多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排机制

铜绿假单胞菌(PA)对多种抗菌药物都有不同程度的耐药,其耐药机制包括酶的产生、生物被膜的形成、外排泵的高表达和外膜孔蛋白表达的降低或缺失,其中多药外排泵能排出多种结构和功能不相关的抗菌药物,包括β-内酰胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素、氯霉素等,目前被认为是导致PA固有和获得性多重耐药的重要原因.     

多药耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排系统的耐药作用

目的探讨MexAB-OprM主动外排系统(外排泵)在多药耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用。方法挑选临床分离的铜绿假单胞菌多药耐药菌株26株、敏感菌株15株及标准质控菌株(ATCC27853),用RT-PCR扩增其内膜转运蛋白mexB的结构基因mexB和内参照基因16S rRNA片段,根据mexB与16S rRNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB mRNA的表达水平,判断MexAB-OprM的表达情况。结果 26株多药耐药菌株对14种常用抗菌药物全部耐药,耐药率为100%,15株敏感菌株对14种常用抗菌药物全部敏感;标准质控菌株、所有的敏感菌株和多药耐药菌株均检测出mexB mRNA基因;耐药菌株的mexB mRNA水平(2.41±1.10)显著高于敏感菌株(1.47±0.83)(P0.01)。结论 MexAB-OprM主动外排系统表达水平的增高与铜绿假单胞菌多药耐药的形成密切相关。     

铜绿假单胞菌多重药物主动外排泵与抗生素耐药

铜绿假单胞菌是一种临床上很重要的条件致病菌。主要感染医院内免疫力低下患者 [1 ] 。铜绿假单胞菌常对多种常用抗生素耐药 ,所涉及耐药机制复杂 ,包括 :外膜低渗透、抗生素修饰酶的生成 (如 β-内酰胺酶 )、外膜孔蛋白缺失、生物膜形成、青霉素结合蛋白改变和主动外排泵系统。可表现为抗生素多重耐药 ,具有重要临床意义。1　铜绿假单胞菌主动外排泵系统1 .1　 四类主动外排泵系统及其调控　到目前为止共报道了四类铜绿假单胞菌的多药外排泵系统 ,但大量同源物已经完全基因组测序证实。大部分编码外排泵的基因组存在于细菌染色体中。较早报…     

主动外排泵在铜绿假单胞菌多药耐药机制中的作用实验研究

目的采用荧光定量RT-PCR的方法检测铜绿假单胞菌MexAB-Opr M、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-Opr M、MexGHI-OpmD 5种外排泵表达情况,探讨主动外排泵在多药耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)耐药机制中的作用。方法采用分子克隆技术,构建克隆载体pMD18-T-mexB、pMD18-T-mexD、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexY及pMD18-T-rpsL作为定量模板,建立标准曲线;采用荧光定量RT-PCR检测并分析30株MDRPA临床分离株外排基因mexB、mexD、mexF、mexH、mexY的mRNA表达。结果成功构建pMD18-T-mexB、pMD18-T-mexD、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexY及pMD18-T-rpsL的标准曲线;在30株MDRPA中,16株高表达MexAB-Opr M(53.33%),7株高表达MexCD-OprJ(23.33%),8株高表达MexEF-OprN(26.67%),2株高表达MexGHI-OpmD(6.67%),3株高表达MexXY-Opr M(10.00%)。结论主动外排泵在多药耐药铜绿假单胞菌耐药机制中起着重要作用。     

泛耐药铜绿假单胞菌外排泵表型分析

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PAE)是一种常见的医院内获得性感染的重要条件致病菌[1].泛耐药铜绿假单胞菌(pandrug-resistant Pseudomonas aeruginosa,PDPAE),是指对头孢菌素类、碳青霉烯类、青霉素类、氟喹诺酮类和氨基糖苷类等5类以上抗菌药物全部耐药,但不包括多粘菌素及替加环素[2].随着广谱抗生素的广泛应用,住院时间的延长,免疫缺陷宿主的增加,抗生素的不合理使用,多重耐药甚至泛耐药铜绿假单胞菌明显增多,给临床抗感染治疗带来极大困难.为了解体外构建的泛耐药菌株与临床分离株在外排泵机制方面的差异,本研究通过次抑菌浓度诱导法[3]建立泛耐药模型,并进一步检测及分析外排泵表型.现将结果报告如下.     

