呼吸道合胞病毒感染患儿免疫功能变化及PBL体外表达IL－2R的动态观察

探讨７２例确诊呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）特异性血清抗体及鼻咽分泌物脱落细胞中ＲＳＶ抗原阳性患儿急性期及恢复期Ｔ淋巴细胞亚群，血清ＩｇＧ、ＩｓＭ、ＩｇＡ及ＩＬ－２Ｒ的活性表达，动态观察了呼吸道合胞病毒感染患儿急性期、恢复期和正常对照组外周血淋巴细胞经ＰＨＡ刺激后，于不同时间（２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ）细胞膜上ＩＬ－２Ｒ的活性表达。结果表明，抗体效价恢复期较急性期升高４～１２８倍，病例组急性期ＣＤ３、ＣＤ１６、Ｂ细胞升高，ＣＤ４／ＣＤ８的比值下降，ＩｇＧ、ＩｇＡ均降低，而ＩＬ－２Ｒ的活性表达呈下降趋势。此结果有助于探讨ＲＳＶ感染患儿的免疫紊乱发生机制。     

培养的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体的基因表达及调节

在培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压ＷＫＹ大鼠的主动动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）模型，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，分别检测ＡＳＭＣ中碱性成纤维细胞生长因子（ｈＦＧＦ）和血管紧张素Ⅱ（ＡＮＧⅡ）Ｉ型受体（ＡＴ１Ｒ）的基因表达。结果表明：ＳＨＲＡＳＭＣ中ｈＦＧＦ基因的基础表达和ＡＮＧⅡ刺激后的表达水平元旦明显高于ＷＫＹ大鼠；ｂＦＧＦ（１０ｎｍ／ｍｌ）对两种     

表皮生长因子及其受体在食管癌中的表达

目的 研究表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）在食管鳞状细胞癌中的表达。方法 用免疫组织化学ＡＢＣ法分析并研究染色结果与病理改变之间的关系。ＥＧＦ染色,以正常人颌下腺作为阳性对照。ＥＧＦＲ以正常人胎盘组织为阳性对照。ＥＧＦ和ＥＧＦＲ染色一抗的浓度分别为１：２００,１：１００,４℃孵育４８ｈ。结果 ＥＧＦ强阳性１８例,弱阳性１６例,ＥＧＦＲ强阳性１８例,弱阳性１６例。ＥＧＦ和ＥＧＦＲ的表达分为     

造血生长因子促进RV介导LacZ—Neo^R基因在人骨髓造血细胞中 …

目的：本文探索了不同组合的造血生长因子ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６对逆转录病毒（ＲＶ）介导的ＬａｃＺ－Ｎｅｏ＾Ｒ双标志基因转染人骨髓造血细胞转染效率、表达水平的影响及其相关机理。方法：采用ＲＶ转染人骨髓非粘附造血细胞（ＮＡＢＭＣ）及经ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６不同组合预激４８ｈ后的ＮＡＢＭＣ。经荧光素二－β－Ｄ－半乳糖呋喃苷脂（ＦＤＧ）标记的半乳糖苷酶、Ｇ４１８＾ＲＣＦＵ－ＧＭ及ＰＣＲ／Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎ－     

造血生长因子促进RV介导LacZ-NeoR基因在人骨髓造血细胞中转染的机制

目的：本文探索了不同组合的造血生长因子ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６对逆转录病毒（ＲＶ）介导的ＬａｃＺ－ＮｅｏＲ双标志基因转染人骨髓造血细胞转染效率、表达水平的影响及其相关机理。方法：采用ＲＶ转染人骨髓非粘附造血细胞（ＮＡＢＭＣ）及经ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６不同组合预激４８ｈ后的ＮＡＢＭＣ。经荧光素二－β－Ｄ－半乳糖呋喃苷脂（ＦＤＧ）标记的半乳糖苷酶、Ｇ４１８ＲＣＦＵ－ＧＭ及ＰＣＲ／Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测ＮｅｏＲ和ＬａｃＺ基因的表达。结果：早期造血生长因子（ＨＧＦｓ）的预激明显改善了ＲＶ介导的ＬａｃＺ－ＮｅｏＲ基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,ＳＣＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６＞ＳＣＦ＋ＩＬ３＞ＩＬ３＋ＩＬ６＞ＳＣＦ＋ＩＬ６。氚标记脱氧胸苷（３Ｈ－ＴｄＲ）自杀及５－溴脱氧尿苷－碘化丙啶（ＢｒｄＵ－ＰＩ）双标流式细胞仪（ＦＣＭ）检测显示,ＨＧＦｓ预激后人骨髓造血细胞及ＣＦＵ－ＧＭ的Ｓ期比例显著提高。结论：ＳＣＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６的联合预激可显著改善ＲＶ介导的外源基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,这可能与ＨＧＦｓ预激后明显提高人骨髓造血细胞及ＣＦＵ－ＧＭ的Ｓ期比例密切相关     

