Endoglin在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 研究不同转移潜能非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中以及癌与癌旁组织中endoglin (ENG)的表达情况,探讨ENG在NSCLC的发生发展和转移复发中的作用.方法 体外培养5株NSCLC细胞及1株正常支气管上皮细胞(HBE),随机选取22例NSCLC手术切除后癌与癌旁组织样本,分别采用real time PCR及Western blot法检测其中ENG mRNA和蛋白表达情况.采用x2检验分析ENG的表达和临床资料之间的相关性.结果 高转移性3株肺癌细胞系中ENG mRNA和蛋白表达显著升高,而正常细胞株及低转移性2株肺癌细胞中ENG表达缺失.22例肺癌样本中,其中19例癌组织中ENG mRNA和蛋白呈阳性表达(86.36％),且表达量明显高于相对应的癌旁组织(P＜0.01).ENG表达与患者临床病理特征年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、病理分级、组织类型等均无关,而与患者淋巴结转移情况密切相关(P＜0.01).结论 ENG在NSCLC中的表达与淋巴结转移显著相关,有可能作为预测NSCLC转移及预后的分子标志.     

B细胞表面蛋白CD_(72)/Lyb-2是CD_5的配体

糖蛋白CD_5表达于所有成熟T 细胞和小部分B 淋巴细胞膜表面上。其在免疫上的确切作用尚不清楚。有报道指出CD_5在人和小鼠都可作为一个受体,以和CD_2,CD_(28)相类似的方式介导一个对T 细胞的共同刺激信号。抗CD_5抗体能刺激由CD_3结合TCR 介导的T 细胞增殖,并且也刺激IL-2分泌和其受体的表达,同时也诱导细胞内Ca~(++)浓度的增加。     

肺癌中凝血酶受体-1的表达及意义

目的 分析凝血酶受体(PAR-1)在肺癌组织及细胞中的表达情况，探讨PAR-1与人肺癌生物学行为的关系。方法 采用免疫组织化学、Westem blot及RT-PCR方法检测不同类型肺癌组织及细胞系中PAR-1的表达情况。结果 免疫组化S-P法检测PAR-1在52例肺癌组织中表达情况分别为：腺癌14／20例、鳞癌6／16例、大细胞癌6／10例、小细胞癌中4／6例。免疫组化阳性细胞多位于癌巢周边，1例侵及支气管软骨处的鳞癌癌巢及另1例低分化腺癌脉管内的癌栓呈明显阳性，1例腺癌组织周围的肺泡上皮不典型增生灶呈明显阳性。Westem blot及RT-PCR方法检测结果均显示PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的高表达明显高于其低转移株(PLA801C)。结论 PAR-1在各种组织类型的人肺癌组织中均有不同比例表达。PAR-1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株(PLA801D)中的表达明显高于其低转移株(PLA801C)。PAR-1表达可能与肺癌的恶性表型及生物学行为有关。     

活化外周血淋巴细胞和双功能免疫异源结合体体外增强对人卵巢癌的溶解作用

异源结合的单克隆抗体(HAs)为一种抗肿瘤相关抗原(TAA)抗体和一种抗T 淋巴细胞受体复合物抗原CD_3抗体的共价连接物。此HAs 分子既可与表达TAA 的肿瘤细胞结合,又可与T 淋巴细胞结合,在体内外可加强CTLs 溶解培养细胞系的作用,本文作者探讨了HAs 直接对T 淋巴细胞介导的新鲜人卵巢肿瘤溶解作用的影响。卵巢癌细胞来自卵巢癌患者的癌性腹水或手术切除标本,作者在15个月内对30例卵巢癌和3名正常人卵巢标本通过流式细胞器分析了其TAA(包括OV-TL_3、113F_1、317G5、MOV_(19)、17(?)1A 等)的表达。分析结果显示,大多数卵巢癌细胞表面表达多种抗原成分,在所测3例正常卵巢标本中皆表达了OV-TL_3抗原,而317G5、MOV_(19)和113F_1表达极少,OV-TL_3抗体由于缺乏对     

