甲基N-硝基亚硝基胍和视黄酸致ICR小鼠腭裂发育模型的建立

目的:建立发生率较高、畸形类型明确、易于获得并可用于不同类型化学物致腭裂发生机制研究的动物模型.方法:采用致突变性化合物甲基N-硝基亚硝基胍(MNNG)和非致突变性致畸物视黄酸(RA)作用于ICR小鼠(对照组采用溶剂),观察不同剂量和不同给药时间的胚鼠腭裂畸形发生率,确定诱导腭裂发生的最佳作用条件,并通过光镜、电镜等手段对其畸形特征作进一步分析.结果:孕10 d一次给予40 mg/kg MNNG所致腭裂的发生率为55.2%,一次给予80 mg/kg RA腭裂发生率几乎达100%;光镜结果显示这2种化学物诱导的腭裂均为小腭;电镜结果表明孕16 d对照组腭中嵴上皮细胞表面有大量的丝状伪足而实验组中则无.结论:成功建立了可供两类不同腭裂发生分子机制研究的动物模型,为进一步研究腭裂畸形的分子机制奠定了基础.     

过量维A酸诱导昆明小鼠露脑畸形动物模型的建立及其形态学观察

目的: 建立过量维A酸(RA)诱导的露脑畸形动物模型,分析RA在胚胎发育期间对胎鼠和母孕鼠的毒性作用。方法: 将昆明小鼠随机分为对照组20只和实验组60只,实验组分别在妊娠(GD)7.50 d、GD7.75 d、GD8.00 d和GD8.50 d一次性灌服相应剂量(20、30、40和50 mg/kg)的全反式RA (atRA)花生油悬液,对照组灌服等剂量花生油。结果: 不同用药时间和不同剂量的atRA均可致露脑畸形发生,且其发生率随用药剂量的增加而增加、随孕龄的增加而减少。其中GD 7.75 d 30 mg/kg实验组诱导露脑畸形发生率最高。GD 7.75 d 30 mg/kg RA组显示头部神经管未闭,GD 16.50 d胚胎可见头部缺损处脑组织外露,颅顶骨及头部皮肤发育不全。结论: 成功建立atRA致昆明小鼠露脑畸形动物模型,为进一步研究露脑畸形的发生机制奠定了基础。     

细胞凋亡与腭裂发生关系的实验研究

【目的】探讨由地塞米松 (dexamethasone ,DEX)诱导的腭裂胚胎模型的腭裂形成中细胞凋亡的意义与作用。【方法】给 12孕期日 (gestationday ,GD)的昆明小白鼠腹腔注射 10～ 5 0mg/kg剂量的DEX ,获取腭裂胚胎模型。对标本标准颅颌冠状切片进行辣根过氧化物酶标亲核素 生物素 dUTP原位末端标记法 (ISEL) ,在光镜及电镜下做形态学定性观察及腭突凋亡细胞计数分析。【结果】实验组均观察到ISEL阳性细胞 ,其计数均数及腭裂发生率分别与DEX剂量呈正相关 (r =0 9911/ 0 9978)。【结论】DEX诱导的腭裂与腭突细胞凋亡水平升高有关     

维甲酸诱导BALB／c近交系小鼠腭裂动物模型的实验研究

目的分析维甲酸（RA）在胚胎发育期间对胎鼠的致畸作用,建立维甲酸诱导腭裂动物模型的最佳剂量。方法将特定妊娠期BALB／c近交系小鼠分为对照组和实验组。实验组小鼠一部分在妊娠8d,10d,12d管饲RASOmg／kg,一部分在妊娠10d给予40mg／kg、50mg／kg和60mg／kg三种不同剂量RA;对照组小鼠在妊娠8d,10d,12d管饲等剂量玉米油。观察胎鼠腭裂比率,确定诱导腭裂形成的最佳作用条件。结果RA在不同的发育阶段均可诱导腭裂,妊娠第10天50mg／kgRA诱导腭裂的比率为93．75％（P〈0．05）,诱导腭裂形成的比率最高。结论RA诱导BALB／c近交系小鼠腭裂是一种较为理想的腭裂动物模型,其最佳剂量为妊娠第10天给予50mg／kgRA。     

地塞米松和维生素B12对A系小鼠胚胎腭突细胞生长因子基因表达的影响

目的：揭示地塞米松（DEX）引起腭裂发生及维生素B12阻抑腭裂发生的分子机理。方法：应用RT－CPR技术，半定量研究DEX和维生素B12对培养的A系小鼠腭突细胞生长因子基因表达的影响。结果：DEX能明显刺激腭突细胞EGF及TGFβ1基因的表达，而对TGFα基因表达无明显影响，维生素B12对EGF、TGFα、TGFβ1的基因表达无明显影响；维生素B12可抑制DEX促进腭突细胞EGF、TGFβ1基因表达的作用。结论：DEX可能是通过改变腭突细胞一些生长因子基因表达，干扰了正常的腭突发育，导致腭裂畸形。维生素B12则通过减弱DEX对腭突细胞一些生长因子基因表达而抑制DEX引起腭裂畸形的作用。     

