电场暴露抑制晶状体上皮细胞的增殖

目的 观察外源性电场对晶状体上皮细胞增殖行为的影响并研究其作用机制。方法将培养的晶状体上皮细胞暴露于场强为200mV／mm的直流电场48h，未受电场暴露的细胞作为对照。以细胞的密度、生长率和分裂指数评价其增殖能力，并通过流式细胞仪进行细胞周期分析和蛋白印记分析检测细胞周期调节蛋白的表达。结果细胞的增殖在电场中受到明显抑制，表现为细胞密度、生长率及分裂指数明显下降。电场暴露抑制细胞周期由G1期向S期的过渡，导致G1期阻滞。电场暴露细胞的cyclin—E表达明显降低，但Cdk2的表达不受影响，而cyclin—E／Cdk2复合物的抑制蛋白p27^kipl的表达明显增加。结论电场抑制晶状体上皮细胞的增殖，阻止细胞周期Gl／s期的过渡使细胞周期休止于G1期，这一作用是藉增加p27^kipl的表达和减少cyclin—E的表达而实现。     

电场暴露抑制晶状体上皮伤口的愈合

目的探讨电场暴露对晶状体上皮伤口愈合的作用。设计实验研究。研究对象原代培养的牛晶状体上皮细胞。方法钝头玻璃针戳刺原代培养的牛晶状体上皮细胞单层形成圆形微伤口,暴露于场强为200mV/mm的直流电场2h(n=37),未受电场暴露的伤口作为对照(n=29),由Leica图像分析系统测量伤后0h、1h和2h的伤口面积。用抗F-actin荧光抗体染色观察伤口细胞微丝骨架。主要指标伤口面积及细胞微丝骨架的排列。结果与对照伤口比较,电场暴露伤口愈合延迟,电场暴露伤口伤后2h的平均面积(19106μm2±2167μm2)明显大于未接受电场暴露的对照伤口(8555μm2±1911μm2)(t=2.942,P=0.0045)。对照伤口细胞微丝骨架呈向心性排列,电场暴露伤口细胞微丝骨架则沿伤缘呈“索状”排列。结论生理强度的外源性电场可抑制晶状体上皮伤口的愈合。     

榄香烯对人晶状体上皮细胞增生及细胞周期的影响

目的探讨中药单体榄香烯（Ele）对人晶状体上皮细胞株（HLE-B3）增生及细胞周期的影响。方法利用重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）诱导HLE-B3增生,将80mg/L的Ele作用在处于增生状态下的HLE-B324h后,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测Ele对HLE-B3增生的抑制作用;苏木精-伊红染色观察Ele作用后HLE-B3细胞形态的改变;流式细胞术（FCM）检测Ele对HLE-B3细胞周期的影响。结果MTT检测显示：rhbFGF组HLE-B3吸光度值（0.5990±0.0531）较正常组（0.4091±0.0422）显著升高,Ele组HLE-B3吸光度值（0.4500±0.0614）较rhbFGF组显著降低,抑制率达24.90%（P〈0.01）。苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察到rhbFGF组较正常组细胞数量增多,细胞形态清晰,胞浆丰富,胞核清晰,交织呈网状结构;Ele组细胞数量明显减少,胞浆减少,轮廓不清,交织的网状结构减少,甚至有的细胞变圆,细胞核凝集,见核固缩现象,胞浆嗜酸性染色。FCM检测细胞周期变化时发现：G1期的细胞在rhbFGF组（42.062%±1.270%）较正常组（46.422%±3.765%）减少（P〈0.05）,Ele组（60.665%±2.069%）较rhbFGF组明显增加（P〈0.01）;S期的细胞在rhbFGF组（51.647%±1.123%）较正常组（31.842%±2.798%）明显增加（P〈0.01）,Ele组（30.222%±3.429%）较rhbFGF组明显减少（P〈0.01）;G2期的细胞在rhbFGF组（6.288%±0.966%）较正常组（21.735%±3.806%）明显减少（P〈0.01）,Ele组（9.112%±1.659%）较rhbFGF组明显增加（P〈0.01）。结论Ele能通过改变HLE-B3细胞形态及细胞周期的进程而有效抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增生,有望成为防治后发性白内障的理想药物。     

