维拉帕米对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成的影响

目的 探讨钙通道阻滞剂维拉帕米治疗增生瘢痕的作用机理及进一步应用于临床的可能性。方法 采用组织块法进行增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）的体外培养;MTT比色法检测维拉帕米对HSFB生长增殖的 影响;^3H－脯氨酸掺入法及羟脯氨酸比色法测定维拉帕米对细胞胶原合成的影响;Northern Blot检测维拉帕米对HSFBⅠ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响。结果 维拉帕米对HSFB的增殖、胶原合成及Ⅰ、Ⅲ型前胶原的基因表达均呈剂量依赖性抑制,以100μmol/L浓度组作用最为显著。结论 维拉帕米可以通过减少Ⅰ、Ⅲ型前胶原的基因表达等途径抑制瘢痕增生。     

17—β雌二醇对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的：研究雌激素对增生性瘢痕形成的影响。方法：对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）进行体外培养,通过^3H-脯氨酸掺入法及人PCⅢ（hPCⅢ）放免试剂盒测定HSFB胶原合成含量。结果：17-β雌二醇（17-βE2）对HSFB胶原合成呈明显剂量依赖性促进（P＜0．01）;17-βE2对HSFB胶原合成的影响无明显性别差异（P＞0．05）。结论：雌激素可以促进增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成,而且无性别差异。     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

雷公藤提取物抑制增生性瘢痕成纤维细胞的实验研究

目的　为雷公藤提取物 (LLZ)治疗烧伤后增生性瘢痕提供实验依据。　方法　体外培养增生性瘢痕成纤维细胞 ,培养液中加入不同浓度的LLZ(5× 10 -3 、5× 10 -4、5× 10 -5、5× 10 -6g/L) ,2 4h后观察细胞形态、增殖活性及药物雷公藤提取物的细胞毒性。　结果　不同浓度的LLZ均能改变成纤维细胞形态 ,减少细胞数量 ,同时可明显降低细胞增殖活性。　结论　LLZ对烧伤后增生性瘢痕成纤维细胞形态和增殖均有明显的抑制作用 ,此作用并非毒性所至。     

白藜芦醇通过抑制Egr1的表达抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长和迁移

目的 探讨白藜芦醇是否通过调节早期生长反应1(early growth response 1,Egr1)蛋白的表达发挥抑制增生性瘢痕成纤维细胞生长和迁移的作用。方法 选取自2016年1月至2019年1月于北部战区总医院烧伤整形科就诊的12例增生性瘢痕患者作为研究对象,分离培养增生性瘢痕成纤维细胞。将细胞分成4组,分别使用0、0.1、0.5和1.0 g/L的白藜芦醇作用于增生性瘢痕成纤维细胞。处理1～4 d后通过四甲基噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromidesigmam, MTT）实验检测细胞增殖能力。不同因素处理细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡水平,transwell实验检测细胞迁移能力。蛋白免疫印迹实验检测Egr1、Cyclin D1、p21和MMP9的表达水平。结果 细胞增殖实验检测结果显示,白藜芦醇具有显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖能力（P<0.05）。白藜芦醇作用于增生性瘢痕成纤维细胞24 h后,能够显著上调G0-G1期细胞的百分比（P<0.05）,下调S期细胞的百分比（P<0.05）,...     

丹参对兔耳瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的 探讨丹参对兔耳瘢痕成纤维细胞超微结构的影响,揭示其对瘢痕的作用及机制.方法 用丹参对兔耳瘢痕模型进行体内试验,将4只健康的日本大耳白兔的32个耳瘢痕模型随机分为对照组(10个瘢痕)及2个实验组(各11个瘢痕);对照组注射生理盐水,2个实验组分别注射浓度为0.75g/ml和1.50g/ml丹参液150mg和300mg,于注射后第28、35天分别处死白兔,取材进行HE染色、Masson染色和柠檬酸铅-醋酸铀双染色,采用光镜和透射电镜进行观察.结果 对照组成纤维细胞丰富,细胞内粗面内质网发达,未见凋亡小体;2个实验组均表现为瘢痕成纤维细胞减少、胶原合成降低、细胞内粗面内质网减少和凋亡小体产生,而且2个实验组间无明显差别.结论 丹参可抑制兔耳瘢痕模型成纤维细胞的生长、增殖及胶原合成.     

