用流式细胞术测定小儿急性白血病骨髓细胞DNA,RNA及蛋白质含量

用流式细胞术（ＦＣＭ）测定了４５例不同病期急性白血病患儿和１３例非白血病患儿骨髓细胞原位ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质含量，对急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）治疗前、急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）治疗前、急性淋巴细胞白血病缓解期（ＣＲ）和非白血病患儿共四组病人的上述各项指标进行了分析。结果显示：１．急性白血病患儿的ＤＮＡ非整倍体检出率为４１．２％，其中ＡＬＬ为３３．３％，ＡＮＬＬ为６０％。ＡＬＬ和ＡＮＬＬ的     

急性白血病细胞凋亡、DNA含量的流式分析

目的分析急性白血病(急淋初治37例、缓解期32例，急非淋9例)细胞凋亡量、DNA含量的变化及临床意义。方法采用流式细胞术(FCM)碘化丙啶插入性DNA定量染色法。结果凋亡百分率在缓解期最高，为19.92±8.05，初治组为8.16±3.12，与正常儿有显著性差异；白血病儿DNA指数(DI值)、异倍体(AN)率、SPF值(S期细胞百分比)均显著性增高，异倍体的发生与肝脾大小、白细胞数有关，与FAB分型无关。结论小儿白血病细胞存在DNA含量的异常，凋亡量、SPF等指标对提示预后有一定的参考价值。     

流式细胞仪测定血液病骨髓细胞DNA的临床意义

目的 探讨小儿常见血液病骨髓细胞的异倍体,细胞周期分布及其临床意义。方法 应用流式细胞仪测定４５例血液病患儿骨髓单个核细胞的ＤＮＡ的含量,计算细胞周期各时相比例。结果 白血病组异倍体检出率明显高于非白血病组的异倍体检出率。１２例非白血病中４例为异倍体,其中２例癌变。白血病组骨髓细胞Ｓ％明显低于对照组。３例接受治疗的急性淋巴细胞性白血病。患儿达到完全缓解后,其Ｓ％明显高于治疗前,非白血病组的骨髓细胞     

流式细胞术检测儿童急性白血病血小板活化功能的研究

建立微量全血血小板活化功能流式细胞术 (FCM)检测方法 ,探讨儿童急性白血病 (AL)不同阶段血小板活化状态及活化功能的变化。利用FCM检测微量全血中血小板活化特异性单克隆抗体CD62P、PAC 1在AL初论未治 ( 2 1例 )、诱导缓解后(CR1、14例 )、及持续完全缓解 (CCR) 2年以上 ( 6例 )患儿血小板表面表达百分比和ADP激活后表达变化 ,并以 16例外科畸形择期手术前患儿作为对照组。结果 ,AL初诊未治和CR1时ADP激活前后血小板CD62P表达均高于对照组 (P <0 0 5 ) ,AL初诊未治ADP激活后血小板PAC 1表达低于对照组 (P <0 0 5 ) ,CCR 2年以上者ADP激活后血小板CD62P 表达高于对照组 (P <0 0 5 )。结果表明 :AL初诊未治时体内血小板活化增强 ,ADP激活后血小板活化功能降低 ;AL缓解后ADP激后ADP激活后血小板活化功能恢复 ,但体内血小板活化状态仍高于对照组 ,CCR 2年以上者ADP激活后血小板活化功能增强。提示血小板功能异常在AL初诊未治时出血的发生中起一定作用。AL时伴有血小板功能异常 ,化疗后血小板活化功能有所恢复。本研究为AL时血小板功能的研究开辟了一种可靠简捷的方法。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达及DNA含量与临床相关性研究

