志贺毒素:纯化、结构和功能

志贺毒素是由1型痢疾志贺菌产生的一种蛋白毒素,它有3种生物活性:细胞毒性、肠毒性及神经毒性。本文介绍了志贺毒素的     

出血性大肠杆菌O157:H7四株菌株的vero细胞毒性比较

目的:研究出血性大肠杆菌四株菌株的vero细胞毒性,从而筛选出vero细胞毒性强的菌株,为进一步研究vero细胞毒素(VT)提供基础。方法:用超声法破碎菌体,用倒置显微镜观察法检测vero细胞毒性,并用毒素中和试验检测毒素提取液中的vero细胞毒素。结果:国际菌株933和中国流行菌株882364的毒素提取液的vero细胞毒性最强,其毒素提取液的vero细胞毒性可以被VT1抗体和VT2抗体部分中和。结论:在出血性大肠杆菌中国流行菌株中,882364茵株vero细胞毒性最强,并含有多种vero细胞毒素。     

单克隆抗志贺氏毒素抗体的分离和鉴定

作者从Ⅰ型痢疾志贺氏菌制备了几种抗志贺氏毒素的单克隆抗体(McAb)。这些McAb都是IgG 1型,但中和细胞毒性和在固相放射免疫测定(RIA)中结合志贺氏毒素的能力有所不同。免疫斑点试验证明,这些McAb能特异性地区别痢疾志贺氏菌粗制溶解物中的未水解和水解的志贺氏毒素。     

轮状病毒LLR株在两种不同细胞中病毒滴度的比较

目的:通过轮状病毒LLR株在牛肾细胞和Vero细胞中培养效果的比较,为轮状疫苗的生产筛选最佳的细胞基质和培养条件。方法:将轮状病毒LLR株按MOI 0.02分别接种牛肾细胞和Vero细胞,在相同培养条件下进行培养,每天观察两种细胞病变的情况,同时抽样检测病毒滴度,分析两种细胞对轮状病毒LLR株的敏感性。结果:牛肾细胞在感染轮状病毒LLR株后d 3病毒滴度达到最高,为6.8 lgCCID50.mL-1;而Vero细胞在感染轮状病毒LLR株后d 8病毒滴度达到最高,为7.3 lgCCID50.mL-1。轮状病毒LLR株在牛肾细胞和Vero细胞上均能达到满意的病毒表达量。结论:轮状病毒LLR株在Vero细胞中培养能够达到理想的病毒表达量,利用Vero细胞培养轮状病毒LLR株,有利于提高疫苗的产量和质量。     

大肠杆菌O157：H7生物学特性研究

血清型O157－H7大肠杆菌,可引起人类出现散发和暴发流行出血性结肠炎（HC）和溶血性尿毒综合症（HUS）,本文对5株大肠杆菌O157：H7的生物学特性进行了研究,结果研实：本菌为革兰氏阴性杆菌,电镜下观察可见细菌表明具有鞭毛,荚膜和菌毛,5菌具有典型大肠杆菌的生化反应,并有其独特的生化特性,不发酵山梨醇,对棉子糖,赖氨酸,鸟氨酸呈100％阳性反应。山梨醇－麦康凯培养基（SMAC）可用于分离大肠杆菌O157：H7,但SMAC至少不能区分大肠杆菌O157：H7和宋内氏痢疾杆菌,除个别抗生素外,此菌对常用的抗生素都敏感。5株大肠杆菌在D－甘露糖存在或不存时,均不能引起人A型红细胞和豚鼠红细胞发生凝集反应,5株菌均能产生一种特殊的肠溶血素,并且培养基对其溶血环的产生有很大影响,所有检测的大肠杆菌O157：H7都产生Vero细胞毒素,不产生不耐热肠毒素和耐热肠毒素,也不具有侵袭力,小鼠毒力试验（LD50）显示毒力远远大于肠毒原性大肠杆菌和宋内氏痢疾杆菌,DNA G＋C Mol%测定表明5株菌之间及其与作为标准大肠杆菌的E.coilK12之间具有很近的亲缘关系,质粒图谱分析结果表明：3株菌携带分子量为2．55MD,4．32MD和59．6MD的3个质粒,一株菌携带两个质粒：分子量为2．09MD和59．6MD,另一株菌也携带两个质粒：分子量为3．98MD和59．6MD。用紫外线照射法从5株大肠杆菌O157：H7中诱导出5种噬菌体,本文提取了大肠杆菌O157：H7的O－特异性多糖,其对小鼠有一定的免疫保护力。     