17-β雌二醇、孕酮对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响

目的:研究雌性激素对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响。方法:对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)进行体外培养,利用MTT比色法及3H-TdR掺入法测定17-β雌二醇(17-βE2)、孕酮(P)对HSFB生长增殖的影响;并且对两种激素作用效果加以比较。结果:17-βE2 、P对HSFB生长增殖的抑制作用呈明显的剂量依赖性(P<0.01),17-βE2 总的抑制作用比P强(P<0.05)。结论:在体外环境中,雌性激素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖,且雌激素的作用效果比孕激素强。     

γ-干扰素对增生性瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的观察γ干扰素对增生性瘢痕及成纤维细胞的作用，探索γ干扰素治疗增生性瘢痕的依据。方法取１０例患者增生性瘢痕标本，培养增生性瘢痕的成纤维细胞，取第１代细胞，分为实验组和对照组。实验组加入γ干扰素１００Ｕ／ｍｌ，作用５天，并观察成纤维细胞的细胞计数、肌成纤维细胞分化比例及细胞凋亡率。结果实验组成纤维细胞计数、肌成纤维细胞分化比例下降，细胞凋亡率增加，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论γ干扰素抑制成纤维细胞生长，抑制向肌成纤维细胞分化，促进成纤维细胞凋亡。     

血管紧张素II对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响

目的:探讨血管紧张素II及其I型受体(AT1)拮抗剂洛沙坦(losartan)对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响。方法:体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,在不同浓度的血管紧张素II、losartan、PD123319作用下,观察成纤维细胞的生长情况,并绘制生长曲线,采用MTT法和3H-TDR掺入释放法分别检测成纤维细胞增殖和DNA含量的情况。结果:血管紧张素II在浓度为10-8mol/L～10-5mol/L时,成纤维细胞的细胞数量明显增多,DNA含量增加(P<0.05);losartan能几乎完全抑制AngII的这种作用,PD123319对此作用几乎没有影响。结论:AngII可促增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,该作用主要通过AngII的I型受体介导完成,AT1的拮抗剂有望在增生性瘢痕防治中发挥重要作用。     

血管紧张素Ⅱ对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ及其Ⅰ型受体（AT1）拮抗剂洛沙坦（losartan）对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响。方法：体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞，在不同浓度的血管紧张素Ⅱ、losartan、PD123319作用下，观察成纤维细胞的生长情况，并绘制生长曲线，采用MTT法和3H—TDR掺入释放法分别检测成纤维细胞增殖和DNA含量的情况。结果：血管紧张素Ⅱ在浓度为10^-8mol／L-10^-5mol／L时，成纤维细胞的细胞数量明显增多，DNA含量增加（P〈0．05）；losartan能几乎完全抑制AngⅡ的这种作用，PD123319对此作用几乎没有影响。结论：AngⅡ可促增生性瘢痕成纤维细胞的增殖，该作用主要通过AngⅡ的Ⅰ型受体介导完成，AT1的拮抗剂有望在增生性瘢痕防治中发挥重要作用。     

氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法:以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将氨甲喋呤(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)加入细胞培养液中进行干预并与空白对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响。结果:10-6mol/L、10-5mol/L的氨甲喋呤对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),10-9mol/L～10-5mol/L的氨甲喋呤对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P<0.01)。结论:氨甲喋呤在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用。     

光动力学治疗对瘢痕成纤维细胞增殖及其细胞周期的影响

目的 探讨血卟啉单甲醚-光动力学疗法对体外培养瘢痕成纤维细胞的作用.方法 原代培养瘢痕组织来源的成纤维细胞后,建立细胞系,实验采用第4～6代细胞.银染细胞后镜下观察,并计算核仁组成区的相对面积(I.S%);采用流式细胞技术,分析光动力学治疗后各细胞周期中细胞分布比例,并计算增殖指数.结果 ①光动力学治疗后瘢痕成纤维细胞内I.S%显著降低;②流式细胞仪检测结果表明光动力学治疗组S期峰低于对照组,S期细胞比例显著降低,为(11.2±2.3)%;③计算对照组和光动力学治疗组的增殖指数,分别为(35.0±3.4)%和(27.2±3.1)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 血卟啉单甲醚-光动力学疗法能够抑制瘢痕成纤维细胞的过度增殖,改变其细胞周期分布.     