RARα和β-catenin在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用

目的探讨RARα和β-catenin在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用。方法采用免疫组织化学及图像分析方法，检测维甲酸致畸小鼠和相应对照组小鼠腭板中RARα和β-catenin的表达状况。结果实验组RARα在腭板上皮细胞和间充质的表达量明显低于对照组；实验组β-catenin在腭板上皮细胞中的表达量明显高于正常对照组。结论RARα在腭板上皮和间充质细胞中表达的下调和β-catenin在腭板上皮细胞中表达的上调与维甲酸致昆明小鼠腭裂发生相关。     

凝集素受体WGA、RCA和ECL在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用

目的  探讨凝集素受体WGA、RCA和ECL在过量维甲酸（RA）致小鼠腭裂畸形中的作用。   方法  以生物素标记的凝集素受体WGA、RCA和ECL为探针,应用亲和细胞组织化学染色方法检测上述3种凝集素受体在RA致畸鼠胚（实验组）和相应对照组鼠胚腭板上皮及其间充质的分布状况和变化规律。  结果  3种凝集素受体在实验组不同发育阶段的小鼠胚胎腭突上皮内的表达量显著低于相应对照组。3种凝集素受体在小鼠胚胎腭板间充质中的表达量在实验组及对照组之间差异无统计学意义。  结论  WGA、RCA、ECL 3种凝集素受体在腭板上皮中表达量的下调与RA致昆明小鼠腭裂发生相关。     

化学物质诱发的小鼠肢体畸形动物模型的建立

目的：建立发生率稳定、畸形类型特异和易于获得的化学物质所致小鼠肢体畸形动物模型。方法：采用致突变性致畸物N—甲基—N’—硝基—N—甲基亚硝基胍(N—methyl-N‘=nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG)作为受试物，观察不同剂量和不同给药时间的胎鼠畸形率、畸形类型及特征。结果：孕期第12天一次给予MNNG 40mg/kg时，胎鼠畸形类型主要为肢体畸形，肢体畸形率以活胎计为33.7％(3l／92)，以窝计为8l.8％(9／11)，肢体畸形占畸形胎鼠的构成比为l00％。畸形类型以短指(趾)和缺指(趾)最常见。四肢畸形的发生率和严重程度存在不对称性，依次为左后＞左前＞右后＞右前。掌跖骨缺失和骨化不全发生率较高，此外还有胫腓骨的缺失和骨化不全，特别是大体形态所见短肢是胫腓骨缺失所致。结论：成功建立了小鼠肢体畸形动物模型，为进一步研究肢体畸形的分子机制奠定了基础。     

维甲酸诱导腭裂发生的过程中对TGF-β/Smad信号途径的抑制作用

目的探讨维甲酸在诱导腭裂发生过程中对Smad2磷酸化的影响,并分析其可能的致畸机制。方法建立维甲酸诱导的腭裂模型,利用HE染色观察维甲酸诱导腭裂发生的过程;应用免疫组化检测E12 d、E13 d、E14.5 d、E15 d、E15.5 d、E16 d(Ed:Embryonic day)对照组和实验组胎鼠模型腭突中嵴上皮内P-Smad2蛋白的表达。结果在腭突融合过程中,内源性的Smad2通过磷酸化能够被激活。与对照组相比,维甲酸可抑制腭突中嵴上皮中Smad2的磷酸化表达。结论维甲酸诱导腭裂的发生,与中嵴上皮细胞中Smad2磷酸化的抑制密切相关。     

Caspase-3在维A酸致小鼠胚胎神经管畸形中的表达及意义

目的:探讨Caspase-3在维A酸(RA)致小鼠胚胎神经管畸形发生过程中的表达及意义。方法:40只未经产昆明种小鼠随机分为实验组和对照组各4小组,每小组5只。分别在花生油及RA处理18、42、66、90 h后剖腹取胎、剥离头部神经管,Western-bloting法检测Caspase-3的表达变化。结果:Caspase-3在正常胚胎神经管组织中的表达存在时间依赖性。对照组Caspase-3在花生油灌服后18 h表达升高,42 h和66 h时表达最强,之后表达逐渐降低。实验组Caspase-3在RA处理后42 h表达水平显著低于对照组(P0.01),66 h和90 h时表达水平均显著高于对照组(P0.01)。结论:RA改变了昆明种小鼠胚胎神经管中Caspase-3的正常时间表达模式,这种异常的基因表达模式可能参与了RA诱导的神经管畸形发生。     

