Bcl-2、eIF-4E及VEGF的关系.方法以肿瘤直径大于4cm的宫颈鳞状上皮癌患者48例(Ⅰb期12例,Ⅱ期36例)为对象,采用奈得铂、异环磷酰胺、硫酸培洛霉素(SIP疗法)治疗1～2个疗程,磁共振成像判断疗效;采用免疫组化法(SP法)测量组织标本中的Bcl-2、Eif-4及VEGF的阳性率.结果48例患者治疗1个疗程后,有效28例,无效20例,有效率58.8%,有效病例1疗程结束时肿瘤体积较治疗前明显缩小,Bcl-2及VEGF明显降低.结论1疗程结束后组织标本中的Bcl-2及VEGF的变化可以预测宫颈鳞状上皮癌术前化疗效果.     

阿托伐他汀对人非小细胞肺癌A549细胞化疗敏感性的影响

目的 探讨阿托伐他汀对人非小细胞肺癌A549细胞化疗敏感性的影响.方法 人非小细胞肺癌A549细胞预先暴露于浓度为O、20、40 nmol/L阿托伐他汀的培养液中(对照组、20 nmol/L组、40 nmol/L组),实验重复3次,磺酰罗丹明B(SRB)法研究常用化疗药物紫杉醇、吉西他滨和顺铂对肿瘤细胞增殖的影响.结果 顺铂40 nmol/L组的半抑制浓度(IC50)显著低于对照组和20 nmol/L组[(1.37±0.10) mg/L比(1.89±0.06)、(1.81±0.04)mg/L,P＜0.01].紫杉醇和吉西他滨不同组间IC50比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿托伐他汀体外能增加人非小细胞肺癌A549细胞对顺铂的敏感性,合用有助于降低化疗的不良反应.     

后程适形放疗同期化疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的观察与护理

非小细胞肺癌（non small cell lung cancer,NSCLC）约占肺癌总数的80％,就诊时40％-50％为Ⅲ期,绝大多数失去手术机会,多选择放射治疗和化疗。NSCLC对放射治疗和化疗敏感性差,二者单独治疗的疗效不理想。近年来放射治疗加化疗的综合治疗成为研究的热点。笔者所在医院自2002年1月至2004年1月以后程适形放疗同期顺铂（PDD）加依托泊（VP16）化疗治疗Ⅲ期NSCLC29例,取得较好疗效。现将同步治疗中的毒副反应及相关的护理体会总结如下。     

晚期非小细胞肺癌NP方案化疗相关性白细胞减少与化疗疗效关系

目的：探析采用NP方案治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）产生的相关性的白细胞减少（CIL）对于评价疗效的作用。方法：回顾98名2011年6月~2013年6月在我科进行NP化疗的晚期的NSCLC患者临床情况,按照CIL发生的情况分为ⅰ组（CIL无发生）、ⅱ组（CIL程度中轻）和ⅲ组（发生CIL严重）三组。并对各组患者的总有效率（TRR）作比较,分析CIL和疗效评价关系。结果：ⅱ组治疗RR明显高于ⅱ组,而ⅲ组RR又明显比ⅱ组要高（P〈0.05）,随着CIL程度加重,晚期NSCLC患者的疗效越好。结论：CIL情况能反映行NP方案治疗晚期NSCLC疗效,因此能够将其用于疗效预测和评价化疗药作用等内容,具有前瞻预测的临床作用,值得关注。     

风疹病毒E1基因的克隆及原核表达

目的构建风疹病毒E1基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达。方法通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)风疹病毒E1基因高活性片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后连接于原核表达载体PET-28a(+),并于大肠杆菌中诱导目的重组蛋白表达。结果成功扩增出399bp的目的基因,有效表达出E1重组蛋白。结论在大肠杆菌中成功表达风疹病毒E1基因重组蛋白,为风疹病毒的血清学检测提供了一种新的抗原。     

