CD+4CD+25T细胞在多发性硬化发病和治疗中的作用

CD4^＋CD25^＋T细胞被称作调节性T细胞（regulatory T cell，Treg），属于免疫调节细胞，占CD4^＋T细胞的5％-15％，是近10年来免疫学研究最活跃的领域。它在外周免疫耐受中起关键作用，能限制过度的免疫反应引起的组织损伤，是维持免疫系统平衡的主要因素，这些细胞能通过主动抑制其他免疫细胞的功能活性而抑制自身免疫性疾病和移植排斥反应。关于该细胞的基础研究已经很多，人们开始探讨其在免疫系统疾病中的作用。CD4^＋CD25^-效应性T细胞（effector T cell，Teff）和Treg之间的平衡是免疫系统保持稳定的重要基础，若Treg数量减少或功能下降将会引起自身免疫性疾病，相反，若此类细胞数量增多或功能亢进将会发生肿瘤等疾病。因此，这类细胞在调节免疫稳态中起了关键作用。本文将详细讨论Treg在多发性硬化（multiple sclerosis，MS）发病机制和治疗方面的作用。     

帕金森病大鼠CD4+CD25highFoxP3+调节性T细胞的变化

目的 研究帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠外周血中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的改变,并探讨其与脑内免疫炎症反应的相关性.方法 SD大鼠随机分为对照组、假手术组、PD 4周组、PD 2周组.PD 4周组和2周组定向注射6-羟多巴建立PD大鼠模型,假手术组注射PBS缓冲液,PD 2周组于术后第2 周,其他组于术后第4 周时,应用免疫荧光染色法观察各组大鼠黑质处酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元、离子钙接头蛋白分子-1(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1,iba-1)和胶原纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acid protein,GFAP)阳性细胞数量及形态的改变,并通过流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测其外周血中CD4+CD25highFoxP3+ Treg 占T 淋巴细胞比例的变化.结果 PD4 周组TH 阳性神经元偏侧毁损率(91.33%±8.53%)较对照组和假手术组增加(P<0.01),且较PD2周组(64.56%±17.94%)毁损更为严重(P<0.05).PD4周组iba-1阳性细胞增加率(82.60%±11.52%)和GFAP阳性细胞增加率(86.62%±6.80%)较对照组及假手术组均增加(P<0.01),但PD 4 周组较2 周组iba-1 阳性细胞增加率(104.89%±13.39%)和GFAP 阳性细胞增加率(117.92%±15.34%)均减少(P<0.05).FCM示PD4周组大鼠外周血中CD4+CD25highFoxP3+ Treg占T淋巴细胞的比例(0.64%±0.08%)较对照组、假手术组及PD2周组均降低(P<0.01).另外,外周血T淋巴细胞中Treg比例变化与TH 阳性神经元毁损率(r=-0.59,P<0.01)、iba-1 阳性细胞增加率(r=-0.87,P<0.01)和GFAP 阳性细胞增加率(r=-0.89,P<0.01)均呈负相关.结论 PD大鼠外周血中Treg比例减少且可能与脑内免疫炎症反应相关.     

γ-干扰素诱导人外周血CD4~+CD25~-T细胞转化为CD4~+CD25~+调节性T细胞的可行性研究

目的研究γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)将人外周血CD4~+CD25~- T细胞诱导为CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Tregs)的可行性。方法采用免疫磁珠法分离19名健康志愿者外周血单个核细胞中的CD4~+CD25~- T细胞,在抗CD3和抗CD28抗体存在条件下给予不同水平IFN-γ刺激72 h,以流式细胞仪检测CD4~+CD25~+T细胞比例并以real time-PCR法检测其特异性表型标志FoxP3表达水平。将诱导生成的CD4~+CD25~+T细胞与自体CD4~+CD25~-T细胞共培养检测诱导生成的CD4~+CD25~+T细胞抑制CD4~+CD25~-T细胞增殖的能力。结果IFN-γ刺激后CD4~+CD25~+T细胞比例上调且其FoxP3表达较诱导前明显增高,当IFN-γ水平为20、40 ng/mL时,CD4~+CD25~+T细胞上调比例最高;40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4~+CD25~+T细胞FoxP3表达最高,但不及CD4~+CD25~+Tregs。IFN-γ诱导所得CD4~+CD25~+T细胞可抑制自体CD4~+CD25~-T细胞增殖,40 ng/mL IFN-γ诱导的CD4~+CD25~+T细胞抑制能力与CD4~+CD25~+Tregs相当。结论 IFN-γ可诱导CD4~+CD25~-T细胞转化为CD4~+CD25~+T细胞,当IFN-γ水平为40 ng/mL时诱导率最高且诱导生成的CD4~+CD25~+T细胞表型和功能与CD4~+CD25~+Tregs相当。     