丹参注射液对腹膜纤维化大鼠腹膜通透性的影响

目的：探讨中药丹参对大鼠腹膜透析模型腹膜形态及功能的影响。方法：将56只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丹参低剂量组、丹参中剂量组、丹参高剂量组。以腹腔注射脂多糖复制动物模型,并予相应药物干预,实验周期28d。结果：丹参组在2h腹透液中Scr、BUN、Glu水平、网膜透光度、抑制血管增生、降低腹透液NO含量方面优于模型组,在腹透液超滤、2h腹透液中白蛋白水平、腹透液中K＋水平与模型组差异无统计学意义。病理上丹参组在改善炎症、血管扩张出血方面并无明显优势,但能延缓纤维组织增生,光镜、电镜显示丹参可延缓腹膜纤维化的程度,以中剂量丹参治疗组作用最明显。结论：加入脂多糖的4.25%葡萄糖腹透液可损伤腹膜结构和功能,丹参能够拮抗脂多糖对腹膜间皮层结构的损伤,减少基质蓄积,维持了腹膜间皮层结构的完整,改善腹膜结构,提高透析效能,延缓腹膜纤维化。     

光动力学治疗对瘢痕成纤维细胞增殖及其细胞周期的影响

Objective To investigate the effect of HMME-PDT on the proliferation and cell distribution of hypertrophic scar fibroblast (HSF). Methods HSF were cultured and only 4-6th passages were used in this study. Argyrophilic protein in nucleolar organizer regions( AgNORs) were caculated by I. S% after argyrophilic staining. Flow cytometry was applied to analyze the cell cycle and proliferation index (PI). Results ① I. S% of HSF after HMME-PDT was reduced markedly. ② HMME-PDT inhibited HSF entering S stage from G, stage, cell percentage in S stage was decreased to(11. 2 ± 2. 3 ) % . ③ PI in HMME-PDT group was less than that in control group [( 35.0 ± 3.4) % vs (27. 2 ±3. 1)% , P <0.05]. Conclusions HMME-PDT can inhibite proliferation of HSF, and chang cell distribution.     

光动力学治疗对瘢痕成纤维细胞增殖及其细胞周期的影响

Objective To investigate the effect of HMME-PDT on the proliferation and cell distribution of hypertrophic scar fibroblast (HSF). Methods HSF were cultured and only 4-6th passages were used in this study. Argyrophilic protein in nucleolar organizer regions( AgNORs) were caculated by I. S% after argyrophilic staining. Flow cytometry was applied to analyze the cell cycle and proliferation index (PI). Results ① I. S% of HSF after HMME-PDT was reduced markedly. ② HMME-PDT inhibited HSF entering S stage from G, stage, cell percentage in S stage was decreased to(11. 2 ± 2. 3 ) % . ③ PI in HMME-PDT group was less than that in control group [( 35.0 ± 3.4) % vs (27. 2 ±3. 1)% , P <0.05]. Conclusions HMME-PDT can inhibite proliferation of HSF, and chang cell distribution.     