p21活化激酶4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨p21活化激酶4(PAK4)在人非小细胞肺癌细胞系及人非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用Western blot及实时荧光定量PCR检测人支气管上皮(HBE)细胞、非小细胞肺癌细胞(A549、NCI-H520、NCI-H460和NCI-H596细胞)、20例新鲜非小细胞肺癌组织及相应的癌旁组织中PAK4的表达情况;采用免疫组化检测210例非小细胞肺癌组织PAK4的表达情况;采用Kaplan-Meier法评估非小细胞肺癌患者术后5年生存率;用Cox比例风险模型分析PAK4对患者预后的影响。结果:非小细胞肺癌细胞(A549、NCI-H520、NCI-H460和NCI-H596细胞)PAK4蛋白及mRNA表达均显著高于HBE细胞(P0.05);20例非小细胞肺癌组织中PAK4蛋白及mRNA表达高于癌旁组织PAK4蛋白及mRNA表达(P0.05);10例转移性非小细胞肺癌组织PAK4 mRNA表达显著高于10例原发性非小细胞肺癌组织(P0.05);免疫组化染色结果示210例非小细胞肺癌PAK4评分显著高于对应的癌旁组织。临床资料分析显示PAK4蛋白表达与非小细胞肺癌的分化程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有关(P0.05);PAK4高表达组患者5年生存率显著低于PAK4蛋白低表达组患者(logrank检验,P0.05),PAK4蛋白表达是非小细胞肺癌患者的独立预后因素。结论:PAK4蛋白高表达是非小细胞肺癌患者死亡的独立危险因素。     

HIV对B淋巴细胞的感染及感染细胞对杀伤细胞的易感性

HIV 是AIDS 的病源,其特性之一是专门感染表达胞膜CD_4分子的细胞,有报道认为,细胞膜上的CD_4分子是HIV受体。但近来发现有些HIV 感染的细胞不表达可测出的CD_4糖蛋白,因此对HIV 受体的本质还需进一步研究。本文报道,人淋巴母细胞样B 细胞株(Gupta)和人胶质细胞株(HEB)均无可测出的细胞表面CD_4,但它们可以被HIV 感染。令人感兴趣的是Gupta 和HEB 细胞感染HIV 后无合胞体产生,而产生合胞体是CD_4高表达细胞感染HIV 的公认特     

肺癌患者Th1/Th2状态及川芎嗪的调节作用

本研究采用RT PCR方法 ,以IFN γ和IL 2代表Th1型细胞因子 ,IL 4、IL 6、IL 10代表Th2型细胞因子 ,分别检测 3种肺癌细胞株 (鳞、腺、小细胞肺癌 )以及荷瘤机体外周血单个核细胞 (PBMC )Th1/Th2状态 ,并观察中药川芎嗪 (Tetram ethlpyrazine ,TTMP )的作用。结果显示 3种肺癌细胞株IFN γ和IL 2均无表达 ,而IL 4、IL 6、IL 10均表达 ;经川芎嗪培育后 ,3种肺癌细胞株均出现IFN γ的表达 ,而IL 4、IL 6的表达被抑制 ,小细胞肺癌株同时表达IL 2。肺癌患者PBMC中IL 4、IL 6和IL 10表达阳性率明显高于正常人 ,而IL 2无 1例表达 (0 / 2 3) ,IFN γ仅 1例表达 (1/ 2 3) ;与川芎嗪培养后 (两种浓度 ) ,肺癌患者IL 2 ,IFN γ的表达率明显提高 ;Th2型因子表达的优势状态较未加药组出现明显逆转。表明川芎嗪可促进肺癌细胞株和肺癌患者PBMC的Th2优势状态向Th1方向逆转     

肺癌细胞中NF-κB2基因表达及启动子区域甲基化状态分析

目的研究肺癌细胞和人正常支气管细胞(human bronchial epithelial cell,HBE)中NF-κB2的表达情况及其启动子区CpG岛的甲基化状态。方法采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测肺癌细胞和正常支气管细胞NF-κB2基因mRNA的表达情况;采用Western blot技术检测NF-κB2前体蛋白p100的表达情况;采用重亚硫酸盐测序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)技术检测NF-κB2启动子区CpG岛的甲基化状态。结果肺腺癌细胞株A549、肺鳞癌细胞株SK-MES-1和小细胞肺癌细胞株NCI-H446的NF-κB2 mRNA的表达分别是HBE细胞株的6.42±0.91倍(P0.05,t=5.828)、2.78±0.52倍(P0.05,t=3.219)、2.79±0.33倍(P0.05,t=4.611);3种肺癌细胞中p100蛋白较HBE细胞均上调表达;4种细胞株中所扩增片段的CpG位点均呈非甲基化状态。结论肺癌细胞及HBE细胞中NF-κB2启动子区域的CpG位点处于非甲基化状态,说明NF-κB2基因表达情况与甲基化状态无直接关系,其启动子区的甲基化修饰未直接参与该基因的表达调控,可能存在其他相关的调控机制,有待进一步的探索。     