目的探讨 p16蛋白表达及 DNA含量在小儿急性淋巴细胞白血病( ALL)中的临床意义.方法应用 S-P免疫组化法检测 31例 ALL患儿的 p16蛋白表达水平,流式细胞术检测白血病细胞 DNA含量.结果 31例 ALL的 p16蛋白表达缺失率?54.8%( 17/31例), p16蛋白缺失与高白细胞数( >2.5× 109/L)、肝脾肿大等高危临床特征显著相关;高危型 ALL的 p16基因缺失率( 70.5%)远高于标危型 ALL( 35.7%),两组比较差异有显著性( P=0.0459).小儿 ALL异倍体发生率为 41.8%, p16蛋白表达阴性者 17例中 DNA异倍体 9例, p16蛋白表达阳性者中异倍体 4例,两组差异无显著性( P=0.2749).结论 p16蛋白失活在小儿 ALL的发病过程中起重要作用, p16蛋白表达阴性者 DNA异倍体的发生率高,与临床高危因素有关, p16蛋白缺失者可能与 ALL复发有关.     

流式细胞仪测定小儿恶性肿瘤细胞DNA倍体及细胞周期的临床意义

目的探讨小儿恶性肿瘤细胞核DNA倍性分布、细胞周期特征，并分析其临床意义。方法应用流式细胞仪测定20例小儿恶性肿瘤细胞核DNA倍体模式、DNA指数、增殖指数和S期细胞比例，并研究这些参数与肿瘤组织分期之间关系：结果二倍体肿瘤主要分布于细胞分化较好的肿瘤；随着肿瘤细胞病理分级的发展，异倍体肿瘤的检出率逐渐上升。相对于低分化组而言，高、中分化组的DI、SPF及PI有显著性差异：结论流式细胞仪测定小儿肿瘤细胞核DNA倍体模式及细胞周期特征在评估小儿肿瘤恶性程度上有重要意义，测定结果应与临床、病理资料相结合，为恶性肿瘤预后判断提供依据。     

多色流式细胞术在222例儿童急性白血病免疫分型中的应用

目的　探讨多色流式细胞术在儿童急性白血病 (AL)免疫分型中的应用价值 ,了解儿童AL抗原表达规律和免疫亚型的分布情况。方法　采用CD45/侧散射 (SSC)双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原的分析。结果　 2 2 2例儿童白血病免疫分型可分为 4类 :未分化型占 0 9% ,急性髓细胞性白血病 (AML)占 35 1% ,急性淋巴细胞白血病 (ALL)占5 5 9% ,混合型急性白血病占 8 1%。 12 4例儿童ALL中 ,B淋巴细胞白血病 (B ALL)占 75 8% ,T淋巴细胞白血病 (T ALL)占 2 4 2 %。AML伴淋巴系抗原表达为 2 4 4 % ,主要表达CD7(12 8% ) ,其次为CD19(6 4 % )和CD2 (5 1% )。B ALL及T ALL伴髓系抗原表达分别为 36 2 %及 30 0 % ,主要表达CD13(18 5 % ) ,其次为CD15(11 3% )、CD11b(6 5 % )和CD3 3 (4 3% )。CD117和CD56主要在AML中表达 ,分别为 73 3%和 38 6 % ,而在ALL中表达率极低 ,仅为 2 0 % (P <0 0 1)。胞浆内抗原CD2 2 、CD3 及髓过氧化物酶 (MPO)分别特异地表达在B ALL、T ALL及AML ,并比胞膜抗原检测更为敏感。结论　应用多色流式细胞术几乎能对所有儿童急性白血病进行准确分型 ,对儿童白血病患者的治疗方案选择及预后判断等均有重要价值。     

多参数流式细胞术检测急性白血病患儿CD14表达的意义

为了探讨CD14在小儿白血病中的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义 ,本文采用CD45/SSC多参数散点图设门多色流式细胞术分析158例小儿急性白血病 (AL)患儿白血病细胞的CD14及其它白血病相关抗原的表达情况。结果 :158例中有9例 (5.7 %)表达CD14,且均为急性髓系白血病 (AML)。CD14在M4/M5患儿中的阳性率明显高于非M4/M5患儿 (P<0.01) ;M4和M5b患儿CD14的阳性率明显高于M2及M5a(P均<0.01);CD11b在M2的阳性率 (6/20例,30 %)明显低于M5(7/9例,77.8 % ,P<0.05) ;CD15在M5a的阳性率明显低于M5b (P<0.05)、M2 (P<0.01)及M4 (P<0.05)。在AML组中 ,CD14的表达与CD11b、CD15呈正相关 (P均<0.01)。提示CD14有助于淋巴系白血病、髓系白血病及单核细胞相关性白血病 (MLIL)的诊断与鉴别诊断 ,其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为100% ,敏感性为64.3 %。CD14和CD15有助于M5亚型的区分及M2与M5a、M2与M4的鉴别诊断 ,CD14和CD11b则有助于M2与M5的鉴别诊断     

