应用改进的PCR—SSCP银染色法检测卵巢上皮肿瘤p53基因突变？…

目的：探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测基因点突变的准确性和检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因的点突变率。方法：建立ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因第５￣９外显子的点突变。结果：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染正常时出现２条带，突变时出现３条带，卵巢上皮癌ｐ５３基因突变率为３０．６％；第５、６、７、８、９外显子分别为１、１、６、３、０例，突变率在临     

应用改进的PCR-SSCP银染色法检测卵巢上皮肿瘤p53基因突变的研究

目的：探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测基因点突变的准确性和检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因的点突变率。方法：建立ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因第５～９外显子的点突变。结果：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染正常时出现２条带，突变时出现３条带；卵巢上皮癌ｐ５３基因突变率为３０．６％；第５、６、７、８、９外显子分别为１、１、６、３、０例；突变率在临床各期、组织学分级和组织学类型之间无明显差异；卵巢上皮交界瘤仅１例ｐ５３基因第７外显子发生突变，良性卵巢瘤无１例发生突变。结论：ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法检测卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因点突变准确率高，有助于区分卵巢上皮肿瘤的良恶性     

人大肠腺癌组织P^53基因突变与表达

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术和免疫组织化学方法检测１８例人大肠腺癌和腺瘤变组织Ｐ＾５３基因第５－８外显子的突变和Ｐ＾５３蛋白的表达，另对９７例大肠腺瘤和腺瘤癌变组织Ｐ５３蛋白表达进行了检测。１８例大肠腺癌中８例Ｐ＾５３基因，第５－６外显子中存在突变。１０例（５６％）Ｐ＾５３表达阳性。     

贲门腺癌组织肿瘤抑制基因P53突变分析

采用ＰＣＲ－ＤＮＡ序列分析方法，对来自河南林州市３６例贲门癌组织进行肿瘤抑制基因Ｐ５３第４到９外显子突变分析。结果：３６例贲门癌组织中３例发生Ｐ５３基因突变（８％，３／３６）；突变分别发生在第５，６和８外显子上。对３例已知有Ｐ５３基因突变的癌组织大体标本，分别在４个不同部位（１２点、６点和９点和３点钟处）进行取材，进一步进行Ｐ５３突变结构分析，发现３例中第１例４个位点均发生Ｐ５３基因突一突变部位相     

肺癌患者P53基因突变的检测

应用多聚酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）研究技术，从分子生物学角度探讨Ｐ５３肿瘤抑制基因在肺癌中的突变情况。结果：①３６例肺癌中有１７例出现Ｐ５３基因突变，占４７％；其中鳞癌突变发生率为２９％（４／１４），腺癌为５０％（５／１０），小细胞肺癌为７３％（８／１１）；１例肺泡癌未发现突变。②突变集中在Ｐ５３基因的５第５、６和７个外显子，分别有６、３和３例肺癌在相应的外显子部位发生突变。③突变     

慢性宫颈炎组织内P53突变的检测

目的：通过对慢性宫颈炎组织内Ｐ５３基因５－９外显子突变的研究，探讨慢性宫颈炎的发生是否与Ｐ５３的突变有关，并为临床妇科实验室建立一种分子生物学的基因检测方法。方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，对慢性宫颈炎活检组织内Ｐ５３ ５－９外显子的突变进行了检测。结果：在１８例慢性宫颈炎组织中，仅有１例在ＰＣＲ后初步判断为可疑结果，但ＳＳＣＰ结果显示无突变，其余１７例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测结果均无Ｐ５３ ５－９外     

青石棉诱发的转化细胞p53基因突变分析

为探讨青石棉与Ｐ５３基因突变之间的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法，对８株青石棉衣发的ＢＡＬＢ／ｃ ３Ｔ３转化细胞进行Ｐ５３基因的突变检测和分析。结果：从８株转化细胞Ｐ５３基因上的１１个显子中共发现７处突变，其中２个位于外显子４－６，５个位于外显子９－１１；大多数检出的异常表现为比野生型多１条带；突变随机地分布于各个青石棉剂量组。     

