不同灵芝提取物的美白及抗衰作用研究

目的探讨不同灵芝提取物的美白和抗衰作用,选择适合于化妆品开发的原料。方法以清除羟自由基、清除超氧阴离子、清除DPPH作用以及酪氨酸酶抑制活性为评价指标,研究灵芝水提取物和醇提物的抗衰和美白活性。结果 6种灵芝的醇提物和水提物对DPPH都具有很强的清除作用,其中ZLd水提物作用最强,IC50为0.03 g·L-1。仅ZLd水提物和醇提物同时具有清除超氧阴离子的作用。ZLb、ZLc及ZLd的提取物同时具有清除羟自由基的作用,其中ZLd的水提物对羟自由基清除作用最好,IC50值为7.14 g·L-1。6种灵芝的醇提物具有很强的酪氨酸酶抑制活性,其中ZLd作用最强。而6种灵芝水提物的酪氨酸酶抑制活性较醇提物弱,在10 g·L-1浓度时ZLd具有较高的活性,抑制率为66.77%。结论 ZLd适合成为抗衰及美白化妆品开发的原料。     

薄层生物自显影技术比较新疆2种洋甘菊抗氧化活性

目的:比较新疆2种洋甘菊——母菊和罗马洋甘菊抗氧化活性成分差异.方法:采用薄层-生物自显影技术,以1,1-二苯基苦基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基为实验模型,经薄层扫描获得各抗氧化成分的峰面积,从而对2种洋甘菊的挥发油提取物、黄酮提取物进行抗氧化活性成分的分析,以总峰而积大小为指标比较不同提取物的抗氧化能力,并与2种洋甘菊黄酮提取物总的抗氧化活性进行比较.结果:母菊挥发油提取物显现烯炔双环醚等4个白色抗氧化斑点,罗马洋甘菊挥发油提取物显现1个白色抗氧化斑点,薄层扫描结果表明母菊挥发油提取物抗氧化斑点峰而积大于罗马洋甘菊挥发油提取物;2种洋甘菊黄酮提取物紫外-可见分光光度法抗氧化活性测定结果表明,母菊清除50％ DPPH自由基的质量浓度为0.66g·L-1,罗马洋甘菊清除50％ DPPH自由基的质量浓度为0.33 g·L-1;2种洋甘菊黄酮提取物薄层生物自显影实验结果表明,母菊黄酮提取物显现芹菜素、芹苷元-7-葡萄糖苷等7个淡黄色抗氧化斑点,罗马洋甘菊黄酮提取物显现芹菜素,芹苷元-7-葡萄糖苷等8个淡黄色抗氧化斑点,薄层扫描结果表明罗马洋甘菊黄酮提取物抗氧化斑点峰面积大于母菊黄酮提取物.结论:2种洋甘菊挥发油提取物抗氧化活性TLC差异显著,母菊挥发油提取物抗氧化活性强于罗马洋甘菊挥发油提取物;母菊挥发油提取物中已知抗氧化活性成分为烯炔双环醚,其他3个抗氧化活性成分以及罗马洋甘菊挥发油提取物中1个抗氧化活性成分均为未知化合物,有待进一步确定;鉴于2种洋甘菊挥发油提取物抗氧化活性斑点数差异显著,可应用于2种洋甘菊的鉴别区分.2种洋甘菊黄酮提取物抗氧化活性测定结果、薄层生物自显影实验结果一致,母菊、罗马洋甘菊黄酮提取物都具有较强的抗氧化活性,且罗马洋甘菊黄酮提取物的抗氧化活性强于母菊黄酮提取物;2种洋甘菊黄酮提取物中均含已知抗氧化活性成分芹菜素、芹苷元-7-葡萄糖苷,母菊黄酮提取物中其他5个抗氧化活性成分以及罗马洋甘菊中其他6个抗氧化活性成分均为未知成分,有待进一步确定.该方法为进一步鉴定洋甘菊抗氧化活性成分奠定基础.     

