基于Notch1信号通路调控巨噬细胞极化改善佐剂关节炎大鼠关节炎症的机制

目的：探讨Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号轴通过调控巨噬细胞向M2型极化对佐剂性关节炎（AA）大鼠炎症反应的影响。方法：大鼠随机分成3组（6只）：健康组（NC）、模型组（MC）及Notch1抑制剂组（FLI），在致炎后12 d开始给予药物，并于30 d后检测各组大鼠的关节炎指数（AI）、右后足关节肿胀度（E）；采用流式细胞仪测定CD80+和CD163+细胞在大鼠外周血巨噬细胞中的表达量；ELISA检测大鼠血清中IL-4、IL-10、IL-1β、及TNF-α的水平；Western Blot检测大鼠关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白的表达。结果：MC组AA大鼠的E及AI均明显高于NC组（P<0.01）;CD80+细胞的表达显著高于对照组（P<0.01），而CD163+细胞的表达显著低于对照组（P<0.01）;IL-1β、TNF-α表达水平明显升高（P<0.01）, IL-4、IL-10表达水平明显降低（P<0.01）;Notch1、RBP-Jκ、Jagged1、Hes1蛋白的表达量明显增加（P<...     

氟西汀对神经干细胞增殖和Notch1信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨Notch1信号系统在氟西汀促进神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖中的作用?方法:不同浓度的氟西汀干预神经干细胞,获取最适作用浓度?分别予γ泌肽酶抑制剂(DAPT)和氟西汀干预神经干细胞后,采用MTT检测神经干细胞的增殖,Western Blot法检测Notch1信号各因子的蛋白表达?结果:①不同浓度的氟西汀干预细胞48 h后,10 μmol/L?15 μmol/L和20 μmol/L组NSCs的活性高于0 μmol/L组;②与对照组相比,氟西汀组的细胞活性增高,DAPT组的活性降低;与氟西汀干预组相比,氟西汀+DAPT组细胞活性降低;③与对照组相比,DAPT组Hes1 和Hes5蛋白表达水平显著降低;与对照组相比,氟西汀组NICD?Hes1和Hes5蛋白表达水平显著增高;与氟西汀干预组相比,氟西汀+DAPT组的NICD因子?Hes1因子和Hes5因子蛋白表达水平均显著降低?结论:氟西汀促进神经干细胞的增殖;氟西汀可以上调Notch1信号系统的表达;氟西汀可能通过调控Notch1信号的传导促进NSCs的增殖?     

激活Notch1信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响

目的探讨转染人Notch1受体胞内段（NICD）质粒激活Notch1信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响及其可能机制。方法构
建带免疫荧光的NICD质粒与对照质粒,细胞转染后荧光激发显微镜下观察转染效率,Real-time PCR检测靶基因Hes1表达水
平变化;CCK-8法计算NICD质粒转染后胰腺癌细胞增殖的影响;caspase 3试剂盒检测NICD转染后凋亡通路关键酶caspase 3
活性的变化。结果荧光激发显示NICD转染效率在60%~80%之间;NICD转染可促进靶基因Hes1表达,提示激活Notch1信号
通路。NICD转染可显著促进胰腺癌细胞生长增殖;caspase 3活性在NICD转染后明显下降,差异均具有统计学意义。结论应
用NICD质粒转染激活Notch1信号通路活性可通过抑制凋亡而促进胰腺癌细胞生长增殖。
     

Notch1信号途径的激活及其对宫颈癌细胞凋亡的影响

目的探讨Notch1信号途径在宫颈癌细胞中的激活，并研究其对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法扩增入胎盘组织细胞内的全长NICD，并构建pcDNA3．1-NICD真核表达载体。通过脂质体转染宫颈癌细胞，筛选稳定表达NICD的宫颈癌细胞株。通过RT—PCR及Western blotting检测Notch1和Hes1基因的表达，并通过流式细胞仪观察其对宫颈癌细胞凋亡的影响。结果未处理及转染pcDNA3．1和pcDNA3．1-NICD的Hela细胞中均存在Notch1及Hes1基因的表达，表明该信号通路在Hela细胞中处于激活状态。然而，转染NICD的宫颈癌细胞株Notch1及Hes1的表达明屈升高，提示该通路可能在外源NICD的影响下处于过度激活状态。流式细胞仪检测结果显示，在未处理和转染pcDNA3．1的Hela细胞中，细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）；但与未处理的和转染pcDNA3．1的Hela细胞相比，稳定表达NICD的Hela细胞的细胞凋亡率明显增加（P〈0．01）。结论外源的NICD通过Notch1信号途径能引起宫颈癌细胞的凋亡，提示Notch1可能成为治疗宫颈癌的分子靶点。     

