IL—18对狼疮性肾炎患者外周血淋巴细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的：研究LN患者外周血淋巴细胞（PBL）在IL－18刺激下细胞凋亡及凋亡相关基因表达情况。方法：Anniexin V联合PI染色定量法及免疫荧光染色法,分析了12例活动期和26例非活动期狼疮性肾炎患者PBL在IL－18刺激培养后凋亡发生率,凋亡相关基因bcl-2和Fas蛋白的表达以及疾病活动性与淋巴细胞凋亡发生率的相关性。结果：在IL－18刺激培养作用下,活动期LN淋巴细胞凋亡发生率明显增高（P＜0．01）,而非活动期则无明显区别（P＞0．05）,疾病活动性与体外淋巴细胞凋亡率呈正相关（P＜0．01）。bcl-2表达活动期显著性升高（P＜0．05）,非活动期无显著性差异（P＞0．05）。Fas表达活动期显著升高（P＜0．001）,非活动期明显升高（P＜0．05）。结论：IL－18可引起LN患者外周血淋巴细胞凋亡率的增高,表明IL－18在体内凋亡或凋亡相关性免疫机制中起着一定的作用。     

孟鲁司特对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的作用及其机制

目的：观察孟鲁司特（MK）对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的影响并探讨其分子机制。方法：40只大鼠随机分为正常组、哮喘组、MK和地塞米松（DXM）组。采用卵蛋白（OVA）腹腔注射致敏并反复雾化吸入刺激建立大鼠哮喘模型，药物干预组管喂MK或腹腔注射DXM。采用双标记双染色的方法先标记CD4^ /CD8^ T淋巴细胞，然后用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，采用免疫组化的方法检测淋巴细胞Fas的表达。结果：哮喘大鼠外周血及肺组织中T淋巴细胞的凋亡率低于正常组大鼠，MK、DXM处理后，CD4^ /CD8^ T淋巴细胞凋亡率均明显升高，与哮喘组及正常组比较差异均具显著性（P＜0．01）。体外培养时MK呈剂量和时间依赖性促进OVA抗原刺激的外周血淋巴细胞Fas表达水平及凋亡，其中以CD4^ T淋巴细胞凋亡率和Fas表达的增加更为明显，与CD8^ T淋巴细胞比较差异具显著性（P＜0．05）。10^-6mol/L的MK可明显促进10^-4mol/L DXM对淋巴细胞凋亡的诱导作用。结论：MK可促进哮喘大鼠外周血及肺组织中CD4^ T淋巴细胞凋亡，该作用可能通过Fas途径介导。MK对DXM促淋巴细胞凋亡具有协同作用。     

MML-1细胞G_1期阻断对Fas诱导细胞凋亡的抑制作用

目的分析Fas诱导的B淋巴瘤细胞株MML-1凋亡过程中,PMA阻断MML-1进入细胞周期后细胞凋亡敏感性降低的原因。方法采用10 nmol/L PMA预处理MML-1细胞24 h,用流式细胞仪检测PMA阻断细胞周期前后50 ng/mL抗Fas抗体诱导的MML-1细胞凋亡率的变化。采用PI-Triton X和active caspase-3/8双染色、Western blotting技术分析PMA处理前后,经抗Fas抗体诱导的MML-1细胞内活化caspase-3/8的表达。通过Western blotting技术检测G1期细胞的凋亡相关蛋白caspase-3/8、Bcl-2、FLIP和Akt的表达。结果 PMA预处理MML-1细胞24 h后,G1期细胞比例显著升高,达93.77%。PMA预处理前,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为56%;经PMA预处理,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为14%。流式细胞术和Western blotting检测发现经PMA预处理,抗Fas抗体诱导后活化caspase-3和caspase-8蛋白的表达受到显著抑制。Westernblotting检测显示...     