临床铜绿假单胞菌多重耐药株外排泵机制研究

目的研究临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵的外膜蛋白OprM的表达及泵调节基因mexR突变情况。方法筛选铜绿假单胞菌多重耐药株13株和敏感菌株5株进行外膜蛋白SDS-PAGE分析,比较OprM的表达差异。聚合酶链反应(PCR)法扩增mexR基因,鉴定产物,测序。结果多重耐药菌株组OprM蛋白在相对分子量为49 kD处的各电泳条带较敏感菌株和质控菌株铜绿假单胞菌ATCC 27853的灰度明显增强,其光密度值多重耐药菌株组为157.79,敏感菌株组为132.03,两组比较,差异有显著性(t=19.345,P<0.01);多重耐药菌株mexR基因产物测序,除个别碱基插入外,以A-96→G,G-411→A,C-308→G,T-377→A 4个核苷酸点突变为主,后二者还导致了其编码的氨基酸发生改变,分别为Ala-103→Gly,Val-126→Glu。结论OprM表达增强提示MexA-MexB-OprM外排泵耐药机制参与多重耐药形成。多重耐药菌株的mexR基因均存在点突变,提示mexR基因突变引起MexA-MexB-OprM外排泵表达增强。     

铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM与耐药的关系研究

目的研究铜绿假单胞菌对碳青酶烯类抗生素的耐药机制. 方法以亚胺培南为代表,应用逆转录(RT)-PCR方法并设置内参照,分别研究临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株和亚胺培南敏感株的主动外排系统MexAB-OprM中OprM的结构基因OprM的mRNA表达水平. 结果耐药组OprM的mRNA表达水平明显高于敏感组. 结论主动外排系统MexAB-OprM的表达水平增高或异常增多与铜绿假单胞菌对以亚胺培南为代表的碳青酶烯类抗生素耐药密切相关.     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药性

目的 探讨铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性和耐药机制。方法 选取温州医学院附属第一医院162株铜绿假单胞菌临床分离株,采用琼脂稀释法检测抗生素亚胺培南和美罗培南对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC);PCR扩增分离株外膜蛋白基因OprD₂和碳青霉烯酶基因VIM、IMP、SPM、KPC,对阳性产物测序确定基因亚型;羰基氰氯苯腙(CCCP)协同抑制试验检测膜外排机制。结果 162株分离菌株中,亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为37.0%和30.9%;60株耐亚胺培南和/或美罗培南菌株(简称耐药株)中,50株对2种抗生素均耐药,另10株仅对亚胺培南耐药;耐药株中有18株OprD₂基因缺失,102株不耐亚胺培南或美罗培南菌株(简称敏感株)中有20株OprD₂基因缺失;耐药株中检出13株碳青霉烯酶阳性,其中5株产VIM型,8株产IMP型,敏感株中未检出VIM、IMP基因,所有菌株中未检出SPM-1、KPC基因;耐药株有48.3%外排泵表型试验阳性,以亚胺培南和美罗培南作为底物的分别有19株和24株,敏感株有10.8%外排试验阳性。结论 铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药严重,与外膜蛋白OprD₂缺失、产碳青霉烯酶和主动外排共同作用有关。     

中药对多重耐药铜绿假单胞菌外排泵的作用研究

目的研究中药与常用抗生素的相互作用和对多重耐药铜绿假单胞菌(multi drug resistant Pseudomonas aeruginosa,MDR-PA)外排泵的作用。方法采用外排泵抑制剂联合纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)筛选外排泵阳性MDR-PA,并用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,q PCR)确认外排泵基因高表达菌株。检测10种常用中药对抗生素的作用和对外排泵阳性MDR-PA外排泵基因表达的影响。结果从34株MDR-PA中筛选到5株外排泵阳性菌,q PCR法检测到这5株菌外排泵基因的表达水平是野生型铜绿假单胞菌PAOl的2倍或2倍以上(P<0.05)。黄芩、金银花和夏枯草对环丙沙星有较强的拮抗作用,穿心莲和五倍子对庆大霉素的拮抗作用最强,穿心莲和夏枯草对美罗培南的协同作用最强。穿心莲、金银花、夏枯草和五倍子具有促进外排泵基因表达的作用。结论中药穿心莲、金银花、夏枯草和五倍子可通过促进外排泵基因的表达拮抗抗生素的抗菌作用,临床抗感染治疗时需谨慎使用。     