Vero细胞在无血清条件下制备乙型脑炎灭活疫苗

目的 探索Vero细胞在无血清条件下制备乙型脑炎灭活疫苗的工艺. 方法 用无血清培养基培养Vero细胞,并将乙型脑炎病毒P3V2株毒种接种于培养的Vero细胞,观察细胞和病毒的生长情况.收获病毒液,通过灭活、纯化制备乙型脑炎灭活疫苗,检测疫苗各项指标,并与有血清培养工艺制备的疫苗(2013年生产的疫苗)进行比较.结果 无血清培养基培养的Vero细胞生长良好,培养5d的细胞呈致密单层生长.3批无血清培养工艺制备的疫苗的第1、2和3次收获液的平均病毒滴度分别为8.847、8.319和7.194 lgLD50/ml.3批无血清培养工艺制备的疫苗半成品的平均抗原含量(1.51 EU/ml)与有血清培养工艺制备的疫苗(1.41 EU/ml)相当,但前者的宿主细胞蛋白含量(19.69 μg/L)则明显低于后者(63.90 μg/L).结论 乙型脑炎病毒可在无血清Vero细胞中良好生长,Vero细胞无血清培养工艺制备乙型脑炎灭活疫苗是可行的.     

志贺菌菌型分布和耐药性分析及治疗策略

目的 了解广州市部分医院检测的志贺菌的菌型分布及耐药情况,指导临床合理用药及有效的治疗.方法 126株志贺茵均按常规的方法进行培养、分离、鉴定及分型,采用K-B法检测其对14种抗生素的敏感性.结果 126株志贺菌中福氏志贺菌71株(占56.3%);鲍氏志贺菌34株(占27.0%);宋内志贺菌14株(占11.1%);痢疾志贺菌7株(占5.6%);其对氨苄西林及复方新诺明耐药率较高达90.0%以上,对阿莫西林/棒酸、氨曲南的耐药率次之分别为72.2%和69.8%;对亚胺培南、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦较敏感,耐药率在10.0%以下;对喹诺酮类的耐药率在20%～30%之间;主要流行菌福氏和鲍氏志贺菌对各种受试抗菌素的耐药性均无显著差异.结论 广州市部分医院所检测的志贺菌以福氏志贺菌为主,对临床常用的抗生素的存在一定的交叉耐药,相关的医疗卫生部门应加强对志贺菌菌型及耐药性监测.     

不同培养基和胰蛋白酶对Vero细胞培养及消化效果的比较

目的 比较不同公司生产的无血清培养基对病毒性疫苗生产用Vero细胞培养效果,及基因工程胰蛋白酶的细胞消化效果,以判断是否适用。方法 实验组用VirusPro Vero-A培养基进行Vero细胞的培养,用Trpzyme消化细胞。对照组用VP-SFM培养基进行细胞培养,用TrypLE Select消化细胞。两组Vero细胞以相同密度接种在T175培养瓶中,以相同的培养条件和传代方法在T175瓶和细胞工厂中各培养3代。培养期间观察细胞的上清液、形态以及汇合度,消化后检测细胞活率并计算细胞收获量。采用配对t检验比较两组消化液的pH值、总消化时长、37 ℃消化孵育时长、细胞活率以及细胞收获量。结果 两组细胞生长状态均良好。配对t检验显示,实验组消化液的pH值（6.99）、总消化时长（17.28 min）和37 ℃消化孵育时长（6.93 min）均值均大于对照组消化液的（分别为6.75、12.34 min、3.30 min）,细胞活率（94.79%）及细胞收获量（T175瓶：3.91×10⁷个;细胞工厂：1.90×10⁹个）均值均高于对照组的（分别为90.20%、3.33×10⁷个、1.26×10⁹个）,且差异有统计学意义（t值分别为9.17、3.46、2.98、2.31和4.38,P值均<0.05）。结论 实验组无血清培养基培养效果较好,基因工程胰蛋白酶细胞消化液温和、细胞损伤小,均适用于Vero细胞。     

酪酸梭菌的抑菌作用研究

目的：研究酪酸梭菌对肠出血性大肠杆菌，痢疾志贺菌，霍乱沙门菌，霍乱弧菌等肠道致病菌以及婴儿双歧杆菌的抑制作用。方法：先将酪酸杆力，痢疾杆菌等分别进行单独培养，测定不同培养时间内的pH值和活菌数，然后将酪酸梭菌分别和致病菌进行混合培养，再测量pH值和活菌数，并与单独培养时的情况进行比较。结果；酪酸梭菌对婴儿双歧杆菌无抑制作用，对肠出血性大肠杆菌，痢疾志贺菌，霍乱沙门菌，霍乱弧菌均有显著的抑制作用。结论：酪酸梭菌对肠道致病菌有显著的抑制作用。     

