食品中产单核李斯特菌PCR检测灵敏度的研究

目的:研究PCR检测不同食品中产单核李斯特菌(Lm)的灵敏度。方法:从市场采集牛奶和火腿,向其中以及作为对照的生理盐水中添加不同量的Lm,直接检测或经过高温处理后检测Lm。结果:添加Lm的牛奶、火腿和生理盐水样品,未经高温、经100℃10 m in、经121℃15 m in处理后,PCR检测灵敏度分别为未经高温26.5、265、2.65×103cfu/m l;265、2.65×104、2.65×104cfu/m l;2.65×105、2.65×108、2.65×108cfu/m l。结论:不同食品中Lm PCR检测灵敏度不同,高温处理影响检测灵敏度。     

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌（LMO）的快速方法，应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法：根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立改良分子信标-实时PCR检测体系，应用于食品中LMO检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg，菌液灵敏度为99cfu／ml或4cfu／PCR反应体系，无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO，均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测，8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份1310细菌培养阳性。结论：改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高，特异性强．能提高LMO的检出率和准确性，可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。     

市售猪肉产单核细胞李斯特菌分离及hly基因序列分析

目的：了解市售猪肉中产单核细胞李斯特菌（Lm）的污染状况及Lm分离菌株hly基因部分序列的分析比较。方法：分离菌株鉴定应用聚合酶链反应（PCR）；以PCR产物直接测序，对780bp片段作序列分析。结果：市售猪肉产单核细胞李斯特菌的污染率为1．08％（4／370）；分离菌株WLD1和FCY1与国内外14个参考菌株的同源性分别为96．4％～98．6％和95．0％-97．2％，而两分离株之间的同源性仅为95．9％。结论：合肥市市售猪肉中有一定程度产单核细胞李斯特菌的污染，且存在李斯特菌病的可能性和食物中毒的潜在危险；分离菌株WLD1和FCY1，尤其是FCY1分化程度较高．Lm hly基因核苷酸序列蒡异的距离与地理分布、菌株的样品来源无相关性。     

快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究

目的：为产单核李斯特菌提供了一个方便快捷切实有效的检测技术。方法：采用胶体金标记产单核李斯特菌抗体制备免疫层析检测试剂，通过免疫层析作用对产单核李斯特菌进行检测。结果：通过选用柠檬酸钠改良法制备胶体金，测定其最适结合蛋白浓度为28μg／ml，构建起免疫层析检测试剂和检测方法，检测了冷冻猪肉、牛奶、冰激凌以及不同稀释度的产单核李斯特菌标准样品，灵敏度达87．5％，具有良好的重现性。结论：免疫胶体金层析法用于快速检测产单核李斯特菌是可行的。     

市售生牛肉中检出单核李斯特菌

单核李斯特菌广泛存在于自然界,且易污染肉制品。2004年7月,盐城市疾病预防控制中心根据江苏省食品污染物监测计划,采用国标方法增菌、分离、鉴定,从20份市售生牛肉中检出2株单核李斯特菌,现将结果报告如下。     

2005—2007年衢州市食品中产单核李斯特菌污染状况调查

目的:掌握衙州市食品中产单核李斯特菌污染状况.方法:按GB/T4789.30-2003方法分离单增生李斯特菌.结果:2005～2007年从323份食品中共分离产单核李斯特菌27株,总污染率为8.36%(27/323).生肉类、水产品的污染率分别为14.55%、7.32%;熟肉、生食果蔬类及其制品中未检出.结论:我市存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险.     

温州市食源性产单核李斯特菌污染调查

目的：掌握温州市各类食品中产单核李斯特菌（LM）的污染状况，初步确定易受污染的食品，为食源性疾病监测提供科学依据。方法：采集8大类食品及冰箱内壁涂抹物，按国标GB／T4789-30方法进行分离培养，然后用生化、API鉴定。结果：218件样品中检出LM13株，检出率为5．96％。冰箱内壁涂抹物96件均未检出。结论：LM主要污染的食品为家禽类、熟食制品、淡水鱼及涮羊肉等。     

产单核李斯特菌的研究进展

产单核李斯特菌属于典型的胞内寄生菌，是一种可引起全世界范围内人畜共患和食源性疾病的致病菌。文章从该菌的生物学特性、毒力因子、与动物性食品污染的关系以及检测等方面的研究进展进行了阐述。     