长链非编码RNA-P21在过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞损伤中的表达

目的检测过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞HLE-B3生物活性及长链非编码RNA-p21(lncRNA-p21)的表达变化。方法将HLE-B3细胞分为正常对照组和过氧化氢组, 分别用正常培养液和含200 μmol/L过氧化氢的培养液培养24 h。采用MTS比色法检测细胞活力;采用活性氧试剂盒检测细胞活性氧簇(ROS)的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Caspase-3活性试剂盒法检测细胞Caspase-3活性;采用Western Blot方法检测细胞凋亡相关Bax, Bcl-2蛋白表达;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用EDU增殖试剂盒检测细胞增殖能力;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中lncRNA-p21的表达;采用荧光原位杂交实验法检测细胞中lncRNA-p21的定位。结果过氧化氢组细胞ROS水平为4.65±0.38, 明显高于正常对照组的1.00±0.01, 差异具有统计学意义(t=16.66, P<0.05)。与正常对照组相比, 过氧化氢组细胞凋亡率显著上升, Caspase-3活性增强, 凋亡蛋白Bax相对表达量明显升高, 差异均有统计学意义(t=20.69、3...     

电场对人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显微摄像系统记录不同时间点细胞图像并计数细胞数,检测细胞密度和细胞的生长速度,观测指标包括:细胞密度,以每平方厘米细胞数表示;细胞生长速度,计算公式为:(Ni-N0)/N0×100%(Ni为12h细胞数;N0为0h细胞数);采用流式细胞仪测定细胞周期,计算细胞增生指数:(NS+NG2/M)/N(NS为S期细胞数;NG2/M为G2/M期细胞数;N为细胞总数);Western blotting检测细胞cyclinE蛋白的表达。结果对照组hRPE细胞在12h的观察期间内细胞密度缓慢上升,到12h时细胞密度由95×103cm-2增至130×103cm-2;而实验组在6V.cm-1电场作用下hRPE细胞数量逐渐上升,12h后细胞密度上升至150×103cm-2。实验组hRPE细胞生长速度为50.02%,较对照组(36.84%)明显升高(P<0.05);...     

电场对人视网膜色素上皮细胞移行的影响

目的 观察外源性直流电场对人视网膜色素上皮（hRPE）细胞移行行为的影响，揭示电场在RPE细胞损伤修复中的生理作用及临床意义。 方法 培养的hRPE细胞依培养液成分不同分为改良Eagle培养液(DMEM)组、DMEM+10%新生小牛血清(FBS)组,两组中未暴露于电场的细胞设为对照。将细胞分别暴露于强度为0、4、6 、8 V/cm的电场中，显微摄像系统连续记录2 h中每隔15 min细胞移行的变化图像，测量细胞移行距离及细胞移行方向与场线间夹角。图像分析系统处理结果。 结果 DMEM组中细胞对电场的反应较弱，电压加至6 V/cm时可观察到细胞向阴极方向的移动趋势(不同电场强度中2 h里所有单个细胞总体的位移方向指标之间，即平均cosine Ф相比,P＜0.05）。DMEM+10%FBS组中电场对细胞的作用加强，4 V/cm时细胞出现长轴垂直于场线的排列方式，并向电场阴极运动，该现象随电场强度的增加而更为明显（不同电场强度之间及不同培养液之间平均cosine Ф相比，P＜0.05）。当电极方向转换后，细胞的定向移行方向随阴极方向而改变。 结论 外加电场可诱导hRPE细胞的电场阴极方向的定向移行,此作用受血清影响并与电场强度成正相关。在视网膜损伤后的早期修复过程中，内源性的电场可能是诱导hRPE细胞移行的始动因素之一。 （中华眼底病杂志，2006，22：404-407）     

