乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素检查方法及质量标准的建立

目的建立乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素检测的方法及质量标准。方法参照《中华人民共和国药典》（三部）中细菌内毒素检查法检测,并与家兔热原实验结果进行对比。结果使用凝胶限量法检测乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素,限值为40EU／mL,即将样品稀释至160倍,在该稀释度下样品对试验没有干扰。结论该方法简便、灵敏、结果可靠,可用于乙型脑炎减毒活疫苗中间产品的细菌内毒素检查。     

乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠传代返祖试验中稀释液的筛选

目的 探讨安全试验之乳鼠传代返祖试验中稀释液对乙型脑炎减毒活疫苗的影响.方法 随机选取14批乙型脑炎减毒活疫苗,分别用磷酸盐缓冲液(PBS)、最少细胞培养物质培养液(MEM)、0.5%水解乳蛋白液、199培养液4种稀释液进行乳鼠传代返祖试验.结果 使用PBS组LD50<1.0 Log LD50/0.03mL,小鼠没有死亡梯度;0.5%水解乳蛋白液组和MEM组出现LD50>3.0 Log LD50/0.03 mL,病毒毒力增强;使用199培养液组乙型脑炎病毒活疫苗毒力稳定,重复性好,无返祖现象.结论 199培养液适宜作为乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠传代返祖试验中所用的稀释液.     

金黄仓鼠生产性能的观察与分析

金黄仓鼠是一种有价值的实验动物,具有成熟早、繁殖周期短等特点,目前我国除大量供制造乙型脑炎和狂犬疫苗的原料(仓鼠肾)外已广泛用于微生物学、内分泌学、组织移植、血液系、猪乙型脑炎、死流产模型和口齿病等的研究。为了进一步了解我所金黄仓鼠的生产性能,本文就其生长发育和繁殖情况进行了观察,现将结果报告如下。     

控制金黄仓鼠腹泻的初步探讨

腹泻是我所饲养的金黄仓鼠最为常见的疾病。我所自1948年从美国旧金Hooper基金医药研究所引入金黄仓鼠,已有30多年的饲养历史。由于在乙型脑炎的研究中,证明金黄仓鼠肾是一种对脑炎病毒极为敏感的组织,为供应疫苗生产,自1968年开始大量繁殖。但金黄仓鼠的腹泻却严重影响和威胁生产,曾多次发生     

清洁级金黄仓鼠种群的培育

我们从2002年3月开始进行清洁级金黄仓鼠种群的培育工作，经过一年的时间，目前种群已经初具规模；为探索用非剖腹产方法建立清洁级金黄仓鼠种群，我们采用隔离器饲养，逐代净化的方法；具体做法是：根据近两年来对各普通金黄仓鼠种群的微生物和寄生虫检测情况，并结合近期的检测结果，筛选一定数量发育良好，体质健康的40日龄金黄仓鼠，通过适当的体表消毒处理后，放入隔离器饲养和繁殖。     

乙型脑炎减毒活疫苗与灭活疫苗诱导小鼠免疫应答的比较

目的　比较乙型脑炎 (乙脑 )减毒活疫苗和灭活疫苗在小鼠体液和细胞的免疫应答。方法　应用检测特异性细胞毒性T细胞(CTL)活性的方法检测乙脑减毒活疫苗的细胞免疫应答 ,并以灭活疫苗作对照。结果　减毒活疫苗免疫小鼠后诱导的CTL均值为79.2 % ,较灭活疫苗 (2 9% )高 50 .2 % ,表明减毒活疫苗具有较强的特异性CTL活性。用同批减毒活疫苗免疫小鼠后其中和抗体效价为 1∶5 ,而同批的灭活疫苗为 1∶2 0 ,减毒活疫苗的免疫效力 (ID50 ) 3 .6× 1 0 - 6 /ml,显著高于灭活疫苗的 (4.0～ 4 .2 )× 1 0 - 4/ml。结论　乙脑减毒活疫苗诱导的免疫应答中细胞免疫在保护效力中占有重要地位     