应用PCR—SSCP银染技术检测非小细胞癌p53基因点突变

我们应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术对３１例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｐ５３基因第５，６，７，８，外显子进行检测，结果发现有１５例（４８．３８％）发生基因突变，其中第７外显子８例，第５，８外显子各３例，第６外显子１例，说明５～８外显子为突变热点区域；ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一种敏感，快速，经济，实用检测点突变方法。     

肺癌p53基因突变的临床意义

目的：研究肺癌ｐ５３基因突变的临床意义，方法：运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性分析方法（ＳＳＣＰ），检测原发性肺癌约ｐ５３基因的第５￣８外显子点突变。结果：８例肺良性疾病均无点突变发生，４０例肺癌中１９例（４７．５％）有点突变发生，点突变发生与临床分期和淋巴结果及状态相关（Ｐ〈０．０２）。结论：证实ｐ５３基因点突变在肺癌的发生和进展中起着相当重要的作用。     

青石棉诱发的转化细胞p53基因突变分析

为探讨青石棉与ｐ５３基因突变之间的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法，对８株青石棉诱发的ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３转化细胞进行ｐ５３基因的突变检测和分析。结果：从８株转化细胞ｐ５３基因上的１１个外显子中共发现７处突变，其中２个位于外显子４－６，５个位于外显子９－１１；大多数检出的异常表现为比野生型多１条带；突变随机地分布于各个青石棉剂量组。由此表明，ｐ５３基因突变与体外转化实验中所用的青石棉剂量无关，检出的突变多位于外显子９－１１内，与人类肿瘤中常见ｐ５３基因突变多发生在外显子５－８的情形有所不同。文内还对青石棉与ｐ５３基因突变之间的关系进行了讨论     

溃疡性结肠炎及伴发癌的p53改变和微卫星不稳定性

目的:探讨溃疡性结肠炎和不典型增生、癌变组织的p53基因改变和微卫星不稳定性状况.方法:采用SP法检测21例70个手术切除的溃疡性结肠炎标本和25例正常人的P53蛋白表达;人工微切割-PCR-SSCP/HA-克隆测序技术检测溃疡性结肠炎标本p53基因第5-8外显子的点突变;SSLP-测序技术检测10个微卫星位点的改变情况.结果:P53蛋白免疫组化发现25例正常人全部阴性;溃疡性结肠炎患者4例阳性,其中炎症性、低度不典型增生(LGD)、高度不典型增生(HGD)与癌变阳性标本分别为0/5例、1/7例、2/7例和1/2例.SSCP/HA、SSLP结果各有2例阳性,其中1例癌变病例癌组织 p53基因第6外显子及Bat26微卫星位点均阳性,其LGD区Bat26也阳性;1例LGD病例Bat26位点阳性;另1例HGD病例p53基因第8外显子阳性,后者经测序证实发生了移码突变.21例标本在TGFβRII(A)10、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFβRII(GT)3、BAX(G)8、hMSH3(A)8、hMSH6(C)8、TCF4(A)9和DPC4(CA)179个微卫星位点都阴性.结论:溃疡性结肠炎和癌变黏膜的早期就存在P53蛋白的过表达和微卫星不稳定性,前者部分是基因突变的结果.     

中国西部人群K-ras基因SNP位点多态性在胰腺癌中的表达及意义

目的通过对胰腺癌患者手术切除肿瘤组织K-ras基因突变位点进行分析,探讨检测K-ras基因突变对胰腺癌的诊断预测价值。方法选取170例健康良性对照与66例病理证实胰腺癌患者,提取石蜡组织基因组DNA,使用MassARRAY时间飞行质谱技术进行K-ras基因突变分析。采用Fisher’s精确检验进行统计学分析。结果正常对照胰腺组织未检出阳性;66例胰腺癌组织中,8例K-ras基因第12位密码子（位点位于K-ras 12c1G）突变,通过Fisher’s精确检验统计分析,χ2值为21.329（P〈0.001）,差异具有显著统计学意义;本实验检测的其余两个位点K-ras12c2、K-ras 13未见突变。结论 K-ras基因第12位密码子（K-ras 12c1G）突变可能是胰腺癌变发生发展过程中的一个重要过程和信号。     

P53 Gene Mutations in Non-Hodgkin's Lymphoma

ＳｏｆａｒＰ５３ｇｅｎｅｉｓｓｔｉｌｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒ－ｔａｎｔｇｅｎｅｅｖｅｒｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｔｏｓｕｐｐｒｅｓｃａｎ－ｃｅｒ．Ｉｔｉｓｏｎｈｕｍａｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７Ｐ１３．１,ｅｎｃｏｄｅｓ５３ｋｕｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ...     