miR-124-3p靶向调控KLF6基因表达对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨微小RNA-124-3p（miR-124-3p）对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞增殖及凋亡的影响及其靶向调控 Krüppel样因子6(Krüppel like factor 6,KLF6)的机制。方法　按HLE-B3细胞处理方式的不同,将其分为HLE-B3组、HLE-B3+ H₂O₂组、HLE-B3+H₂O₂+miR-NC组、HLE-B3+H₂O₂+miR-124-3p组、HLE-B3+H₂O₂+si-NC组、HLE-B3+H₂O₂+si-KLF6组、miR-124-3p+pcDNA3.1组、miR-124-3p+pcDNA3.1-KLF6组。利用MTT实验检测各组HLE-B3细胞增殖活性,流式细胞仪检测各组HLE-B3细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验验证miR-124-3p与KLF6的靶向关系。Western blot检测各组HLE-B3细胞中Cyclin D1、P21、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果　H₂O₂可抑制人晶状体上皮HLE-B3细胞中miR-124-3p的表达（HLE-B3组0.79±0.07、HLE-B3+H₂O₂组0.31±0.03）（P＜0.05）,而明显促进KLF6 的表达;miR-124-3p过表达或抑制KLF6表达可促进HLE-B3细胞增殖,抑制HLE-B3细胞凋亡（19.34±1.27、7.66±0.38;19.29±1.33、11.46±1.02）,促进Cyclin D1（0.39±0.04、0.89±0.08;0.39±0.04、0.74±0.07）、Bcl-2表达（0.29±0.03、0.74±0.07;0.29±0.03、0.60±0.06）,抑制P21（0.73±0.07、0.26±0.03;0.79±0.07、0.33±0.03）、Bax表达（0.86±0.08、0.37±0.03;0.86±0.08、0.51±0.05）。共转染miR-124-3p mimics与WT-KLF6可明显降低HLE-B3细胞的荧光素酶活性（0.27±0.03、0.98±0.08）（P＜0.05）;过表达KLF6可逆转miR-124-3p对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞HLE-B3细胞增殖及凋亡的作用。结论　miR-124-3p可通过靶向调控 KLF6表达进而促进H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞HLE-B3细胞增殖并抑制其凋亡。     

电场对人视网膜色素上皮细胞生物学活性的影响

目的:观察电场作用对培养人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞活力及分裂过程的影响。方法:hRPE细胞置于强度为8V/cm的直流电场中暴露3h,停止电场作用后继续培养12h;未受电场作用的hRPE细胞作为对照组。显微摄像系统记录各时间点细胞图像,观察细胞形态变化;细胞行台盼蓝拒染活细胞计数及核仁嗜银蛋白(AgNORs)染色,图像分析染色结果;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:暴露于电场中的hRPE细胞伸长,垂直于场线方向排列,停止暴露后细胞恢复正常形态及分布;各时间点实验组与对照组细胞的台盼蓝拒染率差异无统计学意义(P>0.05);电场暴露前、暴露3h及停止暴露并继续培养12h后hRPE细胞核内AgNORs颗粒数分别为:6.2,6.5,7.3,与正常对照组细胞比较均无显著差异(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示各组均未见明显细胞凋亡。结论:短时间电场作用对hRPE细胞的正常细胞活力及分裂无明显影响,提示该条件下的电场作用可能应用于促进RPE细胞修复的研究。     