木蹄复方体外抗肿瘤作用的实验研究

目的:筛选木蹄复方抗肿瘤活性提取物,初步分析其化学成分并观察其体外抗肿瘤效应.方法:常规水提和醇提的方法提取复方中水溶和醇溶性组分.MTT法测定木蹄复方水提取物(distilled water extract of compound Fomes fomentarius,WECF)和木蹄复方乙醇提取物(ethanol extract of compound F.fomentarius,EECF)对体外培养肿瘤细胞A549,Hela,QGY生长的抑制效应.系统预试法分析WECF化学组成.流式细胞术检测WECF对A549细胞凋亡的影响.结果:WECF对A549,Hela,QGY 3种细胞的IC50分别为(0.28±0.02),(0.40 ±0.06),(0.28±0.05) g·L-1;EECF对3种细胞的IC50分别为(0.50±0.04),(0.50±0.03),(0.60 ±0.06)g·L-1,WECF对肿瘤细胞的生长具有较强的抑制作用.WECF含有有机酸,氨基酸、多肽和蛋白质,糖、多糖和苷类,皂苷,内酯、香豆素及其苷类,植物甾醇、三萜成分以及挥发油和油脂,多糖含量为(16.1±0.5)％.WECF对A549,Hela,QGY,DU145,MDA-MB-435S,SGC-79016种细胞的IC50分别为0.29,0.45,0.32,0.32,0.83,0.23g·L-1; WECF 1 g·L-1作用于A549 24 h后,细胞凋亡率为22.0％.结论:WECF具有较强的体外抗肿瘤效果,对多种肿瘤细胞的生长具有非常明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡.     

灵芝三萜化合物的抗肿瘤靶点预测与活性验证

研究发现灵芝三萜类化合物具有抗肿瘤活性,但其作用靶点尚不清楚,该试验主要研究灵芝三萜类化合物的抗肿瘤活性并对其可能的作用靶点进行预测。采用Discovery Studio软件的Lib Dock模块,以灵芝子实体中的26种三萜类化合物作为配体,分别与抗肿瘤作用明确的11个靶点蛋白进行分子对接,获得对接的打分结果,评判配体与靶点蛋白受体结合的亲和力,从而进行灵芝三萜类化合物抗肿瘤的虚拟筛选,探讨可能的作用靶点。同时,MTT实验检测26种灵芝三萜类化合物对5种肿瘤细胞的抑制能力,计算IC_(50),以此反映化合物的抗肿瘤活性。对接结果表明,对接位置数目大于5,且对接得分高于100,可以作为判断化合物是否具有活性的阈值,据此筛选出8种灵芝三萜类化合物可能具有抗肿瘤活性,其中5个具有多靶点作用的三萜成分。MTT细胞实验显示,灵芝酸Y对肺癌细胞H460显示了一定的抑制活性,IC_(50)为22.4μmol·L~(-1),其次是7-oxo-ganoderic acid Z2,IC_(50)为43.1μmol·L~(-1)。其他三萜类化合物对被测肿瘤细胞株未显示活性或活性很弱。该研究建立的分子对接虚拟筛选方法可用于灵芝抗肿瘤活性成分的初步筛选,通过该方法的筛选,结合MTT细胞毒活性实验结果,发现灵芝酸Y具有抗肿瘤,尤其抗肺癌开发的潜在可能性,7-oxo-ganoderic acid Z2和ganoderon B具有一定的抑制活性,其抗肿瘤作用有待于进一步深入研究,该研究结果可为抗肿瘤药物的研制提供参考。     

2种当归芍药散提取物的镇痛活性与化学成分差异分析

目的:比较当归芍药散水提取物和50%乙醇提取物的镇痛活性与化学成分差异,为其临床合理应用和进一步探讨其物质基础提供依据。方法:采用水回流提取和50%乙醇超声提取方法,制备2种当归芍药散提取物,以醋酸致痛小鼠模型和缩宫素诱导的拟痛经小鼠模型评价二者的镇痛活性;并采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)和硫酸-苯酚法分别对2种当归芍药散提取物中的化学成分进行分析归属和总糖含量测定。结果:当归芍药散水提物2.5,10 g·kg-1及醇提物10 g·kg-1可显著或非常显著减少醋酸和缩宫素诱导的小鼠扭体次数,水提物2.5 g·kg-1抑制率高于醇提物2.5 g·kg-1;HPLC-DAD法可检测到当归芍药散提取物的20个主要指纹峰,水提物中来自于芍药的4个成分的色谱峰面积和总多糖含量高于相应的醇提物。结论:当归芍药散水回流提取物的镇痛活性强于50%乙醇超声提取物,与其所含大极性成分和多糖含量有关。     