应用Taqman实时PCR法检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌

目的建立敏感快速的检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌的实时PCR方法。方法以hlyA基因为靶标,建立并验证实时PCR法的特异性。选用单核细胞增生李斯特菌CMCC 54004,制备不同浓度的纯菌液,用实时PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率。进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g猪肉样本1.3×100、1.3×101、1.3×102、1.3×103、1.3×104、1.3×105和1.3×106CFU。分别在增菌0、4、8、12、18、24、30、36和46 h取1 ml培养液,提取DNA进行实时PCR检测,并用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性。采集24份市售猪肉样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出率。结果建立的实时PCR法特异性好,对纯菌液的检出限为1.3×103CFU/ml。人工染菌样本增菌24 h后,实时PCR检出限1.3 CFU/25 g,PCR及传统方法达到这一检出限需要增菌46 h。根据增菌24 h的检测结果,建立实时PCR样本标准曲线。24份猪肉样本,实时PCR检出17份阳性,阳性率70.83%(17/24),与PCR和传统方法的阳性率一致。根据所得的样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌。结论所建立的实时PCR具有快速简便、敏感特异等优点,整个操作可在27 h内完成,适用于猪肉中单核细胞增生李斯特菌的快速定量检测。     

2000～2004年浙江省食品中产单核李斯特菌污染状况调查

目的：掌握浙江省食品中产单核李斯特菌污染状况。以及内化素基因（Inl）和李氏溶血素O（Hly）两种致病基因携带情况。方法：按GB4789．30方法分离单增生李斯特菌，采用PCR技术检测李斯特菌的两种致病基因。结果：2000～2004年从2282份食品中共分离产单核李斯特菌163株，总污染率为7．14％（163／2282）。生肉类、熟肉及水产品的污染率分别为12．80％、7．67％和2．24％；114份生食蔬菜中1份标本分离到产单核李斯特菌；285份乳及乳制品、59份冰激凌均未分离到产单核李斯特菌；163株产单核李斯特菌有155株同时检测到内化素基因和李氏溶血素O基因。结论：我省存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险。     

产单核李斯特菌的改良分子信标荧光PCR-磁捕获快速检测体系的建立

[目的]建立改良分子信标荧光PCR-磁捕获快速检测产单核李斯特菌(LMO)的体系,应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断. [方法]根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标荧光PCR检测体系.运用磁捕获材料对PCR检测阳性的增菌液进一步处理后划平皿做分离培养. [结果]改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110 fg,菌液灵敏度为99 cfu/ml或4 cfu/PCR反应体系,无交叉反应.以此反应体系检测28株LMO,均出现特异的荧光信号.对228份食品进行LMO检测,8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性.用磁捕获材料处理此8份增菌液,全部细菌培养阳性,高于国标法的6份阳性.[结论]改良分子信标一实时PCR反应体系快速、灵敏度高,特异性强,运用磁捕获试剂能有效提高培养阳性率.应用该检测系统能提高LMO的检出率和准确性.该系统可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断.     

荧光实时定量PCR检测单核李斯特菌方法学建立及应用

目的 建立检测单核细胞增多性李斯特菌的荧光定量PCR方法，并利用此方法检测人工污染的牛奶中单增李斯特菌菌量。方法 选择单增李斯特菌特异性的基因Listeriolysin O基因为靶目标设计引物，采用煮沸法抽提纯单增李斯特菌株（1／2a）DNA，建立SYBRGREEN实时定量PCR检测体系：结果 定量PCR对李斯特菌可产生特异扩增信号，对其他菌（大肠杆菌）无响应。标准曲线的相关系数为0．9521。最小检菌量约为100个菌落形成单位／反应体系。在人为污染牛奶检测中，与传统细菌计数方法结果相比，相关系数为0．839。结论 实时定量PCR是一种快速、灵敏的定量检测单增李斯特菌的方法，可用于牛奶样品的检测。     