重症急性胰腺炎器官损伤与内皮素-1mRNA表达的关系及丹参的影响

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)内皮素-1(ET-1)mRNA表达对胰腺及肺、肾损伤的作用机制,观察丹参注射液对ET-1mRNA表达及病情转归的影响。方法将Wistar大鼠随机分为模型组(n=15)、丹参组(n=15)、对照组(n=15)。建立SAP模型后,丹参组动物立即肌肉注射丹参注射液(每日2ml/kg体重),每6h1次,共给药4次。对照组仅行假手术。各组动物在术后24h测血淀粉酶、ET-1和腹水量。使用原位杂交和图像分析检测胰、肺、肾ET-1mRNA的表达强度,并观察胰、肺、肾病理变化。结果模型组血中淀粉酶(2156.05±355.87)U/L和腹水量(9.87±2.34)ml显著高于丹参组(1439.21±332.99)U/L、(5.27±2.81)ml和对照组(215.67±37.27)U/L、0ml(P<0.01)。模型组血中ET-1(185.47±20.80)ng/L高于丹参组(164.27±18.53)ng/L和对照组(72.90±17.27)ng/L(P<0.05,P<0.01)。模型组胰、肺、肾中ET-1mRNA表达显著高于丹参组(P<0.01)。丹参组胰、肺、肾病理改变较模型组减轻。结论SAP时胰腺的ET-1mRNA高表达导致ET-1过度生成并可能继发引起肺、肾病理损害。丹参能抑制胰腺的ET-1mRNA的过度表达,减轻血管内液体丢失,改善血流动力学,从而对胰腺及肺、肾组织起保护作用。     

5-氨基酮戊酸光动力疗法对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞生长和增殖影响的初步研究

目的：探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对体外培养的增生性瘢痕组织的成纤维细胞生长和增殖的影响,观察细胞的形态学及超微结构的变化,并探讨可能的机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测ALA,激光照射对体外培养的成纤维细胞增殖的影响;lmmol／L的ALA接受在不同的时间激光照射对成纤维细胞增殖的影响;在光镜和电镜下观察ALA-PDT对细胞形态和超微结构的影响;用分光光度法检测ALA-PDT对细胞氧自由基含量、超氧化物歧化酶活性的影响。结果：单一的激光照射对成纤维细胞的生长没有影响;1、10、10。和103mmol／L的ALA对细胞生长有一定的抑制作用（P〈O．05;lmm01／L的ALA接受20min、40min和60min激光照射后细胞的增殖明显下降（P〈0．05）,呈时间依赖关系;ALA-PDT作用于细胞后,细胞体积变大,正常的细胞连接消失,细胞内的线粒体减少、体积增大,内质网呈空泡化;ALA—PDT作用于细胞后,细胞ROS含量升高,SOD活性降低（P〈0．05）。结论：ALA—PDT对体外成纤维细胞具有明显的损伤作用,对细胞的增殖和生长有一定的抑制作用;其作用机制可能与ALA-PDT对细胞的氧化损伤有关。     

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。     

血管紧张素对增生性瘢痕成纤维细胞纤维连接蛋白合成的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其Ⅰ型、Ⅱ型受体阻断剂和钙调神经磷酸激酶（CaN）的阻滞利环胞素A（CsA）对增生性瘢痕来源的成纤维细胞纤维连接蛋白mRNA和蛋白表达的作用。方法：体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞，分别将一定浓度的AngⅡ（10^-9～10^-5mmol／L），和AngⅡ10^-6mmol／L加上不同阻滞剂losartan、PD123319、环胞素A（浓度均为10^-5mmol／L）加入细胞培养液中刺激48h，分别采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及Westernblot印迹方法检测增生性瘢痕成纤维细胞纤维连接蛋白（FN）的mRNA及蛋白表达。结果：体外成功地培养增生性瘢痕成纤维细胞。经AngⅡ刺激48h后，FN mRNA和蛋白表达量明显增高，增高程度与AngⅡ浓度呈正比；加入losaartan和环胞素A后，FN原mRNA和蛋白表达量较单用AngⅡ组下降，而加入PD123319后，FNmRNA和蛋白表达量较单用AngⅡ组无明显改变。结论：AngⅡ可促增生性瘢痕成纤维细胞的FN合成，可能在增生性瘢痕的发展过程中起重要作用，该作用主要通过AngⅡ的Ⅰ型受体介导完成，该作用可能与CaN信号通路有关。     

当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的:探讨当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期及凋亡,用放射免疫法测定胶原合成。结果:1mg/L、4mg/L和16mg/L当归挥发油组与对照组相比G0/G1期细胞、G2/M期减少,显著增加了S期细胞(P<0.05)。凋亡率随当归挥发油浓度增大逐渐增大(P<0.05)。当归挥发油呈剂量和时间依赖性抑制细胞合成胶原(P<0.05或0.01)。结论:当归挥发油抑制成纤维细胞的增殖和胶原合成。