S100及S100A4蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中S100和S100A4蛋白的表达,探讨S100和S100A4在NSCLC侵袭和转移中的作用.方法 应用免疫组化EnVision法检测91例非小细胞肺癌及33例NSCLC癌旁正常肺组织中S100和S100A4蛋白的表达水平.结果 NSCLC组织中S100和S100A4的阳性表达率均高于癌旁正常肺组织(P<0.05);S100和S100A4的表达与患者年龄无关(P>0.05);S100的阳性表达与肿瘤大小有关(P<0.05),而S100A4的阳性表达率与肿瘤大小无关(P>0.05);有淋巴结转移者S100的阳性表达率高于无淋巴结转移者(P<0.05);生存时间在1a内患者的S100和S100A4阳性表达率高于存活1a以上者(P<0.05).在鳞癌患者中,Ⅲ期患者的S100和S100A4的阳性表达率均高于Ⅰ期患者(P<0.05),有淋巴结转移者S100A4的阳性表达率高于无淋巴结转移者(P<0.05);在腺癌患者中,Ⅲ期患者的S100的阳性表达率高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).结论 S100和S100A4可能与NSCLC的侵袭、转移和预后相关,可作为评估NSCLC的侵袭、转移和预后的参考指标之一.     

非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与ERCC1基因表达水平间的关联

目的:探讨EGFR基因发生突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者对铂类药物响应率较高的原因。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测50例NSCLC患者福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)样本EGFR基因突变以及ERCC1基因表达水平。结果:12/50(24.0%)的NSCLC患者癌组织中检测出EGFR基因激活突变,且在女性、腺癌、无吸烟史患者中的突变比例较高,分别为33.3%、28.1%、39.1%;未检测到耐药突变。ERCC1表达量的中位值为42.9(范围为7.5～124.8)。EGFR基因发生突变患者的癌组织中ERCC1基因表达水平显著低于EGFR基因为野生型的患者(P<0.01),但ERCC1基因表达水平在不同类型EGFR基因突变患者间无显著性差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者癌组织中EGFR基因突变与ERCC1基因表达水平之间的关系,可能是EGFR基因突变患者对铂类药物化疗响应率较高的原因之一。     

金属硫蛋白在动物体内的功能及其基因表达调控

金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)是一类富含金属和巯基的低分子量蛋白质,在动物体内金属元素的代谢、清除自由基、应激防护等方面发挥重要作用。MT基因的表达是通过MT基因启动子上的几种反应元件由许多生化介质引发的。综述了MT在动物体内的功能及其基因表达的调控作用及主要机制。     

SOD基因表达与衰老的相关性

目的　探讨SOD活性及SOD基因表达与衰老的相关性。方法　选用快速老化模型鼠 (SAM -P/ 8)进行试验 ,采用生物化学及RT -PCR方法 ,从亚细胞及分子水平上测定衰老过程中丙二醛 (MDA) ,超氧化物歧化酶(SOD)及其基因表达的变化情况。结果　SAM -P/ 8肝组织中SOD活性随着年龄的增加而逐渐降低 ;而MDA含量随年龄的增加逐渐增高 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。不同月龄SAM -P/ 8肝细胞中Cu -ZnSOD基因表达随年龄的增加Cu -ZnSODmRNA逐渐降低 (P <0 0 1)。结论　SOD活性与SOD基因表达的增龄变化有明显的相关性 ,SOD基因转录活性的降低可能是导致SOD活性降低的重要原因 ,表明SOD在衰老过程中扮演着重要角色。     

真核细胞转录起始因子4E表达与乳腺癌血管生成及淋巴结转移的关系

目的　探讨乳腺癌中真核细胞转录起始因子 4E(eIF - 4E)基因表达与血管生成及转移的关系。方法　以Western-blot法检测 5 7例手术切除乳癌标本匀浆中eIF - 4E基因表达 ,免疫组化法检测乳癌组织微血管密度(MVD)表达 ,结合临床资料进行分析。结果　 34例淋巴结阳性组织中eIF - 4E水平上调 10 .11± 0 .30 ,MVD升高32 .2 8± 7.4 2 ,与淋巴结转移阴性组 (5 .94± 0 .13,2 4 .6 7± 8.12 )比较差异显著 (t=4 .37、2 .5 1,P <0 .0 5 )。相关分析表明 ,eIF - 4E表达与乳癌血管生成及淋巴结转移正相关。结论　eIF - 4E基因通过调控乳癌血管生成参与淋巴结转移。eIF - 4E表达可作为乳癌淋巴结转移的判定因素     