P53 gene mutations in non-Hodgkin’s lymphoma

Summary To understand P53 gene change of non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) and human malignant lymphoma cell lines, the exons 5–7 of 29 patients with NHL and 9 kinds of human malignant lymphoma cell lines were studied by silver staining PCR-SSCP technique. Three cases of P53 gene point mutation was found in 29 cases of NHL. Mutation developed in exon 5 in 2 cases, and in exon 6 in 1 case. They were all diffuse lymphoma. In mutation cases, B-cell lymphoma accounted for 2 cases and the other one was T-cell lymphoma. There was no P53 gene mutation in low-grade follicular lymphoma. Seven strains out of 9 kinds of lymphoma cell lines had P53 gene point mutation. One strain had the mutation in exon 5; 5 strains in exon 6 and 1 strain in exons 5, 6, 7. There was a high mutation rate in lymphoma cell lines and low mutation rate in NHL patients. P53 gene plays an important role in lymphoma cell line establishment, cell regeneration and disease evolution. This project was supported by national initiative programs for scholars coming back from other countries (No. 95–135).     

非霍奇金淋巴瘤中p53基因突变情况研究

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin′s Lymphoma,NHL)中p53基因第5~8外显子突变情况。方法采用PCR-SSCP法对47例NHL进行p53基因第5~8外显子的点突变研究。结果p53基因第5~8外显子总突变率为48.94%(23/47)。其中第6外显子的突变率最高为17.02%,其次为第8外显子,突变率为12.87%;高度恶性组和低度恶性组突变率分别为50.00%(12/24)、34.78%(8/23)(P>0.05);T细胞和B细胞突变率分别为39.29%(11/28)、47.37%(9/19)(P>0.05)。结论NHL中存在较高p53基因突变率,提示其突变可能参与了NHL的发生发展。高度恶性组p53基因突变倾向于高发。     

p53基因突变与人食管癌转移的关系研究

目的：探讨ｐ５３基因突变与人食管癌淋巴结转移的关系。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合银染技术,对４７例食管瘤组织中ｐ５３ 基因第５～８外显子进行了突变分析。结果：４７例食管癌标本中,ｐ５３基因第５～８外显子出现突变者２０例,其突变率为４２．６％;其中２２例伴有淋巴结转移的原发癌中１３例出现了突变（５９．１％）,其与无淋巴结转移组（２８．０％,７／２５）相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ｐ５３基因突变与人食管癌的转移可能关系密切。     

肾上腺皮质癌患儿TP53基因的一个新生殖系突变

目的 研究1例肾上腺皮质癌患儿TP53基因突变情况,为该病的基因诊断与遗传咨询提供依据.方法 提取1例肾上腺皮质癌患儿及父母外周血基因组DNA,针对TP53基因设计特异性引物,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增基因的全部编码及侧翼序列,对扩增产物进行直接测序.结果 PCR结合DNA测序发现患者TP53基因第5外显子存在异常:第522与523位核苷酸间插入一个鸟嘌呤(c.522-523insG),导致P53蛋白DNA结合域第175位密码子由精氨酸(R)变为丙氨酸(A),并从突变位置起发生移码,产生移码突变(p.R175AfsX6).患者父亲带有相同的突变,而母亲未发现此突变.结论 TP53基因p.R175AfsX6生殖系突变是导致该例患者肾上腺皮质癌的特异突变.     

