空肠弯曲菌外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答

目的 探讨空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答效果.方法 将30只BALB/c小鼠随机分为5组,每组6只,采用空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白以不同剂量疫苗组,分别在第0、7、14、21、28天,通过背部及腹部皮下多点注射免疫小鼠;空白组、对照组分别采用0.4 mL生理盐水(NS)、0.4 mL福氏完全佐剂.在末次免疫10 d(即第38天),分别应用双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价, ELISA检测血清和肠液中的特异性IgG、IgA、.结果 末次免疫10 d后,各疫苗组中,双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价分别达到1:4～1:16和1:320～1:1 280,ELISA法检测血清、肠液中IgG、IgA、的水平与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);空白组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白佐剂疫苗能够诱导BALB/c小鼠较好的体液免疫应答和高水平的肠液抗体,将为空肠弯曲菌亚单位疫苗的深入研究奠定重要的实验依据.     

空肠弯曲菌PEB1重组蛋白的免疫原性研究

目的探讨空肠弯曲菌PEB1重组蛋白的免疫原性及对机体的保护作用。方法以不同剂量的含弗氏佐剂的纯化PEB1重组蛋白为疫苗,分别经皮下注射和肌肉注射的方法免疫Balb/C小鼠,ELISA法测定血清中特异性抗体的含量,MTT法测定细胞增殖效应。CJ菌液攻击实验,观察攻击后小鼠的精神状态、病死情况,并做血液、肠道分泌液细菌培养。结果用PEB1重组蛋白免疫Balb/C小鼠,可诱导出高滴度的特异性抗体,能有效地刺激淋巴细胞增殖,加入刺激原的各实验组SI值均较对照组显著增高。结论PEB1重组蛋白免疫接种后可诱导出高滴度特异性抗体和致敏淋巴细胞,能有效保护小鼠免受大剂量空肠弯曲菌的攻击,是一种比较理想的基因工程亚单位疫苗候选抗原。细菌攻击实验结果表明,PEB1基因工程亚单位疫苗能使实验动物产生有效的免疫保护力,明显降低动物的患病率和病死率,并能有效地降低血液和肠道分泌液的细菌含量。     

空肠弯曲菌外膜蛋白SDS—PAGE应用于流行病...

The characteristics of outer membrane protein profiles of 41 strains of Campylobacter jejuni from various sources by SDS-PAGE was studied. Seven and nine OMP patterns were differentiated respectively by the presence or absence of six outer membrane protein bands and by the number and size of the molecular weight of the major protein bands. Comparing the OMP patterns of the strains from human with those from animals, the authors inferred that chickens and other animals might be one of the sources for the human infection of Campylobacter jejuni in this district. A comparison between the OMP patterns of the strains from diarrheic children and those from healthy carriers suggested that the pathogenesis of Campylobacter jejuni be possibly associated with the outer membrane proteins. Using the techniques, the authors studied the infection of Campylobacter jejuni in a nursery. The result showed the infection was sporadic and of multi-sources, as evidenced by the multi-patterns of the outer membrane protein profiles. It also indicates that the person-to-person transmission plays a significant role in the infection of Campylobacter jejuni.     

幽门弯曲菌和空肠弯曲菌的电子显微镜对比观察

Specimens were made by preparing the ultrathin sections after negative staining and ruthenium red staining. The specimens were observed under electron microscope. Results revealed that the shapes of Campylobacter pyloridis (Cp) and C. jejuni (Cj) were similar, but distinctive differences in their structures were observed. Cp had one to five sheathed flagella at one end with bulbous tips. Cj had only one unsheathed flagellum on each end without a bulbous tip. The cell body of Cp was longer than that of Cj. A layer of thick and dense delicate filament-like substance was attached to the surface of the cell body of Cp in the ultrathin sections with ruthenium red staining, in the case of Cj only a little of such a substance could be noted.     