超临界CO_2萃取法和醇回流法提取灵芝中三萜类成分的比较

目的:比较超临界CO2流体萃取法(CO2-SFE)和醇回流提取法提取灵芝中三萜类成分的优劣。方法:通过HPLC图谱、RP-HPLC法测定的灵芝酸B含量、可见分光光度法测定的灵芝三萜含量、固形物含量等4个指标综合评价这两种提取方法。结果:超临界CO2流体萃取法和醇回流提取法这两种方法得到的三萜类成分的色谱图具有相似的峰形,灵芝三萜和灵芝酸B含量相近,固形物含量以醇回流法较高。结论:超临界CO2流体萃取法与传统的醇回流提取法提取效果相似,可以取代醇回流提取法提取灵芝子实体中三萜类成分。     

牛贝消核提取物对耐多药结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的体外抑菌作用的研究

目的研究不同工艺制备的中药复方牛贝消核提取物的体外抑菌活性,为制备抗结核中成药制剂提供实验基础。方法制备分别含50,100,200 g·L-1牛贝消核水提取物、醇提取物的改良罗氏培养基,并分别制备含1,10μg/ml异烟肼(Isonicotinic acid hydrazide,INH)和50,250μg·ml-1利福平(Rifampicin,RFP)的改良罗氏培养基为对照,将3株耐多药结核分枝杆菌分离株、牛结核分枝杆菌和4株非结核分枝杆菌分别接种于含药的改良罗氏培养基中,置37℃培养4周,测定其最低抑菌浓度(MICs)。结果牛贝消核水提取物对这8株供试菌的MICs均为200 g·L-1;醇提取物对牛结核分枝杆菌和母牛分枝杆菌的MICs均为100 g·L-1,对3株耐多药结核分枝杆菌分离株、胞内、瘰疬、偶发分枝杆菌的MICs均为200 g·L-1。结论牛贝消核水提取物和醇提取物对敏感或耐药的结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌均有不同程度的抑制作用,醇提取物的抑菌活性比水提取物略强。     

灵芝孢子中抗肿瘤成分的提取与分离

目的 :检测不同破壁率的灵芝孢子的醇提效果并用色谱技术对醇提物中的抗肿瘤成分进行分析。方法 :乙醇为溶剂对灵芝孢子粉进行振荡浸提 ,醇提物依次用硅胶柱和高效液相色谱分析 ,以各部分对Hela细胞的毒性作为其抗肿瘤活性的指标。结果 :未破壁孢子 ,60%～80%及 99%破壁率孢子的醇提率分别为5% ,25% ,33%。99%破壁率灵芝孢子的醇提物经硅胶柱分离 ,氯仿洗脱部分对Hela细胞无毒害作用 ;甲醇洗脱部分的抗肿瘤活性约为乙酸乙酯洗脱部分的 34倍 ;甲醇洗脱部分经高效液相色谱分析 ,得到 2种活性较强且组成较为简单的混合物(Ⅱ1和Ⅱ3 )。结论 :灵芝孢子破壁后醇提物含量远高于未破壁孢子 ;甲醇 水洗脱系统可用于灵芝孢子醇提物中抗肿瘤活性成分的RP HPLC分析。     