新生儿感染单核细胞增生李斯特菌1例

<正>单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是革兰阳性短小杆菌,隶属于李斯特菌属,是引起人畜共患李斯特菌病的病原菌~([1])。近年来,李斯特菌病有增加趋势,而发展中国家报道较少~([2])。虽然Lm感染在我国并不多见,但是在新生儿尤其早产儿中,病死率却较高~([3])。本文对本院接诊的一例感染Lm新生儿的诊疗过程进行分析,并回顾相关文献,为临床诊治提供参考。     

应用PCR技术检测李斯特氏菌致病基因

李斯特氏菌广泛存在于自然界当中,是影响食品卫生的重要病原菌.有资料显示,在其传播途径中,动物性食品日显重要.为掌握李斯特氏菌在我省食品中的污染状况,我们调查了7类食品共315份样品,用常规检验方法检出9株李斯特氏菌,为快速测定其致病性,采用PCR技术对分离菌株做了2种主要致病因素李氏溶血素O和内化素的分析.现报告如下.     

单核细胞增生李斯特菌快速检测的靶基因及其生物学特性

单核细胞增生李斯特菌(Listeria m onocytogene,s Lm)是一种重要的人畜共患病原菌,该菌在自然界分布广泛,极易通过各类污染食品进行传播,感染人和动物引起食源性李斯特菌病。Lm可使孕妇、婴儿以及免疫力低下的易染人群产生腹泻发热等症状,严重的会导致孕妇流产、脑膜炎和败血症     

食品中单核细胞增生李斯特菌PCR快速检测方法

[目的]建立食品中单核细胞增生李斯特菌的快速、敏感、特异的PCR检测方法。[方法]选择Hly基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对单增李斯特菌和10株非单增李斯特菌进行PCR扩增，并且用此方法对30份食品进行检测。[结果]扩增片断表现出极好的单增李斯特菌特异性，最低检出限为190cfu/ml。[结论]本实验建立的PCR检测方法为一种简便、快速、敏感、特异的单增李斯特菌检测方法。     

2005～2007年自贡市食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况的调查

李斯特菌属为革兰阳性无芽孢杆菌。其中单核细胞增生李斯特菌(Listeria m onocytogenes,Lm)(简称单增李斯特菌)是常能引起人畜共患李斯特病的病原菌,感染此菌后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多,病死率较高。自然界广泛存在,食品中肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实有不同程度的污染传播。近年来,国外对李斯特菌引发食物中毒事件时有报道。国内虽未见该菌食物中毒报道,但因食品污染而引发该病的可能性是存在的[1~3]。为掌握我市单增李斯特菌在食品中的污染情况,防止食源性李斯特菌病的发生和流行,于2005~2007年对…     

围生期李斯特菌病1例并文献学习

目的 分析围生期李斯特菌病的临床特点.方法 报道2020年11月新疆医科大学第一附属医院诊治的1例李斯特菌感染孕产妇的诊治过程,并复习相关文献.结果 本例为27岁孕妇,急诊收入产科,临床表现没有特异性,术后诊断为李斯特菌感染,更改治疗方案后母儿预后尚可.结论 围产期李斯特菌感染病罕见,对胎儿及新生儿危害大.临床需提高对...     

李斯特菌属荧光定量PCR检测方法的建立

目的采用荧光定量PCR技术,建立可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌的快速检测方法。方法选取单增李斯特菌hlyM基因和李斯特菌属23Sr DNA基因为靶基因,分别设计引物和探针,在构建二者的阳性重组质粒基础上,对李斯特菌属和单增李斯特菌进行荧光定量PCR的检测。结果建立的李斯特菌属和单增李斯特菌单重荧光定量PCR检测方法与双重荧光定量PCR的检测方法敏感度一致,分别为18.6拷贝/μl和23.2拷贝/μl。结论建立的双重荧光定量PCR方法可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌。     

运用"染片指引法"对产单核李斯特菌暴发食物中毒的诊断及其意义

产单核李斯特菌（Listeria monocytogenes，Lm）污染食品引起食物中毒，早在上个世纪80年代美国、英国、加拿大等国家首先报告。本文在处理一起由140余名8～12岁学生课间营养餐，食用熟食喜蛋82人群体暴发食物中毒事件中，针对本次食物中毒现场流行病学特征和相应的临床特征等综合信息，运用“染片指引法”，简化、快捷、准确、无误地诊断本次食物中毒为Lm所致。现将结果报告如下：