反义寡核苷酸抑制肝癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的：研究血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ODN)对人肝癌细胞系VEGF表达的抑制作用，探讨肝癌基因治疗的新方法。方法：人肝癌细胞系SMMC7721能表达VFGF，采用人工合成反义、正义ODN分别作用于SMMC7721细胞，RT—RCR、流式细胞仪比较各处理组VFGF mRNA及其蛋白的表达变化情况。结果：VEGF RT—PCR扩增条带的图像分析平均灰度值显示，反义组为0．4379，正义组为0．7367，对照组为0．7462。流式细胞仪分析VFGF蛋白表达率，反义组为17．2％，正义组为31．8％，对照组为31．2％。结论：反义ODN能够抑制人肝癌细胞的表达，其有望成为抗肝癌的新一代基因治疗药物。     

VEGF反义寡核苷酸抑制荷瘤大鼠胶质瘤血管生成的作用和效果

观察在荷瘤大鼠脑内原位注射血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对胶质瘤的血管生成的抑制效果。所有大鼠均在立体定向导引下右尾状核区接种含C6胶质瘤细胞 1× 10 6的Hank液 (2 0 μl)。实验Ⅰ和Ⅱ组在细胞接种后的 1和 2周各原位注射 1次 ,共 2次 ,每次实验Ⅰ组为 10 0 0 μmol/L、实验Ⅱ组为2 0 0 0 μmol/L的VEGF反义寡苷核酸。对照组仅在接种后第 1和 2周原位注射 2 0 μl的Hank液。第 3周时处死所有大鼠 ,观察肿瘤的生长情况 ,标本做常规HE染色和免疫组化染色检查VEGF的表达和血管密度 (MVD) ;原位杂交观察VEGFmRNA的表达。结果显示 ,实验组大鼠有较好的生存状态 ,而对照组在实验 2周时开始出现颅内高压症状 ,至 3周时大鼠大多处于濒危状态 ;成瘤抑制率实验Ⅰ组为 91 5 % ,实验Ⅱ组为 10 0 % ;实验组和对照组VEGFmRNA、VEGF的表达和微血管密度比较差异有显著性意义。研究表明 ,原位使用VEGF反义寡核苷酸治疗荷瘤大鼠颅内胶质瘤能取得很好的抗血管生成的治疗效果     

VEGF反义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF 表达抑制作用的定量和定性检测

为观察VEGF反义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF表达抑制作用，应用免疫荧光流式细胞技术和免疫细胞化学定量和定性观察反义、正义、错义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF表达的影响。结果显示，VEGF反义寡核苷酸对C6胶质瘤细胞VEGF的表达有明显抑制作用，而且抑制作用存在浓度依赖性。提示VEGF反义寡核苷酸能够有效地抑制C6胶质瘤细胞VEGF的表达。     

肝癌患者血清VEGF的表达及临床意义

目的：探讨肝癌患者血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)表达情况及临床意义。方法：选择70例肝癌、30例肝硬化和20例正常对照血清标本，采用定量ELISA法检测血清VEGF含量。记录肝癌组临床病理特征，与肝癌组血清VEGF水平做相关性分析。结果肝癌组血清VEGF显著高于肝硬化组和正常对照组（P＜0．05，P＜0．001）。肝癌患者血清VEGF与肿块大小成正相关（P＜0．05）；出现液化坏死病变、伴有远处转移，及肝癌切除术后复发患者血清VEGF水平明显增高（P＜0．05），TNMⅢ、Ⅳ期患者血清VEGF浓度也明显高于TNMⅠ、Ⅱ期患者（P＜0．05）。结论：血清VEGF水平可作为肝癌诊断和预后评价的重要指标。     

血小板反应蛋白1对肾小管上皮细胞VEGF表达的影响

目的　探讨血小板反应蛋白1(TSP-1)对肾小管上皮细胞(HKCs)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法　实验 分4组:对照组(C组)用无血清培养基(FSM)培养人HKCs;转化生长因子β1(TGF-β1)组(T组)用含TGF-β120ng/ml的FSM培养 HKCs;反义寡核苷酸组(TA组)在T组基础上加TSP- 1反义寡核苷酸;错义寡核苷酸组(TS组)在T组基础上加TSP -1错义寡核苷 酸。上述各组均培养72h后,用免疫细胞化学及RT-PCR方法检测TSP-1和VEGF及它们的mRNA表达的变化。结果　T组与C 组比较,TSP 1表达显著增高(P<0.01),VEGF表达显著下降(P<0.01);TA组阻断TSP-1表达后,与T组比较VEGF表达显著增 加(P<0.01)。结论　TGF-β1能诱导HKCs表达TSP-1、SP-1对VEGF的表达有抑制作用。     