Notch信号通路经ROCK2对缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨Notch信号通路经ROCK2对大鼠心肌细胞缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞的凋亡影响。方法选择SD大鼠乳鼠180只,分为6组,检测Hes1的表达、心肌细胞活力、心肌细胞乳酸脱氢酶释放情况、心肌细胞凋亡情况以及NICD、Bcl2、Caspase3以及Hes1表达水平。结果 SI/R组OD值相比对照组明显下降(P0.05);Jagged1+SI/R组与SI/R组、对照组对比,存在明显差异(P0.05);Jagged+DAPT+SI/R组OD值与Jagged1+SI/R组对比,存在明显差异(P0.05);Jagged1组、DAPT组OD值与对照组对比,均未见显著差异(P0.05)。SI/R组、Jagged1+SI/R组、Jagged+DAPT+SI/R组的LDH释放率、细胞凋亡率相比对照组均有明显上升(P0.05);SI/R组、Jagged1+SI/R组、Jagged+DAPT+SI/R组经处理后的Notch1、Hes1、Bcl2均有显著下降,而Caspase3表达显著上升(P0.05)。结论 Notch信号通路在心肌缺血/再灌注的过程中发挥着重要调控作用,对诱导H9c2心肌细胞凋亡具有重要影响,且激活Notch信号通路能起到抗缺血/再灌注损伤的效果。     

慢性应激对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和bax、bcl-2表达的影响

目的：探讨慢性应激对心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响。方法：大鼠随机分为4组（每组12只）,正常对照组（A组）,假手术组（B组）,心肌梗死模型组（C组）,心肌梗死后慢性应激组（C组）;用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax和bcl-2蛋白表达。结果：（1）与A、B组比较,C、D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;A和B组心肌细胞凋亡指数比较无统计学差别;（2）与A、B组比较,C、D组心肌细胞bax和bcl-2蛋白表达均明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞bax蛋白表达明显增加,P〈0.01,而bcl-2蛋白表达明显减少,P〈0.01。结论：慢性应激可促进心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bax蛋白表达和下调bcl-2的蛋白表达有关。     

阈下电刺激对大鼠缺血心肌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的：探讨阈下电刺激对大鼠缺血心肌细胞凋亡及bcl-2和bax表达的影响.方法：Wistar大鼠随机分为假手术组、急性心梗组、阈下电刺激组,假手术组手术不结扎,置入电极不给予电刺激;急性心梗组和阈下电刺激组采用左冠状动脉前降支结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,急性心梗组仅植入电极,不给予电刺激,阈下电刺激组在建立心肌梗死模型后,给予25 Hz、0.3V阈下电刺激,TUNEL法检测3组大鼠心肌细胞凋亡,免疫组化和RT-PCR的方法检测心肌bcl-2及bax蛋白和mRNA的表达.结果：（1）与假手术组比较,急性心梗组、阈下电刺激组大鼠心肌细胞凋亡指数显著升高（P＜0.05）;与急性心梗组比较,阈下电刺激组大鼠心肌细胞凋亡指数降低（P＜0.05）.（2）与假手术组比较,急性心梗组、阈下电刺激组大鼠心肌细胞bcl-2和bax蛋白和mRNA的表达显著升高（P＜0.05）;与急性心梗组比较,阈下电刺激组大鼠心肌细胞bcl-2蛋白和mRNA的表达显著升高,而bax基因表达显著降低（P＜0.05）.结论：阈下电刺激能显著减少大鼠心肌梗死后缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bcl-2表达和下调bax表达有关.     

