三羟异黄酮对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞体外抑瘤效应、细胞周期及凋亡的影响

 目的探讨三羟异黄酮（Genistein GEN）对体外培养人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM抑瘤作用、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测GEN单独及联合阿霉素对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的抑制作用;荧光分光光度法检测GEN对阿霉素在MCF-7/ADM细胞的蓄积作用;用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期及凋亡率的变化。结果GEN单独及联合阿霉素对体外培养MCF-7/ADM细胞均有明显生长抑制作用,GEN单独作用48 h后表现为随时间的延长抑制作用明显增强,当GEN浓度达到60 μg/ml时,其抑制作用急剧上升（P<0.01）。联合阿霉素后与对照组相比抑制率明显上升（P<0.01）,并随GEN浓度的加大其抑制作用增强,细胞内阿霉素的浓度也随之升高。与对照组相比,细胞周期均有G2/M期阻滞作用,细胞凋亡百分比以联合组最高（P<0.01）,G₁期前出现典型的亚二倍体凋亡峰。结论GEN单独及联合阿霉素对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM细胞具有抑瘤增效作用,可以提高阿霉素在MCF-7/ADM细胞内的蓄积、对细胞周期具有G₂/M期阻滞作用,显著诱导MCF-7/ADM细胞凋亡,可能是其发挥逆转多药耐药分子生物学机制之一。     

单抗C225致人肺鳞癌H-520细胞生长抑制和凋亡增加的研究

目的：观察表皮生长因子受体单克隆抗体C225对人肺鳞癌细胞系（H-520）生长、凋亡和周期分布的影响。方法：流式细胞检测H-520细胞EGFR表达比例,将鼠抗人EGFR一抗和FITC标记的羊抗鼠二抗加入细胞悬液中,孵育、漂洗重悬细胞后流式检测。MTT法测定C225抑制H-520细胞生长最佳浓度和最佳时间,将不同浓度C225加入指数生长的细胞培养液中,继续培养一定时间（48h）,检测细胞生长抑制率。流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期。结果：H-520细胞中EGFR表达比例高达82.25%。C225抑制H-520细胞生长的最佳浓度是40nmol/L,最佳作用时间是72h。细胞凋亡实验结果显示,H-520细胞自然凋亡率为5.56%±0.62%,C225可使其凋亡百分率上升到13.75%±0.83%（P〈0.05）。细胞周期分布显示40nmol/L C225可使细胞阻滞于G0＋G1期,S期细胞比例下降。结论：C225对H-520细胞生长抑制作用,可能与细胞G0＋G1期阻滞后凋亡有关。     

重组人血管内皮抑素对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的：探讨重组人血管内皮抑素（恩度）对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测恩度对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测肺腺癌A549细胞的凋亡率,比较各浓度药物对肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用。结果：恩度可以抑制肺腺癌A549细胞的生长,且呈时间剂量依赖性。恩度可以诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,随浓度增加、作用时间的延长,凋亡率增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．001）。结论：恩度对肺腺癌A549细胞的生长具有明显的抑制作用,主要通过诱导肺腺癌A549细胞的凋亡引起。     

单抗C225致人肺鳞癌H-520细胞生长抑制和凋亡增加的研究

目的:观察表皮生长因子受体单克隆抗体C225对人肺鳞癌细胞系(H-520)生长、凋亡和周期分布的影响.方法:流式细胞检测H-520细胞EGFR表达比例,将鼠抗人EGFR一抗和FITC标记的羊抗鼠二抗加入细胞悬液中,孵育、漂洗重悬细胞后流式检测.MTY法测定C225抑制H-520细胞生长最佳浓度和最佳时间,将不同浓度C225加入指数生长的细胞培养液中,继续培养一定时间(48h),检测细胞生长抑制率.流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期.结果:H-520细胞中EGFR表达比例高达82.25%.C225抑制H-520细胞生长的最佳浓度是40nmol/L,最佳作用时间是72h.细胞凋亡实验结果显示,H-520细胞自然凋亡率为5.56%±0.62%,C225可使其凋亡百分率上升到13.75%±0.83%(P＜0.05).细胞周期分布显示40nmol/L C225可使细胞阻滞于G0+G1期,S期细胞比例下降.结论:C225对H-520细胞生长抑制作用,可能与细胞G0+G1期阻滞后凋亡有关.     