DNA防龋疫苗经TSG途径免疫BALB／c小鼠实验研究

目的 观察编码PAc结构基因A—P片段的重组质粒pCIA—P以经肌肉和颌下腺周围区域皮下注射(TSG)两种途径免疫BALB／c小鼠后的特异性免疫反应，并观察表面蛋白抗原PAc在小鼠颌下腺中的表达。方法 将25只BALB／c小鼠随机分为4组，分别以重组质粒pCIA—P经肌肉、颌下腺区周围区域皮下注射两种途径免疫小鼠及pCI质粒和生理盐水肌肉免疫小鼠，ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。将pCIA—P经颌下腺区周围区域皮下注射以免疫组化技术观察表面蛋白抗原PAc。结果 颌下腺区皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高，并持续数周。肌肉注射法后血清IgG型特异性抗体明显升高，但未有效诱导产生唾液IgA型特异性抗体。在小鼠颌下腺中检测到PAc蛋白的表达。结论 重组质粒pCIA—P是一种有效的免疫原，该DNA防龋疫苗经颌下腺周围区域皮下注射免疫是可诱导长期粘膜免疫的有效途径。     

空肠弯曲菌外膜蛋白对巨噬细胞的活化作用

用甘氨酸一盐酸法提取空肠弯曲菌主要外膜蛋白，观察经免疫小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能、碳素廓清率及抗原介导粘附抑制率。结果说明，经免疫后的巨噬细胞吞噬功能和碳素廓清率均明显高于对照组，但抗原介导巨噬细胞粘附抑制率则无显著差异。     

空肠弯曲菌口服全菌佐剂疫苗的初步研究

目的本研究采用明胶为空肠弯曲菌菌苗的佐剂,灌胃免疫小鼠,评价佐剂全菌苗的免疫原性.方法采用明胶为佐剂的全菌疫苗灌胃免疫Balb/c小鼠.加明胶为佐剂全菌疫苗灌胃免疫Balb/c小鼠为实验组,全菌疫苗肌注和全菌疫苗灌胃免疫为实验对照组,PBS灌胃免疫为正常对照组,未作任何处理的Balb/c小鼠为阴性对照组;接种3次,间隔7d,末次接种1wk后收集小鼠血清和小肠粘液.采用ELISA间接法检测血清抗体IgG、IgA、IgM和肠道粘液抗体SIgA水平.结果各组血清抗体IgG、IgA、IgM和肠道粘液抗体SIgA水平,加佐剂组明显高于未加佐剂组,有统计学差异(P＜0.05),肌注组与加佐剂组间没有统计学差异(P＞0.05).结论本研究显示佐剂疫苗口服有良好的免疫原性,明胶可作为口服疫苗的候选佐剂.     

空肠弯曲菌亚单位脂质体佐剂疫苗诱导抗体产生规律的研究

目的:探索空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,CJ)亚单位脂质体佐剂疫苗诱导抗体产生的一般规律,为该疫苗的接种打下一定基础.方法:将CJ疫苗经肌肉注射免疫新西兰家兔后动态收集血清,以ELISA间接法测其特异性IgG OD值.结果:第一次免疫后10天左右,血清中即可检测到IgG,50天左右即达到高峰,此后逐渐降低,较高抗体水平可维持6个月左右.结论:CJ亚单位疫苗在1月内接种3次最佳,6个月后应该加强免疫.     

内置式佐剂LTB对空肠弯曲菌重组蛋白疫苗免疫增强作用的研究

目的 构建空肠弯曲菌(CJ)外膜蛋白(PEB1)及大肠埃希菌LTB融合疫苗并研究其免疫原性.方法 应用重组PCR技术将PEB1和LTB序列连接,构建PEB1-LTB融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-28a,转化入大肠埃希菌BL21,SDS- PAGE电泳表达,Western印迹检测表达蛋白的抗原性.肌注方式免疫小鼠,末次免疫2周后,测定小鼠血清中IgG、IgA及黏膜冲洗液中sIgA抗体水平.结果 PCR扩增分别获得约787、372 bp产物,二者融合后获得一约1180 bp目的基因;该重组蛋白可具有良好的免疫原性,肌注小鼠后其血清IgG、IgA及黏膜冲洗液中sIgA含量均显著增高(P ＜0.01).结论 构建PEB1-LTB融合蛋白可有效增强小鼠免疫应答水平.     