供体凋亡淋巴细胞预输注对猪肝移植受体CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+调节性T细胞的影响

背景：凋亡细胞能够主动调节机体的免疫功能,并能通过调节机体细胞免疫和体液免疫的途径诱导免疫耐受,但这些结果只在大鼠肝脏移植模型中证实。 目的：探讨通过60Co γ射线体外处理后的供体淋巴细胞预输注诱导猪肝移植特异性免疫耐受的作用中,对淋巴细胞亚群的影响。 方法：建立非转流小型猪原位肝移植模型。将受体猪随机摸球法均分为2组：空白对照组,受体猪无特殊处理,行肝移植;淋巴细胞组：受体猪在肝移植前7 d经耳静脉注射60Co γ射线处理过的5×108个供体淋巴细胞。观察两组受体猪移植后的存活时间,移植后T淋巴细胞亚型CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+Tr变化及病理。 结果与结论：移植后3 d,两组病理活检均呈急性中、重度排斥反应;移植后6 d,两组均呈急性重度排斥反应。移植后1,3,6 d CD4+T、CD8+T、CD4+CD25+Tr升降趋势,两组间差异无显著意义(P > 0.05)。提示,60Co γ射线体外处理过的淋巴细胞预输注未能够诱导猪同种异体肝移植特异性免疫耐受,未能引起T淋巴细胞亚群变化有关。     

FoxP3+ CD4+ CD25+调节性T细胞在重症肌无力发病机制中的作用

目的 在细胞与分子水平检验重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)的表达缺陷,探讨CD4+CD25+Tregs亚群异常与MG发病间的关系.方法 流式细胞技术检测21例MG患者(11例经胸腺切除)与20名健康对照者(healthy controls,HCs)外周血CD4+CD25+Tregs及FoxP3+CD4+CD25+Tregs含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析MG患者与HCs外周血CD4+CD25+Tregs中FoxP3 mRNA的表达.结果 MG患者外周血CD4+CD25+ Tregs占CD4+T细胞含量与HCs比较无统计学差异(P＞0.05).MG患者外周血FoxP3+CD4+CD25+ Tregs含量及FoxP3 mRNA表达量与HCs比较均显著性降低(P＜0.05);胸腺切除的MG患者与未经胸腺切除的MG患者外周血FoxP3+CD4+CD25+ Tregs含量及FoxP3mRNA表达量无统计学差异(P＞0.05).结论 MG患者外周血CD4+CD25+ Tregs数量正常,但其表面分子FoxP3的表达下调,这种CD4+CD25+ Tregs亚群的异常发现有助于深入阐明MG的免疫发病机制.     

睾丸内胰岛移植对CD4+ CD25+调节性T细胞分布的影响

背景：CD4+ CD25+调节性T细胞是维持机体免疫耐受的重要调控者，参与了多种移植免疫耐受的诱导。 目的：拟观察小鼠睾丸内胰岛移植后CD4+ CD25+调节性T细胞分布的特点。 设计、时间及地点：观察对照动物实验，2007-04/2008-01在江西省实验动物中心完成。 材料：成年Balb/c小鼠。 方法：分离小鼠胰岛细胞，采用胰管内注射胶原酶水浴消化及Ficoll 400不连续密度梯度离心法纯化，以双硫腙染色，计算胰岛细胞纯度，以体外葡萄糖刺激胰岛素分泌试验判定胰岛细胞功能。将胰岛移植至小鼠睾丸或肾包膜下，每只移植300~400个胰岛。在胰岛移植24 h后麻醉处死小鼠，取脾脏、睾丸及淋巴结，制成细胞悬液，免疫磁珠法分离CD4+CD25+ T细胞，通过流式细胞仪分析计数。 主要观察指标：胰岛细胞的纯度及功能，CD4+ CD25+调节性T细胞的分布。 结果：纯化后每只胰腺获得(478±53)个胰岛细胞，纯度为(81.5±12.3)%，纯化后细胞形态完好，活度大于90%。睾丸内胰岛移植时，睾丸、淋巴结及脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞均显著增多（P < 0.05~0.01）。 结论：睾丸内胰岛移植能明显上调睾丸、淋巴结及脾脏中CD4+ CD25+调节性T细胞数量。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血CD4+CD25+T细胞的研究

