浅谈聚合酶链反应技术的正确使用

聚合酶链反应 (ＰＣＲ)是一种选择性体外扩增ＤＮＡ和ＲＮＡ片断的方法。经不断的改进 ,现已发展到多种ＰＣＲ技术。１ＰＣＲ原理及操作技术１ １ＰＣＲ的基本原理 :ＰＣＲ模拟于ＤＮＡ的自然复制过程 ,它利用人工合成引物介导的ＤＮＡ聚合酶促反应 ,引物按照碱基配对与ＤＮＡ模板互补结合以后 ,在ＤＮＡ聚合酶的作用下 ,按照碱基配对的原则 (Ａ＿Ｔ，Ｃ＿Ｇ)从引物开始合成与模板ＤＮＡ互补的ＤＮＡ链。经变性、退火、延伸等一次循环 ,ＤＮＡ链数量增加一倍 ,模板在以后进行的循环 ,新合成的ＤＮＡ都起模板作用。如此循环一次 ,ＤＮＡ拷贝…     

分子生物学新技术在医学上的应用

分子生物学新技术在医学上的应用山西省中医研究所（０３００１２）黄元桐分子生物学的兴起，对医学是一个很大的冲击。目前，分子生物学技术已渗入医学中的各个学科，包括微生物学和免疫学、遗传学、血液学和法医学等重要学科，产生了巨大的作用，推动了医学的发展，使医学的发展进入了一个新的时期。因此，迎接这种挑战，利用分子生物学新技术来发展和开拓自己所从事的专业，就成为当务之急。基本技术背景医学分子生物学技术主要建立于对去氧核糖核酸、限制性内切酶，基因探针和邵氏技术的基础知识上。去氧核糖核酸（ＤＮＡ）呈双股螺旋形结构，含有腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶４个碱基的特别序列。ＤＮＡ由许多单位组成，每一单位称为一个基因。基因可以是一个完整的ＤＮＡ区段，也可以在一定的ＤＮＡ区段内分段排列。遗传密码储存在三个一组的碱基对上，每三个碱基产生一个氨基酸，由多种氨基酸合成一个蛋白质分子。一个基因合成一个蛋白质。许多基因构成一个染色体。限制性内切酶是一类可以识别ＤＮＡ长链上特定切割位点的ＤＮＡ消化酶。它可以把ＤＮＡ长链裂解成许多ＤＮＡ小段，并用电泳技术制出纯品。邵氏技术是把ＤＮＡ从电泳凝胶上转移到硝酸纤维膜上，并用基因探针进行分子杂交，最后     

单链构象多态性分析—一种方兴未艾的基因突变探测方法

单链构象多态性分析──一种方兴未艾的基因突变探测方法梁曙光，刘鸿君，李学明ＤＮＡ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析是目标ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增，标记、热变性后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分析探测靶序列突变的方法。是一种快速灵敏探测序列点突变的方法。自...     

聚合酶链反应在医学检验中的应用及质控

聚合酶链反应(Polymerasc，chain reation PCR)是一种体外特定核酸序列扩增技术，该技术以待测的DNA序列为模板，用聚合酶催化引物限制的DNA合成反应，经变性，退火，延伸3个步骤，约30～35个重复，可使DNA放大几百万倍，该技术是美国Mullis及同事于1985年在Cetas公司发明，1987年专利局授于PCR专利，     

雷公藤内酯醇与人乳腺癌细胞大分子DNA作用膜式的探讨

采用药物与ＤＮＡ作用的体外检测方法，以ＤＮＡ嵌入剂表阿霉素（ＥＤＲ）作对照，从分子药理水平研究雷公藤内酯醇（ＴＬ）对乳腺癌细胞ＤＮＡ的作用模式。实验发现ＴＬ在１２０μｇ／ｍｌ浓度，３７℃作用２４ｈ可与ＤＮＡ模板结合，同ＥＤＲ呈嵌合效应，但嵌入ＤＡＷ尚不牢固，易发生解离；ＥＤＲ在较低浓度（５μｇ／ｍｌ）作用３０ｍｉｎ即可显示明显的嵌合效率且不是可逆的。说明ＴＬ对乳腺癌细胞ＤＮＡ的作用模式为嵌合逆行模     

用于基因治疗的药物级质粒DNA的大规模生产：问 …

基因疗法是用于预防及治疗癌症、艾滋病和囊性纤维变性等疾病的有效方法。给予治疗基因的方法之一是直接注射露或脂质体包裹的质粒ＤＮＡ,但需要大量质粒ＤＮＡ。当前在基因治疗用药物质粒的ＤＮＡ的大规模生产工艺的设计及操作中还存在一些问题和障碍。     

