小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体放射配基受体结合分析方法

目的　建立简便、快速的小鼠腹腔巨噬细胞PAF放射配基受体结合分析法 ,考察巨噬细胞表面PAF受体的特性。方法　以♂C5 7BL/ 6小鼠腹腔巨噬细胞为受体材料 ,[3 H] PAF为标记配基 ,非膜过滤法进行结合放射配基分离 ,液闪计数测定。结果　小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体结合符合简单单位点受体结合模型 ,Scatchard分析求出的PAF受体结合参数Bmax=10 0 2fmol·1× 10 6cells-1,KD=3 2nmol·L-1。 [3 H] PAF与小鼠腹腔巨噬细胞PAF受体的结合呈现单一、饱和特点 ,并可被特异性PAF受体拮抗剂BN5 2 0 2 1竞争性抑制。结论　利用小鼠腹腔巨噬细胞贴壁特性 ,采用非滤过法处理细胞 ,能够在保持受体生理学活性的状态下 ,用于特异性PAF受体拮抗剂的筛选     

大鼠胃粘膜胃泌素受体的放射配基结合法

目的　建立高效、敏感的大鼠胃粘膜胃泌素受体结合模型。方法　用大鼠胃粘膜粗膜标本为组织受体,［１２５Ｉ］ １５ Ｌｅｕ Ｇ １７为标记配基进行受体结合反应,检测胃泌素受体结合参数。结果　胃泌素受体结合符合简单单位点受体结合模型,Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析求出的胃泌素受体结合参数Ｂｍａｘ＝７－４０４×１０－１２ｍｏｌ·Ｌ－１（３－７０２ｐｍｏｌ·ｇ－１Ｐｒｏ）,Ｋｄ＝１－６８６×１０－１０ｍｏｌ·Ｌ－１。单点法求出的特异结合量Ｒｓ＝２－７３４ｐｍｏｌ·ｇ－１Ｐｒｏ。粗膜标本蛋白浓度在４～１２ｇ·Ｌ－１范围内,与标记胃泌素特异性结合容量成正比。同一样本大鼠胃粘膜粗膜标本［１２５Ｉ］ ＧＡＳ特异结合量测定方法变异系数为７－８０％,竞争抑制实验证明［１２５Ｉ］ ＧＡＳ与大鼠胃粘膜粗膜标本结合特异性良好。结论　大鼠胃粘膜胃泌素受体的放射配基结合法符合受体结合实验方法学要求。     

大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合法

目的　建立大鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验方法。方法　以12 5I [Leu15] gastrin17 I为标记配基 ,以大鼠胃壁细胞悬液为受体制备 ,反应体系总体积为 2 0 0 μl,37℃恒温水浴振荡孵育 30min ,以 49型玻璃纤维滤膜分离结合和游离配基。结果　胃泌素受体结合符合简单单位点结合模型 ,Scatchard作图求出胃泌素受体结合参数Bmax=4 46 0 4× 10 -12 mol·L-1,Kd=1 2 49× 10 -10 mol·L-1。单点法求出特异结合位点数 70 3 2sites·cell-1。细胞浓度在0 2 5× 10 9～ 2× 10 9cells·L-1范围内 ,与标记配基特异性结合容量成正比。同一样品特异结合测定方法变异系数为7 0 4%。竞争抑制实验证明12 5I Gastin与大鼠胃壁细胞结合特异性良好。结论　大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合实验方法符合受体结合实验方法学要求     

北京鸭红细胞膜β肾上腺素受体放射配基结合测定法

本文以[~3H]dihydroalprenolol([~3H]DHA)为放射配基。对北京鸭红细胞(RBC)膜β受体进行了系统研究。结果表明,[~3H]DHA与北京鸭RBC结合具有饱和性,肾上腺素能激动剂与[~3H]DHA竞争结合的强弱顺序与它们的生物活性一致,提示结合有结构特异性和立体特异性,[~3H]DHA与鸭RBC结合迅速、可逆。可见北京鸭RBC膜存在β受体,用于放射配基结合测定有取材方便,受体较丰富,膜蛋白得率高,[~3H]DHA非特异结合低和易于保存等优点,可以代替火鸡RBC。     