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型血CD4 CD25 T细胞的变化及其意义。方法以豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)为抗原免疫Wistar大鼠,建立EAE的动物模型,采用三色流式细胞仪检测EAE和正常大鼠外周血CD4 CD25 T细胞的细胞数并进行比较;通过观察大鼠行为学及脑和脊髓的病理改变确定EAE。结果EAE模型大鼠的成功率为48.9%,EAE大鼠外周血CD4 CD25 T淋巴细胞数(5.29±4.00)显著低于正常对照组(12.61±2.24)(P<0.01)。结论EAE大鼠血CD4 CD25 T细胞数明显减少,CD4 CD25 T淋巴细胞对神经系统脱髓鞘疾病是一种保护因子。     

CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3与多发性硬化的关联

调节性T细胞(regulatoryT cell.Treg)是一类具有免疫调节功能的T细胞哑群,它们在维持外周免疫耐受、预防自身免疫性疾病的发牛过程中起着重要作用.     

首发抑郁症患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的研究

目的 探讨首发抑郁症患者治疗前后外周血中CD4⁺CD25⁺CD127^-占CD4⁺的比例及Treg细胞与抗抑郁治疗的相关性。方法 纳入在大庆市第三医院住院治疗的首发抑郁症患者共20例,均符合《精神障碍诊断与统计手册（第5版）》（DSM-5）关于抑郁障碍的诊断标准,汉密尔顿抑郁量表17项版（HAMD-17）总评分>20分;同期纳入在大庆市第三医院体检中心的健康成人作为对照组,共20例。对抑郁症患者治疗前及治疗12周后分别进行HAMD-17评定。对抑郁症患者治疗前、治疗12周后及健康对照组分别采取其外周血,利用流式细胞术（FCM）测定外周血CD4⁺CD25⁺CD127^-占淋巴细胞的百分比及CD4⁺CD25⁺CD127^-占CD4⁺T细胞的百分比,并作对照分析。结果 在CD4⁺CD25⁺CD127^-/CD4⁺的水平上,抑郁症患者治疗前、治疗后均高于健康对照组,差异均有统计学意义（P均<0.01）;抑郁症患者HAMD-17评分及血清CD4⁺CD25⁺CD127^-/CD4⁺的水平均下降,差异均有统计学意义（P均<0.05）,且抑郁症显效组CD4⁺CD25⁺CD127^-/CD4⁺的变化率与HAMD-17评分减分率呈正相关（r=0.716,P<0.05）。结论 抑郁症患者经SSRIs类药物治疗后,外周血CD4⁺CD25⁺CD127^-/CD4⁺水平的降低预示抗抑郁疗效较好,有效的抗抑郁治疗可能与调节T细胞有一定的相关性。     

多发性硬化患者外周血CD4+CD25+ T细胞变化及其机制探讨

目的探讨多发性硬化(MS)患者外周血CD4 CD25 T细胞数量及叉头样转录因子(FOXP3)表达水平与MS病情的关系。方法选择温州地区MS患者44例(男12例、女32例),均按Poser诊断标准诊断,结合头颅MRI增强扫描排除合并其他神经系统和免疫系统疾病,并统一行EDSS评分;对照组43例(男13例、女30例)为健康查体者。具体方法:流式细胞仪检测外周血CD4 CD25 T细胞数量;免疫磁珠法分离CD4 CD25 T细胞;RT-PCR法检测CD4 CD25 T细胞FOXP3 mRNA表达并进行半定量分析。结果MS患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞数量与对照组比较无明显变化(P>0.05);活化的效应性T细胞数量增加(P<0.05)且活动期增加更为显著(P<0.01)。同一个体疾病活动期外周血CD4 CD25 调节性T细胞数量较非活动期减少(P<0.05)。MS患者外周血中CD4 CD25 T细胞的FOXP3 mRNA表达降低(P<0.05),且活动期降低更明显(P<0.01)。结论此组MS患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞抑制活性降低,FOXP3 mRNA表达减少,活化的效应性T细胞数量增加,且与MS疾病活动性有关。     