维拉帕米对体外人晶状体上皮细胞增殖和黏附的抑制作用

目的:研究钙离子拮抗剂维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)增殖、凋亡和黏附的影响。方法:组织块法培养人晶状体上皮细胞,用Ver处理第二代人晶状体上皮细胞。MTT法观察不同浓度的Ver对HLEC增殖和黏附的影响,AO/EB双染法观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡情况,流式细胞术(FCM)检测Ver对HLEC周期的影响。结果:组织块贴壁4~6d可见HLEC从组织块边缘长出,15~20d接近融合。随着Ver药物浓度的增加,HELC增殖率减少,以72h最为明显。FCM检测细胞周期变化时发现,G1期细胞在10,40g/L Ver(78.1±0.2,83.2±0.6)较正常组(72.0±0.9)增加(P<0.05);S期的细胞在10,40g/L Ver(10.2±0.1,8.5±0.3)较正常组(16.9±0.3)明显减少(P<0.05)。形态学观察发现,HELC在40g/LVer作用48h后发生了一系列形态改变,包括细胞核固缩、染色质边集等凋亡改变。10,20,40,80g/L的Ver可以诱导HLEC发生凋亡,且随着浓度的升高凋亡率显著升高。用药24h后HELC的贴壁量为对照组的73.2%。结论:Ver能改变细胞周期而抑制HLEC增殖、诱导细胞凋亡,并且抑制HLEC的黏附。     

重组腺相关病毒介导的HSV-tk/GCV体系对兔晶状体上皮细胞的抑制作用

目的 探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷体系(HSV-tk/GCV)对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的抑制作用,以及晶状体上皮细胞死亡的机制.方法 实验研究.rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染体外培养N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测病毒的转染效率.重组病毒rAAV2/HSV-tk转染体外培养的N/N1003A细胞为实验组,以没有转染重组病毒的细胞作为对照组,MTT法检测HSV-tk/GCV体系对细胞作用的浓度依赖性、时间依赖性和旁观者效应;相差显微镜、透射电镜、Hoechst33258染色观察细胞凋亡、坏死改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化.不同浓度GCV对两组细胞的作用结果采用两因素析因设计的方差分析;两组细胞周期和凋亡的比较采用两样本t检验.结果 rAAV2载体能介导EGFP基因稳定高效转染N/N1003A细胞.GCV对两组细胞的杀伤作用有剂量-效应依赖关系(F=13 076.239,P<0.001);实验组N/N1003A-tk细胞的存活率低于对照组,差异有统计学意义(F=53 947.119,P<0.001).实验组GCV的IC50为2 mg/L,而对照组IC50为524 mg/L.GCV的杀伤效应随时间延长而增强,且存在明显的旁观者效应.N/N1003A-tk细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡和坏死,细胞的凋亡率7.18%±2.04%,与对照组(3.50%±0.56%)比较差异有统计学意义(t=3.83,P<0.01);S期细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(S期细胞比例:t=3.55,P<0.01;G0/G1期细胞比例:t=4.29,P<0.01).结论 GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2/HSV-tk转染的兔晶状体上皮细胞,并具有较强的旁观者效应.     

miR-375表达对脉络膜黑色素瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨miR-375表达对脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞增殖和侵袭的影响。

方法：培养MUM-2B细胞,分别转染miR-375模拟物序列(模拟物组)、miR-375抑制物序列(抑制物组)、阴性对照序列(阴性对照组)和不做任何处理(空白组),分别采用qRT-PCR实验、CCK-8实验、细胞凋亡实验、Transwell实验检测细胞中miR-375、细胞增殖活性、细胞凋亡情况、细胞迁移和侵袭情况。

结果：相比于阴性对照组(1.01±0.10)和空白组(1.03±0.07),模拟物组细胞中miR-375表达量(2.65±0.15)升高,而抑制物组细胞中miR-375表达量(0.28±0.06)降低(P<0.05); 与空白组和阴性对照组比较,模拟物组细胞24、48、72和96h时OD值均降低(P<0.05),而抑制物组细胞24、48、72和96h时OD值均升高(P<0.05); 与空白组细胞凋亡率(20.54±4.01)%和阴性对照组细胞凋亡率(22.80±4.28)%比较,模拟物组细胞凋亡率(39.11±3.37)%升高(P<0.05),而抑制物组细胞凋亡率(10.13±2.17)%降低(P<0.05); 与空白组和阴性对照组比较,模拟物组细胞迁移数和细胞侵袭数均降低(P<0.05),而抑制物组细胞迁移数和细胞侵袭数均升高(P<0.05)。