两种纯化乙脑疫苗的不良反应对比观察

目的 比较乙型脑炎减毒活疫苗和Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗基础免疫、加强免疫及两种疫苗接种后的不良反应.方法 选择两个县的两组8月～3岁的健康婴幼儿共1864名接种不同疫苗,观察接种前和接种后6h、24h、48h、72h腋下温度、注射部位红肿直径和全身皮疹发生情况,按国家食品药品监督管理局"国食药监注[2005]493号<预防用疫苗临床试验不良反应分级标准指导原则>"进行不良反应分级.结果 疫苗接种后不良反应以发热为主达125人,其次为全身皮疹17人,注射部位红肿7人,未见潜在生命威胁的不良反应,所有接种反应均为一过性.乙型脑炎减毒活疫苗不良反应发生率为5.21%(基础免疫4.69%,加强免疫5.72%),Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗不良反应发生率为8.75%(基础免疫7.10%,加强免疫10.40%),两组不良反应的发生率差异有统计学意义.     

金黄仓鼠全价营养颗粒饲料的研究

金黄仓鼠在生物医学研究中用途广泛,特别是作为制造、生产乙型脑炎疫苗和狂大疫苗的原料动物,我国年需高达300万只左右。国内外许多单位繁育的金黄仓鼠,除用混合配制的所谓全价营养颗粒饲料外,尚须添加各种青绿饲料和麦芽或蚕蛹等高蛋白饲料。这种饲喂方法无法切断消化道病原微生物的传播,经常会发生腹泻(俗称湿尾病)等传染性疾病的流行,造成大批死亡而影响科研和制品生产。这对培育清洁级以上的高品质金黄仓鼠来说,一直是极大的障碍。为此,我们于1986年起进行了不添加新鲜青绿饲     

甘肃省2003～2005年口服脊髓灰质炎减毒活疫苗效价锥形抽样检测分析

目的 了解甘肃省口服脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(OPV)的质量(效价)变化情况.方法 按省、市、县、乡四级逐级抽样北京天坛生物制品有限公司生产的脊灰减毒活疫苗,用脊灰效价微量细胞培养法进行检测.结果 2003～2005年OPV检测除2004年古浪县疾控中心外,其余均达到≥3.50 Log CCID50/ml人群免疫有效标准.结论 脊灰疫苗效价检测是有效免疫的重要保证.     

入托入学儿童预防接种证查验及疫苗补种情况分析

目的:对辖区内的托儿机构及小学的预防接种情况进行调查,并了解疫苗补种情况。方法:收集我院辖区近3年内入托和入学儿童预防接种查验的相关资料,进行回顾性研究分析。结果:本次共调查了入托入学儿童近3200名,其中有预防接种证的有2742名,持证率达到了85.69%;且入托儿童的持证率显然高于入学儿童;脊髓灰质炎减毒活疫苗、白喉-破伤风联合疫苗和麻疹减毒活疫苗、乙型脑炎疫苗、流脑疫苗出现补种情况,补种率均在90%以上。结论:我院辖区内的入托、入学儿童疫苗免疫规划的补种落实效果较好,还可以进一步提高入托入学儿童的持证率。     

VEGF反义寡核苷酸抑制小鼠Lewis肺癌生长的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对C57BL/6小鼠Lewis肺癌肿瘤生长的抑制作用。方法制备C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,随机分为3组,每组10只VEGF反义寡核苷酸(ASPODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SPODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,分别皮下注射ASPODN及SPODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,每周2次,连续4周;观察各组小鼠肿瘤的生长情况、游标卡尺测量肿瘤体积大小。所有C57BL/6小鼠于接种后第25天先用二维超声观察肿瘤的实时图象,利用脉冲多普勒获取血流频谱,获得收缩期峰值速度(PS),阻力指数(RI)。断颈处死小鼠,光镜及电镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化,免疫组化法检测微血管密度(MVD)。结果与对照组瘤重比较(7.83±0.78)g、VEGF-ASPODN组(4.49±0.43)g能明显抑制小鼠肿瘤生长(P<0.01)、VEGF-SPODN组(7.73±0.69)g则无明显作用(P>0.05)。VEGF-ASPODN组、VEGF-SPODN组抑瘤率分别为42.7%、5.9%。组织形态学及超微结构观察,VEGF-ASPODN对肿瘤生长具有抑制作用。VEGF-ASPODN组与对照组相比较PS及RI有明显差异(P<0.01);VEGF-SPODN组与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论肿瘤原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。     