同种异基因大鼠间充质干细胞移植对体内CD4+CD25+T细胞的影响**☆

背景：间充质干细胞的免疫抑制作用近年来逐渐得到证实并开始应用于临床,但相关研究成果主要来源于体外细胞实验。 目的：观察同种异基因大鼠骨髓间充质干细胞从静脉输入后对体内CD4+CD25+调节性T细胞的影响。 设计、时间及地点：以动物为对象的对照观察实验,于2008-03/09在南方医科大学珠江医院移植免疫研究所完成。 材料：Wistar大鼠6只用于制备骨髓间充质干细胞,SD大鼠20只作为输注骨髓间充质干细胞的受体鼠。 方法：从Wistar大鼠骨髓分离培养间充质干细胞,取第3~5代细胞进行实验。①体外淋巴细胞增殖实验：首先将间充质干细胞悬液从尾静脉注入SD大鼠体内10 d后脱臼处死,取大鼠脾脏制备脾淋巴细胞。实验分5组：分别为脾淋巴细胞/骨髓间充质干细胞为1∶10,1∶50,1∶100+ConA 5 μg组,脾淋巴细胞+ConA 5μg组（增殖组）,单纯淋巴细胞组(空白组),检测共培养体系中CD4+CD25+ / CD4+ T淋巴细胞比率。②体内注射骨髓间充质干细胞实验：将5×109 L-1,5×108 L-1,5×107 L-1间充质干细胞及PBS静脉输入SD大鼠体内,10 d后取受体鼠胸腺、脾脏、外周血检测CD4+CD25+ / CD4+ T淋巴细胞比率。 主要观察指标：①淋巴细胞增殖体系中CD4+CD25+/CD4+比率的变化。②SD大鼠胸腺、脾脏、外周血CD4+CD25+/CD4+比率的变化。 结果: ①体外淋巴细胞共培养体系中,1∶10组T细胞亚群CD4+ CD25+ / CD4+细胞百分率较增殖组显著升高（P < 0.01）。②体内输注间充质干细胞达5×109 L-1的受体鼠外周血和脾脏CD4+CD25+ / CD4+ T细胞比率上升,与输注PBS组相比有显著差异（P < 0.05）,而在胸腺中各组比率无明显差异。 结论：高浓度同种异基因大鼠间充质干细胞不仅可以在体外实验中增加CD4+CD25+ / CD4+ T细胞比率,静脉输入后仍具有相同作用。     

Specificity of regulatory CD4+CD25+ T cells for self-T cell receptor determinants

Although the phenotypic and regulatory properties of the CD4(+)CD25(+) T cell lineage (Treg cells) have been well described, the specificities remain largely unknown. We demonstrate here that the CD4(+)CD25(+) Treg population includes the recognition of a broad spectrum of human TCR CDR2 determinants found in the germline V gene repertoire as well as that of a clonotypic nongermline-encoded CDR3beta sequence present in a recombinant soluble T cell receptor (TCR) protein. Regulatory activity was demonstrated in T cell lines responsive to TCR but not in T cell lines responsive to control antigens. Inhibitory activity of TCR-reactive T cells required cell-cell contact and involved CTLA-4, GITR, IL-10, and IL-17. Thus, the T-T regulatory network includes Treg cells with specificity directed toward self-TCR determinants.     

当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠CD34+细胞及其Fas抗原表达的影响

背景：前期实验已证实当归注射液能改善再生障碍性贫血小鼠骨髓微环境，促进造血细胞增生。能增加细胞周期蛋白D2表达，促进细胞从G1→S期的转换。 目的：拟证实当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠CD34+细胞及其Fas抗原表达的影响。 设计、时间和单位：完全随机区组设计的细胞分子学实验，于2005-11/2006-04在武汉大学人民医院儿科研究所进行。 材料：选用8~12周龄雌性(H-2a 、MLSb)Balb/c小鼠作为受体，制作再生障碍性贫血模型。选用DBA/2小鼠（H-2a 、MLSa）8~10周龄作为供体。 方法：将雌性Balb/c小鼠随机分为3组：对照组、模型组和治疗组，每组8只。模型组和治疗组动物建立再生障碍性贫血模型。对照组不经照射。于造模当天开始，模型组和对照组腹腔注射无菌生理盐水10 mL/（kg•d），治疗组腹腔注射当归注射液10 mL/（kg•d），1次/d，连续12 d。 主要观察指标：于第12天每只小鼠采集尾静脉血测外周血白细胞计数,取出股骨，计数骨髓单个核细胞。酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α表达水平，经流式细胞仪检测骨髓单个核细胞CD34+细胞及CD34+细胞Fas抗原表达。 结果：模型组和治疗组小鼠外周血白细胞及骨髓单个核细胞计数均明显低于对照组，治疗组明显高于模型组(P < 0.01)。模型组CD34+抗原表达水平明显低于对照组，治疗组CD34+抗原表达水平明显高于模型组(P < 0.01)，已接近对照组水平。对照组CD34+细胞Fas抗原表达最低，模型组Fas抗原表达明显升高，与对照组比较差异有显著性意义(P < 0.01)，表明细胞增殖受影响。治疗组Fas抗原的表达低于模型组(P < 0.01)。模型组小鼠肿瘤坏死因子α表达明显高于对照组，治疗组明显低于模型组 (P < 0.01)。 结论：当归注射液可能通过降低负调控因子肿瘤坏死因子α水平，减少细胞凋亡，促进再生障碍性贫血小鼠造血细胞的增殖。     