2006-2007年临床分离81株宋内志贺菌体外药敏试验结果

为了解浙江苍南地区宋内志贺菌对常用抗生素的体外药敏情况,用SS,EMB平板和三糖铁培养基进行分离培养,用微量生化发酵培养基和志贺菌属诊断血清鉴定其生物种型,用ATBTMG-5药敏测试条检测阿米卡星等20种抗生素的敏感性.     

Shiga toxins.

Shiga toxin and Shiga-like toxins belong to the group of protein toxins which have a moiety that binds to the cell surface and another enzymatically active moiety that after entry into the cytosol inhibits protein synthesis enzymatically. The toxins can also cause apoptosis by mechanisms that may be different from the effect on the protein synthesis machinery. Shigella dysenteriae, some strains of Escherichia coli as well as other bacteria can secrete such toxins which cause serious complications during infections. An increasing knowledge about the toxins and their interactions with cells is important both for treatment of disease, and for elucidation of pathways of intracellular transport.     

中药奇蒿提取物体外抗菌活性的实验研究

目的研究中药奇蒿80%乙醇粗提取物及其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物对临床常见菌种的抗菌活性。方法对中药奇蒿进行系统性分离提取,以80%乙醇粗提取物和石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物进行体外药敏实验,序贯使用纸片扩散法和常量肉汤稀释法,选用临床常见的致病菌株,包括金黄色葡萄球菌（标准型ATCC25923）、大肠埃希氏菌（标准型ATCC25922）、铜绿假单胞菌（标准型ATCC27853）、无乳链球菌（临床型）、粪肠球菌（临床型）、福氏志贺菌（临床型）和痢疾志贺菌（临床型）。结果奇蒿80%乙醇粗提取物对痢疾志贺菌的最小杀菌浓度（MBC）为25 mg/ml;奇蒿氯仿提取物对大肠埃希氏菌的MBC为6.25 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的MBC为12.5 mg/ml;奇蒿乙酸乙酯提取物对福氏志贺菌、痢疾志贺菌、无乳链球菌的MBC均为6.25 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的MBC为12.5 mg/ml;奇蒿正丁醇提取物对无乳链球菌的MBC为12.5 mg/ml,对痢疾志贺菌的MBC为25 mg/ml;石油醚提取物未对测试的细菌表现出明显的抗菌活性。结论奇蒿不同提取物对临床多种致病菌表现出了良好的杀菌作用,在抗感染治疗领域具有较好的开发和应用前景,其有效单体及杀菌机制有待进一步研究发现。     

ProZZ-EGFP融合蛋白基因在大肠杆菌中分泌表达条件的优化

目的优化大肠杆菌分泌表达ProZZ-EGFP融合蛋白基因的培养条件。方法采用摇瓶培养,在液体培养基中加入终浓度不同的蔗糖、Triton X-100和甘氨酸,诱导大肠杆菌周质腔内蛋白质“泄漏”到液体培养基中,利用ProZZ-EGFP浓度-荧光强度标准曲线快速检测培养基中目的蛋白质浓度。结果利用大肠杆菌HB101表达ProZZ-EGFP融合蛋白,在培养基中含有终浓度1%Triton X-100及1%甘氨酸,可使ProZZ-EGFP在培养液的分泌表达量提高6倍。结论仅在培养基中加入几种物质即可提高ProZZ-EGFP融合蛋白的分泌表达量,简单易行。     

Shiga Toxins: Intracellular Trafficking to the ER Leading to Activation of Host Cell Stress Responses

Despite efforts to improve hygenic conditions and regulate food and drinking water safety, the enteric pathogens, Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and Shigella dysenteriae serotype 1 remain major public health concerns due to widespread outbreaks and the severity of extra-intestinal diseases they cause, including acute renal failure and central nervous system complications. Shiga toxins are the key virulence factors expressed by these pathogens mediating extra-intestinal disease. Delivery of the toxins to the endoplasmic reticulum (ER) results in host cell protein synthesis inhibition, activation of the ribotoxic stress response, the ER stress response, and in some cases, the induction of apoptosis. Intrinsic and/or extrinsic apoptosis inducing pathways are involved in executing cell death following intoxication. In this review we provide an overview of the current understanding Shiga toxin intracellular trafficking, host cellular responses to the toxin and ER stress-induced apoptosis with an emphasis on recent findings.     