靛玉红甲肟对奈达铂抗人食管癌EC-1细胞的化疗增效作用

 目的 探讨靛玉红甲肟(Indirubin-3′-monoxime,IRO)与奈达铂联合应用对人食管癌细胞株EC-1的影响及其作用机制。方法 经不同浓度的IRO和(或)奈达铂处理EC-1细胞后,用MTT法测定细胞增殖抑制效应;流式细胞术观察细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达变化。结果与IRO或奈达铂单药作用相比,IRO与奈达铂联合应用可显著增强人食管癌细胞增殖抑制作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,G₀/G₁期细胞比例下降,G₂/M期细胞比例上升,癌细胞Bcl-2基因表达下降,Bax表达增强。结论 IRO与奈达铂联合应用具有协同抗食管癌作用,其机制可能与细胞周期调控及凋亡相关基因表达调控有关。     

抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela细胞的影响

目的 研究抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela细胞的生长抑制作用.方法 采用MTT法检测抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、A549、NCI-H520、Hela细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期分布及凋亡率.结果 抑瘤宁可明显的抑制MDA-MB-231、NCI-H520、Hela、A549细胞的生长.流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期分布及凋亡率结果显示,各实验组S期细胞百分率明显升高,G0-G1期细胞百分比明显下降,细胞被阻滞于S期,细胞凋亡率升高.结论 抑瘤宁对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和凋亡有关,对NCI-H520、A549细胞及人宫颈癌Hela细胞有明显的生长抑制作用.     

微缺氧对三氧化二砷抑制胃癌细胞SGC-7901生长的影响

 目的 常氧和微缺氧条件下三氧化二砷（As₂O₃）注射液对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用的对比研究。方法 运用产气袋法（GasPaK）制造微缺氧条件，实验分为微缺氧组和对照组，用MTT法检测药物效应。流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡。结果 不同浓度As₂O₃对人胃癌细胞株SGC-7901生长有抑制作用，并呈剂量一效应关系。细胞滞留于G2／M及S期。微缺氧条件下As₂O₃对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用下降（P〈0．01）。凋亡细胞百分比下降。结论 As₂O₃对人胃癌细胞生长有抑制作用，但对缺氧胃癌细胞的抑制作用下降，单用As₂O₃治疗胃癌存在一定的局限性。     

重组人内皮抑素对肺鳞癌放射增敏作用的体外实验研究

目的 探讨国产重组人内皮抑素是否对肺鳞癌细胞系H-520具有放射增敏作用.方法 取指数生长期的人肺鳞癌细胞系H-520细胞,用成克隆实验检测内皮抑素的细胞毒性和各实验组的克隆形成能力,计算各组细胞存活分数,利用多靶单击模型拟合细胞存活曲线.流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布变化及活化的Caspase蛋白片段水平.结果 成克隆实验中内皮抑素联合照射组较照射组D0、Dq、D10、SF2值均低,放射增敏比为1.50(D0值之比).流式细胞术检测细胞凋亡示内皮抑素+照射组细胞凋亡率分别为22.38%±1.61%、35.01%±1.16%、46.83%±2.06%、64.08%±4.28%,照射组分别为4.27%±0.29%、14.3%±1.15%、28.49%±1.58%、54.79%±1.89%,两组凋亡率差异有统计学意义(t=19.17、17.79、25.64、3.44,P值均<0.05).内皮抑素可诱导H-520细胞G0+G1阻滞,而照射则诱导G2+M期阻滞.内皮抑素+照射组活化Caspase蛋白片段表达增加(62.7%±1.9%)较对照组(12.1%±0.1%)、内皮抑素组(54.6%±1.0%)和照射组(34.1%±1.2%)显著增高(t=46.69、6.55、22.54,P值均<0.05;).结论 内皮抑素可通过抑制H-520细胞牛长、促进凋亡、细胞周期重分布来达到放射增敏作用.     