益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达的影响*

目的 观察两种中药复方对脑缺血再灌注大鼠海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法 0.26mm尼龙线,造成大鼠右侧大脑中动脉阻塞,采用随机分组法,分入假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组。脑缺血2h后,分别于再灌注7d和14d取缺血侧海马和皮质。采用Western Blot检测海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组Jagged1、Notch4和Hes1蛋白7d和14d表达均显著上调（P<0.05）;与模型组比较,益气活血方组和补肾生髓方组Jagged1、Notch4和Hes1蛋白7d和14d表达表达均显著下调（P<0.05）;与补肾生髓方组比较,益气活血方组Jagged1、Notch4蛋白7d和14d表达表达均显著下调（P<0.05）。结论 益气活血方和补肾生髓方能通过下调Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达,调节Notch信号通路,影响脑缺血后内源性神经干细胞增殖分化,促进其向神经元分化。     

缺血再灌注前后人心肌组织中Notch信号通路相关分子的变化

目的探讨心脏手术过程中,人心肌组织缺血再灌注后Notch信号分子表达的变化。方法 20例接受体外循环心脏手术的患者,于体外循环前和心脏复跳后15 min后获取心肌样品,以Western Blotting检测Notch信号途径相关受体Notch1胞内区(NICD)和下游分子Hes1表达变化,分析NICD和Hes1在心脏缺血再灌注前后的变化。结果缺血再灌注后心肌组织NICD和Hes1的表达明显减弱,缺血再灌注前后NICD的western blotting信号强度与β-actin信号强度比值分别为:(4.28±0.45)和(1.55±0.36),P0.01;Hes1信号强度与β-actin信号强度比值分别为:(4.61±0.52)和(1.31±0.32),P0.01。结论缺血再灌注过程导致心肌组织Notch途径相关受体Notch1胞内区和下游分子Hes1表达下降,提示Notch信号途径可能在人心肌缺血再灌注损伤中发挥调控作用。     

地黄多糖对过表达Notch1（NICD）大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化及增殖的影响

目的：探讨地黄多糖对过表达Notch1（NICD）大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导分化及增殖的影响。方法以P3～P5代大鼠B MS C s为研究对象,将细胞随机分为正常对照组、空载体组和转染组。脂质体法转染Notch1（NICD）过表达真核载体,转染后以地黄多糖（0．2 mg／mL）进行诱导分化,转染和诱导后行细胞一般状态观察,采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测Notch1（NICD）蛋白、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达,CCK-8检测细胞存活率。结果转染后转染组细胞似神经胶质样细胞形态改变,诱导后各组细胞似神经元样细胞形态结构,转染组显著。转染组Notch1和GFAP蛋白表达阳性率显著高于正常对照组和空载体组（P＜0．05）,而NSE在3组间差异无统计学意义（P＞0．05）;诱导后转染组NSE阳性率高于正常对照组和空载体组（P＜0．05）。转染后与诱导后比较,转染组Notch1表达阳性率降低（P＜0．05）,且正常对照组与空载体组亦降低（P＜0．05）;转染组NSE表达阳性率明显升高（P＜0．01）,且正常对照组与空载体组明显升高（P＜0．01）;转染组GFAP表达阳性率明显降低（P＜0．01）。CCK-8检测显示,地黄多糖诱导后,随时间延长各组细胞存活率略呈下降趋势。结论转染高表达Notch1（NICD）大鼠BMSCs具有向神经胶质样细胞分化倾向,地黄多糖显著抑制Notch1蛋白的表达,诱导BMSCs向神经元样细胞分化。     

Notch1和Notch2对胰腺癌HPAC细胞中Hes家族靶基因的不同调控作用

目的研究Notch1、Notch2受体对胰腺癌HPAC细胞Notch信号通路下游Hes家族靶基因的影响。方法运用siRNA干扰技术分别干扰HPAC细胞中Notch1和Notch2基因,用Western blotting法检测Notch1和Notch2的干扰效率,用real-time PCR检测siRNA干扰后Notch下游靶基因Hes1、Hes2、Hes4和Hes6的mRNA表达水平;同时用Western blotting法检测Hes1的蛋白表达变化。结果与空白对照组(1.000±0.019)和siRNA对照组(0.908±0.039)相比,Notch1-siRNA转染组(0.124±0.005)的Notch1蛋白表达量显著降低。Notch1敲减降低了Hes1和Hes6的mRNA表达,Hes1与空白对照组和siRNA对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Hes6与空白对照组和siRNA对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),对Hes2和Hes4的mRNA则没有影响。Hes2与空白对照组siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);Hes4与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组(1.000±0.015)和siRNA对照组(0.990±0.017)相比Notch2-siRNA转染组(0.350±0.009)的Notch2蛋白表达量显著降低。Notch2敲减降低了Hes1的mRNA表达,Hes1与空白对照组和siRNA对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而对Hes2、Hes4和Hes6的表达没有影响,Hes2与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);Hes4与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);Hes6与空白对照组和siRNA对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Notch1和Notch2下调均不能引起Hes1蛋白水平变化。结论 HPAC细胞中Notch1的靶基因是Hes1和Hes6,而Notch2的靶基因是Hes1,提示不同Notch家族成员调控的靶基因有交叉但是不同。     

