环介导等温扩增法快速检测痰液标本中的结核分枝杆菌

目的由于结核病检测技术目前存在灵敏度低,检测周期长的问题,给结核病防治工作带来了诸多不便。多种基因检测技术的出现为结核病的诊断,提供了有利工具。本文通关过使用新型基因扩增法,LAMP法对痰标本中的结核分枝杆菌进行检测。方法采集54份肺结核疑似患者的临床痰标本,对每份样本使用LAMP法进行检测,并使用痰培养结果作为金标准。结果在直接检测痰标本的试验中LAMP的灵敏度为96%,特异性为100%。结论通过这项研究发现,使用LAMP技术用于痰标本中结核分枝杆菌的检测,可大大缩短检测周期,简化操作步骤,具有成本低、灵敏度高、特异性强的优点,有利于进行结合病的筛查和诊断。     

环介导等温扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的评价环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术在结核分枝杆菌诊断中的应用价值。方法收集246份疑似肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检,罗氏培养以及实时定量PCR和LAMP法检测。结果涂片镜检,罗氏培养实时定量PCR和LAMP法对结核分枝杆菌的检出率分别为30.89%,45.53%,54.47%,57.32%。以罗氏培养结果作为金标准,LAMP法诊断的敏感性为96.19%（101/105）,特异性为76.87%（103/134）,两种方法检测结果的一致性是Κ=0.71,两法具有很好的吻合性。以实时定量法为标准,LAMP法的敏感性为90.07%（127/141）,特异性为93.33%（98/105）,两法检测结果的一致性是κ=0.83,P〈0.001。结论 LAMP法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,与罗氏培养和RT-PCR有着较高的吻合性,很适合作为临床检测项目开展。     

环介导等温扩增技术快速检测结核分枝杆菌核酸

摘要:目的：建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌（MTB）核酸的环介导等温扩增（LAMP）方法。 方法：以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸。用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查。 结果：LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸;灵敏度高,检测限达100 fg;而实时荧光PCR检测限为1 pg。对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28%、39%和38%。 结论：本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法。     

环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核诊断中的应用研究

目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核病的诊断中的应用。方法收集140例本院临床诊断为肺结核病或者怀疑为肺结核患者的痰液标本,分别用涂片抗酸染色法、LAMP法和改良罗氏培养法检测痰标本中结核分枝杆菌的阳性检出率、敏感性和特异性。结果 140份痰标本中涂片抗酸染色法、LAMP法和改良罗氏培养法的阳性检出率分别是25.71%(36/140)、43.57%(61/140)和41.43%(58/140)。LAMP法的阳性检出率明显高于涂片法,差异有统计学意义(P0.05)。以改良罗氏培养法为金标准,并结合临床诊断及患者使用抗结核药物的反应性综合判断,LAMP法的敏感性是87.93%(51/58),特异性是87.80%(72/82),两种方法检测结果的一致性κ=0.752,说明LAMP法在检测结核分枝杆菌方面与罗氏培养法有较好的吻合性。结论 LAMP法在检测痰标本中的结核分枝杆菌方面有着比较高的敏感性和特异性,在结核病的快速诊断上具有优势。     

环介导等温扩增技术在病原微生物临床检测中的应用

病原微生物是威胁人类健康的重要因素之一,快速、准确的检测方法对于感染性疾病的诊断具有重要意义。环介导等温扩增(LAMP)是一种恒温扩增方法,具有反应时间短、操作简便、灵敏度高、特异度高、检测成本低等优点,因此被广泛应用于感染性疾病的快速诊断。基于这种情况,该文主要阐述了LAMP的原理、特点及其在临床常见病原微生物检测方面的应用与研究进展。LAMP技术现在已经被应用于病原微生物的检测,且具有较高的灵敏度及特异度,但该技术仍有易产生假阳性、引物设计复杂等不足之处。该文综述了近年来LAMP技术在病原微生物感染中的应用与进展,并对其未来的发展前景进行了展望,以期在资源有限的环境中为病原微生物感染的快速诊断提供合理的研究方向。     

环介导等温扩增技术在肺结核诊断中的应用价值

目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核诊断中的应用价值。方法选取2016年1月至2019年1月于长治市人民医院就诊的295例可疑肺结核患者为研究对象,所有病例均送痰标本进行LAMP检测和涂片抗酸染色,分别计算LAMP及涂片抗酸染色法的阳性检出率、阳性预测值、阴性预测值等,并进行统计学分析。结果 295例患者中,临床诊断肺结核180例,非肺结核115例,LAMP和涂片抗酸染色法的灵敏度分别为83%、28%。与涂片抗酸染色法比较,LAMP的灵敏度明显高于涂片抗酸染色法。结论 LAMP具有较高的特异度和灵敏度,对肺结核尤其是痰涂片阴性的肺结核有很好的临床诊断价值和应用前景。     