常规PCR与套式PCR的敏感性比较研究

建立了套式引物聚合酶链式反应用于Ⅰ型艾滋病毒ｐｏｌ基因的检测，并比较了常规单对引物ＰＣＲ和套式引物ＰＣＲ的敏感性。结果表明，当模板ＤＮＡ分子的数量低于１０００个时，常规单对引物ＰＣＲ反应不能检出，而套式引物ＰＣＲ反应则可检出低至１０个分子的模板ＤＮＡ。提示采用套式引物可以大大提高聚合酶链式反应的敏感性。     

聚合酶链反应检测肝病患者中HBV的感染

聚合酶链反应(polymerase chain reac-tion,PCR)是一种在体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术。基本过程是一种模板DNA进行反复变性成单链DNA,与加入的一对特定寡核苷酸引物“退火”,在DNA合成的原料(dNTP)和     

保尔佳在血液病中的应用及疗效观察

保尔佳在血液病中的应用及疗效观察侯天德，符粤文，陈国力，谷景棉，彭晓景，王常秀，董秀娟（河南省郑州市第三人民医院血液科郑州市４５００００）保尔佳（Ｐｏｌｙｅｒｇａ）具有抑制肿瘤细胞糖酵解，导致能量代谢障碍，从而ＤＮＡ合成指数降低，瘤细胞变性凋亡。同时...     

阿魏酸钠对培养近端肾小管细胞庆大霉素毒性保护机理探讨

目的 研究阿魏酸钠（ＳＦ）对庆大霉素（ＧＭ）肾毒性的保护作用。方法 采用近端肾小管上皮细胞原代培养技术制作ＧＭ损伤模型，观察细胞丙氨酸氨基转换酶（ＡＬＴ）、过氧化氢酶（Ｃａｔ）、ＮＡＧ酶活性，ＤＮＡ合成，细胞内离子钙浓度以及形态学变化，同时观察ＳＦ的保护作用。结果 ＧＭ组在现为ＡＬＴ，Ｃａｔ酶活性下降，ＮＡＧ酶活性增加，细胞ＤＮＡ合成下降，胞内游离钙浓度升高。光镜发现近端小管上皮细胞内有大量空泡变性和溶酶体髓样体形成。给予 ＳＦ能使上述异常指标明显改善，组织学损害也明显减轻。结论 ＳＦ能有效保护ＧＭ对肾小管上皮细胞的损害。     

STD高危人群中NUC感染的聚合酶链反应监测初探

本文应用聚合酶链反应技术对ＳＴＤ高危人群１３９０例进行ＮＵＣ监测。结果表明：在１３９０例ＳＴＤ高危人群中，单项ＤＮＡ阳性者５２６例，占３７．８４％。其中ＮＧ ＤＮＡ阳性２１５例，ＵＵＤＮＡ阳性１４０例，ＣＴＤＮＡ阳性１７１例。二项ＤＮＡ阳性２１８例，占１５．６８％。其中ＮＧ，ＵＵＤＮＡ双阳性７６例，ＮＧ，ＣＴＤＮＡ双阳性８８例，ＵＵ，ＣＴ，ＤＮＡ双阳性５４例。     

人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白基因的分离及重组质粒鉴定

目的：应用聚合酶链技术获取作为基因探针和体外表达研究所必需的人胰岛细胞自身抗原６９ku蛋白（hＩＣＡ６９）编码基因,为探讨该基因在不同种系间和（或）组织来源间的差 异打下基础。方法：分别从正常白人胰腺细胞和国人胰岛细胞瘤Ｐoly（Ａ＾＋）－ＲＮＡ中逆转录合成编码人胰岛细胞自身抗原６９ku蛋白（hＩＣＡ６９）的全长cＤＮＡ,以双链cＤＮＡ（ds cＤＮＡ）为模板,经聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增出hＩＣＡ６９基因     

抑癌基因的研究进展

抑癌基因的研究进展山西省肿瘤研究所（０３００１３）文锦华史天良张华目前，癌症仍然是医学界面临的一大难题，世界各国投入了大量的人力物力，已有了很大的突破。研究表明，大多数致癌物均可损伤ＤＮＡ并由此导致细胞的突变和癌变。细胞突变机制有二种：第一，细胞中...     