SPF家兔种群的建立

目的 为了建立我国SPF家兔种子核心群，使普通级免升级换代，以满足科研、生产及检定工作不断发展的需要，我们对普通级实验家兔进行了剖腹净化。方法 采用剖腹摘取子宫术，在无菌隔离器内以吮吸法人工哺乳仔兔，离乳后将正常菌群植入仔兔体内，并转入SPF屏障设施内饲养、繁殖。结果 建立了具有100只种兔的SPF兔核心群，兔群生长发育正常。经多次微生物检测，符合SPF标准。SPF兔群将作为建立SPF实验用兔生产群的核心种群。结论 通过剖腹技术，成功地建立了SPF实验用兔种群。     

金黄地鼠封闭群SPF化后的微卫星遗传学检测

目的检测和评估金黄地鼠封闭群SPF化后的遗传学变化,为SPF金黄地鼠遗传质量的控制提供技术资料。方法应用小鼠和大鼠的微卫星标记筛选适于金黄地鼠遗传检测的微卫星标记,并结合微卫星荧光标记-半自动基因分型技术,对成都生物制品研究所的SPF级金黄地鼠及其来源的普通级金黄地鼠进行遗传检测,计算其群体遗传学参数。结果对18个小鼠和6个大鼠微卫星标记进行了筛选,分别有2个小鼠和2个大鼠微卫星标记在金黄地鼠种群中具PCR扩增多态性。4个检测的微卫星位点在普通级金黄地鼠和SPF金黄地鼠种群分别发现25和20个等位基因,两群体的期望杂合度分别为0.4979和0.5048,其群体遗传多样性无显著差异;群体间的不同微卫星位点FST范围从0.0095到0.0367,平均为0.0315,表明两群体间的遗传分化很弱,其遗传多样性主要存在于群体内;Nei(1972)遗传距离和Nei(1978)无偏遗传距离分别为0.0678和0.0570,表明了2群体之间很高的遗传相似度和非常近的亲缘关系;Hardy-Weinberg平衡检验表明普通级和SPF金黄地鼠分别有2个和3个位点偏离遗传平衡,且偏离位点均表现为杂合子缺陷。结论该SPF金黄地鼠基本保持了其来源普通级黄地鼠的遗传多样性,两群体间遗传分化程度和遗传差异很小,但应进一步加强其封闭群的繁育控制,保持其遗传稳定性。     

实验动物运输盒微生物指标检测分析

目的 检测SPF金黄地鼠在从204车间转运到隔离器车间时微生物污染情况,同时对不同运输盒进行比较,筛选合格的实验动物运输盒.方法 用TSA培养皿模拟实验动物运输过程,比较沉降菌检测结果.结果 大小IVC笼盒内环境微生物能控制在14 cfu/4 h以下,而且菌落形态与SPF饲养间环境内的沉降菌基本一致,符合标准要求;甲乙普通运输盒内环境微生物却在70 cfu/4 h以上,不符合标准要求.结论 SPF金黄地鼠在从204车间转运到隔离器车间时未受到污染;实验动物转移运输应选择大小IVC笼盒.     

白化黑线仓鼠的培育研究

在驯育过程中,我们发现了6只黑线仓鼠白化个体,经过三年半人工繁育建立了目前国内外唯一的白化黑线仓鼠种群.原种增殖采取杂合子,白化间互交,以及子代与亲代回交方式,用目睹试配与定期同居的交配方法进行繁殖扩大种群.驯育期间我们观察了动物的性周期、妊娠判断、繁殖力和幼仔的的生长发育.黑线仓鼠(Cricetulu barabensis)俗称中国地鼠是分布于我国北方的小型野生啮齿类.早在本世纪初我国就应用于医学实验。40年代末,斯万德克(Schwentker)将其引到美国,经过几年的研究获得实验室繁殖成功,现已广泛应用于遗传、肿瘤和糖尿病等的研究。目前国内亦有一些单位进行驯育。虽然黑线仓鼠在国外已培育成纯品系、糖尿病品系,但迄今未见有白他黑线仓鼠报道。我们在驯育过程中于1984年4～6月发现一对野生原种杂合子鼠繁育了2胎仔鼠(其中有白化个体6只),经过三年半人工繁育建立了目前国内外唯一的白化黑线仓鼠种群.     