外排泵系统介导的铜绿假单胞菌多重耐药性研究

目的调查镇江地区临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性率,检测外排泵系统M exAB-OprM和M exXY-OprM的调控基因m exR和m exZ的表达情况。方法纸片扩散法(K-B法)测定其对12种常用抗菌药物的耐药性,用PCR扩增m exR和m exZ全长基因。结果药敏结果显示该菌对头孢类抗生素耐药情况严重,铜绿假单胞菌对复方新诺明、头孢唑林、头孢西丁完全耐药,对头孢他啶、头孢吡肟的耐药率在40.0%~60.0%之间。对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南的耐药率达到40.0%。对左氧氟沙星、哌拉西林、头孢噻肟的耐药率均在60%以上。多重耐药率达75.0%。但98.0%的铜绿假单胞菌(71株)对多粘菌素B敏感。72株铜绿假单胞菌中91.0%(65株)同时表达m exR和m exZ基因,5.8%(4株)单独表达m exR基因,4.0%(3株)单独表达m exZ基因。结论m exR和m exZ基因与铜绿假单胞菌多重耐药密切相关。     

生物膜铜绿假单胞菌多药外排泵的表达研究

目的研究铜绿假单胞菌在浮游态、生物膜态及经亚胺培南、环丙沙星诱导后,多药外排泵MexAB-OprM及其阻遏蛋白MexR基因表达情况。方法用铜绿假单胞菌PAO1在eppendorf管内建立生物膜;用1/2 MIC亚胺培南、环丙沙星对浮游菌诱导4 h;4 MIC亚胺培南2、MIC环丙沙星对生物膜菌诱导12 h,分别于生物膜形成的第35、天,用实时荧光定量PCR的方法,测定铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM及MexR的基因表达。结果铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,其外排泵MexAB-OprM的表达水平明显降低,其相对表达量最高相差近10倍,其差异有统计学意义(P0.05);铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,阻遏蛋白MexR表达差异无统计学意义;在亚胺培南及环丙沙星诱导后,浮游菌和生物膜菌其基因MexAB-OprM、MexR表达差异均无统计学意义。结论铜绿假单胞菌由浮游菌转变为生物膜菌后,外排泵MexAB-OprM表达明显减少,MexR基因表达无影响;亚胺培南、环丙沙星对浮游菌及生物膜菌的MexAB-OprM、MexR均无诱导作用。     

下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌耐药性分析

目的了解医院下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌耐药谱变化,指导抗菌药物合理使用。方法回顾性调查医院2005年6月-2006年12月下呼吸道感染患者痰标本培养情况,对分离的229株铜绿假单胞菌药敏试验结果进行统计分析。结果2005年6月-2006年12月共送检痰标本5411份,检出病原菌2291株(42.34%),分离铜绿假单胞菌229株(10.00%);铜绿假单胞菌对妥布霉素、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟敏感率均>60.00%;对复方新诺明的敏感率最低(1.31%)。结论治疗铜绿假单胞菌引起的下呼吸道感染,在结合药物敏感试验结果的同时应考虑该菌的耐药机制;同时应加强抗菌药物的管理,密切监测耐药谱变化,指导临床合理使用抗菌药物。     

铜绿假单胞菌集群运动的研究进展

铜绿假单胞菌(PAE)为革兰阴性菌,是目前临床上最为常见的条件性致病菌之一.该菌对大多数常用抗菌药物不敏感,且随着耐药菌株的不断增加.     

铜绿假单胞菌的细胞间信号联系及其在感染中的作用

细菌的生物学特性往往是群体行为的结果。细菌能够感知它们所处的环境，并通过对自身细胞密度的感应来进行相互间联系，对信息进行加工处理进而做出适当的反应，这种被称为群体感应（quorum—sensing）或细胞间信号（cell—to—cell signaling）的生命现象普遍存在于多种革兰阴性菌和革兰阳性菌中。尽管这种现象早在1970年就已在海生费氏弧菌中被发现，但是直到最近10年，它才成为对致病菌深入研究中的焦点，并且成为研究进展最快的微生物学领域之一。