华蟾素对直肠癌 SW480细胞生长影响的实验研究

目的：探讨华蟾素对直肠癌 SW480细胞的抑制作用及其机制。方法：以不同浓度的华蟾素作用于人直肠癌 SW480细胞,用 MTT 法检测华蟾素对直肠癌 SW480细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）观察华蟾素对细胞周期的影响;划痕实验检测华蟾素对直肠癌 SW480细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法（Western blot）检测华蟾素对凋亡蛋白 Bcl －2表达的影响。结果：MTT 法显示华蟾素显著抑制直肠癌 SW480细胞增殖,其抑制率呈时间及浓度依赖性;FCM检测发现华蟾素使直肠癌 SW480细胞的 G2／M期延长,S 期缩短,周期主要阻滞在 G2／M期;划痕实验结果显示：华蟾素可降低直肠癌 SW480细胞的迁移能力;Western blot 结果显示华蟾素可使 Bcl －2蛋白表达水平降低。结论：华蟾素能够抑制直肠癌 SW480细胞的生长,并阻滞细胞周期在 G2／M期,抑制其迁移,其机制可能与影响凋亡蛋白 Bcl －2的表达相关。     

半边旗提取物5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用

 目的 研究半边旗提取物5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用。 方法 MTT法检测5F对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用PI-Hoechst荧光双染法和TUNEL法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测5F对 DNA含量的影响。 结果 5F抑制NCI-H460细胞的生长,其效果与5F的浓度和作用时间相关,24、48、72h的IC₅₀分别为：21.40、4.52、1.02μg/ml;荧光双染色法显示经5F作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体;细胞被阻滞在G₂/M期。 结论 5F在体外能有效地抑制NCI-H460细胞的生长,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。     

恩度对肿瘤上清液诱导的人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响及其机制的初步研究

目的：探讨恩度对肾癌ACHN细胞系上清液诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖和凋亡的影响及其机制。方法：应用MTT法检测恩度对HUVECs增殖的抑制作用;应用Annexin-V/PI双染法流式细胞仪检测恩度对HUVECs凋亡的影响;Western blot检测恩度对Cbl-b,c-Cbl,磷酸化Akt（p-Akt）和磷酸化ERK（p-ERK）蛋白表达的影响。结果：恩度抑制肿瘤上清液诱导的HUVEC细胞增殖;促进HUVECs凋亡;恩度下调HUVEC中Cbl-b、c-Cbl、p-Akt及p-ERK的表达,且上述效应均呈浓度依赖性。结论：恩度对肿瘤上清液诱导的HUVECs的增殖具有抑制作用,对其凋亡具有促进作用。泛素连接酶、p-Akt及p-ERK通路可能是恩度作用的分子机制之一。     

重组人血管内皮抑素对血管新生的影响研究

目的 探讨重组人血管内皮抑素（Endostar,恩度）对血管内皮细胞趋化、迁移、粘附、增殖及小管形成等与血管新生相关生物学行为的影响。方法 以原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为细胞模型,通过Boyden小室荧光定量分析、划痕试验、HUVEC荧光定量粘附分析、CFSE染色流式细胞术、CCK-8定量检测、小管形成试验和Matrigel栓试验研究恩度对HUVEC与血管新生相关的生物学行为的影响。结果 恩度在5～50 000ng／ml范围内可抑制血管内皮生长因子诱导HUVEC的迁移运动,且浓度为50ng／ml和500ng／ml时效果最明显;恩度在5～50 000ng／ml间可呈剂量依赖的方式抑制HUVEC向损伤部位的迁移。与0ng／ml相比,50、500和5000ng／ml 恩度处理的HUVEC的粘附率、增殖率及HUVEC形成网状小管结构的数量、面积和长度均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）; Matrigel栓实验结果显示,恩度在50～5000ng／ml间对SCID小鼠体内血管新生有明显的抑制作用。结论 恩度在细胞水平能抑制HUVEC与血管新生相关的生物学行为,包括HUVEC的趋化、迁移、粘附、增殖和小管形成;在动物水平能抑制SCID小鼠体内的血管新生,据此推断恩度能抑制血管新生。     