Detection of bacteria contaminating blood for transfusion

When Escherichia coli is cultured in nutrient broth at 1 x 10(3) cells/ml, 7.5 h are needed to detect cell growth as turbidity. The time to detect E. coli in this medium is reduced using the alamar blue method. Alamar blue is an oxidation-reduction indicator that changes color in response to cell growth. E. coli can grow in nutrient broth containing red blood cells, but the detection of E. coli based on turbidity is difficult because the red blood cells muddy the medium. As the change in color in the alamar blue method is not affected by red blood cells, the growth of E. coli contaminating red blood cells is detectable. These results suggest that a cell growth indicator such as alamar blue is useful for the detection of bacteria contaminating blood for transfusion.     

千根草粗取物体外抑菌活性部位的筛选研究

目的 以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变异链球菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌为试验菌株研究千根草的体外抑菌活性.方法 通过K-B纸片扩散法及利用连续（试管）稀释法对70%醇提物,水层、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚相萃取物测定抑菌活性.结果 总提物对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌的最低抑菌浓度（MIC）为25.00g·L-1.粗分部位中,乙酸乙酯相萃取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌抑菌活性最好,其最低抑菌浓度分别为25、12.5、3.13、25g·L-1,水层无抑菌活性.结论 千根草的抑菌活性成分主要存在于乙酸乙酯萃取相中.     

CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶的表达、定位及其抗药活性分析

目的:体外表达CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶(ESBL),并明确表达产物的分布及其抗药活性.方法:收集2006-2007年分离的产ESBL大肠埃希菌46株,采用PCR技术克隆目的基因,基因重组技术构建pET28a-CTX-M-38质粒,用BL21大肠杆菌作为宿主菌进行表达,测定培养基上清及菌体裂解液酶活性检测所表达ESBL的分布;采用液体稀释法检测所表达ESBL抗药活性.结果:PCR扩增条带约在900 bp位置处;测序结果与预测CTX-M-38相一致;菌体裂解液抗药活性较强;转化子对青霉素类、头孢一代、二代及多数三代药物均耐药;对碳青酶烯类药物稳定敏感;对头孢他啶及氨曲南体外敏感;对酶抑制剂除哌拉西林/他唑巴坦敏感外,其余表现为耐药;对庆大霉素、美满霉素、环丙沙星及左氧氟沙星亦具有耐药性.结论:CTX-M-38型ESBL表达成功,表达产物主要分布于表达菌体内,具有广泛抗药活性.     

香连丸联用TMP抗菌作用的实验研究

本实验采用琼脂稀释法对比研究了香连丸、ＴＭＰ及香连丸联用ＴＭＰ对５种不同细菌的体外抗菌作用。结果表明：ＴＭＰ对香连丸的抗菌作用具有协同作用。     

马齿苋及鱼腥草水提取液体外抑菌实验

目的:观察马齿苋与鱼腥草水提取液对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌的体外抑菌作用。方法:采用试管内连续稀释法(几何级稀释法)测定鱼腥草与马齿苋提取液体外最低抑菌浓度(MIC)。结果:马齿苋与鱼腥草水提取液(按生药质量浓度)对肺炎双球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌抑菌作用分别为500.00mg/mL,62.50mg/mL;15.625mg/mL,250.00mg/mL;31.25mg/mL,125.00mg/mL。结论:马齿苋水提取液对痢疾杆菌、大肠杆菌的抗抑作用最佳;鱼腥草水提取液对肺炎双球菌较好。     

槲皮素及其水溶性衍生物体外抑菌试验

目的初步探究槲皮素及其水溶性衍生物槲皮素-7-硫酸酯钠、槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠的体外抑菌效果。方法以革兰阳性菌：金黄色葡萄球菌,革兰阴性菌：大肠埃希菌、痢疾志贺菌、铜绿假单胞菌为实验菌株,分别采用MH琼脂稀释法和药敏纸片法测定槲皮素及其水溶性衍生物的最小抑菌浓度。结果琼脂稀释法,槲皮素及其水溶性衍生物槲皮素-7-硫酸酯钠和槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠梯度浓度0.5～0.0004875mg/mL范围内各种细菌均有生长;药敏纸片法,槲皮素及其水溶性衍生物槲皮素-7-硫酸酯钠和槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠对各种细菌无明显抑菌作用。结论槲皮素、槲皮素-7-硫酸酯钠和槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠对上述四种细菌均无明显抑菌作用。