糖尿病心肌梗死大鼠TGF -β1和CTGF表达变化及HGF的干预作用

摘要目的：探讨糖尿病心肌梗死大鼠心肌TGF-β1和CTGF表达的变化以及肝细胞生长因子（HGF）对其影响。方法：6周龄Wistar大鼠90只随机分为5组：对照组、糖尿病假手术组、心肌梗死组、糖尿病心梗组和HGF治疗组．每组备18只。以高糖高脂饲料＋腹腔注射链尿佐菌素（STZ）诱导建立2型糖尿病大鼠模型后再建立急性心肌梗死（AMI）模型。糖尿病模型大鼠成模后次日,HGF治疗组每天皮下注射HGF,分别观察4周及8周,检测各组心肌组织TGF-β1、CTGF的mRNA及蛋白表达情况：：结果：对照组大鼠的TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平表达微弱;糖尿病心梗组4周后TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平表达明显升高（P〈0．05）,8周后表达进一步升高（P〈0．01）;给予HGF治疗4周后,可以部分降低TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平的表达（P〈0．05）;给予HGF治疗8周后,可以明显降低TGF-β1、CT-GFmRNA及蛋白水平的表达（P〈0．01）。结论：糖尿痛心肌梗死大鼠心肌TGF-β1、CTGF的表达明显增高．HGF治疗后能够降低TGF-β1、CTGF的表达,对糖尿病心肌梗死后心肌纤维化的发生有抑制作用。     

环氧化酶抑制剂对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的作用及机制研究

目的 探讨阿司匹林和塞来昔布对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法 体内实验:AAC建立压力超负荷性心肌肥厚大鼠模型,阿司匹林和塞来昔布分别灌胃8、10和12周。测量动脉血压和左心室质量指数,超声心动图检测心脏结构和功能变化,免疫组化和qRT-PCR法检测Notch1和Hes1的表达水平。体外实验:机械牵张诱导H9c2心肌细胞肥大,Western blot法检测药物干预后Notch1和Hes1蛋白的表达以及siRNA-Notch1转染后ANP、Notch1和Hes1蛋白的表达水平。结果 体内实验:给药后动脉血压和左心室质量指数较模型组降低;与模型组比较,给药10、12周后左心室射血分数、短轴缩短率升高,舒张和收缩末期的左心室内径、容积降低;给药后Notch1和Hes1蛋白和mRNA表达较模型组升高。体外实验:药物干预后Notch1和Hes1蛋白表达较MS组升高;siRNA-Notch1转染后ANP蛋白表达升高,Notch1和Hes1蛋白表达降低。结论阿司匹林和塞来昔布通过上调Notch1信号通路对大鼠压力超负荷性心肌肥厚发挥保护作用。     

丹酚酸B对心肌梗死模型大鼠心肌的保护作用及其分子机制

目的：观察丹酚酸B（Sal B）对心肌梗死模型大鼠心肌的保护作用,阐明Sal B干预大鼠心肌梗死的分子机制。方法：将大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药实验组（AsA组和BHT组）和观察药实验组（Sal B组）,采用冠状动脉结扎法构建大鼠心肌梗死模型。各实验组大鼠均按120 mg/kg剂量腹腔注射给药,模型组与对照组大鼠注射相同剂量的蒸馏水,连续7 d。测定各组大鼠血清中肌酸磷酸激酶（CK）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）的活性,并利用ELISA法分析各组大鼠血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达水平;流式细胞术检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,分光光度法检测自由基清除率。结果：与对照组比较,模型组大鼠血清CK、AST和LDH活性明显升高（P<0.01）;与模型组比较,阳性药实验组和Sal B组大鼠血清CK、AST和LDH活性明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,模型组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显增加（P<0.01）;与模型组比较,Sal B组大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著降低（P<0.01）;而AsA和BHT组上述3种因子水平无明显变化（P>0.05）。与对照组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡率明显增加（P<0.01）;与模型组比较,Sal B组大鼠心肌细胞凋亡率明显降低（P<0.01）;而AsA和BHT组大鼠心肌细胞凋亡率无明显改变(P>0.05)。不同浓度的Sal B均能提高1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的清除率（P<0.05）,且20～100 mg/L Sal B对自由基的清除率均高于AsA和BHT（P<0.05或P<0.01）。结论：Sal B对大鼠冠状动脉结扎诱发实验性心肌梗死具有一定的保护作用,可以有效抑制心肌细胞凋亡,其作用机制可能与抑制免疫炎症因子的分泌和自由基清除作用有关。     