miR-99a-5p靶向SLC44A1对肺癌细胞系A549增殖的影响

目的 探讨miR-99a-5p通过靶点SLC44A1对肺腺癌(LUAD)细胞系增殖的抑制作用及可能机制.方法 从基因表达综合数据库(GEO)中检索并筛选GPL18058的microRNA(miRNA)表达阵列,筛选出肺癌与正常组织差异表达的miR-99a-5p后,通过Target Scan Human数据库预测其下游靶点SLC44A1,并利用UALCAN分析SLC44A1在肺癌组织中的表达情况和LUAD预后关系.利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺腺癌细胞系miR-99a-5p和SLC44A1的表达水平.在A549细胞中转染miR-99a-5p模拟物,通过CCK-8试验、克隆形成实验检测A549的增殖情况;qRT-PCR和Western blot检测SLC44A1的表达.在A549细胞中过表达SLC44A1,评估其对肺癌调节中的miR-99a-5p的选择性作用.结果 在LUAD组织和细胞系中,miR-99a-5p的表达异常下调,过度异位表达的miR-99a-5p抑制A549细胞的增殖(P＜0.05).在LUAD组织和细胞系的基因和蛋白质水平上,miR-99a-5p负性调控SLC44A1(P＜0.05).SLC44A1过度表达有效地逆转了miR-99a-5p在体外对A549细胞增殖的抑制作用.SLC44A1的低表达有利于患者生存率的提高(P＜0.05).结论 miR-99a-5p抑制LUAD中A549细胞系的增殖,并通过负性调控SLC44A1发挥作用.     

CD44对骨肉瘤细胞增殖、黏附和侵袭性的影响

目的研究细胞表面黏附分子CD44对骨肉瘤细胞增殖、黏附和侵袭特性的影响,探讨骨肉瘤细胞生长侵袭的机制。方法流式细胞术和Westernblot检测3株骨肉瘤细胞系MG63、HOS和U2-OS中CD44的阳性表达率和相对蛋白含量;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法研究3株细胞系之间CD44mRNA的表达差异;同时应用MTT法、美蓝硼酸盐法和微孔迁移技术研究阻断CD44的作用前后3株细胞的增殖、黏附和侵袭能力的变化。结果HOS和U2-OS中CD44的阳性百分率均高于99%,但HOS中CD44的平均荧光强度显著高于U2-OS(P<0.01);而MG63中CD44阳性百分率仅为(2.10±0.46)%;Westernblot亦证明HOS中CD44的蛋白含量显著高于U2-OS(P<0.05),而MG-63中CD44表达为阴性;CD44mRNA在HOS和U2OS中的表达也显著高于MG-63(P值均<0.05)。HOS的侵袭性显著高于MG63和U2-OS(P值均<0.01);HOS与MG63的增殖速率和黏附性差异无统计学意义,但均显著高于U2OS(P值均<0.01)。应用中和抗体阻断CD44的作用之后,HOS和MG-63的黏附性均显著降低(P值均为0.03),U2-OS的黏附性无明显变化(P=0.93);HOS和U2-OS的侵袭力显著降低(P值均<0.01),而MG-63的侵袭力无明显改变(P=0.18);3株细胞的增殖速率均无显著变化(P值均>0.05)。结论CD44能促进骨肉瘤细胞系HOS的黏附和侵袭,并参与U2-OS的侵袭和MG-63的黏附过程,但是不影响骨肉瘤细胞的增殖速率。     