全反式视黄酸对新生大鼠纹状体神经干细胞向神经元样细胞分化的作用

目的观察全反式视黄酸（atRA）体外对神经干细胞（NSCs）的诱导分化作用及其可能的分子机制。方法分离培养新生大鼠纹状体NSCs；以免疫组织化学染色观察不同浓度atRA对NSCs分化的影响；RT-PCR分析视黄酸受体表达情况：结果atRA诱导NSCs向神经元方向分化，其作用在一定范围内呈剂量依赖性，诱导剂量以1．0pmol／L较为适宜。NSCs的RARβ基因的表达对atRA存在剂量依赖性和时间依赖性。结论atRA诱导NSCs向神经元方向分化，此作用与atRA上调细胞的RARβ基因转录水平有关。     

全反式视黄酸对新生大鼠纹状体神经干细胞向神经元样细胞分化的作用

目的 观察全反式视黄酸(atRA)体外对神经干细胞(NSCs)的诱导分化作用及其可能的分子机制。方法 分离培养新生大鼠纹状体NSCs;以免疫组织化学染色观察不同浓度atRA对NSCs分化的影响;RT-PCR分析视黄酸受体表达情况。结果 atRA诱导NSCs向神经元方向分化,其作用在一定范围内呈剂量依赖性,诱导剂量以1.0μmol/L较为适宜。NSCs的RARβ基因的表达对atRA存在剂量依赖性和时间依赖性。结论 atRA诱导NSCs向神经元方向分化,此作用与atRA上调细胞的RARβ基因转录水平有关。     

不同剂量STZ诱导小鼠糖尿病模型的发病机制

目的：探讨不同剂量链脲佐菌素（STZ）多次注射诱导小鼠糖尿病模型的发生机制以及糖尿病的发生与自身免疫应答的关系。方法：昆明小鼠40只随机分为正常对照组(Ⅰ组)及20、40、80 mg·kg^-1STZ组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组)。腹腔注射不同剂量STZ诱导小鼠糖尿病作为动物模型。葡萄糖（Glu）测定试剂盒与尿液分析试纸条联合检测小鼠血糖和尿糖的变化,光镜观察胰岛的组织学改变情况,ELISA间接法检测小鼠血清中胰岛素抗体（IAA）的水平,淋巴细胞转化试验（MTT法）检测小鼠胸腺和脾脏的T淋巴细胞功能。结果：对照组血糖基本无变化,模型组血糖值随时间增加而增加;注射STZ后第4周,尿糖结 果Ⅰ组均为(-);Ⅱ组中5只(-),其余均＞+;Ⅲ组中2只(-),其余均＞++;Ⅳ组均＞+++。不同剂量STZ诱导小鼠胰岛β细胞损伤的病理改变和程度均有所差异。Ⅱ组和Ⅲ组的IAA高于对照组(P<0.05),而Ⅳ组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。与对照组比 较,Ⅱ组和Ⅲ组的脾细胞（成熟的T淋巴细胞）对ConA的刺激表现为功能增强,而胸腺细胞（不成熟的T淋巴细胞）对ConA的刺激则表现为功能降低;但Ⅳ组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：3种剂量STZ均可诱导不同程度的糖尿病发生。大剂量STZ（80 mg·kg^-1）可诱导小鼠产生2型糖尿病;而小剂量STZ（20和40 mg·kg^-1）则诱导产生1型糖尿病,以40 mg·kg^-1STZ诱导的1型糖尿病的效果为最佳。     

腭裂相关基因TTF-2转基因小鼠模型的制备过程

目的建立表达TTF-2的转基因小鼠。方法利用显微注射技术把线性化表达载体p BROAD3-TTF-2注射到小鼠受精卵的雄原核中,建立TTF-2转基因小鼠。采用PCR、Southern印迹的方法对转基因小鼠进行鉴定。结果得到胎鼠68只和2只腭裂新生鼠,切鼠尾提取基因组DNA经PCR和Southern印迹方法检测发现13只转基因阳性胎鼠,包括2只腭裂新生鼠。腭裂小鼠出生后24小时死亡。结论获得了TTF-2转基因小鼠,表现型为腭裂,为腭裂发生机制的研究提供一种良好的动物模型。     