灵芝甾醇类活性成分及其抗肿瘤作用机制的研究进展

目前关于灵芝抗肿瘤的研究,多集中在多糖和三萜类成分的研究,甾醇类成分很少引起人们的注意,但笔者认为甾醇、三萜和多糖共同构成灵芝抗肿瘤的物质基础。甾醇的抗肿瘤作用不容忽视,多种甾醇类单体成分报道具有抗肿瘤活性,如麦角甾醇、过氧化麦角甾醇等;在甾醇组分(多个有效单体成分构成)层次上研究灵芝抗肿瘤物质基础,更符合中医药理论体系。文章对近年来灵芝中发现的甾醇类活性成分及其抗肿瘤作用的机制进行了综述。     

9种蓼科植物抗菌活性

目的:研究9种蓼科植物的体外抗菌活性.方法:采用纸片扩散法和多孔板法研究9种蓼科植物的不同提取物对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs-SA)的抑制活性.结果:四季红甲醇提取物和四季红乙酸乙酯提取物质量浓度在50 g·L-1对SA,MRSA和ESBLs-SA的抑菌圈直径较大,其中四季红乙酸乙酯提取物对3种菌均有抑制作用,MIC全部为0.062 5 g·L-1;多孔板法中,辣蓼乙酸乙酯提取物(IC50 0.45 g·L-1)活性最好.结论:实验证明蓼科植物提取物对SA,MRSA,ESBLs-SA有较好的抑制作用,尤其是四季红和辣蓼的抗菌活性较显著.     

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉乙醇提取物对体外培养的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响.方法:选用大鼠HSC-T6进行体外培养,用MTT法测定0.25,0.5,0.75,1.0 g·L-1草苁蓉乙醇提取物作用12,24,36,48 h后对细胞增殖的抑制作用;应用Annexin V与碘化丙啶(PI)双染色荧光显微镜及透射电镜技术观察药物作用后细胞形态学改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率的变化.结果:①MTT实验表明草苁蓉乙醇提取物能抑制HSC-伪细胞增殖,并显出量效和时效关系.0.75 g·L-1草苁蓉刺激12,24,36,48 h对HSC-T6增殖的抑制率分别为(44.58 ±1.42)％,(51.56±1.34)％,(63.83±0.99)％,(74.77±3.40)％(P＜0.05).②荧光显微镜及透射电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC -T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变,细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等.③草苁蓉处理后HSC-T6被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,且表现出明显量效关系.0.75 g·L-1草苁蓉乙醇提取物改变HSC-T6周期分布,使G0/G1期细胞由(50.33±0.80)％增至(61.46±1.07)％,表现出G0/G1期阻滞;同时诱导HSC-T6凋亡,凋亡率由(1.44±0.43)％增至(14.20±0.98)％(P＜0.05).结论:草苁蓉乙醇提取物可明显抑制HSC-T6细胞增殖,其作用可能与诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

灵芝菌对茯苓药材的生物转化研究

目的：利用灵芝菌对中药材茯苓药材进行固态生物转化,研究转化产物中总多糖和总三萜量的变化情况。方法：采用微波法提取茯苓及转化产物中的总多糖并采用苯酚-硫酸法进行含量测定;采用超声法提取茯苓及转化产物中总三萜并用香草醛-高氯酸法进行含量测定。结果：经生物转化后产物中的总多糖含量明显高于未经转化的茯苓药材（P<0.01）,而总三萜含量明显升高（P<0.01）,说明灵芝菌的生物转化过程改变了茯苓药材的原始特性;茯苓对灵芝生长具有促进作用,表现为灵芝菌丝生长旺盛未受抑制、转化产物中总多糖及总三萜含量显著高于茯苓原药材。结论：利用灵芝菌对中药茯苓进行生物转化来提高总多糖和总三萜含量,具有方法简单、成本低等优点,在中药现代化中有较高的应用价值。     

Anti-angiogenic and inhibitory activity on inducible nitric oxide production of the mushroom Ganoderma lucidum

Fresh fruit bodies of Ganoderma lucidum were extracted with 70% ethanol at room temperature. The extract (GL) showed significant anti-angiogenic activity, which was detected using a chick embryo chorioallantoic membrane assay. GL significantly inhibited LPS-induced NO production in RAW 264.7 macrophages. These results support the anti-tumor effect of Ganoderma lucidum.     