Wip1在非小细胞肺癌组织及细胞中的表达

目的： 检测肺癌组织和3种肺癌细胞中Wip1的表达水平,探讨肺癌中Wip1的表达水平与其各种临床病理特征之间的关系。方法: 利用实时荧光定量PCR检测44例肺癌及相应正常肺组织中Wip1 mRNA的表达,分析Wip1 mRNA表达与各临床病理参数之间的关系;利用实时荧光定量PCR的方法检测人肺腺癌细胞A549、人鳞癌细胞NCI-1299、人大细胞肺癌细胞NCI-H460和人正常支气管上皮细胞HBE中Wip1 mRNA的表达量,进行相对定量分析。结果: 44例非小细胞肺癌及相应正常肺组织均有Wip1 mRNA的表达,其中17例肺癌中Wip1 mRNA高表达,占38.6%,两者表达差异显著(ratio=2.1644±1.3940,P＜0.05);分化程度低的肿瘤细胞Wip1 mRNA表达量显著高于分化程度高者（P<0.05）。3种肺癌细胞中的Wip1 mRNA表达量显著高于正常支气管上皮细胞,差异显著(均P＜0.05)。结论: Wip1mRNA在非小细胞肺癌中过表达,可能与肿瘤发生有关,有望成为非小细胞肺癌基因治疗的新靶点。Wip1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达与肿瘤细胞分化程度有关,可能成为确定肿瘤恶性程度的分子生物学参考指标。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗休的研究——Ⅰ、产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV—1SM_(44)株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12、2A8、1G8、1D10、2C55株细胞系用有限稀释法做2—5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV—1和HSV—2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)—10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)—10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV、CMV、JEV和HFRSV无交叉反应。     

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。     

小檗碱对人高转移肺癌细胞与脐静脉内皮细胞黏附的影响

目的： 探讨小檗碱对人高转移肺癌细胞株PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）黏附的影响及其机制。方法：用MTT法检测不同浓度（2.5-40 mg/L）的小檗碱对HUVECs增殖的影响,用2.5、5和10 mg/L小檗碱分别处理人高转移肺癌细胞株PG细胞6、12和24 h, 用虎红染色法测定小檗碱对PG细胞与HUVECs黏附能力的影响, 用荧光抗体染色法测定小檗碱对PG细胞表面黏附分子CD44s表达的影响, 用双光子各向异性度成像系统观察小檗碱对PG细胞膜流动性的影响。结果：（1）2.5、5和10 mg/L小檗碱作用HUVECs 6、12和24 h后对其生长无影响。（2）用不同浓度小檗碱处理PG细胞6、12和24 h后,与TNF-α刺激后的HUVECs相互作用后,能够显著抑制其黏附率,且呈浓度依赖性(P<0.05, P<0.01)。（3）各剂量组的小檗碱均能使PG细胞表面的CD44s分子表达增高（P<0.05或P<0.01）。（4）小檗碱作用PG细胞24 h后能够抑制PG细胞膜的流动性,且随药物浓度的升高这种抑制作用增强。结论：小檗碱对PG细胞与HUVECs的黏附具有抑制作用,可能与小檗碱增加PG细胞表面黏附分子表达、降低其细胞膜流动性有关。     

柯萨奇和腺病毒受体在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的研究柯萨奇和腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。方法用特异性CAR72抗体通过免疫组化EnVision法在存档石蜡样本中研究CAR在非小细胞肺癌组织中的表达。结果14例非肿瘤肺组织全部无CAR表达,51例鳞癌中42例有CAR表达,不同病理分级肺癌细胞中(5例穿刺标本未作病理分级),CAR表达分别为分化好(Ⅰ~Ⅱ级)有20例(20/26)表达,分化差(Ⅲ~Ⅳ级)有17例(17/20)表达。在41例肺腺癌中仅有15例有CAR表达,不同病理分级肺癌细胞中(3例穿刺标本未作病理分级),CAR表达分别为分化好(Ⅰ~Ⅱ级)有8例(8/21)表达,分化差(Ⅲ~Ⅳ级)有6例(6/17)表达。结论CAR表达与非小细胞肺癌发生的组织类型相关而与细胞分化程度无关。     

长链非编码RNA-LINC00485在肺癌中的表达及对细胞增殖和迁移的影响

目的观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12例肺癌组织及癌旁组织中的差异性表达。通过生物信息学方法预测LINC00485可能结合的微小RNA(miRNA)及靶基因,将靶向沉默LINC00485的小干扰RNA(siRNA)通过脂质体转染至HCC827细胞。应用qRT-PCR检测LINC00485、miR-361-5p、p21活化蛋白激酶2(PAK2) mRNA的表达水平。采用Western blot法检测PAK2蛋白的表达水平。应用MTS法检测细胞增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果与正常肺泡上皮相比,LINC00485在肺癌细胞株中均呈高表达(P 0. 05),其中在HCC827细胞中表达水平最高。LINC00485在肺癌组织中的表达水平高于其癌旁组织(P 0. 01)。下调HCC827细胞LINC00485的表达后,miR-361-5p的表达上调(P 0. 01),PAK2 mRNA和蛋白的表达下调(P 0. 01),HCC827细胞增殖能力降低(P 0. 05),细胞迁移能力下降(P 0. 01)。结论 LINC00485在肺癌细胞株和组织中表达升高,下调LINC00485可通过调控miR-361-5p和PAK2基因的表达,抑制肺癌HCC827细胞的增殖和迁移能力。     