BALB/c突变卷毛小鼠血液学指标的检测分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠的血液学指标与正常BALB/c小鼠之间是否存在突变差异。方法选择6周龄的BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠各20只(雌雄各半),使用全自动血细胞分析仪检测8项血液常规指标;使用全自动生化仪检测15项血清电解质及生化指标,并对两组结果进行对比分析。结果 BALB/c突变卷毛小鼠的白细胞、平均血细胞容积、血小板计数和平均血细胞血红蛋白浓度的性别及组间结果与正常小鼠具有显著性差异(P0.05,P0.01);BALB/c突变卷毛小鼠Na+、K+和Cl-的性别及组间结果与正常小鼠具有显著性差异(P0.05,P0.01);BALB/c突变卷毛小鼠丙氨酸转氨酶、葡萄糖和甘油三酯的性别和组间结果与正常小鼠具有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论 BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠的部分血液学指标存在明显差异,这为今后研究和应用BALB/c突变卷毛小鼠模型提供了理论参考。     

BALB/c 小鼠小肠乳糖酶活性双糖酶法测定条件的优化

目的建立一种方便、准确测定小鼠小肠乳糖酶活性的方法.方法采用不同pH的底物溶液与肠黏膜提取物反应,计算相应的酶活性;取不同反应时间(45 min,60 min,75 min),不同显色时间(45 min,60 min,75 min)和不同显色剂用量(2.0 ml,2.5 ml,3.0 ml)按L9(34)正交实验设计方法,测定不同条件下的底物溶液与肠黏膜反应的A值作为正交实验的评分标准.结果与结论由正交实验得出,该方法的最佳反应条件为pH 4.6,水浴75min,显色时间45 min,显色剂用量3.0 ml;批内酶活性(0.029±0.003)U/ml,CV=2.49%,批间酶活性(0.032±0.004)U/ml,CV=4.19%.该方法具有很好的重复性和可靠性.     

应用联合酶建立BALB/c鼠枯否氏细胞体外分离培养方法

目的用作用功效不同的酶联合消化分离BALB/c鼠枯否氏细胞(KC),建立简便易行,产量、活性、纯度较稳定的KC分离培养方法。方法将0.1%型胶原酶、0.2%链霉蛋白酶、0.01%Dnase酶按1∶1∶1比例混合原位灌注和离体消化肝组织,经Percoll梯度离心,贴壁培养纯化细胞,应用荧光显微镜观察、免疫组织化学染色、吞噬功能实验进行鉴定。结果KC获得率为(2~3)×106/鼠肝,细胞存活率达96%,免疫组化和吞噬实验鉴定细胞纯度达92%。KC贴壁后形态大小不规则,呈多角形或星形,免疫组织化学染色显示溶菌酶阳性,胞浆内见吞噬的碳素墨汁颗粒。结论用作用功效不同的酶联合消化KC,经梯度离心和贴壁培养,可获得高产量、高活性、高纯度的BALB/c鼠KC,为进一步研究KC在肝脏疾病中的作用提供可靠的细胞来源。     

BALB/c突变卷毛小鼠皮肤组织结构的分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠的皮肤组织结构与正常BALB/c小鼠之间是否存在突变差异。方法选择10 d、21 d、42 d和63 d四个不同日龄组的BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠每组各10只,观察两组小鼠被毛外观差异情况,取两小块皮肤组织,直接镜检毛囊结构和皮肤组织病理学检测。结果 BALB/c突变卷毛小鼠生长至10 d时被毛弯曲,能够与同日龄的正常小鼠加以鉴别。镜检观察21 d、42 d和63 d的BALB/c突变卷毛小鼠毛囊中毛发根数明显少于正常小鼠,被毛稀疏且毛发卷曲明显。皮肤组织病理学检测结果显示四个不同日龄组的BALB/c突变卷毛小鼠的毛囊数均显著少于正常小鼠。63 d的BALB/c突变卷毛小鼠处于生长期的毛囊中可见毛发弯曲的现象。结论 BALB/c突变卷毛小鼠的毛囊和皮肤组织结构与正常小鼠存在明显差异,说明其皮肤组织结构也发生了改变,这为今后研究突变卷毛小鼠的突变基因和模型应用提供了理论参考。     