人WWOX基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的:克隆人WWOX基因并构建其真核表达载体。方法:从人正常卵巢组织中提取总RNA,经逆转录聚合酶链反应扩增人WWOX基因,并构建其真核表达载体,经测序鉴定后转染人卵巢癌细胞系A2780。结果:成功克隆了人WWOX基因,与Genbank提供的序列(NM-016373)对比显示完全一致。真核表达载体pCMV-WWOX转染人卵巢癌细胞系A2780后,癌细胞的WWOXmRNA的表达水平显著增高(P<0.01)。结论:从人正常卵巢组织中成功克隆了人WWOX基因,为进一步研究WWOX在卵巢癌发生和进展中的作用及其靶向基因治疗奠定了实验基础。     

E9基因的克隆及蛋白的原核表达和纯化

目的通过分子生物学的手段从库蚊幼虫中获得E9酯酶基因,构建表达载体PET-32aE9,实现在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白并将其纯化。方法通过RT—PCR技术从库蚊幼虫中特异性扩增E9酯酶基因,将目的基因通过基因连接反应与PET-32a载体连接,重组质粒进行基因序列测序,构建PET～32a和目的基因的高表达质粒,异丙基-B—D-硫代半乳糖（isopropylthiogalactoside,IPTG）诱导表达,NP柱纯化,Western．blot法检测纯化的目的蛋白。结果成功获得库蚊幼虫E9酯酶基因,基因测序显示基因突变率为0,表达质粒构建双酶切（BamHI和NcoI）可见目的基因的条带,经IPTG诱导表达,获得带HIS标签的融合蛋白E9,相对分子质量为80．6×10^3,经Western—blot分析证实抗原性正确。结论E9酯酶基因可以通过基因工程手段获得体外高效表达,为其功能的研究、抑制剂的筛选以及农药污染的环境治理提供基础。     

染矽尘大鼠毒理效应相关差异基因表达谱的研究

目的 研究染矽尘大鼠毒理效应相关差异基因表达谱.方法 应用气管暴露法对雄性Wistar大鼠进行二氧化硅(50 mg/ml)染尘,对照组大鼠气管内灌注1ml灭菌生理盐水.染尘后第14天处死大鼠,取肺组织.应用Illumina激光共聚焦光纤微珠基因芯片技术,研究大鼠肺组织差异基因表达谱,采用因注释、富集数据库(the database for annotation,visualization and integrated discovery,DAVID)生物信息学分析工具,对差异基因的基因功能和生物学通路进行富集统计学分析.结果 检测出的有效基因共22107个,筛选出染矽尘组与对照组的差异基因共1567个,其中上调基因为765个,下调基因为802个.与毒理效应相关的差异基因有461个,其中上调基因为285个,下调的有176个.Real-time PCR实验验证了血红素加氧酶(HMOX1)、过氧化物歧化酶(SOD2)基因上调的趋势和基因芯片结果是一致的.结论 二氧化硅粉尘诱导的大鼠肺组织纤维化中起毒理效应的大量相关基因上调或下调,二氧化硅所致的肺纤维化可能存在复杂的基因网络调控系统,其中,毒理机制是肺纤维化发生发展过程中的重要一环.     

RhoC及PTEN在非小细胞肺癌中的表达及临床意义的探讨

目的 观察Ras同源性原癌基因C（RhoC）及张力蛋白同源的磷酸酶基因（PTEN）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达程度及其与临床病理学之间的关系,探索RhoC与PTEN在肺癌发生及演变过程中的作用机制及两者之间的关系,为非小细胞肺癌的发生机制提供理论基础,并为NSCLC的早期诊断提供新思路.方法 （1）试验分组：60例非小细胞肺癌标本及40例正常对照肺组织.（2）采用免疫组织化学方法检测RhoC及PTEN表达情况及其与临床病理学之间的关系. 结果 60例NSCLC组织中, RhoC蛋白阳性表达率分别为68.33%（41/60）,显著高于正常肺组织,RhoC在NSCLC组织中阳性表达率与吸烟史、年龄及组织学类型无关,而与癌组织的分化程度、临床分期密切相关.PTEN在非小细胞肺癌组织中的阳性率为36.70%,显著低于非肺癌组织的阳性率80.00%（P〈0.01） PTEN的表达与肺癌患者的细胞分化程度、TNM分期、肿瘤直径相关.RhoC和PTEN两者表达强度之间呈显著负相关（P〈0.01）.结论 （1）在非小细胞肺癌组织中RhoC的高表达与PTEN的低表达密切相关,可能参与了NSCLC的演进.（2）PTEN基因蛋白表达缺失在不同类型和不同分化程度的非小细胞肺癌发生、发展中存在重要意义,可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的参考指标.