CXCR4反义核酸对结肠癌细胞VEGF-C mRNA表达的影响及体外侵袭的抑制作用

目的 研究趋化因子受体CXCR4反义核酸转染对结肠癌细胞HT-29血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA功能性表达和其体外侵袭能力的影响.方法 利用自行设计的引物,借助RT-PCR技术获得两端含不同限制性酶切位点的CXCR4 cDNA片段,反向插入pcDNA 3.1( )质粒中,构建CXCR4反义真核表达载体.以脂质体转染法将质粒导入HT-29细胞,用RT-PCR检测其对HT-29细胞VEGF-C mRNA表达的影响,Western blot检测HT-29细胞CXCR4蛋白表达的变化,MTT法测定HT-29细胞的生长曲线,体外侵袭实验观察转染前后HT-29细胞体外侵袭能力的变化.结果 成功构建了CXCR4反义重组质粒.与未转染(HT-29)组表达的VEGF-C mRNA相比,CXCR4反义核酸转染(HT-29tran)组的表达量下降54.2%,而空白质粒转染(HT-29KZ)组的表达量仅下降9.4%,HT-29tran组和HT-29KZ组相比差异显著(P＜0.01).穿膜细胞百分率HT-29tran组为61.3%±5.8%,而HT-29KZ组为93.7%±7.8%,两组相比差异显著(P＜0.05).结论 CXCR4反义核酸转染可明显抑制HT-29细胞VEGF-C mRNA的表达,并可显著降低HT-29细胞的体外生长和侵袭能力.     

反义寡核苷酸与血管内皮生长因子对血管成形术后再狭窄的影响

目的 探讨反义寡核苷酸和血管内皮生长因子联合应用对血管成形术后再狭窄的影响. 资料与方法 中国大耳白兔56只,分为8组,每组7只;髂总动脉球囊拉伤后,分别给予反义寡核苷酸或/和血管内皮生长因子,取病理切片对再狭窄程度进行评价; 采取免疫组织化学及Western Blotting以细胞增殖抗原的表达对反义寡核苷酸和血管内皮生长因子的效果进行评价. 结果 反义寡核苷酸与血管内皮生长因子各组均能减轻球囊损伤后再狭窄,反义寡核苷酸与血管内皮生长因子联合应用显著减轻再狭窄且两者间无交互作用(P>0.7). 结论 反义寡核苷酸与血管内皮生长因子联合应用显著减轻再狭窄且两者之间无交互作用.     

反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响

目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响.方法以端粒酶逆转录酶组分hTERT cDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGF-C及其受体Flt-4 mRNA表达水平的变化,免疫组化法检测VEGF-C、Flt-4蛋白表达.结果反义hTERT稳定转染后SGC7901细胞VEGF-C及其受体VEGFR-3（Flt-4） mRNA和蛋白表达均受到明显抑制.结论反义hTERT可有效抑制胃癌细胞VEGF-C及其受体Flt-4的表达,阻断肿瘤血管和淋巴途径转移.     

反义△Np73基因对大肠癌细胞治疗作用的实验研究

目的：探讨反义△Np73基因在抑制大肠癌细胞生长、转移及抗肿瘤血管生成治疗中的意义。方法：以人类大肠癌细胞株LOVO为研究对象，将外源性的pcDNA3-△Np73以及反义基因pEGFP－AS△Np73转染大肠癌细胞后，分别命名为LOVO／△Np73和LOVO／AS△Np73，并测定MTT生长曲线；Boyden小室体外侵袭实验测定侵袭力改变；免疫组化染色测定细胞VEGF表达的变化；再将转染了两种基因的大肠癌细胞株分别种植于裸鼠，成瘤后测定种植瘤内MVD以及VEGF表达变化（免疫组化法）。结果：细胞生长曲线提示：LOVO／AS△Np73细胞的生长较LOVO／△Np73组细胞减慢，细胞侵袭力明显降低（P〈0．01）；细胞及种植瘤VEGF免疫组化染色提示：LOVO／AS△Np73组VEGF染色呈弱阳性，而LOVO／△Np73组则呈强阳性；MVD检测提示：LOVO／AS△Np73细胞组与对照组（示LOVO／△Np73细胞组）相比，MVD显著减少（P〈0．01）。结论：反义△Np73基因可减缓大肠癌细胞的生长，降低其侵袭力，并抑制了肿瘤血管的生成，对大肠癌具有治疗作用，可作为大肠癌基因治疗的新靶点。     