A study of DNA bases sequence preference of aclarubicin B to bind DNA and inhibit DNA-dependent RNA synthesis in vitro

采用荧光淬灭法和体外无细胞ＲＮＡ合成系统研究了阿柔比星Ｂ结合ＤＮＡ和抑制ＤＮＡ依赖性ＲＮＡ合成的ＤＮＡ碱基顺序选择性。结果表明阿柔比星Ｂ与小牛胸腺ＤＮＡ，ｐｏｌｙ［ｄ（Ａ－Ｔ）］和ｐｏｌｙ［ｄ（Ｇ－Ｃ）］有明显结合；结合ＲＮＡ的活性小；与天然ＤＮＡ的结合力较与变性ＤＮＡ的结合力大。Ｓｃａｔｃｈａｒ分析显示阿柔比星Ｂ结合３种ＤＮＡ的亲和性依次为ｐｏｌｙ［ｄ（Ａ－Ｔ）］＞ｐｏｌｙ［ｄ（Ｇ－Ｃ）］＞小牛胸腺ＤＮＡ。同样，用大肠杆菌ＲＮＡ多聚酶和大鼠肝细胞核游离ＲＮＡ多聚酶实验均显示阿柔比星Ｂ的抑制力依次为ｐｏｌｙ［ｄ（Ａ－Ｔ）］＞ｐｏｌｙ［ｄ（Ｇ－Ｃ）］＞ｐｏｌｙ［ｄ（Ｉ－Ｃ）］。上述结果证明抑制ＲＮＡ合成的碱基顺序选择性与其结合ＤＮＡ碱基顺序的选择性有关     

分子生物学技术在肝癌研究中的应用

肝癌的发生是有其分子生物学基础的。自８０年代以来许多技术相继开发应用到肿瘤的分子生物学研究，并取得了显著的成效。一类主要用于基因组ＤＮＡ的检测，如肝癌基因和抑癌基因的定位克隆，比较基因组杂交，代表性差异分析；用于ｃＤＮＡ或ｍＲＮＡ或ｍＲＮＡ水平的技术包括消减杂交、差异显示ＰＣＲ、ｃＤＮＡ代表性差异分析、ＤＮＡ芯片及探微列陈等。这些技术的应用为肝癌的分子生物学研究开拓了一个崭新的领域。１ＤＮＡ水平的研究１．１ 定位克隆癌基因和抑癌基因：利用各种ＤＮＡ多态性标记对癌基因或抑癌基因进行染色体定位进而克…     

HBV－DNA及DNAP在各型肝炎中的动态变化

ＨＢＶ－ＤＮＡ及ＤＮＡＰ在各型肝炎中的动态变化０６６００１秦皇岛市第三医院金慧，杨献文ＨＢＶ－ＤＮＡ及ＤＮＡＰ的检测，能为各型肝炎的诊断及其代病毒情况作决定，且能对患者的预后作出估计、指导治疗及预防。此两项检测在我市有其先进性，值得推广。１应用的技术...     

DNA疫苗接种的免疫学机理,优越性及安全性

本文介绍了ＤＮＡ免疫接种的免疫学机理，优点及安全性问题等。鉴于ＤＮＡ免疫接种是一门人的技术。目前尚未完成安全性和长期效果观察，故在考虑实际应用推广时，应全面权衡本法的效益和危险性问题。     

半重叠PCR扩增IgH和TCR基因重排检测微小残留病

利用ＩｇＨ、ＴＣＲ克隆性基因重排原理用半重叠ＰＣＲ和单轮ＰＣＲ技术分别对２５例急性淋巴细胞白血病患儿的骨髓标本进行检测。结果表明，半重叠ＰＣＲ双轮扩增ＩｇＨ、ＴＣＲｒ基因重排对微小残留的检测，起到增敏效果，可减少非特异性产物的生成，大大提高了微小残留的阳性检出率，并与单轮ＰＣＲ同样具有简便、快速以及ＮＮＡ用量少，对ＤＮＡ模板质量要求低，无放射性污染等优点。     

二甲基亚砜在λDNA重包装法中的遗传毒性研究

二甲基亚砜在λＤＮＡ重包装法中的遗传毒性研究曹阳，胡维民华南农业大学蚕桑系（广州５１０６４２）；曹佳第三军医大学分子毒理室；许莉萍中山大学生物工程中心国家自然科学基金资助课题ＮＯ３８８０６８０华南农业大学校长基金资助课题ＤＮＡ体外重包装技术是基因工程...     

聚合酶链反应技术的应用及HBV－DNA结果分析

聚合酶链反应技术的应用及ＨＢＶ－ＤＮＡ结果分析金德来（安徽省安庆市传染病医院检验科安庆市２４６０００）聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种将核酸片断在体外无限量的扩增的最新的生物学技术。它采用遗传基因工程技术直接将致病基因或病员体ＤＮＡ（或ＲＮＡ）进行检测，...