cAMP,cGMP在大鼠心肌细胞bFGF基因表达调节中的 …

目的：研究ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ在心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达调节中的作用。方法：分离培养大鼠心肌细胞，加入８－溴－ｃＡＭＰ的硝普钠，升高细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度，用原位杂交及免疫细胞化学的方法观察细胞内ｂＦＧＦ的表达，图象分析检测ｂＦＧＦ表达量的变化。结果：在培养中加８－溴－ｃＡＭＰ的心肌细胞，２４ｈ时ｂＦＧＦ ｍＲＮＡ及蛋白表达均明显高于对照组，４８ｈ、７２ｈ仍然较强表达     

乳腺癌细胞雌激素受体的检测和雌孕激素对MCF—7细胞活性…

目的：探讨乳腺癌细胞雌激素受体（ＥＲ）的检测方法和雌孕激对ＭＣＦ－７乳腺癌细胞系活性的影响。方法：对２４例乳腺癌细胞悬液采用细胞酶联免疫吸附实验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附实验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测ＥＲ表达。并应用唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定雌孕激素对ＭＣＦ－７细胞活性的作用。结果：⑴Ｃ－ＥＬＩＳＡ法实验组ＥＲ表达明显高于对照组，差异有显著性意义；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的１２例乳腺癌中，Ｅ     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其传递途径

本文观察了低氧对离体培养成年牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）＾３Ｈ－ＴｄＲ参入的影响，并用异搏定、Ｈ７、ＰＭＡ和ＥＧＦ进行干预实验，对ＭＳＣ增殖中信息传递途径作了初探。结果显示：（１）缺氧２４ｈ，ＰＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入显著增高。（２）异搏定及Ｈ７显著降低低氧Ｈ－ＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入，而ＰＭＡ及ＥＧＦ显著增加ＨＳＭＣ＾３ＨＴｄＲ参入。（３）Ｈ－ＳＭＣ对ＰＭＡ和ＥＧＦ反应强于常氧Ｎ－ＳＭＣ；     

乳腺癌细胞雌激素受体的检测和雌孕激素对MCF-7细胞活性的作用

目的：探讨乳腺癌细胞雌激素受体（ＥＲ）的检测方法和雌孕激素对ＭＣＦ－７乳腺癌细胞系活性的影响。方法：对２４例乳腺癌细胞悬液采用细胞酶联免疫吸附实验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附实验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测ＥＲ表达。并应用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定雌孕激素对ＭＣＦ－７细胞活性的作用。结果：（１）Ｃ－ＥＬＩＳＡ法实验组ＥＲ表达明显高于对照组，差异有显著性意义；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的１２例乳腺癌中，ＥＲ阳性１０例，阴性２例。（２）低浓度的雌激素对ＭＣＦ－７细胞的活性有加强作用，高浓度雌激素明显抑制其活性；低浓度的孕激素无明显的作用，高浓度孕激素则具有明显抑制作用，低浓度雌、孕激素共同作用时，对ＭＣＦ－７无明显抑制和加强作用，高浓度时其活性明显增加，增加程度低于单独雌激素，但稍高于孕激素对ＭＣＦ－７的作用。结论：在特异性和敏感性上，Ｃ－ＥＬＩＳＡ法检测ＥＲ优于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，是一种可行定量检测ＥＲ的方法，雌激素紊乱可以导致乳腺癌的发生。     