隔离器饲育SPF鸡微生物质量控制方法的建立

目的建立隔离器饲育SPF鸡生产管理方式,探讨并建立其微生物质量控制方法。方法对引进的SPF鸡种蛋进行孵化后,将种鸡置于隔离器中进行饲养,在种鸡10、20、40周龄时采取鸡血清进行微生物质量监测,检验当前SPF鸡生产管理和微生物质量控制方法的有效性。结果隔离器饲育SPF鸡初期由于对孵化环节控制不严出现了微生物污染现象。在对孵化环节操作管理改进后,隔离器饲育SPF鸡的微生物状况得到控制。结论通过加强各个环节消毒,隔离器饲育环境能够保证SPF鸡的微生物质量。适当控制隔离器内SPF鸡的密度不仅有利于SPF鸡的繁育和种蛋回收,而且有利于环境微生物的控制。     

使用超净工作台实施子宫摘除术净化KM小鼠的研究

目的建立SPF级湖北封闭群KM小鼠生产群.方法使用超净工作台实施子宫摘除术净化小鼠的方法,建立了SPF级湖北封闭群KM小鼠生产群,并对子一代进行了微生物及寄生虫的检测.结果使用上述方法实施手术67例,成功57例,得净化仔鼠509只,育成的460只小鼠符合SPF级标准.结论使用生物净化的方法可以保存优良实验动物品种.     

唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法的建立

实验用兔是实验动物的重要组成部分,主要应用于药品、生物制品的热原检定试验、抗血清的制备、皮肤刺激性试验和视神经、微生物学、运动医学等科研及教学领域,在我国的使用量仅次于大、小鼠、金黄仓鼠和豚鼠,是目前尚不可替代的实验材料和模型。国外发达国家实验兔研究与SPF级实验兔的培育和应用发展迅速。随着我国生命科学、医学领域研究水平的提高和为顺应我国新颁布的《中国药典》、《中国生物制品规程》对实验兔质量提出的要求,实验兔正逐步向SPF级／清洁级方向发展。本文就我国SPF级新西兰兔培育和生物特性研究工作的进展作一概述。     

SPF及清洁级种兔的培育

目的 建立SPF级和清洁级兔的种群和生产基地,建立在清洁级环境中饲养、繁殖清洁级兔的技术,提高实验动物用兔的质量。方法 利用子宫摘除术,在无菌隔离器中剥离子宫取仔,用人工哺乳方法将仔兔培育成无菌兔,再将双岐杆菌等5种微生物接种到无菌兔体内,使其成为无特定病原体(SPF)兔,并进一步在清洁级环境中培育成清洁级兔。结果 共做10批,剖孕兔20只,每批得仔兔10—15只,人工哺乳成活率为7．1％～82％。共育成52只,并已开始繁殖。人工培育出的SPF兔和清洁级兔,经国家动物标准检测室(药品生物制品监定所)检测均合乎相应级别的国家标准。结论 人工哺乳培育SPF兔并转化成清洁级兔的技术已经成熟,具有可重复性和可操作性。     

SPF级BALB/c裸小鼠的生产管理与质量控制

SPF级裸小鼠的饲养及质量控制涉及多方面的环节和工作。生产管理及质量控制效果,直接影响动物的数量和质量。我中心2007年开始,逐步建立了规范的SPF级BALB/c裸小鼠生产繁育体系。裸小鼠生产繁育至今,数量和质量得到较好的保证。本文通过介绍我中心SPF级BALB/c裸小鼠的设施、种群、饲养管理及质量控制的具体做法和经验体会,为SPF级BALB/c裸小鼠相关繁育和研究提供参考和借鉴。