CD_4在成年鼠胸腺内前T细胞上的表达

T 细胞在成年胸腺内发育所必须的条件是缓慢而持续地输入干细胞或前胸腺细胞。本文研究胸腺内前T 细胞上CD_4的表达。C_(57)BL/Ka Thy1.2小鼠胸腺细胞经抗CD_8及CD_3抗体处理后,使其缺乏CD_4~+CD_8~+胸腺细胞及成熟T 细胞;再用抗IL-2受体(IL-2R)及CD_2抗体处理以除去CD_4~-CD_8~-前体细胞;亦用抗红细胞、单核细胞、巨噬细胞及B 细胞抗体处理以除去各种非T 细胞。经上述处理过的胸腺细胞用免疫荧光及流式细胞仪测定其表型,即以荧光标记的抗CD_4(GK1.5)及抗热稳定抗原HSA(M1/69)抗体染色,并通过FACS 分离;然后将这些细胞输入X 线照射的C_(57)BL/Ka     

非小细胞肺癌中Ezrin和CD44v6的表达及意义

目的 探讨非小细胞肺癌中Ezrin和CD44v6的表达及其与肺癌各种临床病理参数之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测55例非小细胞肺癌组织中Ezrin及CD44v6的表达.结果 Ezrin的表达程度与非小细胞肺癌的TNM分期(P=0.004)和淋巴结转移(P=0.003)密切相关; CD44v6的表达程度与非小细胞肺癌的TNM分期(P=0.012)和淋巴结转移(P=0.010)密切相关;Ezrin 和CD44v6两者在非小细胞肺癌组织中的表达呈正相关(r=0.568, P=0.000).结论 Ezrin和CD44v6与肺癌淋巴结转移和临床TNM分期密切相关,联合检测Ezrin和CD44v6有助于判断肺癌的预后.     

PRDM14在肺癌细胞系中的表达

目的检测PRDM14在肺癌细胞系中的表达及分布情况。方法采用RT-PCR技术和免疫荧光方法分别检测人支气管上皮细胞系(HBE)和6个肺癌细胞系中PRDM14mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR结果显示PRDM14与GAPDH电泳条带的平均光密度比值在肺癌细胞系中显著高于HBE细胞系(P0.001);免疫荧光结果显示PRDM14蛋白表达的平均荧光强度在肺癌细胞系中高于HBE细胞系(P0.05),PRDM14蛋白荧光信号主要定位于细胞浆。结论 PRDM14在HBE细胞系低表达,在肺癌细胞系高表达,主要分布于细胞浆,PRDM14可能在肺癌的发生发展中发挥作用。     

人原发性肺癌组织中Rab相互作用溶酶体蛋白基因甲基化检测及其临床意义

目的 分析Rab相互作用溶酶体蛋白(RILP)在肺癌患者癌组织及肺癌细胞系中的表达及其甲基化情况,探索RILP基因的生物学功能。方法 收集重庆医科大学附属长寿人民医院88例肺癌患者的癌组织和癌旁组织标本,分别用免疫组化染色、荧光定量PCR检测RILP蛋白及mRNA表达水平。选取肺癌细胞系(H1299、A549、H358、H19936和H460)和正常肺上皮细胞系(BEAS-2B),用荧光定量PCR检测RILP mRNA表达水平。用甲基化特异性PCR检测肺癌组织及细胞中RILP的甲基化。分析肺癌患者一般临床资料与RILP甲基化的关系。用空载体或人源RILP表达载体转染A549细胞,用克隆形成实验检测细胞增殖活性。结果 肺癌组织RILP高表达率为13.64%,低于癌旁组织的76.14%(P <0.05),癌旁组织RILP mRNA表达水平高于肺癌组织(P <0.05),正常肺上皮细胞系中RILP mRNA表达水平均高于肺癌细胞系(P <0.05)。与正常肺上皮细胞系相比,RILP基因在肺癌细胞系中出现了明显的甲基化。60.23%(53/88)的肺癌患者发生RILP基因甲基...