锁阳中粗多酚和粗多糖抗氧化活性的比较△

目的:比较锁阳粗多酚和粗多糖的抗氧化活性,为锁阳入药提供依据.方法:100 g锁阳粉末提取粗多酚和粗多糖.采用超声波辅助乙醇法提取粗多酚,依次用石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯和正丁醇进行萃取.同时用水提醇沉法提取粗多糖.用DPPH·法和ABTS+法进行锁阳粗多酚和粗多糖的抗氧化活性检测.结果:多酚粗提物中的总酚含量达到了922.9 mgGAE·g-1(没食子酸当量),而多糖粗提物中的多糖含量为366.6 mg·g-1(葡萄糖当量).DPPH.法检测锁阳粗多酚和粗多糖的IC50值分别为79.3 μg· mL-1和145.6 μg· mL-1.经ABTS+法检测,二者的TEAC值分别为2.12 mmol·g-1和0.69 mmol·g-1.结论:锁阳粗多酚的抗氧化活性远高于锁阳粗多糖.     

灵芝和紫芝对照提取物在灵芝样品指纹图谱分析的应用

目的使用赤芝对照提取物(CZERS)、紫芝对照提取物(ZZERS)对所收集18批次灵芝药材进行高效薄层色谱(HPTLC)以及高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析。方法使用HPTLC指纹图谱方法,高效娃胶预制板,以氯仿-乙腈-甲醇-甲酸=13:2:0.5:0.53次展开和环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=15:5:0.5:0.52次展开的方法分别分析灵芝三萜酸类和甾醇类成分。使用HPLC指纹图谱方法,Kromasil 100-5 C18柱(4.6mm×250 mm,5μm);流动相:A-乙腈,B-0.02%嶙酸;梯度洗脱程序:0~40min,29%→33%A,40-70 min,33%→65%A,70-105 min,65%→100%A;105-120 min,100%A;检测波长244 nm(DAD检测器);流速1.OmL·min^-1;进样量10μL;柱温25℃。结果使用对照提取物(ERS)和指纹图谱分析方法,可以区分赤芝,无柄灵芝和紫芝。不同种类和生长方式的灵芝成分存在差异。结论灵芝品种繁多,分野生和人工培养,而人工培养的培养基又有不同,导致不同灵芝个体间成分存在差异。使用特定品种的ERS和指纹图谱分析方法更加适合灵芝多成分整体质量控制的需求。     

AB-8大孔吸附树脂同时分离纯化毛冬青总黄酮、总皂苷工艺

目的: 研究大孔吸附树脂纯化毛冬青总黄酮、总皂苷的工艺条件。方法: 以总黄酮、总皂苷的吸附率和转移率为指标,考察上样药液质量浓度、pH、树脂径高比、树脂药材比、洗脱乙醇体积分数等影响因素。结果: 毛冬青纯化工艺为上样药液质量浓度0.4g ·mL^-1,药液pH 4.5,药材-树脂比1∶8,树脂径高比1∶15,分别用12 BV水洗,10 BV 30%乙醇洗脱,10 BV 70%乙醇洗脱得总皂苷。结论: 采用大孔吸附树脂可较好地纯化毛冬青总黄酮与总皂苷,纯化后毛冬青总黄酮含量、总皂苷均达50%以上。     