MML-1细胞G《,1》期阻断对Fas诱导细胞凋亡的抑制作用

目的 分析Fas诱导的B淋巴瘤细胞株MML-1凋亡过程中,PMA阻断MML-1进入细胞周期后细胞凋亡敏感性降低的原因.方法 采用10 nmol/L PMA预处理MML-1细胞24 h,用流式细胞仪检测PMA阻断细胞周期前后50 ng/mL抗Fas抗体诱导的MML-1细胞凋亡率的变化.采用PI-Triton X和active caspase-3/8双染色、Western blotting技术分析PMA处理前后,经抗Fas抗体诱导的MML-1细胞内活化caspase-3/8的表达.通过Western blotting技术检测G1期细胞的凋亡相关蛋白caspase-3/8、Bcl-2、FLIP和Akt的表达.结果 PMA预处理MML-1细胞24 h后,G1期细胞比例显著升高,达93.77%.PMA预处理前,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为56%;经PMA预处理,抗Fas抗体诱导6 h后的MML-1细胞凋亡率为14%.流式细胞术和Western blotting检测发现经PMA预处理,抗Fas抗体诱导后活化caspase-3和caspase-8蛋白的表达受到显著抑制.Westernblotting检测显示G1期细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达上调.结论 将MML-1细胞阻断在G1期能够抑制Fas诱导的细胞凋亡,可能与凋亡抑制分子Bcl-2在G1期的表达上调有关.     

两种状态抗CD_3单抗诱导人T淋巴细胞活化增殖的初步观察

目的：观察并比较粘附状态抗ＣＤ３单抗和游离状态抗ＣＤ３单抗诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖的能力。方法：采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入淋巴细胞增殖试验、苔盼蓝拒染法、间接免疫荧光染色法以及ＣＴＬＬ细胞ＩＬ－２检测法，分别检测人外周血单个核细胞，经两种状态抗ＣＤ３单抗刺激后，其增殖活性、外源性ＩＬ－２的协同作用、内源性ＩＬ－２释放以及ＩＬ－２Ｒ表达等生物免疫学指标。结果：粘附状态抗ＣＤ３单抗刺激ＨＰＢＭＣ，其增殖活性、活细胞总数以及增殖活性维持的时间均高于游离状态抗ＣＤ３单抗，且前者不依赖外源性ＩＬ－２；粘附状态抗ＣＤ３单抗诱导ＨＰＢＭＣ释放内源性ＩＬ－２以及细胞表面ＩＬ－２Ｒ表达的能力也强于游离状态抗ＣＤ３单抗。结论：粘附状态抗ＣＤ３单抗比游离状态抗ＣＤ３单抗具有更强的诱导人Ｔ淋巴细胞活化增殖能力。     

IFN-γ及IL-6对血液透析患者淋巴细胞凋亡的影响

目的 :　　为了探讨细胞因子对血液透析患者活化诱导的淋巴细胞凋亡的影响。方法 :采用碘化吡啶染色法 ,在流式细胞仪上检测维持性血透患者活化诱导的淋巴细胞凋亡情况。结果 :与正常对照组比较 ,维持性血透患者活化诱导的淋巴细胞凋亡增强 ,而且随着透析间期时间的延长 ,其凋亡率逐渐增加 ,呈现时间依赖性。 IFN-γ对活化诱导的淋巴细胞凋亡呈现轻度抑制作用 ,但差异无显著性意义 ;而 IL -6能促进活化诱导的淋巴细胞凋亡 ,具有浓度依赖性。结论 :Th1 / Th2类细胞因子可能通过影响血透患者活化诱导的淋巴细胞凋亡 ,调节免疫应答的强度 ,…     

Fas诱导MML-1凋亡时活化caspase-3 表达与细胞周期的关系

目的 研究Fas诱导的B淋巴细胞瘤细胞株MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3表达与细胞周期的关系.方法 抗Fas抗体孵育MML-1不同时间以诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率并验证MML-1对Fas诱导凋亡的敏感性.采用PI-Triton X和FITC-active caspase-3双染色分析经Fas诱导凋亡的MML-1内活化caspase-3的表达.以细胞周期蛋白cyclin A、B_1、E 标记Fas诱导凋亡的处于不同增殖周期MML-1(S、G_2/M和G_1期细胞),流式细胞术检测细胞内活化caspase-3的表达.结果 Fas诱导6 h后,MML-1凋亡率达到56%.Fas诱导4 h后,活化caspase-3在G_1期细胞内表达显著升高,仅有少量S期和G_2/M期细胞表达活化caspase-3.Cyclin A、B_1阴性而cyclin E阳性MML-1表达活化caspase-3.结论 Fas诱导MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3的表达与细胞周期有关.G_1后期和S早期的MML-1最先表达活化caspase-3,且对Fas诱导凋亡的敏感性最高.     

抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体对哮喘肺组织T细胞增殖能力的影响

目的：探讨抗细胞间粘附分子－1（ICAM－1）单克隆抗体（单抗）对过敏性小鼠哮喘模型肺组织T淋巴细胞增殖反应和活化状态的影响,方法：应用鸡卵清蛋白致敏和刺激小鼠以复制过敏性哮喘模型,收集肺组织T细胞并以流式细胞仪检测其增殖反应,以及活化后产生白细胞介素－5（IL－5）的能力。结果：哮喘小鼠肺组织T细胞的增殖反应明显增强,肺组织局部所产生的IL－5的水平也显著增高,经抗ICAM－1单抗处理后,T细胞增殖能力显著降低,同时,抗ICAM－1单抗还可以抑制IL－5的产生。结论：抗ICAM－1单抗能够抑制肺组织局部T细胞的增殖以及IL－5的产生。     

Fas诱导MML-1凋亡时活化caspase-3表达与细胞周期的关系

目的研究Fas诱导的B淋巴细胞瘤细胞株MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3表达与细胞周期的关系。方法抗Fas抗体孵育MML-1不同时间以诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率并验证MML-1对Fas诱导凋亡的敏感性。采用PI—Triton X和FITC—active caspase-3双染色分析经Fas诱导凋亡的MML—1内活化caspase-3的表达。以细胞周期蛋白cyclin A、B1、E标记Fas诱导凋亡的处于不同增殖周期MML-1（S、G2／M和G1期细胞）,流式细胞术检测细胞内活化caspase-3的表达。结果Fas诱导6h后,MML-1凋亡率达到56％。Fas诱导4h后,活化caspase-3在G1期细胞内表达显著升高,仅有少量S期和G,／M期细胞表达活化caspase-3。Cyclin A、B1阴性而cyclinE阳性MML-1表达活化caspase-3。结论Fas诱导MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3的表达与细胞周期有关。G1后期和S早期的MML-1最先表达活化caspase-3,且对Fas诱导凋亡的敏感性最高。     

γ射线照射后免疫细胞表面Fas表达变化规律的研究

目的 观察γ射线照射后小鼠脾赃淋巴细胞凋亡的变化规律与Fas(CD95)表达的关系。方法 采用PI染色、双荧光流式细胞术及免疫组织化学的ABC方法研究不同剂量γ射线照射后不同时间,小鼠脾脏淋巴细胞凋亡及CD95表达的规律。结果 小鼠脾脏淋巴细胞对不同剂量照射的凋亡敏感性有显著性差异,4Gy照射后凋亡率最高(在2～6Gy之间观察),淋巴细胞表面Fas的表达随照射后细胞凋亡率的变化而改变。结论 B细胞较T细胞具有更高的辐射凋亡敏感性;脾脏淋巴细胞在辐射后表现出明显的Fas介导凋亡。     

抗Fas核酶抑制小鼠T细胞凋亡

目的 研究抗Fas核酶对小鼠原代T细胞凋亡的抑制作用，探索增强T细胞抗凋亡能力的新途径。方法 设计并合成针对小鼠Fas基因的锤头状核酶，通过电穿孔转染法将其导入小鼠脾脏T细胞，通过RT-PCR、Westernblot检测细胞上Fas的表达，细胞经抗Fas的抗体(JO2)作用后。通过Caspase-3活性检测试剂盒测转染前后细胞Cagpase-3活性的变化。MTT法测细胞的增殖，Annexm-V凋亡检测试剂盒测细胞凋亡。结果 ①与对照组、空载体和突变核酶转染组相比，细胞表面的Fas水平明显降低；②与抗Fas的抗体9呼育后，与转染空载体和突变核酶的细胞相比，转染核酶的细胞Caspase-3活性明显降低；③经抗Fas抗体处理后，细胞的增殖活性明显增高；④与空载体和突变核酶转染组相比，转染核酶的细胞凋亡率明显降低。结论 小鼠活化T细胞上高表达Fas，抗Fas核酶能显著降低其Fas水平，使细胞免于Fas途径的凋亡，从而增强其抗凋亡能力。     