多沙唑嗪对映体对大鼠肠系膜微动脉α_1受体介导收缩反应的作用

目的分析消旋多沙唑嗪[(±)DOX]、左旋多沙唑嗪[(-)DOX]和右旋多沙唑嗪[(+)DOX]对大鼠离体肠系膜微动脉α1受体介导收缩反应的阻断作用。方法采用DMT 620 M微血管张力测定系统,记录苯肾上腺素(Phe)诱发大鼠离体肠系膜动脉第二级和第三级阻力血管的收缩反应,分析(±)DOX及其对映体对α1受体的拮抗参数。结果大鼠肠系膜动脉二级分支的血管内径为(162.5±5.3)μm(n=11),三级分支的内径为(103.1±2.3)μm(n=23)。LabChart软件的标准化程序测算的肠系膜动脉二级分支血管的标准前负荷为(2.93±0.15)mN,三级分支血管的标准前负荷为(2.64±0.10)mN,二者的标准化前负荷差异无显著性(P>0.05)。与标准前负荷相比,二级阻力血管施以5mN前负荷时,Phe诱发的收缩未见明显改变;当标本的前负荷增加至10 mN、15 mN和20 mN时,Phe诱发的收缩反应的Emax值分别下降了12%、29%和43%(P<0.01)。大鼠肠系膜动脉二级和三级阻力血管分别给予0.001、0.01、0.1μmol·L-1浓度的(-)DOX或(+)DOX后,Phe量效曲线均右移,Emax值不变;二级阻力血管Schild plot分析结果表明,(-)DOX、(+)DOX和(±)DOX非竞争性拮抗Phe诱发的血管收缩反应。3者的pKB值由小到大的排列顺序是:(-)DOX(7.85±0.09)、(±)DOX(8.53±0.09)、(+)DOX(8.67±0.10);三级阻力血管Schild plot分析结果表明,(-)DOX和(+)DOX在三级分支血管竞争性拮抗Phe诱发的血管收缩反应;三者的pKB值由小到大,分别为(-)DOX(7.48±0.14)、(+)DOX(8.48±0.10)、(±)DOX(8.68±0.17)。结论在大鼠肠系膜微动脉,(-)DOX阻断α1受体的活性明显低于(+)DOX和(±)DOX。尽管(+)DOX和(±)DOX阻断α1受体的活性差异无显著性,在血管三级分支(±)DOX的作用有增强的趋势。     

mmLDL对小鼠肠系膜动脉α_1受体介导的血管收缩及相关蛋白表达影响的研究

目的探讨mm LDL对小鼠肠系膜动脉α1受体的作用。方法小鼠尾静脉注射mm LDL,微血管肌张力描记仪观察NA引起的小鼠肠系膜动脉收缩量效曲线变化,RTPCR、Western blot检测α1受体及α2受体表达。结果mm LDL引起NA收缩量效曲线明显增强,表现为Emax值由生理盐水(NS)组的(120.75±3.44)%上升为(161.00±6.87)%(P<0.01),p EC50值由NS组的(5.65±0.05)上升为(6.20±0.08)(P<0.01)。α1受体拮抗剂哌唑嗪引起量效曲线的明显右移,mm LDL引起α1受体m RNA水平、蛋白表达明显增加,对α2受体表达基本没有影响。结论尾静脉注射mm LDL上调小鼠肠系膜动脉α1受体。     

甘草次酸与大鼠肝膜血管紧张素Ⅱ受体相结合

目的从中药成份中筛选血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）受体的拮抗剂。方法采用大鼠肝细胞膜为材料的受体放射配基结合分析。结果大鼠肝细胞膜ＡⅡ受体的ＫＤ值为０５１８ｎｍｏｌ·Ｌ－１，Ｂｍａｘ为０１１９ｐｍｏｌ·Ｌ－１，是属于高和性的单位点结合。膜制剂在－７０℃保存３０～６０ｄ，结合率基本不受影响。从２１种中药有效成分选出甘草次酸对血管紧张素Ⅱ受体有较好结合作用，其ＩＣ５０为７５０μｍｏｌ·Ｌ－１。结论甘草次酸有望成为ＡⅡ受体非肽拮抗剂的先导化合物     

白三烯C4(LTC4)放射受体结合方法的建立及二苯乙烯低聚体和LTC4受体结合特性

目的:建立LTC4放射受体结合实验方法,并比较二苯乙烯低聚体(Gn3)和LTC4受体的结合特性。方法:以豚鼠肺膜为实验材料,采用3HLTC4为放射配体,以FPL55712作阳性对照药物,Gn3为实验药物,进行药物竞争结合实验。采用离体器官生物检测法鉴定Gn3对LTC4受体的拮抗作用。结果:3HLTC4与其相应受体呈现单一结合位点,Gn3可明显取代3HLTC4与其受体结合。生物学检定法证实Gn3可抑制LTC4引起的生物学效应。结论:豚鼠肺膜LTC4受体为单一结合位点受体,Gn3为高活性的LTC4受体拮抗剂。     

