bFGF在氟中毒大鼠切牙牙髓中的表达和意义

目的研究过量氟对大鼠牙髓细胞表达bFGF的影响。方法选择20只Wistar大鼠,随机分为2组I组(对照组)和II组(实验组)。8周后处死动物,利用磨片、HE染色、免疫组化染色技术观察过量氟对大鼠切牙形态及bFGF表达的影响。结果实验组大鼠切牙釉质、牙本质生长线明显,牙本质可见钙质小球,牙髓细胞及髓腔内侧牙本质bFGF表达明显弱于对照组,差异有显著性(P<0.01)。结论过量氟可抑制牙髓细胞表达bFGF,影响牙体硬组织的结构。     

牙本质涎蛋白在氟中毒大鼠牙髓组织和牙本质中的表达和意义

目的:研究氟中毒对大鼠牙髓及牙本质表达DSP的影响。方法:选择20只Wistar大鼠,随机分为对照组(饮用自来水,水氟浓度0.16 mg/L)和给氟组(水氟浓度100 mg/L)。3个月后处死大鼠,利用HE染色、免疫组化染色观察氟中毒对牙本质结构和DSP表达的影响。结果:100 mg/L组牙本质生长线明显加重,出现大量球间牙本质。DSP蛋白在牙本质、成牙本质细胞、牙髓细胞中均有不同程度的表达,在牙本质层内侧的成牙本质细胞和牙髓细胞的染色强度2组间无明显区别(P>0.05)。在给氟组,强烈的DSP染色持续出现在前期牙本质层和矿化的牙本质层(P<0.05),表现为加重的生长线。结论:DSP在氟中毒组牙本质中表达明显增强,推测氟可能影响DSP蛋白的降解,影响牙本质的正常矿化。     

过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。饲养8周后处死,利用HE染色和免疫组织化学染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞形态及釉蛋白表达的影响。结果 实验组大鼠下切牙成釉细胞由原有的高柱状结构变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,成釉细胞和成牙本质细胞中釉蛋白表达明显低于对照组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论 过量氟可抑制釉蛋白表达,影响釉质发育。     

过量氟对大鼠切牙Shh表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙Shh(Sonic Hedgehog)表达的影响,从分子水平探讨氟斑牙的发病机制.方法 20只Wistar大鼠随机分为2组:对照组(饮用蒸馏水)和实验组(饮用100 mg/L氟化水),复制氟斑牙动物模型,8周末处死动物,获取切牙标本,免疫组化染色观察Shh在大鼠切牙的表达定位及在对照组与实验组切牙表达的变化.结果 Shh在分泌期成釉细胞、成牙本质阳性表达.实验组Shh的表达明显弱于对照组,差异有显著性(P＜.01).结论 过量氟可能通过抑制Shh的表达,从而影响牙齿发育的启动和随后的细胞分化,导致釉质发育障碍.     

过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响

目的：研究过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响，探讨氟斑牙的发病机制。方法：选择20只Wistar大鼠，随机分成2组：Ⅰ组（蒸馏水组）和Ⅱ组（0．1g／L F^-）。饲养8周处死动物，利用免疫组化染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3表达的影响。结果：免疫组化结果经图像分析显示实验组大鼠切牙成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3的表达均低于对照组（P〈0．01），存在显著性差异。结论：过量氟可能通过抑制Smad3的表达来干扰上皮和间充质之间正常的信号转导，进而使釉质的分化发育受到影响。这有可能是氟牙症发生的细胞内机制之一。     

过量氟对大鼠切牙骨涎蛋白表达的影响

目的:研究过量氟对牙硬组织发育过程中骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)时空表达的影响,从蛋白水平上探讨氟牙症的发病机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组(饮用蒸馏水)和实验组(100mg/LF-)2组。饲养8周后处死动物,通过免疫组织化学染色观察并比较BSP在对照组与实验组大鼠牙胚上皮中的表达,采用计算机图像分析系统对免疫组化染色阳性结果进行计算机图像分析,采用SASv6.12统计软件对2组图像分析结果进行t检验。结果:对照组,各期成釉细胞排列均匀整齐,细胞形态正常,成熟的成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞中BSP表达为阳性;实验组,大鼠切牙成釉细胞由原有的高柱状变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,大鼠牙胚上皮中BSP表达显著低于对照组,P<0.01。结论:氟化物能抑制大鼠牙胚上皮BSP的表达,提示氟可能通过抑制BSP在牙胚发育过程中的表达,从而抑制牙胚上皮细胞(成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞)的增殖分化及随后的基质合成与分泌,导致氟斑牙的形成。     

