胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后前角运动神经 …

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）对唯物事运动神经元的保护作用。方法：大鼠分为假手术组、生理盐水（ＮＳ）组和ＧＤＮＦ组,改良Ａｌｌｅｎ法撞击致伤Ｔ１２脊髓,蛛网膜下腔分别给予ＮＳ和ＧＤＮＦ,分别取不同时间的伤段脊髓进行切片,应用酶组织化学染色方法显示脊髓前角外侧核运动神经元中胆碱酯酶（ＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活性,并结合计算机进行图像分析。结果：ＧＤＮＦ组较ＮＳ组ＣｈＥ活性显著增     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用

目的:观察外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响.方法:利用Nystrm法制备大鼠胸髓压迫损伤模型.蛛网膜下腔置管至损伤局部,连续1周给予GDNF.应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经中丝(NF)免疫组化活性的变化来评价外源性GDNF对伤区皮质脊髓束和轴突再生的影响.结果:脊髓损伤后4周GDNF治疗组GFAP表达较对照组明显减少,NF标记轴突数显著多于对照组,皮质脊髓束部分再生并通过损伤区至远端0.5 cm.结论:外源性GDNF局部给药能减少胶质细胞增生,促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复.     

联合应用神经营养素-4胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用研究

目的研究周围神经损伤后经蛛网膜下腔置管局部联合应用神经营养素（NT）-4和外源性胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法成年SD大鼠随机分为3组,GDNF组、NT-4组和GDNF联合NT-4组。切断大鼠坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元损伤,于第5、6腰椎椎间隙行蛛网膜下腔置管,并注入外源性GDNF（10μg/mL）和NT-4,不同时间处死动物并取材,对L4～6节段脊髓标本冰冻切片,行苏木素-伊红染色、尼氏体染色、胆碱酯酶染色。结果 GDNF联合NT-4组脊髓前角运动神经元的存活率、胆碱酯酶阳性颗粒面积均比前2组有明显提高,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论周围神经损伤后通过蛛网膜下腔联合注入NT-4、GDNF较两者单独使用更有利于保护脊髓运动神经元。     

胶质细胞源性神经营养因子对运动神经元病培养模型的保护作用

目的 利用运动神经元病的脑片和脊髓片培养模型,观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对运动神经元的保护作用.方法 取1日龄SD乳鼠的大脑做脑片培养,取8日龄SD乳鼠脊髓做脊髓片培养.脑片在培养2周后,脊髓片在培养1周后,随机分为对照组、模型组（100 μmol/L THA）、不同浓度GDNF组（1 ng/ml、5 ng/ml和50 ng/ml）,继续培养3周后,SMI-32免疫组化染色,分别计数脑片中皮层运动神经元和脊髓片中前角运动神经元数目的变化,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量.结果 模型组SMI-32阳性的皮层运动神经元数目和脊髓运动神经元数目较对照组明显减少,差异有显著性意义（P＜0.05）,而GDNF各组神经元存活数目较模型组显著增多,差异有显著性意义（P＜0.05）,脑片组和脊髓片组中的模型组LDH含量均对照组显著增高,差异有显著性意义（P＜0.05）,GDNF各组培养液中LDH含量较对照组均升高,差异有显著性意义（P＜0.05）.结论 GDNF能保护运动神经元免受谷氨酸兴奋毒性的损伤,使得GDNF在临床上治疗MND成为可能.     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后功能和体质量的影响

&&胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后功能和体质量的影响@宋海涛 @贾连顺 @陈哲宇 @沈强 @路长林 @强华&&&&&&&&     

重组胶质细胞源性神经营养因子腺病毒保护培养的原代脊髓运动神经元

目的:观察胶质细胞源性神经营养因子(glia cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)重组腺病毒(AdCMVgdnf)对培养的原代脊髓运动神经元的保护作用.方法:原代培养的脊髓运动神经元转染不同滴度AdCMVgdnf不同时间后计数,并计算凋亡的运动神经元的百分率.结果:104～107 pfu*ml-1 (pfu,plaque form unit) AdCMVgdnf的保护作用中, 以107 pfu*ml-1作用最显著,腺病毒的滴度过大或过小,保护作用都减弱;观察1～9 d不同转染时间的效果时,在第3～9天均可观察到保护作用,以第9天最明显,存活的运动神经元数比对照组增多280%,同时凋亡神经元的百分比较对照组减少12.9%.结论:在一定的时间(9天)和合适的腺病毒滴度(107 pfu*ml-1)条件下,腺病毒介导的GDNF对体外培养的脊髓运动神经元起到了保护作用.     

胶质细胞源性神经营养因子在脊髓损伤中的相关作用研究

脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)包括原发性和继发性损伤,致使神经元损伤死亡、轴突断裂及脊髓内环境恶化等多种病理改变,这使得神经元存活修复和轴突再生难度增大.胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell linederived neurotrophic factor,GDNF)是转化生长因子-β...     

脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子基因转染对大鼠脊髓损伤后神经功能的影响

目的　探讨阳离子脂质体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)基因体内转染对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能恢复的影响。方法　雄性成年SD大鼠 30只 ,随机均分为绿色荧光蛋白 (GFP)对照组及GDNF治疗组。采用改良Nystr m法经后路压迫大鼠胸段脊髓模型 ,以直接注射法将脂质体DC Chol和重组质粒 pEGFP GDNFcDNA混合后注入大鼠损伤脊髓。HE染色观察伤后 4周伤段脊髓残存组织的面积 ,采用斜板试验和运动功能评分观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果　大鼠脊髓损伤后 1～ 4周 ,GDNF治疗组后肢运动功能评分明显高于GFP对照组 ,两组间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。伤后 4周 ,GDNF组伤段残存脊髓组织的面积大于对照组 (P <0 .0 1)。结论　脂质体介导GDNF基因体内转染能明显减少脊髓损伤后伤区的坏死和萎缩 ,并促进大鼠后肢运动功能的恢复     

神经营养因子对急性脊髓损伤后神经修复的相关研究进展

脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）的治疗在现阶段未取得较好的进展。随着对急性脊髓损伤的以及其修复机制的研究的深入,发现神经营养因子在脊髓损伤修复中发挥重要的作用,本文就脊髓损伤后几种常见的神经营养因子：脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的相关表达情况以及在急性脊髓损伤后修复中的作用做一综述,为进一步的研究提供理论基础。     

恒河猴脊髓半横断损伤后脊髓腹角及对侧皮质前运动区胶质细胞源性神经营养因子的表达

目的:探讨恒河猴脊髓损伤后脊髓腹角及对侧大脑皮质前运动区胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的变化.方法:18只成年恒河猴随机分为假手术组和脊髓半横断损伤(hSCI)后7 d、14 d、1个月、2个月和3个月组,每组3只.假手术组术后24 h取材;各损伤组于第11胸髓节段切断左侧半脊髓,在相应时间点取材.取脊髓损伤处近、远段5 mm组织及损伤对侧大脑皮质前运动区组织,制作冰冻切片,采用免疫组织化学SP法检测GDNF,计数阳性神经元数目.结果:恒河猴hSCI后3个月内,损伤处脊髓近、远段损伤侧与未损伤侧腹角GDNF阳性神经元数均较假手术组减少(P＜0.05),并且表现为先降低后增加,晚期逐渐减少;hSCI 1个月以后损伤侧GDNF阳性神经元数目多于未损伤侧;对侧皮质前运动区GDNF阳性神经元在损伤早期急剧减少,此后增加,至hSCI后3个月时恢复至正常数量.结论:损伤局部GDNF的缺乏是影响脊髓损伤后再生修复的原因之一;适时补充外源性GDNF可能会促进神经修复;应用GDNF治疗SCI的最佳时机在损伤早期.     

蛛网膜下隙局部应用GDNF对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的 研究周围神经损伤后经蛛网膜下隙置管局部应用外源性胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neu-rotrophic factor,GDNF)对脊髓前角运动神经元的保护作用. 方法 成年SD大鼠随机分为2组:GDNF组(坐骨神经切断术后给予GDNF)和NS组(术后给予生理盐水).切断两组大鼠左侧坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元部分损伤,行蛛网膜下隙置管,实验组注入外源性GDNF(10 μg/ml),对照组注入同等剂量的生理盐水,于2,4,8周行坐骨神经功能指数检测;取L4-6节段脊髓标本冰冻切片,行胆碱酯酶(ChE)和酸性磷酸酶(ACP)染色并进行图像分析. 结果 GDNF组脊髓前角运动神经元ChE阳性颗粒面积比NS组有明显提高(P<0.05),ACP阳性颗粒面积低于NS组(P<0.05);GDNF组坐骨神经功能指数亦优于NS组. 结论 周围神经损伤后通过蛛网膜下隙注入外源性GDNF对相应的脊髓运动神经元有保护作用.     

睫状神经营养因子对脊髓神经元的保护作用

目的：研究脊髓操作后脊髓神经元内酶学的变化,并探索睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对神经元的保护作用,方法：用Ａｌｌｅｎ改良法打击摸型致ＳＤ大鼠Ｔ８脊髓操作分别于术前及术后３,７,１０ｄ测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的含量。结果：ＡＣｈＥ于术后持续下降;ＡＣＰ在术后第３天开始上升,第７天至最高,以后逐渐下降;用ＣＮＴＦ处理的大鼠上述两种酶变化的幅度较小,且整个过程也比较平     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后GDNF基因表达的影响及意义