McAb共刺激PBLs淋巴细胞在培养体系中的状态及超微结构的 …

通过用抗ＣＤ３,ＣＤ２８＋ＣＤ８０ ＭｃＡｂ激活健康人的ＰＢＬｓ,并以ＰＨＡ,ＩＬ－２,ＰＢＬｓ为对照组;对各组不同时间段的淋巴细胞超微结构进行观察。结果提示：ＣＤ３及ＣＤ２８＋ＣＤ８０刺激淋巴细胞增殖外,也能使淋巴细胞活化,细胞表现为胞体增大,细胞器增多,具有粗大的绒毛和突出伪足,并可见单核细胞吞噬活跃。     

足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性及影响因素的初步观察

目的　探讨足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性及其影响因素。②方法　以健康成人为对照 ,采用凋亡细胞计数和片段DNA电泳观察足月新生儿T淋巴细胞凋亡特性 ;用免疫荧光法、ELISA法分别检测足月新生儿CD2 5,CD3 8表达率和IL 2 ,IL 6产生能力 ,并分析其与凋亡率的相关性。③结果　经PHA刺激培养 2 4,48h足月新生儿T淋巴细胞凋亡率明显高于成人组 (t=32 .2 5 8,2 1.6 80 ,P <0 .0 1) ;足月儿组培养 0 ,48h的CD3 8表达率与T淋巴细胞凋亡率呈正相关 (r=0 .894,0 .774,P <0 .0 1) ,而培养 48h的CD2 5表达率与T淋巴细胞凋亡率呈负相关 (r =- 0 .886 ,P <0 .0 1) ;足月儿组IL 6产生水平明显低于成人组 (t=6 .741,P <0 .0 1) ,而T淋巴细胞凋亡率与IL 2 ,IL 6产生水平皆无相关性。④结论　凋亡过剩是新生儿T淋巴细胞功能不成熟的重要特征之一。     

白细胞介素24及其抗肿瘤作用

白细胞介素24(IL-24)又称黑素瘤分化相关基因7(melanoma differentiation associated gene-7,MDA-7)主要表达于脾、胸腺、外周血白细胞、单核细胞等免疫组织和分化的黑素细胞．其他组织细胞可被诱导表达。IL-24受体有2种(IL-22R1／IL-20R2和IL-20R1／IL-20R2)。IL-24可诱导人外周血单个核细胞产生高水平IL-6、TNF—α和IFN-γ以及少量IL-1β、IL-12和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)。将携IL-24基因的腺病毒质粒(Ad—IL-24)转染细胞后能抑制多种肿瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡,但对正常细胞无影响。IL-24的这些作用与其诱导凋亡相关因子(BAX／Bcl-2,BAK／Bcl-2)的比例变化、上调p38-MAPK及可被生长停滞和DNA损伤诱导的基因家族产物增加有关。提示IL-24有治疗肿瘤的临床价值,基于Ad—IL-24基因治疗的临床试验已经开始。现就IL-24及其抗肿瘤作用的现状和发展作一综述。     

三氧化二砷对淋巴细胞的毒性作用及机制研究

目的 研究As2O3对人外周血淋巴细胞的毒性作用,探讨As2O3损伤淋巴细胞的机制。方法 从正常人外周血中分离淋巴细胞,台盼蓝染色检测细胞活性;FITC,Annexin-V／PI染色检测细胞凋亡;电镜观察形态学改变;流式细胞术观察细胞bcl-2表达水平。结果1—50μmol／L As2O3对正常人外周血淋巴细胞的生长有明显的抑制作用,其抑制效应随着As2O3浓度的增高和作用时间的延长而增强,24、48、72h的半数抑制浓度分别为7．74、4．81和3．19μmol／L。经10μmol／L As2O3处理的淋巴细胞出现细胞体积缩小、胞质浓缩、染色质聚集、固缩、沿核膜内侧分布呈新月形等典型的凋亡细胞特征性形态改变;2．0-10．0μmol／L As2O3可显著降低淋巴细胞bcl-2蛋白的表达水平。结论 As2O3对人外周血淋巴细胞有明显的毒性效应,主要作用机制为通过抑制bcl-2表达而诱发细胞凋亡。     