环介导等温扩增法在淋巴结结核诊断中的应用研究

目的:总结环介导等温扩增(LAMP)在淋巴结结核诊断中的临床意义。方法:将2017年1月至2018年10月广州市胸科医院收治的124例淋巴结结核手术获取的淋巴结标本进行组织匀浆,然后运用LAMP法检测结核分枝杆菌,并对阳性病例进行药物敏感性检测,同时采用涂片检测、结核菌培养、Xpert方法,比较其阳性检测结果和敏感性、特异性。结果:LAMP检测法阳性率高于涂片检测、结核培养法,与Xpert法之间的无明显差别。结论:LAMP法在临床上对于淋巴结结核的检查阳性率高,且便捷、准确,时间由传统方法的数周缩短到2天以内。     

环介导等温扩增技术的应用

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换型DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温65℃左右保温几十分钟快速进行核酸扩增的方法.由于其具有快速、简便、特异性好、灵敏度高、成本低等优...     

环介导等温扩增在病原诊断中应用

经典的病原检测和诊断方法是体外培养和显微镜技术,这种方法在临床实验室仍然是一项核心技术。但由于临床上很多病原体难以被选择培养,从而限制了它们的诊断。尤其在发展中国家,这种敏感性较低的抹片显微镜检查往往会延误治     

环介导等温扩增技术在下呼吸道感染常见病原体检测中的应用

目的应用环介导等温扩增技术(LAMP)检测下呼吸道感染患者标本中的13种病原体,为临床快速诊断感染性疾病提供依据。方法收集疑似下呼吸道感染患者痰标本103例、肺泡灌洗液45例,常规培养分离细菌、真菌,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行细菌鉴定,同时采用LAMP技术检测13种常见病原体(肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、结核分枝杆菌复合群),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测45例肺泡灌洗液标本中肺炎支原体,LAMP法检出的结核分枝杆菌阳性标本用二代测序(NGS)技术验证。结果 148例标本中,质谱法检出率为42.6%(63/148),分离出病原菌81株;LAMP法检出率为68.2%(101/148),共检测出175种病原体。质谱法和LAMP法对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的检出率差异无统计学意义(P>0.05),但LAMP法对肺炎链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌的检出率高于质谱法(P<0.05)。LAMP法从45例肺泡灌洗液中检出26例肺炎支原体,而采用RT-qPCR检出23例。148例样本中,LAMP法检出2例结核分枝杆菌复合群,并使用NGS验证为阳性。结论与传统细菌培养鉴定相比,LAMP技术具有检测快速、准确、操作简便等优势,可为临床诊疗提供可靠依据。     

环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

目的 建立环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测临床标本中金黄色葡萄球菌(SA)的方法.方法 基于金黄色葡萄球菌femA基因部分序列设计一套(共4条)特异性引物,包括特异性识别靶序列上6个不同区域的两条内引物和两条外引物.通过条件优化,建立检测SA的LAMP方法.用该法检测临床分离的40株SA、12种其他革兰阳性球菌和...     

生殖支原体环介导等温扩增检测方法的建立

目的建立检测生殖支原体(M.genitalium,Mg)的环介导等温扩增方法。方法根据Gen Bank公布的Mg核苷酸序列,设计4条特异性引物,进行PCR反应,对内、外引物浓度,d NTPs和Mg SO4浓度及Bst DNA聚合酶用量等进行优化,建立Mg LAMP的检测方法并进行特异性和敏感性评价;对20份HIV感染者的DNA样本分别进行LAMP和常规PCR检测。结果内、外引物浓度分别为1.6和0.2μmol/L,d NTPs浓度为1.6 mmol/L,Mg SO4浓度为12 mmol/L,Bst DNA聚合酶用量为8 U时,LAMP反应效果较好;用该体系检测同源关系较近的穿通支原体(M.penetrans,Mpe)、梨支原体(M.pirum,Mpi)均呈阴性;对Mg的检测灵敏度可达10-7;20份HIV感染者用LAMP法及常规PCR法各检出Mg阳性标本5份,两法的检测结果一致。结论建立的Mg LAMP检测方法的特异性、灵敏度较好,成本低廉,适合临床应用。     

环介导等温扩增技术及其在分子诊断中的应用

环介导等温扩增技术作为新兴的分子生物学技术,已经广泛应用于各种病原微生物的分子水平的研究,并且取得了令人鼓舞的成绩。文中就环介导等温扩增技术的原理及在分子诊断中的应用作一综述。     