结论：上调MUM-2B细胞中miR-375表达可降低细胞增殖活性,加速细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,下调miR-375表达则发挥相反的作用,表明miR-375可能在脉胳膜黑色素瘤病程中发挥抑癌功能。     

低氧/高糖环境下间充质干细胞对RPE生物学特性的影响

目的：建立人骨髓间充质干细胞( hMSCs)与视网膜色素上皮细胞( RPE)低氧高糖培养的细胞共培养模型,研究在与hMSCs共培养条件下低氧及高糖时RPE细胞增殖、凋亡和移行等生物学特征的影响,对糖尿病刺激脉络膜新生血管( CNV)的机制进行初步探讨。
　　方法：使用Transwell间接共培养模型。将共培养模型按照培养氧浓度及糖浓度培养基类型分为4组：常氧常糖组(21% O2加5.56mmol/L葡萄糖培养液,A组)、常氧高糖组(21% O2加30mmol/L葡萄糖培养液,B组)、低氧常糖组(5% O2加5.56mmol/L葡萄糖培养液,C组)和低氧高糖组(5% O2加30mmol/L 葡萄糖培养液,D 组)。通过CCK-8检测间接共培养模型在12,24,48 h时RPE细胞的增殖能力、Transwell 检测间接共培养模型在24 h 时 RPE细胞的移行情况、流式细胞仪检测间接共培养模型中24 h时RPE细胞的凋亡情况。
　　结果：与对照组相比,12,24和48 h时, B组(1.61±0.41,1.80±0.34,1.91±0.35)、C 组(1.34±0.46,1.94±0.40,2.14±0.41)及D组(1.98±0.47,2.26±0.42,2.55±0.40)中的细胞增殖能力均较对照组(0.92±0.45,1.27±0.32,1.59±0.41)增强(P<0.05),并且低氧高糖联合作用组增殖能力最强。在24h时,B 组(149.5±9.19)、C 组(140±9.90)、D组(170.5±7.78)较对照组(114.5±7.78)的RPE
　　细胞移行能力增强(P<0.05)。而在24h时各组间的凋亡情况无明显差异(P>0.05)。
　　结论：与hMSCs共培养条件下,低氧及高糖环境促进RPE细胞的增殖和移行,而对其凋亡并无影响。     

锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的：研究锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)凋亡的影响。

方法：将培养的SRA01/04细胞系分为六组,对照组、半乳糖处理组、补锌组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组、缺锌联合半乳糖处理组。采用MTT法检测半乳糖对HLEC存活率的影响,荧光显微镜和流式细胞仪分别检测各实验分组细胞核形态和细胞凋亡率水平的变化。

结果：不同浓度半乳糖(0、25、50、75、100、125mmol/L)处理HLEC细胞后,细胞存活率分别为(100.0±5.4)%、(97.5±3.2)%、(91.3±5.3)%、(93.4±0.6)%、(86.6±1.4)%和(83.5±0.4)%,与未处理细胞相比,半乳糖浓度为100、125mmol/L时,细胞存活率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜结果显示对照组和补锌组的细胞核呈现均一的染色,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组中一些细胞的细胞核收缩,表现出典型的细胞凋亡形态。各组的细胞凋亡率分别为(1.5±0.1)%、(7.1±0.2)%、(1.4±0.1)%、(4.4±0.2)%、(5.5±0.2)%和(15.8±0.3)%。与对照组相比,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P < 0.05)。与半乳糖处理组相比,补锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率则显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：补锌可以保护人晶状体上皮细胞抵抗由半乳糖引起的细胞凋亡,可能对白内障的形成有抑制作用。     

