EXPRESSION AND DELETION ANALYSIS OF EcoRII ENDONUCLEASE AND METHYLASE GENE

INTRODUCTIONEcoRIIrestrictionendonuclease（EcoRII．R）andEcoRIIDNA－methyltransferase（EcoRII．M）constitutearestriction－modificationsysteminE．coliR，whichrecog－nizethesamesequenceCCWGGasDNAcytosinemethylase（Dcm）existinggenerallyinE．coli．CleavagewithEcoRII．RinrecognizedsequencescanbeinhibitedbyeitherEcoRII．MmethylationorDcmmethylation．EcoRII．Risthefirsttype－IIrestrictionendonucleaseofwhichendonucleolyticactivitywasfoundtodependonthesimultaneousinteractionwit…     

EcoRⅡ限制性内切酶和甲基化酶基因克隆,表达和缺失突？…

目的 同时克隆ＥｃｏＲⅡ限制性内切酶基因和ＥｃｏＲⅡ甲基化酶基因,初步探讨该限制－修饰系统的协同表达机制。方法 采用外切酶Ⅲ删除法构建单向缺失亚克隆,根据亚克隆的酶活性对上述两种基因进行初步定位,经核酸序列测定确定亚克隆的缺失部位,再以Ｓ１核酸酶保护分析法测定基因的转录起始点。     

CLONING AND EXPRESSION OF THE GENE CODING FOR IL-2 （60）-PE40, A MOLECULAR TARGETED PROTEIN

It has recently been shown that chimeric toxin composed of IL2 fused tp PE40,a mutant form of Pseu-domonas Exotoxin A devoid of its native cell recognition and binding domain was cytotoxic to IL-2 receptor bearing cells.We here amplified the gene IL-2 (60),which codes for the N-terminal 1-60 amino acids of human IL-2 by PCR.After that,we fused it to PE40 and the new chimteric protein IL-2 (60)-PE40 was expressed in E.coli.SDS-PAGE revealed that IL-2(60)-PE40 chimeric protein accounts for more than 18% of total cell proteins.As the region IL-2 binds with its receptor was defined in the N-terminal residuse 8-54 of IL-2,such fusion proteins will have the same activity with IL-2-PE40.Following primany purification,IL-2(60)-PE40 was shown to be very toxic to IL-2 receptor-positive cells but non measurable effect on the cells lacking IL-2 receptors.Such a structure has not been reported by now.The fusion pro-tein is useful for suppressing the immune response in cases of rejection of allografts and organ transplants and as therapeutic agents for the treatment of IL-2 receptor related diseases such as autoimmune disease,and as therapeutic agents for the treatment of IL-2 receptor related diseases such as autoimmune disease,ATL(adult T-cell leukemia),et al.     

牛摩拉氏菌中国地方株限制性核酸内切酶的提取与纯化

目的：为探讨牛摩拉氏菌中国地方株MABL8011限制酶的存在。方法：采用改进的GelinasRE等方法对MABL8011菌株的培养物分别进行超声裂解、离心、盐析、BioGel-A0.5M和磷酸纤维素P11柱层析。获得可切割λDNA和pBR332DNA与国际标准酶MboI切点一致的酶提取物。结果：在改进的条件下,3000ml培养物,可获得7200UMboI,纯化率为23.2%,酶产出量高于文献报导值。结论：表明牛摩拉氏菌中国地方株MAL8011确含MboI限制性内切酶,完全可用于基因结构分析。     

变性梯度凝胶电泳分析PAH基因外显子3突变

采用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳、限制性内切酶分析及ＤＮＡ直接序列分析等方法，对５８例南方地区中国人苯丙酮尿症（ＰＫＵ）的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子３进行了分析，发现９例ＰＫＵ患者外显子３存在突变，占ＰＫＵ患者的１５．５２％（９／５８），外显子３突变占ＰＡＨ基因突变的７．７６％（９／１１６），６例患者存在ＡｒｇｌｌｌＴｅｒ错义突变，该突变位点的基因内频率为５．１７％。结果提示中国南方和北方人群ＰＫＵ分子遗传学可能存在一定程度的差异。     

人鼻咽癌相关的转化基因Tx转录活化机制研究

采用ＤＮａｓｅⅠ超敏区分析法寻找Ｔｘ２．８ｋｂＥｃｏＲＩ片段的转录活化位点，以期探索Ｔｘ基因在鼻咽癌发病过程中的作用。结果未发现在此片段中有ＤＮａｓｅⅠ超敏区位点。提示与ＩｇκＣ同源的Ｔｘ２．８ｋｂＥｃｏＲＩ片段可能采用免疫球蛋白基因所独有的基因调控方式，而与瘤基因的一般转录活化方式明显不同。     