恩度对肿瘤上清液诱导的人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响及其机制的初步研究

目的:探讨恩度对肾癌ACHN细胞系上清液诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及其机制。方法:应用MTT法检测恩度对HUVECs增殖的抑制作用;应用Annexin-V/PI双染法流式细胞仪检测恩度对HUVECs凋亡的影响;Western blot检测恩度对Cbl-b,c-Cbl,磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达的影响。结果:恩度抑制肿瘤上清液诱导的HUVEC细胞增殖;促进HUVECs凋亡;恩度下调HUVEC中Cbl-b、c-Cbl、p-Akt及p-ERK的表达,且上述效应均呈浓度依赖性。结论:恩度对肿瘤上清液诱导的HUVECs的增殖具有抑制作用,对其凋亡具有促进作用。泛素连接酶、p-Akt及p-ERK通路可能是恩度作用的分子机制之一。     

IFN-γ对白血病细胞株FBL-3细胞生物学行为的影响

目的探讨IFN-γ对白血病细胞增殖、细胞周期、凋亡及侵袭等生物学行为的影响。方法用不同剂量的IFN-γ处理小鼠白血病细胞株FBL-3,MTT比色法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测瘤细胞周期分布和凋亡率;根据瘤细胞穿过Matrigel胶的能力,检测瘤细胞体外侵袭力,以未处理组作为对照。结果（1）小剂量IFN-γ（5 ng/ml）对白血病（FBL-3）细胞增殖没有明显作用（P＞0.05）,50~200 ng/ml IFN-γ对白血病细胞株FBL-3细胞作用48小时,存活率均可达到80%左右;但是大剂量IFN-γ（500 ng/ml）则明显抑制细胞的增殖(P＜0.05),存活率不足50%;（2）FBL-3细胞经IFN-γ处理后,G0/G1期细胞明显增多,G₂/M期细胞相对减少,提示细胞被阻滞在G0/G1期;（3）IFN-γ在促白血病细胞的凋亡和抑制其体外侵袭能力上存在明显剂量依赖性(P＜0.05)。结论IFN-γ通过剂量依赖性方式抑制白血病细胞的增殖、促凋亡、降低细胞的侵袭能力,具有抗白血病作用。     

重组人血管内皮抑制素对鼻咽癌HNE-1细胞株体外血管生成拟态的抑制作用

目的：研究重组人血管内皮抑制素（rh-Endostatin，Endostar，恩度）对人鼻咽低分化鳞癌HNE-1细胞的增殖、迁移及体外血管生成拟态的影响。方法：用不同浓度恩度（0～50μg／m1）处理HNE-1细胞，MTT法检测HNE-1细胞增殖活性的变化；创伤修复实验检测细胞迁移能力的变化。在Matrigel上接种HNE-1细胞，观察HNE-1细胞能否形成血管网状结构及其特点；体外管状形成抑制试验检测恩度对HNE-1细胞管道形成能力的影响。结果：恩度（1-50μg／m1）组的OD值与对照组比较无明显统计学差异（P〉0．05），但可以显著降低HNE-1细胞的迁移速度（P〈0．01），且与浓度呈负相关（r=-0．983，P〈0．01）。HNE-1细胞在Matrigel上培养能形成血管网状样结构，并能与内皮细胞连接共同构成马赛克样血管网状结构；恩度能抑制HNE。1细胞体外管道形成（P〈0．01），其管状结构数量与恩度浓度呈负相关（r=-0．978，P〈0．01）。结论：HNE-1细胞具有血管生成拟态及与内皮细胞共同形成马赛克血管的能力，恩度能够抑制HNE-1细胞的迁移和体外血管生成拟态形成。     