rhGM-CSF cDNA直接注射小鼠骨骼肌的体内表达研究

将外源基因直接注入动物体内并获得表达，是近几年发展起来的一种新的基因疗法。该方法操作简便，临床易于接受。天然ＧＭ－ＣＳＦ在体内产生的量极少，本研究将ｈＧＭ－ＣＳＦ基因直接注入小鼠体内，以使小鼠体内产生自身所需要的天然ｈＧＭ－ＣＳＦ。首先将ＰＣＲ扩增的ｈＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ片段平端插入真核表达质粒ｐＣＤＳ中，构建成重组质粒ｐＣＧＩ；然后采用电击法转染ＣＯＳ－７细胞，ＥＬＩＳＡ法检测结果显示转染后２４，４８，７１和９６小时细胞上清有ｈＧＭ－ＣＳＦ的表达分泌。说明重组质粒ｐＣＧＩ能表达分泌ｈＧＭ－ＣＳ…     

L-精氨酸对大鼠血管损伤后内膜增生及相关细胞周期调控基因表达的影响

目的:研究L-精氨酸(L-Arg)对大鼠血管损伤后内膜增生及相关细胞周期调控基因表达的影响。方法:大鼠分为假手术组,球囊损伤组(又分为术后48h、7d和14d亚组)及球囊损伤+L-Arg组。取各组实验动脉段测新生内膜面积,并采用免疫组化及计算机图像分析法测细胞周期依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E(cyclinE)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:球囊损伤后14d组的血浆NO水平低于假手术组(P＜0.01),CDK2、cyclinE及PCNA均于球囊损伤术后48h在中膜表达,第7d、14d在内膜表达,中膜几无表达,随着内膜增厚表达水平上升。与球囊损伤后14d组相比,球囊损伤+L-Arg组的血浆NO水平增高(P＜0.01),新生内膜面积少59.1%(P＜0.01),CDK2、cyclinE及PCNA的阳性表达指数分别低36.1%,46.3%和76.2%(P均＜0.01)。结论:L-Arg可有效抑制血管损伤后内膜增生,其机制可能与逆转CDK2、cyclinE及PCNA的过表达从而抑制血管平滑肌细胞增殖有关。     

大鼠血管球囊损伤促进血小板活化、凝血酶受体及血管紧张素Ⅱ1型受体的mRNA表达

目的该研究通过建立大鼠主动脉内皮球囊损伤模型，观察血小板活化、凝血酶受体及血管紧张素Ⅱ1型受体的变化。方法将大鼠随机分为对照组(n=24)和手术组(n=24)，并于术后3、7、14和28d取主动脉，通过组织学检查、放射免疫法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测血管球囊损伤后内膜增生的过程、血小板表面GMP-140的数目、血管AT1受体和凝血酶受体mRNA表达的变化。结果①凝血酶受体mRNA在正常血管组织表达极弱，球囊损伤术后3d已显著增加，术后14d达峰值，术后28d开始下降。②AT1受体mRNA于术后3d明显增高，并持续至术后14d，术后28d恢复至对照水平。③GMP-140于术后3d明显升高，术后7d开始下降。④内皮损伤术后3d已有增殖的血管平滑肌细胞(VSMC)移行至内膜层，术后7d内膜开始增生，术后14d VSMC的增殖及内膜增生更为明显，术后28d VSMC的增殖明显减弱，细胞外基质增加，内膜继续增生。结论血小板活化、凝血酶受体和AT。受体mRNA表达增加参与了血管内皮损伤后内膜增生的过程。     