Interaction with collagen IV protects lens epithelial cells from Fas-dependent apoptosis by stimulating the production of soluble survival factors

PURPOSE: To investigate the sensitivity of lens epithelial cells (LECs) to Fas-dependent apoptosis and to determine the role of interaction with the extracellular matrix (ECM) in the regulation of Fas-dependent apoptosis. METHODS: Sensitivity to Fas-mediated apoptosis of primary human LECs and HLE-B3 LECs cultured on different substrates was determined by Hoechst staining after incubation with Fas-stimulating or control IgM. Fas expression was determined by Western blot analysis. Effects of varied cell density and conditioned media from HLE-B3 cells cultured on different substrates on the Fas sensitivity of HLE-B3 cells cultured on tissue culture (TC) plastic were determined. RESULTS: Primary LECs cultured as free-floating anterior capsulotomy specimens were resistant to Fas-dependent apoptosis. The LE cell line, HLE-B3, was sensitive to Fas-dependent apoptosis when cultured on TC plastic but not on lens capsule. Culture on collagen IV, but not on laminin, rendered HLE-B3 cells resistant to Fas-dependent apoptosis, although Fas was still expressed. Primary LECs cultured on TC plastic after migration from lens capsule explants were resistant to Fas-dependent apoptosis if the lens capsule and attached cells were still present, but not if the lens capsule had been removed. Conditioned medium from LECs cultured on collagen IV, but not TC plastic, protected cells cultured on TC plastic from Fas-dependent apoptosis. The protective effect of culture on collagen IV diminished with decreasing cell density. CONCLUSIONS: LECs are protected from Fas-dependent apoptosis by interaction with collagen IV. Soluble factors released by the LECs cultured on collagen IV protect LECs from Fas-dependent apoptosis.     

Mechanisms of inhibition of elemene on human lens epithelial cell proliferation in vitro

AIM: To study the effects of elemene (Ele) on proliferation and cell cycle of human lens epithelial cells B3 (HLE-B3) and the mechanisms of its signal transduction. METHODS: Recombinant human basic fibroblast growth factor (rhbFGF) was used to induce proliferation of HLE-B3 cells, which were incubated with 80mg/L Ele for 24 hours. The inhibitory effects of Ele on the proliferation of HLE-B3 cells were evaluated by MTT method. The effect of Ele on HLE-B3 cell cycle was analyzed by flow cytometry(FCM). The expressions of protein kinase A (PKA) and protein kinase G (PKG) of HLE-B3 were also analyzed by FCM. RESULTS: Ele altered the cell cycle of HLE-B3 and effectively inhibited HLE-B3 cell proliferation induced by rhbFGF. Ele up-regulated PKA and down-regulated the expression of PKG in HLE-B3 cell. CONCLUSION: Ele inhibits HLE-B3 proliferation, making it an attractive potential agent in regimens to treat after- cataracts.     