1312-13急性白血病细胞凋亡、DNA含量的流式分析

目的 分析急性白血病(急淋初治37例、缓解期32例，急非淋 9例）细胞凋亡量、DNA含量的变化及临床意义。方法 采用流式细胞术(FCM)碘化丙啶插入性DNA定量染色法。结果 凋亡百分率在缓解期最高，为19.92±8.05，初治组为8.16±3.12，与正常儿有显著性差异；白血病儿DNA指数（DI值）、异倍体（AN）率、SPF值（S期细胞百分比）均显著性增高，异倍体的发生与肝脾大小、白细胞数有关，与FAB分型无关。结论 小儿白血病细胞存在 DNA含量的异常，凋亡量、SPF等指标对提示预后有一定的参考价值。     

流式细胞术在诊断儿童中枢神经系统白血病中的意义

目的 探讨流式细胞术(FCM)在诊断儿童中枢神经系统白血病(CNSL)中的意义.方法 分别采用FCM及细胞形态学(CC)检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿脑脊液(CSF),对比这两种方法诊断儿童CNSL的敏感度.结果 脑脊液FCM检出67例异常表型细胞,检出率为20.36％;脑脊液CC检出6例异常细胞,检出阳性率1....     

三色流式细胞术在120例儿童急性白血病免疫分型中的应用

目的探讨三色流式细胞术在儿童急性白血病AL免疫分型中的应用价值，了解儿童AL抗原表达规律和免疫亚型的分布情况。方法采用CD45／侧散射（SSC）双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原的分析。结果120例儿童白血病免疫分型可分为4类：未分化型占0．8％，急性髓细胞性白血病（AML）占35．0％，急性淋巴细胞白血病（ALL）占57．5％，混合型急性白血病占6．7％。69例儿童ALL中，B淋巴细胞白血病（B - ALL）占75．3％，T淋巴细胞白血病（T - ALL）占24．7％。AML伴淋巴系抗原表达为28．8％，主要表达CD5、CD7及CD19（均为9．6％）。B - ALL伴髓系抗原CD13、CD33表达分别为40．4％和5．8％，T - ALL伴髓系抗原CD13、CD33表达分别为35．3％和5．9％。结论应用流式细胞术几乎能对所有儿童急性白血病进行准确分型，对儿童白血病患者的治疗方案选择及预后判断等均有重要价值。     

多参数流式细胞术检测急性白血病患儿CDl4表达的意义

为了探讨CDl4在小儿白血病中的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义，本文采用CD45／SSC多参数散点图设门多色流式细胞术分析158例小儿急性白血病(AL)患儿白血病细胞的CDl4及其它白血病相关抗原的表达情况。结果：158例中有9例(5.7％)表达CDl4，且均为急性髓系白血病(AML)。CDl4在M4／M5患儿中的阳性率明显高于非M4／M5患儿(P＜0.01)；M4和M5b患儿CDl4的阳性率明显高于M2及M5a(P均＜0．01)；CD11b在M2的阳性率(6／20例，30％)明显低于M5(7／9例，77.8％，P＜0.05)；CDl5在M5a的阳性率明显低于M5b(P＜0．05)、M2(P＜0.01)及M4(P＜0．05)。在AML组中，CDl4的表达与CD11b、CDl5呈正相关(P均＜0．01)。提示CDl4有助于淋巴系白血病、髓系白血病及单核细胞相关性白血病(MLIL)的诊断与鉴别诊断，其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为100％，敏感性为64.3％。CDl4和CDl5有助于M5亚型的区分及M2与M5a、M2与M4的鉴别诊断，CDl4和CDllb则有助于M2与M5的鉴别诊断。     