硫化氢通过抑制ROS介导的内质网应激改善脓毒症心肌损伤的研究

  目的  探讨硫化氢（H₂S）对脓毒症心肌损伤中活性氧（ROS）介导的内质网应激的影响。  方法  采用盲肠结扎穿刺术（CLP）诱导SD大鼠脓毒症模型,将大鼠随机分成假手术（sham）组、脓毒症（CLP）组、脓毒症+硫氢化钠（NaHS）（CLP+NaHS）组。超声心动图观察各组大鼠左心室功能,检测大鼠血浆H₂S的水平;通过乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平检测以及ROS染色评估大鼠心肌氧化应激水平;HE染色观察大鼠心肌组织形态变化,透射电子显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构;Western blot检测细胞内源性硫化氢合成酶半胱硫氨酸-γ-裂解酶（CSE）、3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-MST）表达变化,内质网应激标志性蛋白:磷酸化（p）-激酶蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、p-细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、p-肌醇需要酶1α（IRE1α）、活化转录因子（ATF）4和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达变化;TUNEL染色观察大鼠心肌细胞凋亡变化。   结果  脓毒症大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）降低（P<0.05）,血浆H₂S降低（P<0.05）,血浆H₂S与LVEF和LVFS呈线性相关（r2=0.62、r2=0.64,P均<0.05）。脓毒症组大鼠ROS水平明显增强,LDH水平增高（P<0.05）,MDA表达增强（P<0.05）,GSH表达下降（P<0.05）;在HE染色中可见炎性细胞浸润,心肌细胞水肿,透射电子显微镜可观察到线粒体明显损伤,可见线粒体水肿,嵴结构溶解等情况;Western blot结果显示,CSE、3-MST表达水平有所下降（P<0.05）,内质网应激标志性蛋白p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、ATF4和CHOP蛋白表达水平升高（P<0.05）;TUNEL染色结果显示心肌细胞凋亡水平明显增加（P<0.05）。NaHS处理后,LVEF和LVFS升高（P<0.05）,血浆H₂S升高（P<0.05）。心肌氧化应激水平降低,HE与透射电镜显示心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻,CSE、3-MST水平升高（P<0.05）,p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、CHOP蛋白表达下降（P<0.05）,心肌细胞凋亡水平有所下降（P<0.05）。  结论  H₂S通过抑制ROS介导的内质网应激,减少脓毒症心肌细胞凋亡,从而改善脓毒症心肌功能障碍。     

全脑照射对大鼠海马区Notch 1信号通路的影响

目的 观察大鼠全脑照射后海马区Notch 1信号通路中Notch 1与下游因子Hes 1的表达变化。方法 单次10Gy全脑照射构建大鼠放射性脑损伤模型,于照射后1、3天、1、2周、1、2个月处死大鼠获取海马组织,采用real-time PCR和Western blot法检测海马组织Notch 1、Hes 1的表达变化,免疫组织化学染色法检测海马区新生神经细胞数。结果 相较对照组,大鼠全脑照射后Notch 1表达进行性下调;其下游因子Hes 1在照射后2周内表达无明显变化,而在照射1、2个月后表达显著下调（P<0.05）。在照射后1、2个月组中,海马区新生神经细胞数较对照组显著减少。结论 大鼠全脑照射后,海马区Notch 1信号通路活性显著下调,伴随着海马区神经再生显著抑制,提示Notch 1通路可能参与放射性脑损伤后神经再生的调控过程。     

阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p和下调Notch1/Hes1通路促进哮喘大鼠BMSCs归巢