食管鳞癌TP53基因突变及其瘤内异质性分析

目的 探讨食管鳞癌瘤内多个取材位点中TP53基因突变异质性状态及其与临床病理特征的相关性。 方法 对食管鳞癌原发肿瘤及其配对的手术切端组织,采用聚合酶链式反应(PCR)法和直接测序法检测TP53基因第2～11号外显子突变状态,评估各病例瘤灶内4个不同位点TP53基因突变与临床病理参数的相关性及其在瘤内的异质性。 结果 在30例被测食管鳞癌肿瘤中,发现18例患者存在TP53基因突变,占60%(18/30)。16例为点突变,其中3例为无义突变,13例为错义突变;另2例为导致移码的缺失突变。大部分突变集中于TP53基因5～8号外显子,其中5号外显子的突变率最高,为23.3%(7/18)。在2例肿瘤中检测到第282位密码子突变(R282W),3例检测到第175位密码子突变(R175H)。观察每例肿瘤各位点突变等位基因峰高与正常等位基因峰高之比(relative intensity,RI值),发现在有点突变的16例中,12例的4个肿瘤位点的RI之间存在很大差异,其余4例瘤内各位点RI值也不一致。 结论 食管鳞癌存在较高频率的TP53基因突变,而且每例肿瘤均存在不同程度的瘤内异质性。      

胶质瘤中p53基因突变p16基因缺失细胞增殖和凋亡及与临床病理特征的相关性研究

目的探讨P53基因突变、p16基因缺失、肿瘤细胞增殖活性(PCMNA)和凋亡在胶质瘤发生发展中的作用、相互关系及其与临床病理特征的相关性。方法应用LSAB免疫组化法检测96例不同类型胶质瘤中P53,P16蛋白表达及其肿瘤细胞增殖活性(PCNA);应用非同位素PCR-SSCP技术检测p53基因5-8外显子突变。应用PCR-DNA测序技术检测SSCP阳性标本中p53基因5-8外显子碱基突变谱和氨基酸顺序改变。应用TUNEL技术检测肿瘤细胞中凋亡的改变。结果结果显示96例不同类型胶质瘤中P53蛋白阳性表达率为41.7%(40/96),其中Ⅱ级肿瘤阳性率为27.3%(13/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤阳性率分别为62.5%(20/32)、63.6%(7/11),低分级与高分级胶质瘤中P53蛋白阳性表达率有显著性差异(χ2=4.88,P<0.05)。SSCP检测结果显示34/96(35.4%)例胶质瘤出现p53基因异常移动的单链DNA电泳带,主要分布在5,7,8外显子。在40例P53蛋白阳性的病例中有32例呈现该基因的单链构象多态性改变,两种方法检测的符合率基本一致。DNA序列分析显示,17例SSCP有异常电泳带的标本中均存在p53基因突变,而且主要发生在5-8外显子,突变类型多数为点突变或碱基缺失,突变位点多分布在第5外显子130-175号密码子之间,第8外显子270-291密码子之间,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p16蛋白的表达缺失率为60.4%(58/96),其中Ⅱ级肿瘤为39.6%(21/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤为81.2%(26/32)、100%(11/11),在高级别胶质瘤中P16表达缺失率均显著高于低级别的肿瘤。复合表达研究显示,p53蛋白的表达与p16缺失之间存在负相关性(P<0.05)。96例胶质瘤细胞增殖活性及凋亡检测显示,PCNA标记指数(PCNALabelIndex,PCNALI)随着肿瘤分级的升高而递增,而凋亡指数(Apoptosis Index,AI)随着肿瘤分级的升高而递减,PCNALI/AI之比随着肿瘤分级的升高而递增。结论p53异常表达和突变是胶质瘤中最常见的基因改变,与胶质瘤的组织学分级呈显著正相关;p53突变更常位于5、7、8外显子,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p53基因突变可以通过p53蛋白的表达来间接反映,p53基因的异常表达及突变与胶质瘤的发生和进展密切相关。p16的缺失更多见于高级别的胶质瘤,与胶质瘤的发生和进展密切相关。胶质瘤发生、发展与PCNA的高表达和细胞凋亡的抑制密切相关,PCNALI/AI比PCNALI或AI单独检测更能反映胶质瘤的病理特征及恶性行为。p53基因突变、p16基因表达的缺失及PCNALI的增高和细胞凋亡的抑制在胶质瘤发生、发展中可能起着重要协同作用并与肿瘤的分化和异常增生显著相关,而胶质瘤细胞凋亡的发生受p53、p16基因的调控,p53及p16抑癌基因的失活,是胶质瘤逃逸凋亡的重要原因之一。