VEGF及其受体的表达与肝癌的生物学特性关系

目的：通过检测裸鼠肝癌模型中肝癌不同生长时期的病理改变与血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）KDR及Flt-1的异常表达，探讨肝癌复发转移与VEGF及其受体间的关系。方法：将裸鼠25只随机分成5组，Ⅰ组为对照组，其余20只原位种植人肝癌细胞，分别于1周、2周、3周、4周作血管造影，取标本切片行HE染色及用免疫组化的方法检测anti-VEGF,anti-KDR及anti-Flt-1的表达。结果：血管造影显示种植后2周组肝脏血管开始有增生及扭曲，3周及4周组血管改变更加明显，各组成瘤率均为100％，光镜下1周组可见瘤细胞散在肝血窦周围，2周组瘤组织聚集成团，3周组，4周组瘤细胞团形态不规则，边界不清，向瘤周浸润，瘤细胞团内可见坏死，1周组瘤细胞VEGF表达成弱阳性，2周组VEGF表达成阳性，3周组及4周组VEGF表达强阳性；正常对照组于种植后1周组肿瘤细胞与周围肝细胞VEGFR表达未见明显差异，种植后2周、3周、4周肿瘤新生儿血管VEGFR表达逐渐增强，肿瘤新生血管内皮细胞的VEGFR着色明显强于瘤周血管内皮细胞，肿瘤细胞亦可见VEGFR染以。结论：多血供的肝癌结节VEGF及其受体表达较强，肿瘤的生长，局部浸润，远处转移与VEGF及其受体密切相关，VEGF首先来源于旁分泌，在后期肿瘤自分泌是VEGF高表达的重要来源，这可能是肝癌阻断血供后，癌灶能存活，复发和转移的重要原因之一。     

Low hemoglobin is associated with increased serum levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) in cancer patients

BACKGROUND: Vascular endothelial growth factor (VEGF) is an endothelial cell specific mitogen with strong angiogenic activity. Expression of VEGF may therefore be an indicator for the angiogenic potential and biological aggressiveness of a tumor. Recently, measurement of the VEGF-protein in sera has become available. We report results of serum-VEGF in an unselected group of patients with cancer with special emphasis on a possible role of anemia. PATIENTS AND METHODS: Between August 1997 and January 1998, serum-levels of VEGF were determined in a total number of 54 consecutive patients with previously untreated, non-metastatic carcinomas at the Department of Radiotherapy at the Martin-Luther University Halle-Wittenberg. The age ranged from 35 through 89 years with a median age of 67 years. All patients had locoregional confined disease without evidence of hematogenous metastases. Tumor sites were gynecological cancers in 22, head and neck in 14, gastrointestinal in 13, lung in 4 and prostate in 1 case. Forty-four patients had squamous carcinomas and 10 adenocarcinomas. Prior to treatment, routine laboratory work-up was done including measurement of serum-vascular endothelial growth factor (VEGF). The pretreatment hemoglobin ranged from 8.9 through 15.6 g/dl with a median of 13 g/dl. VEGF was measured with a quantitative sandwich enzyme immunoassay technique. RESULTS: The serum levels of VEGF in 40 patients with benign diseases ranged from 57 through 891 pg/ml with a mean of 267 +/- 170 pg/ml. In the investigated 54 cancer patients, VEGF ranged from 62 through 2,609 pg/ml with a mean of 614 +/- 551 pg/ml. Age, UICC/FIGO-stage, T- or N-category, primary tumor site, grade and histologic type had no significant impact on VEGF-serum levels. There was, however, an association between hemoglobin level and serum-VEGF with an increased mean serum-VEGF in 26 patients with a low hemoglobin (< 13 g/dl) as compared to 28 patients with a hemoglobin > 13 g/dl (805 +/- 656 vs 438 +/- 360, p = 0.016, 2-sided t-test). CONCLUSIONS: With regard to the recently established correlation between anemia and intratumoral hypoxia, the increased serum-VEGF levels in patients with low hemoglobin may be explained via hypoxia-induced VEGF secretion. This would suggest that anemia may stimulate angiogenesis via hypoxia. The hypothesis, however, requires further investigation and might have important therapeutical impact.     