目的 观察阳和平喘颗粒对哮喘miR-139-5p、Notch1/Hes1信号通路及骨髓源性间充质干细胞（BMSCs）归巢的影响。方法 50 只 SD 大鼠随机均分为 5 组：正常对照（NC）组、模型对照（MC）组、BMSCs 移植（BMSCs）组、BMSCs+地塞米松（BMSCs+DXM）组[地塞米松 0.0625 mg/ （kg·d）]、BMSCs+阳和平喘组[阳和平喘颗粒3.5 g/ （kg·d）]。采用卵清蛋白致敏激发建立大鼠哮喘模型,BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组大鼠在激发最后1 d经尾静脉移植入1×106/mL BMSCs悬液。NC组、MC组以生理盐水灌胃,药物干预组分别予相应药物灌胃,灌胃量为1 mL/100 g,均持续1周。HE染色观察肺组织病理形态学,流式细胞术检测肺组织中CXCR4蛋白表达,酶联免疫吸附法检测肺组织γ干扰素（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）表达。免疫荧光观察支气管上皮细胞CXCR4、Notch1、Hes1表达。RT-PCR法检测肺组织miR-139-5p、Notch1、Jagged1、RBP-J、Hes1基因表达,免疫印迹法检测肺组织 Notch1、Jagged1、Hes1 蛋白表达。结果 （1）与 NC 组比较,MC 组肺组织 CXCR4、IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达升高,INF-γ、miR-139-5p mRNA表达降低（P<0.05）;（2）与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA升高,IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达降低（P<0.05）;（3）与BMSCs组比较,BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA表达升高,IL-4、Notch1mRNA表达量降低（P<0.05）。结论 阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p,下调Notch1/Hes1通路,强化BMSCs归巢对Th2炎症反应的抑制作用。     

Calpain-1在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌中的表达及意义

目的：了解缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠心肌细胞凋亡和Calpain-1表达的变化。方法：采用改良的Rice法构建新生大鼠HIBD模型,64只大鼠随机分为对照组和HIBD后2、12、24 h及2、3、5、7 d组。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,并计数凋亡指数（AI）,RT-PCR法和Western blot法检测各组大鼠心肌中Calpain-1mRNA及蛋白活性的变化。结果：对照组偶见凋亡细胞,HIBD组凋亡细胞均明显增多（P〈0.01）,3 d达凋亡高峰（P〈0.001）,此后开始降低,7 d仍高于对照组（P〈0.001）。与对照组相比,Calpain-1mRNA于HIBD后12 h开始增高（P〈0.001）,2 d达到高峰,3～5 d表达量仍维持在较高水平（P〈0.001）;蛋白活性自HIBD后2 h增高（P〈0.05）,3 d达高峰（P〈0.001）后开始降低,7 d与对照组无统计学差异（P〉0.05）;Calpain-1 mRNA及蛋白活性均与AI呈直线正相关（r=0.786,P〈0.01;r=0.853,P〈0.01）。结论：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌中Calpain-1表达增强,且与细胞凋亡有关。     

脑缺血后处理对大鼠大脑海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4蛋白表达的影响

目的：探讨基于Notch1信号通路观察缺血后处理（CIP）对全脑缺血再灌注（I/R）大鼠海马区神经元中Cyclin D1和CDK4蛋白表达的影响,阐明其机制。方法：128只健康的雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/R组（改良的Pulsinelli四血管阻断法制作）、CIP组（在彻底再灌注之前进行反复3次的再通/阻断血管）和DAPT组（实施CIP之前3 h按10mg·kg^-1·d^-1腹腔注射DAPT）,每组32只。分别在缺血后6、24、48和72 h采用HE染色观察各组大鼠海马区神经元表现并计算存活率,免疫组织化学染色观察CyclinD1、CDK4和Notch1表达的细胞,Western blotting法观察各时间点大鼠海马区中Cyclin D1、CDK4和Notch1蛋白的表达水平。结果：HE染色,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区神经元结构损伤,各时间点海马区神经元存活率明显降低（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组相应时间点大鼠海马区神经元存活率明显升高（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组相应时间点大鼠海马区神经元存活率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学染色,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）,Notch1阳性细胞数明显增加（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4阳性细胞数增加（P<0.05）,Notch1阳性细胞数明显减少（P<0.05）。Western blotting法,与假手术组比较,I/R组大鼠海马区Notch1、Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平升高（P<0.05）;与I/R组比较,CIP组大鼠海马区Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Notch1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CIP组比较,DAPT组的Cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Notch1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：CIP对神经元的保护作用可能是通过提高Notch1蛋白活性和抑制Cyclin D1和CDK4蛋白实现的。