小儿急性白血病免疫表型和骨髓细胞DNA含量测定的临床意义

目的　分析小儿急性白血病 (AL)的免疫表型、异倍体、细胞周期分布状况的临床意义。方法　应用流式细胞仪检测了 4 2例初诊为AL患儿的免疫表型及骨髓单个核细胞 (MNC)的DNA含量。结果　B -ALL明显多于T -ALL ,髓系抗原在ANLL组中的表达率依次为CD3 3 >CD13 >CD14>CD15 。 4例AL同时表达了淋系和髓系的抗原 ,预后差。AL患儿骨髓细胞周期的S期细胞比例 (S % )明显低于正常对照 ,说明AL患儿白血病细胞的增殖能力低下。ALL组中 ,亚倍体的S %均值与超二倍体、二倍体比较存在显著差异性 ,ANLL组中 ,CD3 3/CD13<1者的S %均值与CD3 3 /CD13 >1者比较亦存在显著差异。结论　AL患儿的免疫表型、倍体关系、细胞周期及其之间的关系 ,对临床诊断、治疗、预后判断具有重要指导意义。     

应用流式细胞术检测微量残留白血病

应用流式细胞术（ＦＣＭ），结合免疫双标记技术，对１１３例次急性淋巴细胞白血病患儿进行了微量残留白血病（ＭＲＤ）检测。结果表明，ＦＣＭ结合免疫双标记技术检测ＭＲＤ敏感度可达到０．０１％，是一种简便实用、快速敏感的方法。ＭＲＤ检测对于判断预后以及制定个体化的化疗方案有重要意义。     

急性淋巴细胞白血病巩固维持期脑脊液流式细胞术阳性患儿临床特点及预后分析

目的:探讨巩固维持期急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)脑脊液流式细胞术阳性即中枢神经系统浸润阳性(central nervous system infiltration,CNSI +)患儿的临床特点及预后。 方法:回顾性分析12例巩固维持期ALL...     

小儿急性淋巴细胞白血病p16蛋白表达的临床研究

探讨p16蛋白表达及DNA含量在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)中的临床意义。应用S P免疫组化法检测 3 1例小儿ALL白血病细胞的p16蛋白表达水平 ,流式细胞术检测白血病细胞DNA含量。结果 ,3 1例ALL的p16蛋白表达缺失率为5 4 8% ( 17 3 1) ,p16蛋白缺失与高白细胞数 ( >2 5× 10 9 L)、肝脾肿大等高危临床特征显著相关 ;高危型ALL的p16基因缺失率 ( 70 5 % )远高于标危型ALL( 3 5 7% ) ,两组差异有显著性 (P <0 0 1)。小儿ALL异倍体发生率为 3 8 7% ,p16蛋白表达阴性者17例中DNA异倍体 9例 ( 9 17) ,p16蛋白表达阳性者中异倍体 4例 ( 4 14 ) ,比较差异无显著性 ( χ2 =1 10 6,P >0 0 5 )。结果表明 :p16蛋白失活在小儿ALL的发病过程中起重要作用 ,p16蛋白表达阴性者DNA异倍体的发生率高 ,与临床高危因素有关 ,p16蛋白缺失者可能与ALL复发有关     