细胞凋亡与腭裂发生关系的实验研究

「目的」探讨由地塞米松（ｄｅａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＥＸ）诱导的腭断裂胎模型的腭裂形成中细胞凋亡的意义与作用。「方法」给１２孕期日（ｇｅｓｔａｔｉｏｎ ｄａｙ，ＧＤ）的昆明小白鼠腹腔注射１０￣５０ｍｇ／ｋｇ剂量的ＤＥＸ，获取腭裂胚胎模型。对标本标准颅颌冠状切片进行辣根过氧化物酶标亲核素－生物素－ｄＵＴＰ原位末端标记法９ＩＳＥＬ），在光镜及电镜下做形态学定性观察及腭突凋亡细胞计数分析。「结果」实验组     

Dishevelled2和Vangle2蛋白在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的表达变化及意义

目的探讨Dishevelled2和Vangl2蛋白在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用。方法采用免疫组织化学及图像分析方法,检测维甲酸致畸小鼠（实验组）和相应对照组小鼠腭板中Dishevelled2和Vangl2蛋白的表达状况。结果Dishevelled2在实验组间充质的表达量明显高于相应对照组,在腭板上皮表达量先明显高于而后又明显低于相应对照组;Vangl2在实验组腭板间充质中的表达量先明显高于而后又明显低于相应对照组。结论Dishevelled2在间充质细胞中表达的上调以及在上皮细胞中先上调又明显下调和Vangl2在腭板间充质细胞中表达的先上调后下调可能与维甲酸致昆明小鼠腭裂发生相关。     

三维超声自由解剖成像技术在胎儿唇腭裂中的应用

目的:探讨三维超声自由解剖成像技术(OmniView)在诊断胎儿唇腭裂中的应用价值,为胎儿唇腭裂畸形的早期诊断提供依据。方法:分别用二维超声及三维OmniView技术采集60例正常胎儿及15例唇腭裂胎儿的数据,比较两种方法对唇腭部的显示率,以及两种方法对唇腭裂畸形的符合率。结果:二维超声与OmniView技术对唇部及牙槽突弓均能较满意显示(均P0.05)。OmniView技术对硬腭和软腭的显示率高于二维超声(均P0.05)。三维OmniView技术对腭裂诊断的符合率(13/15)高于二维超声(8/15),差异有统计学意义。结论:三维超声OmniView技术对胎儿腭部的显示率高于二维超声,可提高患儿腭裂的检出率及准确率。     

腭裂修复术式与腭穿孔、开裂的关系探讨

目的：探讨腭裂手术后发生穿孔和开裂的原因。方法：比较我科和美国慈善医疗队采用不同术式完成的腭裂手术,其发生穿孔和开裂的比率,分析发生的原因。结果：美国慈善医疗队完成腭裂手术38例,发生穿孔和开裂的有24例,发生率为63％;我科同期完成腭裂手术43例,发生穿孔的有3例,发生率为7％。结论：腭穿孔和伤口开裂主要和伤口的张力有关,我科采用的术式更符合我省患者的畸形特点。     

2,3,7,8-四氯二苯二噁英诱导腭裂发生的差异蛋白筛选

目的:以蛋白质组学方法筛选2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致先天性腭裂发生的差异表达蛋白.方法:以TCDD诱导建立胎鼠先天性腭裂模型,行腭部的大体解剖及组织学检查.取实验组和对照组胎鼠的腭组织,分别提取组织总蛋白.通过双向电泳和质谱分析,...     

RTX诱导神经管畸形动物模型的建立及机制研究

目的 :通过胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)特异性抑制剂———雷替曲塞(RTX)干预孕鼠,建立小鼠神经管畸形(neural tube defects,NTDs)模型,探讨细胞凋亡和增殖、DNA损伤在RTX诱导的NTDs发生中的作用。方法:将孕7.5 d C57BL/6J小鼠随机分为6组:1组为对照组,5组为RTX干预组。对照组腹腔注射0.9%Na Cl,RTX干预组分别腹腔注射不同剂量的RTX(5.0、10.0、11.5、13.5、15.0 mg/kg),孕11.5 d取胚胎并观察其发育情况。苏木精-伊红(HE)染色观察神经管闭合情况,放射性法测定TS活性,高效液相色谱检测胸苷酸(d TMP)及尿苷酸(d UMP)含量,Western blot分析复制蛋白A2(RPA2)、γ-H2AX和caspase-3表达,免疫组化检测细胞增殖。结果:RTX注射剂量为11.5 mg/kg时,NTDs发生率最高(30.56%);RTX干预后,TS活性较对照组显著降低,dUMP含量显著升高,dTMP含量显著下降;RTX建立的NTDs模型中,RPA2和γ-H2AX磷酸化水平显著升高;caspase-3表达量显著增加,细胞增殖显著减少。结论:通过RTX干预孕鼠可建立小鼠NTDs模型,dTMP合成障碍导致DNA损伤、细胞凋亡与增殖失调可能是NTDs发生的重要机制。