山莨菪碱对肺损伤肺α_1受体及磷脂酶A_2的影响

用放射性配基结合分析法，检测大鼠内毒素性肺损伤中肺α１肾上腺素受体（α１受体）的变化，并观察山莨菪碱对肺α１受体和磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）的影响。结果表明，（１）ｉｖ内毒素（ＥＴ）后４ｈ，大鼠肺α１受体的最大结合容量明显降低，较对照组减少３４％，同时肺组织ＰＬＡ２激活及膜磷脂含量减少。（２）山莨菪碱能减轻ＥＴ诱导的大鼠急性肺损伤，其作用机制与阻滞α１受体，抑制ＰＬＡ２、防止膜磷脂降解、减少花生四烯酸的释放等有关。     

α_1受体对不同状态心肌细胞的作用

目的　通过激活和阻断不同状态心肌的α1 受体 ,探讨α1 受体的活化状态与不同状态心肌的关系。方法　采用Langedorff灌流技术复制动物模型。第 1个实验检验不同浓度的α1 受体激动剂 phenylephrine和阻断剂 prazosin(0 0 1、0 1、1、1 0、1 0 0 μmol·L- 1 )在缺血前 1 0min、缺血期和再灌注时的效应。第 2个实验研究 phenylephrine和 prazosin的时间依赖性。每组实验的末期 ,测量磷酸肌酸激酶、细胞凋亡和坏死情况。结果　 0 1、1 μmol·L- 1 的 phenylephrine可发挥最大效益 ,但prazosin浓度超过 1 0 μmol·L- 1 可产生有害作用。缺血前激活、缺血期间阻断α1 受体可保护心肌。再灌注时激活α1 受体效应不明确 ,但阻断α1 受体有害。结论　激动或阻断α1 受体所产生的效应与心肌的状态有关     

在毁脊髓大鼠和肛尾肌上甲基莲心碱对α_1受体激动剂作用的影响

甲基莲心碱(Nef)使甲氧胺(Met)升高毁脊髓大鼠血压的量效曲线平行右移,用大鼠肛尾肌标本、观察Nef的α_1受体阻断作用,发现Nef 1,10,30μmol9·L~(-1)和哌唑嗪(Pra)3,10,30 nmol·L~(-1)一样,使去氧肾上腺素(Phe)累积量效曲线平行右移,不明显压低最大反应,测得Nef的pA_2值为6.9,Nef对高钾去极化收缩的胆囊及Oddi括约肌有抑制作用,以对炎性标本作用为强,结果提示Nef能阻断x_1,受体,能松弛由高钾去极化收缩的胆道平滑肌。     

脊髓α1受体介导的升压效应

目的 探讨脊髓内α肾上腺素能受体对平均动脉血压的调控作用。方法 在完整和颈1横断的大鼠,脊髓蛛网膜下腔注射(ith)选择性α1受体激动剂去氧肾上腺素后对血压和心率进行观察记录。结果 (1)在完整大鼠ith选择性α1受体激动剂去氧肾上腺素后引起血压显著升高和心率明显增快。(2)在颈1横断脊髓的大鼠,ith相同剂量的去氧肾上腺素也引起显著的升压效应。(3)在颈1横断脊髓的大鼠,ithα受体阻断剂妥拉苏林可使ith去氧肾上腺素的升压效应减弱55．1％。(4)在选择性α1受体阻断剂派唑嗪预处理后能使ith去氧肾上腺素的升压效应减弱91．1％。结论 在脊髓水平存在有由α1受体调控的升压机制。     

北京鸭红细胞膜β肾上腺素受体放射配基结合测定法

本文以[³H]dihydroalprenolol([³H]DHA)为放射配基。对北京鸭红细胞(RBC)膜β受体进行了系统研究。结果表明,[³H]DHA与北京鸭RBC结合具有饱和性,肾上腺素能激动剂与[³H]DHA竞争结合的强弱顺序与它们的生物活性一致,提示结合有结构特异性和立体特异性,[³H]DHA与鸭RBC结合迅速、可逆。可见北京鸭RBC膜存在β受体,用于放射配基结合测定有取材方便,受体较丰富,膜蛋白得率高,[³H]DHA非特异结合低和易于保存等优点,可以代替火鸡RBC。     

鞘内注射6-羟多巴胺、α_1受体拮抗剂对氯胺酮脊髓镇痛作用的影响

目的　在体探讨脊髓去甲肾上腺素 (NE)能神经元α1受体和氯胺酮 (Ket)脊髓镇痛的关系。方法　用热水甩尾法观察鞘内注射 (ith)氯胺酮 5 0、10 0、2 0 0 μg对小鼠甩尾潜伏期(TFL)的影响。并观察鞘内分别预先注射 6 羟多巴胺 (6 OH DA ,6 μg)、α1受体拮抗剂哌唑嗪 (Pra,5、15 μg)或特拉唑嗪(Ter,5、15 μg )对Ket(10 0 μg ,ith)脊髓镇痛的影响。 结果　Ket(5 0 μg ,ith)对小鼠TFL无影响 (P >0 0 5 ) ,而Ket(10 0、2 0 0μg ,ith)可剂量依赖性地延长小鼠TFL(P <0 0 5 )。鞘内单独注射 6 OHDA、Pra或Ter对小鼠的痛阈无影响 (P >0 0 5 )。ith 5 μgPra或Ter对Ket脊髓镇痛无影响 (P >0 0 5 ) ,而ith 6 OHDA、15 μgPra或Ter则可明显减弱Ket脊髓镇痛 (P <0 0 5 )。结论　脊髓是Ket的镇痛部位之一 ,Ket脊髓镇痛和脊髓NE神经元α1受体有关     