脑缺血再灌注损伤的海马神经元对Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

目的：凋亡调控基因在脑缺血再灌后海马神经元的表达。方法：采用免疫组织化学的方法，观察 昆明小鼠双侧颈总动脉结扎7min后不同再灌时间组(24h组、48h组、72h组、7d组、14d组)海马CAl区神经元Bax、Bcl-2和Caspase-3的活性形式CM1的免疫反应活性。结果：Bax和CM1阳性神经元数在48h组最多，与其他各组相比差异有显著性(P＜0．01)，72h组明显下降，14d组完全消失；而Bcl-2阳性神经元数在48h组增多(与24h组相比，P＜0．01)，72h组下降，7d组再次上升(与72h组相比，P＜0．01)，14d组最多(与48h组相比，P＜0．01)。在24h、48h、72h、7d组，Bax阳性神经元多于Bcl-2阳性神经元(P＜0．05)，14d组则相反。结论：Bax和caspase-3在脑缺血再灌早期表达增强，然后下降以至消失，Bcl-2于再灌后期表达增强。Bax表达上调可能与Caspase-3激活相关。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠 Nogo-AmRNA的表达

为观察 Nogo-A m RNA在脑缺血再灌注后的动态变化 ,探索其在大脑皮质及纹状体神经元表达的意义及作用 ,应用原位杂交方法在大鼠局灶性大脑中动脉阻塞动物模型上观察脑缺血再灌注时大鼠 Nogo-A m RNA的表达。结果显示 :脑缺血再灌注大鼠缺血侧大脑皮质 Nogo-A m RNA的表达与假手术组比较明显增加 ,在 12 h内达高峰 (P<0 .0 1) ,2 4h时下降 ,48h时又升高 ,出现第二个高峰 ,然后逐渐降低 ,7～ 14 d降至基础水平 ;大脑纹状体脑缺血 1h后再灌流 ,2 h时 Nogo-A m RNA的表达明显增加 ,之后逐渐下降 ,到 2 4h时接近基础水平 ,48h时又升高 ,以后表达水平下降 ,3～ 14 d时 ,接近基础水平。结果提示 ,脑缺血后内源性 Nogo-A m RNA的表达呈动态性变化 ,参与了脑缺血后神经元的再生过程的调节。     

大鼠脑缺血再灌注后脑组织PAR-1表达与MDA含量的相关性研究

目的：观察脑缺血再灌注（cerebral ischemia reperfusion,CIR）后脑组织中PAR-1的表达与MDA含量变化之间的关系。方法：40只SD大鼠随机分缺血再灌注（CIR）后3h、6h、12h、1d、2d、3d、7d及假手术组8个组每组5只大鼠。于脑缺血2h后再灌注相应时间断头取脑,免疫组化法和脑组织匀浆法观察蛋白酶激活受体-1（protease—activated receptor-1,PAR-1）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）变化情况。结果：随着CIR时间延长,PAR-1表达和MDA含量增多,呈正相关关系（r=0．844,P〈0．05）。结论：CIR后PAR-1表达增多可加重脑损伤。     

Implications of proprotein Convertase 5 (PC5) in the arterial restenotic process in a porcine model.

INTRODUCTION: Convertases (PCs), especially PC5, have been detected in various layers of atherosclerotic and injured arteries. We postulate that PCs could be important enzymes in vascular disease thus studied PC5 expression in a porcine balloon and stent coronary arterial vascular injury model. METHODS: Immunohistochemistry and in situ hybridization of slides of porcine arteries from paraffin blocks were studied 1, 7, 14 and 28 days post injury. RESULTS: Immunohistochemistry studies show expression of PC5 in control artery endothelial cells, weak medial smooth muscle cell (SMC) staining and strong staining in the small nerves of the adventitia. At 7, 14 and 28 days postinjury, there is strong positive PC5 staining of the neointimal cells and the adventitial vasa vasora and myofibroblasts. Colocalization immunohistochemistry confirms the smooth muscle staining properties of the myofibroblast-like cells in both these locations. Single-label immunohistochemistry studies show the same cells to stain strongly positive with TGF-B, PDGF, matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and MMP-9. CONCLUSION: PC5 may be involved in the process of arterial injury via its effect on growth factors (GFs) and mediators. These preliminary observations suggest that the convertases, especially PC5, represent a target for future study in the process of arterial injury.     