六色流式细胞术检测儿童急性B淋巴细胞白血病微小残留病变价值研究

目的利用六色流式细胞术(FCM)检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病变(MRD),探讨传统用于临床危险度分级各因素与六色FCM检测MRD值间关系及化疗不同时间点MRD检测值间关系。方法研究对象为2010-7-15—2011-1-25在广州市妇女儿童医疗中心初诊并接受正规化疗的25例B-ALL患儿。根据患儿初发时免疫分型结果,分别在诱导化疗第15、33天及大剂量MTX化疗前3个时间点进行MRD检测,每例患儿使用一组六色同型对照及根据初诊时免疫分型结果灵活调整的两组六色抗体组合进行检测。一组六色同型对照为IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PE-Cy7/IgG1-APC/IgG1-Percp/IgG1-APC-cy7;两组六色抗体组合为CD20-FITC/CD34-PE/CD10-PE-Cy7/CD22-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7、CD7-FITC/CD5-PE/CD13-PE-Cy7/CD33-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7或CD38-FITC/CD34-PE/CD10-PE-Cy7/CD22-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7、CD7-FITC/CD15-PE/CD34-PE-Cy7/CD33-APC/CD45-Percp/CD19-APC-cy7。分析各时间点MRD检测值与传统用于临床危险度分级各因素间关系及3个不同检测时间点MRD检测值间关系。结果化疗第15天使用六色FCM检出骨髓MRD阳性20例,P25为0.19%,P50为0.67%,P75为4.21%;第33天检出骨髓MRD阳性10例,P25为0.07%,P50为0.10%,P75为0.26%;大剂量MTX化疗前检出骨髓MRD阳性14例,P25为0.03%,P50为0.04%,P75为0.09%。结论在诱导化疗阶段、诱导化疗结束时MRD的阳性率与诱导化疗第15天相比有显著下降;大剂量MTX化疗前MRD阳性值与诱导化疗第15天和诱导化疗结束时相比,有随化疗时间延长逐步下降的趋势。按传统危险度分级的相关因素分别分组,各组在诱导化疗第15天、诱导化疗结束时和大剂量MTX化疗前MRD检出率均无明显差异。     

六色流式细胞术用于儿童急性B系淋巴细胞白血病相关免疫表型的检测

目的比较六色流式细胞术与三色流式细胞术在急性B系淋巴细胞白血病(B-ALL)中检测出白血病相关免疫表型(LAIP)的差异。方法利用两组六色抗体组合CD20/CD34/CD10/CD22/CD45/CD19、CD7/CD5/CD13/CD33/CD45/CD19对25例三色流式免疫分型诊断为B-ALL的初诊患儿骨髓标本进行检测,通过FSC/SSC、CD45/SSC、CD19/SSC设门,在多个双参数二维点图上对幼稚细胞群、CD19+细胞群进行分析。结果三色流式免疫分型使用23种抗体共检测出CD19strong、CD10strong、CD34strong、CD22strong、CD19+/CD45-/dim+、CD19+/CD34+/CD38-、CD19+/CD13+、CD19+/CD15+、CD19+/CD33+9种LAIP。25例患儿中23例检测出LAIP,其中1个LAIP 4例,2个LAIP 8例,3个LAIP 5例,4个LAIP 3例,5个LAIP 3例。六色流式细胞术使用10种抗体共检测出CD10strong、CD34strong、CD22strong、CD45-/dim+、CD19+/CD13+、CD19+/CD33+、CD19+/CD34+/CD20+、CD19+/CD34+/CD22++、19+/CD34+/CD10dim+、19+/CD45-/dim+/CD34-/dim+、19+/CD10-/CD20-/CD34-11种LAIP。25例中23例检测出LAIP,其中1个LAIP 4例,2个LAIP 5例,3个LAIP 3例,4个LAIP 6例,5个LAIP 5例。结论儿童B-ALL患者具有LAIP者比例较高,适用于运用流式细胞术对B-ALL患儿进行化疗骨髓缓解(CR)后微小残留病(MRD)检测。六色流式细胞术使用的抗体总数较少,但通过FSC/SSC、SSC/CD45、SSC/CD19设门,对幼稚细胞群、CD19+细胞群在多个双参数点图上进行分析,能发现比三色流式细胞术更多的LAIP,并且六色流式细胞术可在同一试管中同时检测6种抗原,能根据患儿初诊时免疫分型结果进行灵活调整,更有利于进行CR后MRD的检测。     

小儿白血病凋亡的流式细胞术分析及Ｂcl—2蛋白表达的研究

凋亡细胞百分比是流式细胞术（ＦＣＭ）近年在白血病应用中新建立的一个测指标，本研究即是应用ＦＣＭ测定小儿白血病细胞的凋亡量并分析其与凋亡基因bcl-2 表达间的关系。