牵拉对α1受体激动剂苯肾上腺素诱发兔离体血管收缩反应的影响

目的研究在α1受体激动剂苯肾上腺素(Phe)诱发血管收缩反应实验中,如何确定动脉标本的最适前负荷.方法采用兔离体肾动脉、股动脉、隐动脉、肠系膜动脉、脾动脉和耳中央动脉环标本的等长张力纪录法.结果在1.0～5.0 g前负荷条件下, 随前负荷增加, 各血管环静息张力呈线性增加. KCl (120 mmol·L-1)引起各动脉的收缩随前负荷的增加而增强,但除耳动脉外, 在其他动脉标本上未观察到KCl最大收缩反应的最终坪值点.以Phe(0.01～100 μmol·L-1)为收缩剂时, 在肠系膜动脉, 脾动脉和隐动脉, Phe的EC50(EC50·Phe)值随前负荷增加(1.0～5.0 g)而明显改变; 但是, 各组标本在不同前负荷下的EC50·Phe值中存在一个最小值,其标准差亦很小.结论前负荷明显影响血管的EC50·Phe值测定.确定离体血管标本最适前负荷, 特别是研究受体反应时, 应以受体激动剂的EC50值及其变异程度最小作为关键指标.     

普萘洛尔对大鼠心肌细胞膜α_1肾上腺素受体密度及α_(1A)/α_(1B)比例的影响(英文)

放射配基结合实验表明,大鼠ip普萘洛尔(Pro)7 d后,心肌细咆膜α_1肾上腺素能受体密度由137±25增加到178±30fmol/mgprotein(P<0.05),KD值无显著改变,5-MU竞争结合实验表明,使用Pro后α_(1A)亚型在α_1受体总数中所占比例由19±6％增加到31±8％(P<0.05),但两种受体亚型的亲和力都未改变。说明β受体阻断后,α_(1A)亚型变化更为敏感。     

苄基四氢巴马汀对α受体的作用

本实验表明苄基四氢巴马汀(BTHP)具有阻断α-肾上腺素受体的作用。它能竞争性拮抗苯肾上腺素所致大鼠肛尾肌和兔主动脉条的收缩反应,其pA_2值分别为5.86和5.8;也能浓度依赖性地使可乐定和B-HT920的量效曲线平行右移,最大反应不变,其pA_2值分别为5.2和5.3。放射配基结合测定表明,BTHP对α_1和α_2受体均有亲和力,其竞争抑制常数(K_i)分别为3.52μmol/L和8.1μmol/L。     

一个新型α_1-去甲肾上腺素受体的光亲和放射性碘探针的母体化合物的合成

光亲和标记结合现代分离技术,已成为研究受体药理学的有力工具。业已发展了几个光亲和探针以研究β-Adrenergic receptor(β-AR)。然而对α_1-Adrenergic receptor(α_1-AR)的研究由于缺少该受体的适当的亲和配体而进展缓慢。最近Leeb-Lundberg和Hess分别在强效α_1-AR拮抗剂prazosin(Ⅰ)的基础上,先后发展了两个具有高亲和力和高选择性的放射性碘标记的亲和及光亲和探针Ⅷb,Ⅷc,Ⅸb和Ⅸc。为了研究具有结构通式Ⅷ/Ⅸ的其他类似     

白三烯C4（LTC4）放射受体结合方法的建立及二苯乙烯低聚体和LTC4受体结合特性

目的：建立LTC₄放射受体结合实验方法,并比较二苯乙烯低聚体（Gn-3）和LTC₄受体的结合特性。方法：以豚鼠肺膜为实验材料,采用³H-LTC₄为放射配体,以FPL₅₅₇₁₂作阳性对照药物,Gn-3为实验药物,进行药物竞争结合实验。采用离体器官生物检测法鉴定Gn-3对LTC₄受体的拮抗作用。结果：3H-LTC₄与其相应受体呈现单一结合位点,Gn-3可明显取代3H-LTC₄与其受体结合。生物学检定法证实Gn-3可抑制LTC₄引起的生物学效应。 结论：豚鼠肺膜LTC₄受体为单一结合位点受体,Gn-3为高活性的LTC₄受体拮抗剂。