组织型纤溶酶原激活物在兔髂动脉损伤后平滑肌细胞内的表达

为进一步探讨动脉粥样硬化形成及血管成形术后再狭窄的发生机制，应用光镜、显微-微机图像分析、发色底物显色法活性测定、原位分子杂交等技术，研究兔血管损伤后不同时间组织型纤溶酶原激活物（t-PA）在平滑肌细胞（SMC）的表达。研究发现：血管损伤后4天t-PA活性明显增加[（7．50±0．05）×10-2IU／mg蛋白]，此时SMC开始从中膜向内膜迁移。损伤后7天，t-PA活性降至近于正常水平[（2．50±0．37）×10-2IU／mg蛋白]。正常血管壁t-PAmRNA杂交阴性，血管损伤后4天，内弹力板下及内膜SMC有大量t-PAmRNA表达，7天时仅表达少量。说明t-PA可能在血管损伤后的SMC增生和迁移过程中起重要作用。     

Hypoxia-induced inhibition of tropoelastin synthesis by neonatal calf pulmonary artery smooth muscle cells.

Animals chronically exposed to hypoxia develop characteristic structural changes in the pulmonary arterial vasculature including cell hypertrophy, hyperplasia, and increased deposition of extracellular matrix proteins. The medial smooth muscle cells' (SMC) increase in tropoelastin mRNA expression and elastin deposition as determined by in situ hybridization and histologic examination appears to contribute significantly to this increase in matrix protein accumulation. The primary stimulus for the increased tropoelastin production, which persists in vitro, is unknown but mechanical forces and hypoxia seem to play a role. In order to determine the direct effects of hypoxia on tropoelastin production by pulmonary artery SMC, cultured neonatal bovine pulmonary artery SMC were exposed to 3%, 10%, and 21% O2 concentrations for 48, 72, and 120 h and soluble tropoelastin was measured by direct immunoassay. Tropoelastin mRNA levels were also determined by Northern and slot blot analysis after 48 h of incubation under hypoxic conditions. SMC cultured in 3% and 10% O2 for 120 h showed dose-dependent decreases (11-fold and 2-fold, respectively) in measured tropoelastin levels compared with SMC cultured in 21% O2 conditions. This decrease was not due to cell damage or accumulation of toxic metabolites while under hypoxic conditions nor to a change in tropoelastin partitioning between the cell and media. Tropoelastin mRNA levels were also decreased under hypoxic conditions. Secreted, cell layer, and total protein synthesis determined by L-[3H]leucine incorporation again showed a dose-dependent decrease under hypoxic conditions but not to the same extent as tropoelastin production.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

盐酸芬戈莫德抑制颈动脉球囊损伤后的血管炎症反应

背景：炎症因子在球囊损伤后血管狭窄的过程中起到关键作用,1型1-磷酸鞘氨醇受体可以增强炎症因子的表达,促进这一病理过程的发生发展。目的：观察大鼠颈动脉球囊损伤后炎症因子及1型1-磷酸鞘氨醇受体的表达变化和盐酸芬戈莫德减轻炎症反应的作用。方法：60只SD大鼠随机分为4组。空白对照组和阴性对照组仅分离左侧颈总动脉,结扎左侧颈外动脉;损伤组和药物干预组行左侧颈总动脉球囊损伤建立大鼠颈动脉损伤模型。阴性对照组与药物干预组以盐酸芬戈莫德1 mg/kg腹腔注射,空白对照组与损伤组用等量生理盐水腹腔注射,于第3,7和21天取材。结果与结论：苏木精-伊红染色显示损伤组血管增生明显,药物干预组血管增生厚度明显减轻,空白对照组与阴性对照组血管形态基本正常。实时荧光定量PCR显示药物干预组第7天环氧合酶2、前列腺素E2 mRNA的表达水平显著低于损伤组(P < 0.05),损伤组和药物干预组环氧合酶2、前列腺素E2 mRNA在同一时间点的表达水平明显高于空白对照组与阴性对照组(P < 0.05);Western Blot显示的结果1型1-磷酸鞘氨醇受体的表达在损伤初期有较高的表达,损伤后期减少,特别是经过药物干预后蛋白表达进一步减少。结果提示盐酸芬戈莫德通过1型1-磷酸鞘氨醇受体调节环氧合酶-2、前列腺素E2mRNA的表达,抑制损伤血管的炎症反应,减轻损伤血管的狭窄。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：