脑梗死患者与其N~(5,10)亚甲基四氢叶酸还原酶基因关系的研究

目的:探讨脑梗死(CI)患者与其N5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性的关系。方法:运用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RELP)检测脑梗死患者MTHFR基因多态性。结果:MTHFR基因型有3种,即纯合子(C/C)型、杂合子(T/C)型、纯合子(T/T)型。3种基因型在病例组和对照组研究对象间的分布无显著性差异,但T等位基因在病例组和对照组研究对象间的差异有统计学意义。结论:MTHFR基因C677T突变与脑梗死的发生有关,MTHFR基因可能是脑梗死的易感基因之一。     

RNA介导染色质水平的基因沉默

近年来，一种RNA水平的基因沉默引起了研究者的高度关注，这便是由双链RNA表达引起的RNA干扰。双链RNA在体内经过扩增和切割变成单链小分子RNA，结合到相应序列的mRNA转录本并引起mRNA被核酸内切酶识别并切割，从而导致这些mRNA降解而无法翻译出产物，从mRNA水平关闭基因表达。这个过程大致可以分为双链RNA的形成、小RNA的形成和信号放大以及异染色质的形成三个步骤。     

Xp21邻近基因缺失综合征1例及其基因缺失分析

目的:探讨Xp21邻近基因缺失综合征基因缺失范围.方法:应用聚合酶链反应对1例Xp21邻近基因缺失综合征患者进行基因缺失分析.结果:该患者Xp21区域的缺失范围包括从DMD基因的部分3'端序列到AHC基因的几乎全部序列,其中位于DMD和AHC之间的GKD基因和微卫星DNA标记DXS992未发现缺失,缺失的5'端断裂点位于DMD基因外显子61和外显子62之间,3'端断裂点位于AHC基因的远端.结论:尽管常规染色体检查正常,对先天性肾上腺皮质功能低下的患者,应进一步考虑是否患有Xp21邻近基因缺失综合征,分子遗传学分析有助于确定基因缺失的范围.     

Gene deletion analysis of a Chinese boy with Xp21 contiguous gene deletion syndrome

Xp21 contiguous gene deletion syndrome, sometimes called complex glycerol kinase deficiency, is associated with variable size Xp21 deletions that usually include the glycerol kinase gene and span multiple Xp21 disease gene loci in the region. The order of the potentially affected loci are as follows: Xpter-Aland Island eye disease ( AIED ), congenital adrenal hypoplasia ( AHC ),     

大肠癌p53基因突变及p16基因缺失检测及临床意义

目的：探讨本地区散发性大肠癌p53、p16蛋白表达、临床病理因素的关系。方法：SSCP－PCR检测p53基因突变、p16基因缺失,免疫组化检测p53,p16蛋白表达,结果p16基因缺失率48％（19／40例）,未见突变,p16蛋白缺失率为55％（22／40）。p53基因突变率30％,p53蛋白阳性表达率为68％（27／40例）。组织学分组Ⅱ,Ⅲ级p16基因缺失率明显高于Ⅰ级（P＜0．01）,临床分期D期p53估变明显高于临床分期B,C期（P＜0．05）,结论p16基因缺失、53基因突变与大肠癌的发生、发展有关。     

鲍曼不动杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的检测

目的了解耐氨基糖苷类药物鲍曼不动杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行情况。方法收集2008年1月—2009年4月临床分离对阿米卡星和庆大霉素耐药的鲍曼不动杆菌70株,PCR（聚合酶链反应）方法扩增5种甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD）,PCR产物进行电泳分析和测序。统计菌株对亚胺培南等12种抗生素的耐药率。结果 armA基因的检出率为68.6%,未检出rmtB、rmtA、rmtC和rmtD基因。所有菌株对除亚胺培南外其它抗生素的耐药率均大于80%。结论 16S rRNA甲基化酶（armA亚型）基因广泛存在于这些耐药菌株中。这些对阿米卡星和庆大霉素耐药的菌株,对其它抗生素的耐药也十分严重。     

常染色体显性遗传帕金森病家系1例基因缺失序列分析

目的:分析常染色体显性遗传帕金森病家系的基因缺失.方法:根据Parkin基因外显子和内含子DNA序列合成14对引物,以人基因组DNA为模板,巢式PCR扩增,扩增产物纯化后直接测序.通过与正常人相应的DNA序列比较,检测1例常染色体显性遗传帕金森病家系基因缺失位点.结果:该家系检测到染色体6q25.2-q27Parkin基因外显子3中110 bp的缺失,第4和第5外显子检测到部分碱基的变异.结论:Parkin基因外显子3缺失的检出对常染色体显性遗传帕金森病的早期诊断和基因治疗具有指导意义.     