CD4+CD25+ regulatory T cells and CD1-restricted NKT cells do not mediate facial motoneuron survival after axotomy

CD4+ T cells rescue facial motoneurons (FMN) from axotomy-induced cell death. The objective of this study is to determine if the CD4+ T regulatory subsets, CD4+CD25+ T or CD1d-restricted NKT cells are critical for FMN survival after facial nerve axotomy. Surviving FMN within facial motor nuclei from axotomized and control sides 4 weeks after axotomy were counted to determine percent FMN survival. Data generated by applying this paradigm to recombination activating gene-2-deficient mice reconstituted with CD4+ T cells depleted of CD4+CD25+ T cells and to CD1-/- mice, deficient in CD1d-restricted NKT cells, suggest that neither regulatory CD4+ T subset is critical for FMN survival.     

Opioid maintenance therapy restores CD4+ T cell function by normalizing CD4+CD25(high) regulatory T cell frequencies in heroin user

There is an increasing body of evidence that heroin addiction is associated with severe alterations in immune function, which might contribute to an increased risk to contract infectious diseases like hepatitis B and C or HIV. However, the impact of heroin consumption on the CD4(+) T cell compartment is not well understood. Therefore, we analyzed the frequency and functional phenotype of CD4(+) T cells as well as immune-suppressive CD4(+)CD25(high) regulatory T cells (Tregs) isolated from the peripheral blood of opiate addicts currently abusing heroin (n=27) in comparison to healthy controls (n=25) and opiate addicts currently in opioid maintenance treatment (OMT; n=27). Interestingly, we detected a significant increase in the percentage of CD4(+)CD25(high) Tregs in the peripheral blood of heroin addicted patients in contrast to patients in OMT. The proliferative response of CD4(+) T cells upon stimulation with anti-CD3 and anti-CD28 antibodies was significantly decreased in heroin users, but could be restored by depletion of CD25(high) regulatory T cells from CD4(+) T cells to similar values as observed from healthy controls and patients in OMT. These results suggest that impaired immune responses observed in heroin users are related to the expansion of CD4(+)CD25(high) Tregs and more importantly, can be restored by OMT.     

Impairment of circulating CD4+CD25+ regulatory T cells in patients with chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy

Abstract   Chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy (CIDP) is an immune-mediated peripheral nervous system disease. CD4⁺CD25⁺ T regulatory cells (Tregs) have been unequivocally shown to be critical in maintaining immune tolerance and preventing auto-immune diseases by suppressing self-reactive T cells. Thus, we hypothesized that the numbers and/or the function of Tregs would be deranged during the progressive or relapse phases of CIDP. The number of Tregs was determined by flow cytometry according to their characteristic CD4⁺CD25^high membrane phenotype. Functional characterization of Tregs was analyzed by suppression of proliferation and secretion of cytokines by co-cultured effector CD4⁺CD25⁻ T cells. FOXP3 message expression level was assessed by quantitative real-time polymerase chain reaction. The results showed significant reduction in both the number and the suppressive function of Tregs in the patients with CIDP compared with healthy controls. Also, Tregs isolated from CIDP patients expressed lower levels of FoxP3 mRNA. During the progressive or the relapsing phases of CIDP, the number of Tregs was reduced, and the suppressive function of them decreased. These findings may be helpful to our understanding of the possible role of Tregs in the pathogenesis of CIDP.