重组人血管内皮抑制素抑制内皮细胞血管生成的实验研究

目的:观察国产重组人血管内皮抑制素(Endostar,恩度)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗血管生成作用,并对其机制进行初步探讨.方法:采用MTS/PMS系统测定不同浓度恩度对HUVECs和人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用;流式细胞术检测恩度在相同时间内诱导HUVECs和HepG2细胞早期凋亡和晚期凋亡情况;通过迁移/侵袭实验、体外管腔形成实验和鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察恩度对HUVECs迁移/侵袭和体内外管腔形成及功能的影响.结果:不同浓度的恩度持续作用72h,对HUVECs具有抑制增殖,且在50～200ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系;而对HepG2细胞未见明显作用.药物处理方式的不同,恩度对HUVECs诱导凋亡和迁移/侵袭作用差异显著;对HepG2细胞的迁移/侵袭未见明显影响.高剂量的恩度对HUVECs体外管腔形成和鸡胚尿囊膜的血管发生及成熟具有显著影响.结论:重组人血管内皮抑制素(恩度)能够有效地抑制血管内皮细胞形成复杂的管腔,并显著影响血管的成熟;对人肝癌细胞系HepG2生长及迁移/侵袭未见明显影响.     

阿司匹林抑制肺癌细胞增殖的实验研究

 目的 观察阿司匹林在体外对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）法观察阿司匹林及与奥沙利铂联用抑制A549细胞的增殖；采用流式细胞仪（FCM）观察阿司匹林处理后A549细胞周期分布的变化；采用HE染色和DNA末端原位标记染色技术（TUNEL）观察阿司匹林处理后诱导A549细胞凋亡的作用。结果 MTT显示阿司匹林呈剂量依赖方式抑制A549细胞增殖。阿司匹林作用后，FCM显示G0／G1期细胞比例增加，S期和G／M期细胞比例降低，TUNEL显示细胞凋亡指数（AI）由3．67％±1．15％增加到26．33％±2．52％，呈一定剂量效应关系。光镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化。阿司匹林（2．5mmol／L）与奥沙利铂（≥6．25ug／mL）联用可增强抑制A549增殖的作用，二者呈协同或相加作用。结论 阿司匹林可抑制肺腺癌细胞A549的增殖，其影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡可能是其重要的机制。阿司匹林及与奥沙利铂联用有显著的协同抗增殖效应。     

塞来昔布对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制的实验研究

目的 研究环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响。方法 采用MTT法测定细胞代谢率,以流式细胞术观察细胞DNA含量和凋亡的变化情况,免疫组化SP法检测COX-2的表达情况。结果 塞来昔布对CNE-2细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性。细胞周期各时相DNA 含量改变明显,G₀～G₁期细胞显著升高 (由最初47.03%升至最高79.20%),而S、G₂～_M期细胞明显下降;凋亡率显著增高。塞来昔布明显下调细胞中COX-2蛋白的表达。结论 塞来昔布对鼻咽癌CNE-2 细胞有明显的增殖抑制作用,并且呈时间和剂量依赖性,使细胞聚集在G₀/G₁期,其机制涉及COX-2依赖性途径。     

p42/44MAPK抑制剂U0126对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究U0126对人胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响。方法 用MTT法测定U0126对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测U0126对SGC-7901细胞周期和细胞凋亡的影响,用Western blot分析p42/44和p38以及其磷酸化水平的变化。结果 10、15、20μM U0126均能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖;可使S和G2/M期肿瘤细胞比例减少,G₀/G₁期肿瘤细胞比例增加,其中20μM浓度的U0126作用最强(P<0.01);U0126诱导肿瘤细胞凋亡,其中20μM浓度的U0126凋亡作用最强(P<0.01);U0126使p-p42/44下调而使p-p38上调。结论 U0126诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,其机制可能是抑制p-p42/44表达,并使p-p38表达增强。