DCTPP1基因在乳腺癌中的表达及其生物信息学分析

目的 利用肿瘤数据库挖掘数据分析DCTPP1基因在乳腺癌组织中的表达及与患者预后的相关性,探讨DCTPP1基因的生物学作用及功能.方法 利用ualcan数据库分析乳腺癌组织中的DCTPP1基因mRNA表达水平,利用Human Protein Reference Database数据库分析不同病理类型乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平,采用GEPIA乳腺癌数据分析DCTPP1基因的表达水平与乳腺癌患者预后的相关性.在gene-mania和WebGestalt数据库对与DCTPP1基因表达相关基因及其功能进行生物信息学分析,探讨基因功能.结果 与正常乳腺组织比较,乳腺癌组织中DCTPP1基因mRNA呈高表达(P<0.05).不同病理类型、不同肿瘤分期的乳腺癌组织中DCTPP1基因均呈高表达(P<0.05).乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平高于正常乳腺组织.与低表达比较,DCTPP1基因高表达明显降低乳腺癌患者总体生存时间(HR=1.9,P<0.05).基因功能分析提示与DCTPP1表达相关的20个基因主要位于细胞质、细胞核及细胞膜性结构中,参与细胞的代谢、生物调节、细胞生长等过程,在结合蛋白、酶活性、结合核酸等过程中发挥着作用.结论 DCTPP1基因在乳腺癌中明显高表达,与乳腺癌患者不良预后相关,参与多种生物过程,可能成为乳腺癌治疗干预的新靶点.     

DCTPP1基因在乳腺癌中的表达及其生物信息学分析

目的 利用肿瘤数据库挖掘数据分析DCTPP1基因在乳腺癌组织中的表达及与患者预后的相关性,探讨DCTPP1基因的生物学作用及功能.方法 利用ualcan数据库分析乳腺癌组织中的DCTPP1基因mRNA表达水平,利用Human Protein Reference Database数据库分析不同病理类型乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平,采用GEPIA乳腺癌数据分析DCTPP1基因的表达水平与乳腺癌患者预后的相关性.在gene-mania和WebGestalt数据库对与DCTPP1基因表达相关基因及其功能进行生物信息学分析,探讨基因功能.结果 与正常乳腺组织比较,乳腺癌组织中DCTPP1基因mRNA呈高表达(P<0.05).不同病理类型、不同肿瘤分期的乳腺癌组织中DCTPP1基因均呈高表达(P<0.05).乳腺癌组织中DCTPP1蛋白表达水平高于正常乳腺组织.与低表达比较,DCTPP1基因高表达明显降低乳腺癌患者总体生存时间(HR=1.9,P<0.05).基因功能分析提示与DCTPP1表达相关的20个基因主要位于细胞质、细胞核及细胞膜性结构中,参与细胞的代谢、生物调节、细胞生长等过程,在结合蛋白、酶活性、结合核酸等过程中发挥着作用.结论 DCTPP1基因在乳腺癌中明显高表达,与乳腺癌患者不良预后相关,参与多种生物过程,可能成为乳腺癌治疗干预的新靶点.     

脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1 在结直肠癌 组织中的表达及临床意义

目的 探讨脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1（APE1）在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征 和预后的关系。方法 选取2015 年10 月—2017 年9 月浙江省台州医院收治的100 例结直肠癌患者的结直 肠癌组织及其癌旁组织（距离肿瘤切缘≥ 5 cm）标本,组织标本采集后立即放入液氮中保存。免疫组织化学 （HE）染色测定结直肠癌和癌旁组织中APE1 蛋白表达。结果 APE1 在结直肠癌组织中表达率高于癌旁组织 （P <0.05）。APE1 在不同肿瘤大小、肿瘤分期、是否淋巴结转移及是否远处转移的表达比较,差异有统计学 意义（P <0.05）。肿瘤直径≥ 5 cm、肿瘤分期Ⅲ和Ⅳ期、有淋巴结转移及有远处转移结直肠癌组织中APE1 阳性表达率高于肿瘤直径<5 cm、肿瘤分期Ⅰ和Ⅱ期、无淋巴结转移及无远处转移者（P <0.05）。APE1 在 不同年龄、性别、肿瘤位置及分化程度表达比较,差异无统计学意义（P >0.05）。APE1 高表达组总生存率低 于APE1 低表达组（P <0.05）。Cox 比例风险模型分析显示,APE1 表达[Hl ^ R=1.198（95% CI ：1.102,1.276）, P =0.000]、肿瘤分期[Hl ^ R=1.426（95% CI ：1.358,1.492）,P =0.000]、淋巴结转移[Hl ^ R=1.384（95% CI ： 1.306,1.457）,P =0.000]、远处转移[Hl ^ R=1.735（95% CI ：1.164,2.237）,P =0.000] 为结直肠癌总生存期的独 立影响因素。结论 结直肠癌组织中APE1 表达升高,APE1 与结直肠癌的肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴结转移、 远处转移及预后关系密切。