树突状细胞单克隆抗体对大鼠心脏移植排斥反应的免疫抑制作用

探讨树突状细胞单克隆抗体（DC McAb）对大鼠心脏移植排斥反应的免疫抑制效果及其对细胞免疫和体液免疫的影响。方法：以大鼠同种异体腹腔心脏移植为模型（Wistar→SD），应用含DC McAb的WZD腹水按1∶25（McAb 25组）和1∶50（McAb 50组）稀释，心脏移植后受体腹腔注射给药7?d，1?ml/d，观察移植心脏存活时间。另设非移植组，相同方法给药4～5?d后处死大鼠，取脾观察DC McAb对大鼠脾淋巴细胞增殖、白细胞介素 2（IL 2）生成活性及绵羊红细胞（SRBC）免疫后抗体形成细胞功能的影响。结果：受体体内短期应用DC McAb，McAb 25组大鼠移植心脏存活时间为（19.37±2.93）d，McAb 50组为（19.13±2.25）d，而生理盐水对照组（NS组）为（8.75±1.28）d(P均＜0.01)；两McAb组脾淋巴细胞增殖、IL 2生成活性及抗SRBC抗体形成能力均明显低于对照组（P均＜0.01）。结论：DC McAb能够明显延长大鼠移植心脏存活时间，对大鼠脾淋巴细胞增殖、IL 2生成活性及抗体形成细胞功能均有明显抑制作用。     

TRIM21促进T淋巴细胞凋亡的分子机制及临床应用价值分析

目的 探讨E3连接酶TRIM21在anti-Fas诱导的T淋巴细胞凋亡中的作用及其分子机制,为评价TRIM21在临床上的应用奠定基础.方法 构建TRIM21真核表达载体,设计TRIM21干扰片段,分别将它们过度表达于Jurkat T淋巴细胞中.将流式细胞仪分选的阳性细胞分为空载无药物组、空载药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21无药物组和TRIM21药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)分别进行药物处理,将转入对照双链小干扰RNA(siRNA)与TRIM21 siRNA的Jurkat T淋巴细胞分为对照siRNA无药物组、对照siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21 siRNA无药物组和TRIM21 siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h),并采用Annexin V/碘化丙啶双染法测定Jurkat T淋巴细胞的凋亡率.将分选Jurkat T淋巴细胞分为空载组和TRIM21过表达组,分别采用蛋白质免疫印迹法与实时定量聚合酶链反应检测TRIM21过度表达对抗凋亡蛋白c-FLICE抑制蛋白(FLIP)的蛋白质及mRNA水平表达的影响.结果 空载药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于空载无药物组(P＜0.001),TRIM21药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于TRIM21无药物组(P＜0.001).对照siRNA药物处理组的JurkatT淋巴细胞凋亡率显著高于对照siRNA无药物组(P＜0.001),但TRIM21 siRNA药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率大大降低,显著低于对照siRNA药物处理组(P＜0.001).以空载组的c-FLIP(L)蛋白质表达量为100％,TRIM21过表达组则为(31.25±0.25)％.以空载组的c-FLIP(L) mRNA表达量为100％,TRIM21过表达组则为(25.60±3.33)％.结论 TRIM21能抑制抗凋亡蛋白c-FLIP的表达,增强T淋巴细胞对Fas诱导细胞凋亡的敏感性.     

FK506促进异体神经匀浆激活的巨噬细胞凋亡的实验研究

目的 研究FK506促进外周血来源的异体神经匀浆激活的巨噬细胞的凋亡。方法 取1月龄SD幼鼠,腹腔抽取法培养异体神经匀浆激活的巨噬细胞。按不同浓度的FK506分组:A组空白对照组、B组0.25ng/ml、C组0.5ng/ml、D组1.0ng/ml。将4组处理因素分别加入长有巨噬细胞的96孔板中,用MTT法检测巨噬细胞的活力情况,用倒置显微镜和荧光显微镜及透射电镜对巨噬细胞的凋亡进行形态学上的观察与鉴定。流式细胞仪检测巨噬细胞凋亡情况。结果 B组和C组均可见异体神经匀浆激活的巨噬细胞的活性减弱及细胞凋亡发生,D组可见巨噬细胞发生坏死性改变。透射电镜和荧光显微镜可观察到巨噬细胞的凋亡前期和凋亡小体出现。流式细胞仪检测B和C组凋亡率为24.6%和26.5%,均高于对照组,D组发生坏死。结论 FK506可以在早期促进异体神经匀浆激活的巨噬细胞的凋亡,从而减少或抑制周围神经异体移植后巨噬细胞所介导的免疫排斥反应。