风疹病毒在BALB/c小鼠体内的感染与分布

用BALB/c小鼠形成风疹病毒感染模型,小鼠经尾静脉感染RVGOS_(-10)株10~6TCID_(50),每只0.5ml,病毒血症持续约一周,感染后第4天达最高滴度,为10~(6.3)TCID_(50)/0.25ml,间接免疫荧光及间接酶标染色法观察小鼠组织切片,感染后不同时间,病毒对小鼠各脏器可形成广泛的侵害,抗原主要分布于胞桨,病毒分离结果与之吻合,感染后第18天,心、眼、肺中的病毒滴度分别为10~(5.2),10~(5.6),10~(5.5)TCID_(50)。     

仙台病毒感染对BALB／c小鼠药物代谢的影响

用仙台病毒通过滴口鼻和腹腔注射感染８～１０周龄的清洁级ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，１周后腹腔注射戊巴比妥钠６０ｍｇ／ｋｇ，测得仙台病毒感染组的睡眠时间为２８．２±１１．５ｍｉｎ，对照组为４１．６±９．３ｍｉｎ，２组的睡眠时间有显著差异（Ｐ＜０．０１）；另取４～７日龄清洁级ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的肝脏进行肝细胞培养，设仙台病毒感染肝细胞组和正常肝细胞组，分别加入等浓度的心得安（３００μｇ／Ｌ），经高压液相色谱技术检测，仙台病毒感染肝细胞对心得安的代谢比正常肝细胞慢，２组间差异非常显著（Ｐ＜０．００１）。     

免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞

目的　使用免疫外科法分离克隆BALB c小鼠胚胎干细胞 (embryonicstemcells,ES细胞 ) ,为进一步建立BALB c小鼠ES细胞系打下基础。方法　用免疫外科法从 4 5枚BALB c小鼠囊胚中分离得到 2 0枚去除滋养层细胞的ICM ,接种在MEF饲养层上 ,使用DMEM(高糖 ) 15 ?S 0 1mmol Lβ 巯基乙醇 0 0 1mmol L非必需氨基酸 10 0 0IU mlLIF 10 0IU mL青霉素 10 0IU ml链霉素培养液 ,17枚形成典型的ICM集落 (85 0 % ) ,有一枚胚胎传至第 10代。用于全胚培养的BALB c小鼠胚胎共 10 2枚 ,使用与免疫外科相同的培养方法 ,6 6枚形成典型的ICM集落 (6 4 7% ) ,其中一枚胚胎传至第 8代。结果　免疫外科法较全胚培养法有利于小鼠ES细胞的分离与克隆 ;添加LIF(10 0 0IU ml)有利于小鼠ES细胞的分离与传代 (P <0 0 5 ) ;0 0 5 %胰酶 0 0 0 8?TA是较好的ES细胞消化液 ,对细胞综合损伤力小 ,且传代后ES细胞集落形成能力也较高 (P <0 0 5 )。结论　分离得到的ES细胞经形态学观察 ,AKP染色 ,体外分化实验 ,核型分析等证明其具有胚胎干细胞的诸多特性。     

正常BALB/c小鼠脾脏中PrPc mRNA的检测及其基因序列研究

目的：研究正常BALB／c小鼠朊蛋白(Cellular prion protein，PrP^c)在神经外组织的分布及PrPcDNA序列，阐明可传播性海绵样脑病(transmissible spongiform encephalopathy，TSE)的传播和致病机理。方法：从BALB／c小鼠脾脏中提取总RNA，RT—PCR扩增小鼠PrP(23～231)cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增，对其进行克隆和测序，并进行序列比较。结果：从BALB／c小鼠脾脏中检测到PrP^cmRNA，克隆了PrP(23～231)cDNA序列，测序结果表明其397位碱基为A。结论：正常BALB／c小鼠脾脏中有PrP^cmRNA转录，表明脾细胞存在表达的PrP^c，PrPcDNA序列存在一定的差异。