LIM矿化蛋白1在大鼠牙髓损伤修复中的时空表达

目的:探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达.方法:建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件及单因素方差分析比较各组间的差异.结果:在正常大鼠牙髓组织中LMP-1表达阴性;在大鼠牙髓损伤后1d,LMP-1表达于成牙本质细胞及部分牙髓成纤维细胞;术后3 d,LMP-1表达于坏死牙髓下方的细胞增殖层;术后7d,LMP-1显著表达于增殖活跃的牙髓细胞及部分成牙本质细胞中.结论:LMP-1在牙髓损伤修复过程中呈时空特异性表达,可能参与成牙本质细胞及牙髓细胞的增殖、分化及修复性牙本质的形成.     

Notch 1信号蛋白在早期牙髓损伤修复中表达的免疫组化研究

目的 :通过建立大鼠牙髓损伤动物模型 ,观察Notch1信号蛋白在牙髓损伤修复过程中的表达。方法 :在大鼠第一磨牙牙合面开髓 ,分别对损伤后 2h、12h、2 4h、3d、7d及正常大鼠牙髓标本进行HE染色、免疫组化染色 ,检测各组标本中Notch1信号的表达。结果 :Notch1信号蛋白在正常成年大鼠牙髓组织中无表达 ,在牙髓损伤后表达上调。牙髓损伤 12h ,Notch1在成牙本质细胞层、部分牙髓细胞间质中呈弱阳性表达。损伤后 1～ 3d ,Notch1在成牙本质细胞层、部分牙髓细胞间质及接近损伤部位的牙髓细胞中呈阳性着色。损伤后 7d ,Notch1的表达位于成牙本质细胞层和穿髓孔下方的细胞增殖层。结论 :Notch1信号蛋白在大鼠牙髓损伤后早期阶段表达逐渐上调 ,随后在成牙本质细胞区及富细胞区牙髓细胞中表达增强 ,并沉积于穿髓点附近的细胞增殖层。提示它可能在牙髓损伤的早期自身修复和牙本质矿化中起作用     

Effect of overdose fluoride on the expression of DSP mRNA in rat incisors

目的 研究过量氟对大鼠切牙发育过程中牙本质涎蛋白( dentin sialoprotein,DSP) mRNA表达的影响.方法 选择6只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组常规饲料喂养,自由饮用蒸馏水;实验组常规饲料喂养,自由饮用氟离子浓度为100 mg/L的氟化水,建立大鼠氟斑牙模型.饲养8周处死动物,提取大鼠切牙组织总RNA,逆转录为cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术观察过量氟对大鼠切牙中DSP mRNA表达的影响.结果 实时荧光定量聚合酶链反应结果显示DSP mRNA在实验组表达水平明显高于对照组表达水平(t=2.132,P＜0.01).结论 过量氟可能通过增强DSP mRNA的表达,影响牙本质的发育矿化.     

基质细胞衍生因子1α及其受体CXCR4在牙本质-牙髓复合体损伤修复过程中的表达

目的:通过构建牙本质-牙髓复合体损伤修复动物模型,研究基质细胞衍生因子1α及其受体CXCR4(SDF-1α/CXCR4)在其损伤修复过程中的表达。方法:制备大鼠牙本质-牙髓损伤模型,通过免疫组织化学染色、PCR技术分别对损伤后0、6h和1、3、7d及正常大鼠牙髓标本中SDF-1α/CXCR4进行检测。结果:正常大鼠组牙髓中没有发现SDF-1α、CXCR4阳性表达,实验大鼠组损伤6h后少量的成牙本质细胞和前期牙本质开始出现较弱阳性表达,损伤1d后成牙本质细胞阳性表达增强,损伤3d后牙髓成纤维细胞出现阳性表达,损伤7d后未分化间充质细胞出现阳性表达,大鼠牙髓损伤后SDF-1α、CXCR4随着时间的增加阳性表达程度明显增强。图像分析结果显示,SD大鼠牙本质-牙髓复合体损伤后牙髓中SDF-1α、CXCR4的表达(灰度值)除Oh外其余各组均高于对照组(P<0.05)。PCR结果显示,损伤后大鼠牙髓中SDF-1α、CXCR4均符合产物设计大小。其表达(灰度值)除Oh外其余各组均高于对照组(P<0.05)。结论:大鼠牙本质-牙髓复合体损伤后,前期牙本质、成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞和未分化间充质细胞对SDF-1α、CXCR4的表达呈时间依赖性,提示SDF-1α、CXCR4可能参与了修复性牙本质的形成。     