环介导等温扩增技术检测肺结核患者感染铜绿假单胞菌的临床应用研究

目的探讨针对opr L基因设计引物的环介导等温扩增技术(LAMP)对铜绿假单胞菌的诊断价值。方法采用LAMP技术对铜绿假单胞菌标准株的DNA样品进行检测,评价LAMP技术的检测限;同时对阴沟肠杆菌和大肠埃希菌等6种标准菌株进行鉴定,评价该方法的特异性。对106例肺结核患者临床痰标本进行普通细菌培养鉴定,对临床分离株进行LAMP技术检测,评价LAMP技术的临床应用价值。采用χ2检验进行统计学分析。结果本研究中采用的LAMP技术对DNA样品检测限为25 pg/μl。LAMP对铜绿假单胞菌质控菌株的DNA样品检测结果为阳性,6种其他普通菌菌株检测结果为阴性,特异度为100%。对临床分离株检测发现LAMP技术与培养法之间差异有统计学意义(χ2=7.11,P<0.01)。结论靶点opr L基因设计引物的LAMP的敏感度和特异度均较高,方法简单快速,适于临床应用。     

环介导等温扩增检测弓形虫方法的建立

目的建立环介导等温扩增（LAMP）检测弓形虫DNA的方法。方法以构建的弓形虫B1基因质粒为阳性模板,建立LAMP检测弓形虫的方法,并进行特异性和敏感性评估,在此基础上建立LAMP检测弓形虫的定量体系及通过显色反应直接判断结果的简便方法,最后应用建立的方法对57例孕妇外周血标本进行检测。结果建立的方法仅对弓形虫DNA扩增出特有的梯状条带,酶切结果与预期相符;检测下限为每反应管10拷贝。以重组质粒制作的标准曲线,阳性反应时间与模板浓度有良好的线性关系。57例孕妇标本检测,发现2例阳性。结论本方法特异性强、敏感性高、简便快速且成本低,有望在临床检测中发挥一定的作用。     

环介导等温扩增法检测尿液中奇异变形杆菌临床价值

目的:探讨应用环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测泌尿系感染患者尿液中奇异变形杆菌的价值。方法:分别应用LAMP法、分离培养法检测50例泌尿系感染患者尿液标本中奇异变形杆菌,并进行比较。结果:LAMP法检出奇异变形杆菌阳性6例,分离培养法检出变形杆菌阳性5例,二者符合率83.3%。结论:LAMP法可用于尿液中奇异变形杆菌的初筛检测。     

肺结核病人痰标本中结核分枝杆菌检查结果分析

[目的]评价肺结核病人痰标本中结核分枝杆菌的直接涂片显微镜检和培养检查的临床效果。[方法]采用直接厚涂片萋-尼氏法抗酸染色显微镜检和BACTEC-TB960快速培养系统对1340例肺结核病人痰标本进行检测。[结果]快速培养法检测的阳性率为36.6％，直接涂片镜检的阳性率为24.6％，两种检测法的阳性率有显著性差异（P〈0.01）；两种方法联合检测的阳性率为4l％，高于培养法阳性率（P〈0.05）。痰标本的留取时间对培养法检出率有很大影响，晨痰检出率高于即时痰（P〈0.05）。[结论]提高肺结核病人痰标本中结核分枝杆菌检出率的有效方法是采用直接涂片镜检与培养法联合进行检测，同时应重视痰标本留取时间对检出率的影响。     

简便敏感的环介导等温扩增基因诊断新技术

核酸扩增是基因诊断技术中最常用的方法之一，目前核酸扩增的方法很多，如聚合酶链反应（PCR）、依赖核酸序列扩增（nucleic acid sequence-based amplification，NASBA）、自主序列复制（self-sustained sequence replication，3SR）以及链置换技术（strand displacement amplification，SDA）。这些方法都能将微量标本进行快速扩增，但都在特异性、简便程度、温度和试剂仪器要求等方面有缺点。     

环介导等温扩增技术快速检测脑膜炎奈瑟菌属方法的建立

目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立一种快速敏感的脑膜炎奈瑟氏菌属检测方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌属(ctrA)基因序列的6个区域设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),同时设计2条环引物,并对反应条件和反应体系进行优化。分别验证该方法的特异性及敏感性,并与普通PCR进行了比较。结果在适宜反应条件所设计引物对脑膜炎奈瑟菌的扩增的特异性及敏感性均较好,与普通PCR方法比较,LAMP敏感性比普通PCR高10倍。结论 LAMP检测速度相比PCR更快速,在60 min内即可完成扩增反应。实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测脑膜炎奈瑟氏菌,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用。     

噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本临床应用研究

结核病乃是严重威胁人类健康的重大传染病，其实验室快速诊断一直是国内外研究的焦点内容之一。噬菌体生物扩增方法（PhaB）是近年来建立的一种细菌学快速诊断新技术，具有简便、快速、灵敏、价廉的优点，非常适合结核分枝杆菌（结核菌）这类生长缓慢细菌的快速诊断。我们在建立PhaB快速检测结核菌方法学基础上，将其用于临床标本的检测，并与涂片、培养和PCR结果进行比较。