膀胱癌血管内皮生长因子微血管密度免疫组化研究

 目的测定膀胱癌中血管内皮生长因子(VEGF)的表达及微血管密度(MVD),探讨膀胱癌中VEGF表达与MVD的关系及在膀胱癌中表达的意义.方法应用免疫组化--二步法.结果 68例肿瘤组织中VEGF阳性表达42例(61.8%)、MVD为63.64±33.20,均显著高于正常膀胱组织.VEGF的表达:浸润性肿瘤明显高于浅表性(P＜0.01),Ⅱ、Ⅲ级明显高于Ⅰ级(P＜0.05,P＜0.01).VEGF阳性组MVD明显高于阴性组(P＜0.01);VEGF阳性组术后5 a预后不佳发生率明显高于阴性组(P＜0.01),5 a生存率明显低于阴性(P＜0.05).结论 VEGF蛋白表达及微血管密度与膀胱肿瘤的临床分期和病理分级有关;VEGF蛋白表达与膀胱癌的血管生成和病人的预后相关.     

缺氧诱导因子与血管内皮生长因子在肾透明细胞癌中的表达

目的：研究肾透明细胞癌（CCRCC）中HIF-1α、HIF-2α的表达与VEGF、MVD的相关性及其对肿瘤病理分期的影响。方法：在40例CCRCC组织标本中,应用免疫组化方法检测HIF-1α、HIF-2α和VEGF的表达,用CD34单克隆抗体标记肿瘤微血管密度（MVD）。结果：HIF-1α染色阳性28例,HIF-2α染色阳性25例,VEGF染色阳性24例。Spearman等级相关分析发现HIF-1α、HIF-2α分别与VEGF表达程度呈正相关。HIF-1α、HIF-2α或VEGF阳性肿瘤组织的MVD值显著高于正常肾组织（P〈0.05）。未发现HIF-1α、HIF-2α和VEGF表达与肿瘤病理分期有关（P〉0.05）。结论：在CCRCC中HIF-1α、HIF-2α与VEGF表达相关,并可能诱导VEGF的过度表达,促进肿瘤血管生成,而且与CCRCC的侵袭性生物学行为密切相关,但其表达与肿瘤病理分期无相关性。     

高压氧对小鼠结肠癌移植瘤血管内皮细胞生长因子表达及微血管密度的影响

目的 探讨高压氧(HBO)对小鼠结肠癌移植瘤生长的抑制作用及对肿瘤组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达和肿瘤微血管密度(MVD)的影响.方法 建立小鼠结肠腺癌细胞CT26移植瘤模型16只,按数字表法随机分为对照组(8只)和HBO组(8只).HBO组每天HBO暴露1次,每次60 min,共15次.HBO处理结束后检测肿瘤生长情况,计算抑瘤率,并采用免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF表达和肿瘤MVD的改变.结果 与对照组[(2.692±0.391)cm3]比较,HBO组[(1.729±0.402)cm3]肿瘤的增长速率减慢(P＜0.05),且HBO组VEGF的表达(1.82±0.43)及MVD计数(23.43±4.05)与模型对照组VEGE(2.37±0.16)和MVD(31.57±6.32)比较均显著性降低(P＜0.05).结论 HBO可能通过抑制VEGF的表达、降低肿瘤血管生成进而抑制肿瘤的生长.     

去甲肾上腺素对烧伤大鼠脑组织血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 观察去甲肾上腺素（NE）对烧伤大鼠脑组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法 用40％总体表面积（TBSA）Ⅲ度烫伤大鼠，观察NE对烧伤大鼠血脑屏障通透性的影响。用免疫组织化学法、实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法，观察NE对烧伤大鼠脑组织VEGF表达的影响。结果 （1）烧伤大鼠和NE刺激后的烧伤大鼠血脑屏障通透性增加，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。随着烧伤前注入NE剂量的加大，BN2、BN3组脑组织的血脑屏障通透性增加明显，与烧伤组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；（2）大剂量NE刺激时，脑组织VEGF的表达增加，烧伤后VEGF的表达明显增加，与对照、N1、N2组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。随NE刺激剂量增大，烧伤后VEGF表达增强，BN2、BN3组与烧伤组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 NE能够诱导严重烧伤大鼠脑组织VEGF表达，可能是烧伤后促进脑水肿形成的一个重要因素。     