过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）表达的影响，从分子水平探讨氟牙症的发病机制。方法将20只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为两组：对照组（饮用蒸馏水）和实验组（饮用100mg／L氟化水），复制氟牙症动物模型，8周末处死动物，获取切牙标本，免疫组化染色观察bFGF在大鼠切牙的表达定位及其在对照组与实验组切牙表达的变化。结果bFGF在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞中均呈阳性表达。实验组bFGF的表达明显弱于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论过量氟可抑制bFGF的表达，从而影响上皮与间充质之间的相互介导作用，导致釉质发育障碍。     

胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中表达的实验研究

目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von kossa染色检测矿化结节的形成。培养期间,采用半定量RT-PCR技术监测LIM矿化蛋白1及碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果。结果:培养14d,实验组牙本质涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组牙本质涎蛋白表达阴性,von kossa染色阴性。RT-PCR结果显示碱性磷酸酶及LIM矿化蛋白1在实验组和对照组各时段均表达。培养期间,实验组LIM矿化蛋白1的表达显著性高于对照组,其中培养第2天及9天时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.8倍及3.0倍。培养期间,碱性磷酸酶的表达显著性增高,其中培养14d时约为对照组的2.0倍。结论:首次发现LIM矿化蛋白1与人牙髓细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白1可能在牙髓细胞的分化及矿化中发挥一定作用。     

过量氟对大鼠切牙牙本质涎蛋白mRNA表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)mRNA表达的影响。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组常规饲料喂养,自由饮用蒸馏水;实验组常规饲料喂养,自由饮用氟离子浓度为100 mg/L的氟化水,建立大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,提取大鼠切牙组织总RNA,逆转录为cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术观察过量氟对大鼠切牙中DSP mRNA表达的影响。结果实时荧光定量聚合酶链反应结果显示DSP mRNA在实验组表达水平明显高于对照组表达水平(t=2.132,P<0.01)。结论过量氟可能通过增强DSP mRNA的表达,影响牙本质的发育矿化。     

过量氟对大鼠HAT-7细胞系自噬的影响

目的:研究过量氟对大鼠HAT-7细胞系自噬的影响.方法:取大鼠HAT-7细胞,分别加入不同浓度的氟化钠培养液,培养48 h后,透射电子显微镜检测过量氟对大鼠成釉细胞自噬泡的影响,Western免疫印迹和定量反转录聚合酶链反应技术检测过量氟诱导大鼠成釉细胞内微管相关蛋白轻链(LC3)和Beclin 1表达的变化.选择40只Wistar大鼠,随机分为A、B、C、D 4组,进行免疫组织化学实验,检测饮水氟对大鼠自噬分子表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:实验组自噬泡明显增多;Western免疫印迹及定量反转录聚合酶链反应结果显示,随着氟浓度的增加,HAT-7细胞自噬相关基因LC3和Beclin 1表达增加.回归分析结果显示,氟化钠与LC3及Beclin 1的表达有线性关系;大鼠体内免疫组织化学染色结果显示,实验组LC3以及Beclin 1为棕褐色,呈阳性表达.结论:过量氟诱导大鼠HAT-7细胞系自噬.     

早期牙髓损伤修复中牙本质涎磷蛋白表达的免疫组化研究

目的：衬步探讨牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP)在早期早贿损伤修复中的作用。方法：制备大鼠牙髓损伤模型,分别对损伤后6h,12h,1d,2d,3d,7d及正常大鼠牙髓标本进行HE和免疫组织化学染色,检测各实验组标本中DSPP的表达。结果：正常大鼠牙髓中仅在成牙本质细胞层有DSPP的阳性着色;牙髓损伤后6h,12h,DSPP在成牙本质细胞层的染色明显减弱;损伤后1-3d,梁色较正常牙增强。此时,牙尖及富细胞区的牙髓细胞也有了性着色;损伤后7d,染色与正常对照无明显差异。结论：DSPP在牙髓损伤的早期阶段表达下调;随后在成牙本质细胞及富细胞区牙髓细胞中表达增强;7d时表达趋于正常。提示：它可能在牙髓损伤早期的自身修复中起作用。     

DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达

目的检测DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达,为大鼠牙髓干细胞的生物学功能研究提供基础。方法采用免疫组织化学染色的方法,对DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达进行检测,然后采用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导,并对诱导后细胞进行DSP、DMP1表达的检测。结果大鼠牙髓干细胞DMP1仅个别细胞阳性表达,DSP少量细胞阳性表达,CBFA1、BMP2为阳性染色。经矿化液诱导后,大鼠牙髓干细胞DSP染色出现部分细胞强阳性,DMP1出现阳性结果。结论CBFA1、BMP2阳性表达表明大鼠牙髓干细胞具有一定的未成熟性,而经过诱导后出现牙本质特异性DSP的表达,表明大鼠牙髓干细胞可以被诱导向成牙本质细胞方向分化。     

Notch-2在大鼠牙髓炎中的时空分布及其意义

目的:研究单纯开髓导致大鼠牙髓炎进程中Notch-2在牙髓损伤修复中的作用.方法:通过开髓建立大鼠牙髓炎模型,用免疫组织化学染色方法研究Notch-2的时空表达变化及其意义.结果:牙髓损伤早期(3 d),牙髓间充质细胞和牙髓成纤维细胞中Notch-2均呈弱阳性表达,成牙本质细胞为阴性表达.牙髓损伤中期(5 d),靠近损伤区的成牙本质细胞深层细胞Notch-2阳性表达达到高峰;同时,新生毛细血管内皮细胞呈强阳性表达.牙髓损伤晚期(7 d),Notch-2在牙髓间充质细胞、血管内皮细胞中表达均减弱,而在成牙本质细胞阳性表达达到高峰.牙髓损伤末期(14 d),Notch-2仅在成牙本质细胞下层细胞中尚有微弱表达,而其余牙髓细胞均为阴性表达.对照组正常牙髓组织Notch-2表达为阴性.结论:Notch-2在牙髓损伤应激情况下在牙髓间充质细胞和成牙本质细胞中上调表达,对于启动牙髓自我修复、诱导牙髓间充质细胞功能性分化以及抑制受损成牙本质细胞凋亡、维系和调动其相对正常的生理功能可能具有重要作用.     

过量氟对大鼠切牙基质金属蛋白酶-20及其组织抑制剂表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙生长过程中基质金属蛋白酶-20（MMP-20）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分为对照组和给氟组。8 周后处死动物,获取切牙标本,免疫组化染色观察MMP-20和TIMP-2在大鼠切牙中的表达定位和氟对二者表达的影响。结果 MMP-20和TIMP-2 在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞以及成釉器均有阳性表达,给氟组MMP-20的表达明显弱于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;TIMP-2在两组的表达无显著性差异（P>0.05）。结论 过量氟可抑制MMP-20的表达, MMP-20和TIMP-2表达失衡,TIMP-2的抑制作用加强,致使釉基质蛋白清除延迟,导致矿化不全和釉质缺损。     

锌指E盒结合同源框2在人牙髓组织和细胞的表达

目的：检测锌指E盒结合同源框2（ZEB2）在人牙髓组织和细胞中的表达,并初步探讨其意义。方法：制作牙髓组织石蜡切片,荧光原位杂交技术（FISH）检测 ZEB2的表达;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测正常及TGF-β1刺激下人牙髓细胞（hDPCs）中ZEB2 mRNA表达水平;制作hDPCs细胞爬片, FISH检测ZEB2的表达。结果： FISH结果显示ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层,在牙髓细胞呈弱阳性表达。 RT-qPCR结果显示TGF-β1的作用促进ZEB2的表达,且具有浓度和时间依赖性,5ng/ml TGF-β1刺激ZEB2表达达最大（P〈0.05）;5ng/ml TGF-β1刺激后, ZEB2 mRNA在24h内表达逐渐上调,24h达峰值（P〈0.05）。 FISH结果示ZEB2在正常hDPCs胞质和胞核均呈弱阳性表达, TGF-β1刺激24h后ZEB2表达增强,胞核表达明显。结论： ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层,正常hDPCs中弱阳性表达,而TGF-β1可促进hDPCs中ZEB2表达,提示ZEB2可能通过参与TGF-β1信号通路调控hDPCs的成牙本质向分化过程。