目的:探讨神经干细胞(NSC)移植对大鼠脊髓损伤后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响及其意义。方法:NSC提取自新生Wistar大鼠的海马区,经培养、鉴定。制作大鼠脊髓损伤(SCI)模型,于伤后第7d移植NSC。实验分为3组:NSC移植组(A组)、DMEM填充组(B组)、正常对照组(C组)。应用RT-PCR法和免疫组化法观察细胞移植后不同时间点GDNF基因的表达变化。结果:RT-PCR结果分析,移植术后第1,3,5d,A组GDNF mRNA的表达量明显高于B组,差别有显著性意义(P<0.05)。组化结果分析,移植术后第7,14,28d GDNF的表达量明显高于B组,差别有显著性意义(P<0.05)。结论:NSC在移植后可上调神经营养因子GDNF基因的表达,是修复脊髓损伤的机制之一。     

胎鼠脊髓内源性NT—3及BDNF对脊髓神经元的营养作用

目的：研究发育中的胎鼠脊髓中神经营养因子－3（NT－3）和脑源性的神经营养因子（BDNF）的营养作用．方法：用抗NT－3及BDNF的抗体封闭小鼠胚胎脊髓内源性NT－3及BDNF，观察封闭后体外培养的脊髓神经元活性和突起生长的变化．结果：NT－3在小鼠脊髓神经元中广泛表达，其作用主要为促进脊髓神经元突起生长，不加抗体封闭式，突起平均长度为（362．062±166．381）μm，当封闭抗体浓度为5mm／L时，突起长度为（262．011±109．168）μm．BDNF免疫反应阳性细胞主要为大细胞和DRG神经元，其作用主要是促进神经元的存活，在封闭抗体浓度为6．25mg／L，4．34mg／L时吸光度（A）值显著低于对照组．结论：发育中胚胎小鼠脊髓中NT－3促进神经元突起生长，BDNF则促进神经元存活．     

Effect of glial cell line-derived neurotrophic factor on peripheral nerve regeneration in adult rat

Objective: To study the effect of glial cell line-derived neurotrophic (GDNF) on adult peripheral nerve regeneration. Methods: Transectioned sciatic nerve in adult rats was sutured into silicone channel. GDNF or SAL solution was injected into the silicone channels during operation. Four weeks later, the effect of GDNF on axonal regeneration was evaluated by degenerative neurofiber staining and HRP retrograde tracing. Results: Compared with SAL group, the percentage of degenerative neurofiber areas decreased from 17.3% to 1.9% ( P＜0.01 ) and the ratio of labeled spinal somas number was significantly increased from 43.5% to 68.3% ( P＜0.01 ) in GDNF group. Conclusion: The results suggest that exogenous GDNF can obviously enhance adult peripheral nerve regeneration.     

胶质细胞源性神经营养因子在链霉菌的分泌表达

目的：构建胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达质粒，实现GDNF在链霉菌的分泌表达。方法：从人基因组中克隆GDNF成熟肽编码基因，与链霉菌酪蛋白酶melC1启动子和信号肽DNA序列融合。melC1信号肽DNA与GDNF融合后地翻译框呆的漂移，且GDNF的转录受控于melC1启动子。融合基因与链霉菌载体pIJ702连接并转化Slividans TK24原生质体。结果：经抗性筛选及限制性酶切分析获得重组质粒pIJMC。携带pIJMG的链霉菌培养上清存在约15000的特异性表达带，与GDNF成熟肽的分子质量吻合。结论：GDNF在MelC1信号肽指导下可以在链霉菌分泌表达。     

睫状神经营养因子对损伤脊髓神经元酶学的影响

目的：研究脊髓损伤后脊髓神经元的酶学变化,并探索睫状神经营养因子（CNTF）对脊髓神经元的保护作用。方法：用改良Allen打击法致SD大鼠T8脊髓损伤,分别于术术前术后第3、7、14天测定脊髓组织内乙酰胆碱酯酶（AChE)和酸性磷酸酶（ACP）的含量。结果：AChE于手术持续下降,ACP在术后3天开始上升,第7天升至最高,以后逐渐下降,经CNTF治疗后上述峡谷种酶变化的幅度较小,且整个过程比较平衡,结论：CNTF对脊髓损伤的神经元具有一定的保护作用。     

坐骨神经切断后脊髓前角GDNF mRNA的表达变化及其意义

目的：探讨大鼠坐骨神经切断后,脊髓前角胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）mRNA的表达变化及其意义。方法：切断SD大鼠两侧坐骨神经,建立脊髓前角运动神经元损伤模型,应用半定量RT-PCR方法,观察大鼠L3-L5脊髓前角运动神经元GDNFmRNA的表达。结果：坐骨神经切断前,GDNF mRNA在脊髓前角少量表达,坐骨神经切断后1天表达减少20%,4天减少40%,7天减少70%,14天后减少80%。结论：脊髓前角运动神经元GDNF mRNA表达减少,是“细胞体-轴突-靶器官”轴质流中断所致,为应用外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。