药用拟层孔菌子实体提取物的抗肿瘤活性研究

目的:测定药用拟层孔菌子实体的石油醚粗提物、乙酸乙酯粗提物和甲醇粗提物的总三萜及总甾醇含量;研究3种粗提物及从乙酸乙酯粗提物中分离得到的三萜类单体化合物的体内抗肿瘤活性。探讨其抗肿瘤活性与总三萜和总甾醇含量的关系。方法:通过分光光度法测定3种粗提物的总三萜和总甾醇含量。通过H22荷瘤小鼠移植模型的体内抗肿瘤实验,观察该真菌子实体的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物及三萜类单体化合物的抗肿瘤活性进行评价。结果:乙酸乙酯粗提物中总三萜含量和总甾醇含量最高,石油醚次之。从乙酸乙酯层分离得到5个单体化合物:去氢齿孔酮酸,3-酮基-去氢硫色多孔菌酸,去氢齿孔酸,阿里红酸A和阿里红酸C。在体内实验中,乙酸乙酯层抑瘤率效果最佳,当浓度达到1 000mg·kg~(-1)时抑瘤率为64.65%,与阳性药5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抑瘤率(59.98%)接近,并且免疫器官指数均有一定的变化。单体化合物2(3-酮基-去氢硫色多孔菌酸)抑瘤率为75.13%,与阳性药物CTX(81.76%)抑瘤率接近,比阳性药5-Fu高。其余4种单体化合物也有一定作用效果。结论:乙酸乙酯提取物及这5种单体化合物能有效抑制肿瘤的生长,并且对机体的免疫力有较好的促进作用,该5种单体化合是药用拟层孔菌子实体的抗肿瘤活性成分,药用拟层孔菌的抗肿瘤活性成分可能是三萜类化合物。     

女贞子总三萜的制备及抗氧化活性研究

目的：从中药女贞子中制备总三萜并评价总三萜抗氧化活性。方法：用甲醇浸提,石油醚、乙酸乙酯先后萃取,并用乙醇热溶冷沉纯化制备总三萜,并测试总三萜抗氧化活性。结果：总三萜含量高,抗氧化活性高。结论：该制备方法简单,总三萜抗氧化活性显著高于单体三萜的抗氧化活性。     

番荔枝皮化学成分及其抗肿瘤活性的研究

目的:研究番荔枝Annona squamosa的化学成分,并对分离化合物进行活性筛选.方法:综合运用各种色谱方法分离纯化番荔枝中的化学成分;采用NMR等波谱方法鉴定其结构;运用SRB法测定化合物对肿瘤细胞体外增殖能力的抑制作用.结果:从番荔枝皮乙醇提取物中分离得到11个化合物,分别是annosquamosin C(1),15,16-epoxy-17-hydroxy-ent-kau-ran-19-oic acid(2),16,17-dihydroxy-ent-kauran-19-oic acid(3),annosquamosin A(4),ent-kaur-16-en-19-oic acid (5),19-nor-ent-kauran-4-ol-17-oic acid(6),16-hydroxy-ent-kau-ran-19-oic acid(7),ent-15β-hydroxy-kaur-16-en-19-oic acid (8),annosquamosin B (9),ent-16β,17-dihydroxykauran-19-al(10),16,17-dihydroxy-ent-kauran-19-oic acid methyl ester(11).抗肿瘤活性实验表明,化合物1,2,3,5,9对人肺癌95-D细胞的体外增殖能力均具有不同程度的抑制作用,化合物5的活性最强,IC50为7.78 μmol·L-1;化合物2,5,9对人卵巢癌A2780细胞有抑制作用,其中化合物2和9的抑制作用较强,IC50分别为0.89,3.10 μmol·L-1.结论:化合物2,8,11分别为首次从该科、该属和该种植物分离得到;化合物5对人肺癌95-D细胞的抑制作用较强;化合物2和9对人卵巢癌细胞A2780的抑制作用较强.     

臭茉莉叶总黄酮提取工艺优化及月周期变化研究

目的:采用超声辅助正交试验法优化臭茉莉叶总黄酮的提取工艺,并进一步研究臭茉莉叶中总黄酮1年内每月含量变化趋势,探讨臭茉莉叶最佳采收时间。方法:以提取液中总黄酮含量为指标,选择乙醇浓度(%)、超声时间(min)、料液比、提取温度(℃)等为考察因素,采用正交试验法L9(34)确定臭茉莉叶提取液中总黄酮的最优工艺。结果:臭茉莉叶所含总黄酮最优提取工艺条件:乙醇浓度70%、超声时间60min、料液比1∶25、提取温度50℃。3月份总黄酮/药材量是0.0235mg·g-1为最高。结论:该提取工艺快捷以及操作简便,适用于臭茉莉叶总黄酮的提取。结合总黄酮月周期变化规律,可以确定1年中5月份和7月份为最佳采摘期。