食管癌患者放疗前后血清血管内皮生长因子变化的临床意义

目的 检测食管癌患者放疗前、中、后血清血管内皮生长因子(VEGF)的水平,探讨其变化及临床意义。方法 采集67例食管癌患者和30例健康体检者(健康对照组)血清,应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定VEGF水平,并对其变化与临床分期和患者放疗疗效的关系进行分析。结果 食管癌患者放疗前、中、后血清VEGF水平均较健康对照组升高,差异有统计学意义(F=11.65,P＜0.01);放疗后较放疗前VEGF水平明显降低,差异有统计学意义(F=10.72,P＜0.01)。T₃、T₄患者的平均VEGF水平与健康对照组比较显著升高,差异有统计学意义(F=14.10,P＜0.01)。N₁、N₂组患者的平均VEGF水平显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(F=8.64,P＜0.01)。可评价疗效的62例患者中,有21例放疗后血清VEGF水平较放疗前升高,有41例较放疗前降低,升高组的放疗有效率为61.90%,降低组的放疗有效率为90.24%,两组比较差异有统计学意义(χ²=6.08,P＜0.05)。50例CR+PR患者放疗后及放疗中的血清VEGF水平均比放疗前显著降低,差异有统计学意义(F=7.98,P＜0.01)。结论 监测食管癌患者血清VEGF水平变化可判断患者放射治疗的敏感性,对临床预测放射治疗的预后有重要的意义。     

VEGF和Ang-1在皮肤创伤和放射性烧伤愈合过程中的表达

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）和促血管生成素-1（Ang-1）在皮肤单纯性创伤和放射性烧伤中表达的动态变化,了解其在血管再生中的作用,为深入探讨放射性烧伤的愈合机制及其治疗提供有意义的实验资料。方法在大鼠背侧切开皮肤全层制备大鼠创伤模型（单创组）,应用电子线照射臀部皮肤,建立放射性烧伤模型（放伤组）。于伤后1-60d不同时间活体伤口取材,HE染色组织病理学观察,应用Western blot法检测VEGF和Ang-1蛋白的表达。结果在单纯性皮肤创伤愈合过程中,VEGF和Ang-1蛋白表达变化均在伤后第1天开始上升,伤后第5-7天达高峰,然后逐渐下降到接近正常水平。在放射性烧伤愈合过程中,VEGF是先降低后升高然后再降低,而Ang-1的变化与此相反。与单创组比较,放烧组VEGF蛋白表达在第1、7和14天明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;在第1、7、14、21、28和35天Ang-1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）,此后渐升高。结论放射性烧伤愈合早期阶段VEGF和Ang-1的蛋白表达明显降低,是放射性烧伤愈合延迟的重要原因之一。     

血管内皮生长因子表达与输尿管癌的生物学行为关系

 目的在分子水平上了解原发性输尿管癌生长、发展的机制。方法 应用免疫组化技术一两步法,测定26例原发性输尿管癌组织的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达。结果 26例肿瘤组织中VEGF阳性表达16例(61.54％),显著高于正常输尿管组织及输尿管息肉(P＜0.01)。VEGF在原发性输尿管癌中的表达,Ⅲ级高于Ⅰ、Ⅱ级(P＜0.05),B以上高于T2以下(P＜0.05)。VEGF阳性组术后5a复发率明显高于阴性组(P＜0.01),5a生存率明显低于阴性组(P＜0.05)。结论VEGF蛋白表达与原发性输尿管癌的临床分期、病理分级及患者的预后相关。     

肝细胞癌螺旋CT扫描与血管内皮生长因子表达的相关性研究

 目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平与螺旋CT增强扫描表现关系,从影像学角度评价VEGF在HCC表达的意义与特点.方法 50例外科手术切除、病理证实的HCC患者,术前均作肝脏的平扫与双期增强扫描,依据肿瘤的强化方式分为四型:动脉期强化型、门静脉期强化型、双期强化型及双期不强化型.采用流式细胞技术测定手术标本肿瘤边缘区、肿瘤中央区及肿瘤临界区的VEGF表达水平.结果 ①HCC肿块边缘区VEGF的表达水平高于肿瘤中央区和临界区(P＜0.01).②VEGF的表达水平与HCC分级存在正相关性(P＜0.01).③HCC分型与VEGF表达水平相关(P＜0.05).4、HCC动脉期肿块强化CT值与VEGF表达水平正相关(P＜0.01).5、HCC肿块的大小与VEGF表达水平无关(P＞0.05).有淋巴结转移及门静脉癌栓形成的病例其VEGF表达水平高于无淋巴结转移、无门静脉癌栓形成的病例.(P＜0.01,P＜0.05).结论 HCC肿瘤动脉期强化值与VEGF表达水平均值呈线性相关(r=0.713),且VEGF表达水平与HCC分型、分级、肿瘤的强化方式及肿瘤是否转移密切相关.