雌二醇通过激活SIRT1/P53通路对人晶状体上皮细胞抗凋亡作用研究

目的探究雌二醇(estradiol,E2)对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞(HLE-B3细胞)氧化损伤的保护作用及抗凋亡机制。方法不同浓度H2O2作用于HLE-B3细胞,探索最佳浓度。将HLE-B3细胞随机分成5组空白对照组,模型组(100μmol·L^-1 H2O2),低、中、高浓度E2组(100μmol·L^-1 H2O2+0.01μmol·L^-1、0.10μmol·L^-1、1.00μmol·L^-1 E2),观察各组细胞形态变化。采用CCK-8和流式细胞学检测细胞的增殖与凋亡,观察不同浓度的E2对HLE-B3细胞的影响。RT-qPCR检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)mRNA、P53 mRNA表达。Western blot检测SIRT1、肿瘤抑制蛋白P53、乙酰化P53(acetylate P53,Ac-P53)蛋白表达,免疫荧光化学检测SIRT1定位及荧光强度。结果100μmol·L^-1H2O2为诱导HLE-B3细胞氧化应激的最佳浓度。CCK-8检测结果显示低、中、高浓度E2组的细胞增殖率均高于模型组(均为P<0.05)。流式细胞学检测结果显示模型组细胞凋亡率均高于其他各组,两两比较空白对照组<高浓度E2组<中浓度E2组<低浓度E2组<模型组(均为P<0.05)。RT-qPCR及Western blot检测结果表明SIRT1表达随着E2浓度的升高而增加,高浓度E2组>中浓度E2组>低浓度E2组>模型组>空白对照组(均为P<0.05)。Ac-P53在空白对照组表达与高浓度E2组差异无统计学意义(P>0.05),其余组间Ac-P53表达比较模型组>低浓度E2组>中浓度E2组>高浓度E2组(均为P<0.05)。空白对照组中P53表达均低于其他各组(均为P<0.05),其余各组之间两两比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。共聚焦免疫荧光化学检测结果示SIRT1荧光强度随着E2浓度升高而增强。结论E2对HLE-B3细胞的保护作用与SIRT1/P53通路相关,在生理浓度范围化学检测内,随着E2浓度的增加,SIRT1表达增强,抑制Ac-P53,减少HLE-B3细胞凋亡。     

Re-orientation and faster, directed migration of lens epithelial cells in a physiological electric field

The vertebrate lens drives current through itself in a pattern which concentrates current efflux at the lens equator. Lens epithelial cells (LECs) move into this region where they change shape and differentiate into lens fibre cells. The mechanisms underpinning these cell behaviors are unclear. We have attempted to mimic, in isolation, the effects which such electrical signals have on LEC behaviors, by culturing LECs in a physiological DC electric field (EF) similar to that in lens. Primary human (PHLECs), primary bovine (PBLECs) and a transformed human cell line (THLECs) all changed shape to lie perpendicular to the EF, the same orientation which LECs adopt with respect to the equatorial EF as they differentiate into lens fibre cells. Exposure to an EF also significantly increased the migration rate of all three LEC types. All three LECs also showed directed cell migration although, curiously, different cell types moved in different directions. PBLECs and THLECs showed voltage-dependent, anode-directed migration, with a response threshold between 100-150 mV mm(-1)and 25-50 mV mm(-1), respectively. Small sheets of THLECs also migrated anodally. By contrast PHLECs migrated cathodally with a response threshold below 100 mV mm(-1). Reversing the polarity reversed the migration direction for each cell type. These observations raise three possibilities: (1) that small electric field may be one of the cues regulating lens epithelial cell behaviors in vivo; (2) that altering the in vivo electric field by lens replacement may contribute to the aberrant migration of epithelial cells in conditions such as posterior capsule opacification and (3) that applying electric fields may be one way of controlling aberrant lens epithelial cell behaviors.     

纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、黏附和移行的影响

目的:探讨纤维连接蛋白(fibronectin,FN)对人晶状体上皮细胞系HLE-B3的增殖、黏附和移行的影响及其受体整合素α5亚基的表达。方法:培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3,接种于不同浓度的FN(0,10,20,40mg/L)包被的培养板中,倒置显微镜下观察HLE-B3的生物学特性,采用WST-8法检测细胞的增殖、黏附情况,划痕法观察细胞的移行并记录细胞缺损区闭合时间,免疫细胞化学法观察整合素α5亚基的表达。结果:各浓度FN包被后,增殖实验中WST-8法检测的吸光值增高不明显(P>0.05)。随FN包被浓度的增高,黏附实验中的吸光值逐渐增高,划痕实验中缺损区闭合的时间逐渐缩短,各浓度组在统计学上具有显著性差异。整合素α5亚基随FN包被浓度的增高表达增强(P<0.05)。结论:FN具有显著促进HLE-B3黏附和移行的作用,同时能上调其受体整合素α5亚基的表达。