单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharosc 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或童叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该50K血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

盐析与疏水电荷诱导层析相结合快速纯化单克隆抗体

目的:建立一种简便、快速纯化抗体的疏水电荷诱导层析(HCIC)方法。方法:小鼠腹水先经硫酸铵沉淀处理,然后经HCIC后得到单克隆抗体(mAb),纯化的mAb的活性用间接ELISA法测定。同时比较了不同pH洗脱液对mAb纯度的影响。结果:用pH为4.5的洗脱液进行洗脱,获得的mAb纯度大于90%,总的回收率为65%。结论:盐析与HCIC相结合的抗体纯化法,纯度高、生物活性好,适合在基层实验室推广。     

阳离子交换一步层析法纯化抗gp130单克隆抗体

目的:建立从小鼠腹水中纯化抗gp130单克隆抗体(mAb)B-S12的一步层析方法。方法:小鼠mAb腹水样品经离心后,进行阳离子交换层析柱纯化。检查了上样缓冲液的pH值和洗脱液的离子强度梯度对mAb纯度的影响。纯化后mAb的生物学活性用MTT比色法检测。结果:在pH4.0、20mmol/LHEPES缓冲液条件下上样,用0～1.0mol/L的NaCl梯度洗脱,可获得纯度超过90%的mAbB-S12,回收率为52%。纯化后的mAb对XG-2细胞有明显的促增殖作用。结论:建立的一步纯化方法操作简便,所得mAb的纯度高及生物学活性好。     

单克隆抗体亲和层析法纯化SEB及其活性鉴定

目的：采用亲和层析法获取高纯度的金黄色葡萄球菌肠毒素B（Staphylococcal enterotoxin B，SEB），并对其进行活性分析。方法：采用正辛酸沉淀法纯化了一株抗SEB的单克隆抗体（1D2），与CNBr活化的Sepharose4B偶联制成亲和层析柱纯化SEB，并对其超抗原活性和抗原活性进行鉴定。结果：与离子交换纯化法和市售的标准品相比较，亲和层析法纯化的SEB纯度高，纯化的效率为60．71％。同时，纯化后的SEB具有良好的抗原性和超抗原活性。结论：单克隆抗体亲和层析法可以高效率地纯化高纯度的SEB。     

一种利用HCIC快速纯化抗rhTF_(243)单克隆抗体方法的研究

目的:建立从小鼠腹水中快速纯化抗人重组组织因子243(recombine human tissue factor243,rhTF243)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的方法。方法:含抗rhTF243单克隆抗体的腹水经离心、过滤及缓冲溶液变换等预处理后,先经疏水电荷诱导层析纯化处理,去除大部分杂蛋白,再经Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析柱进一步纯化。结果:经两步纯化后获得抗rhTF243单克隆抗体,其生物学活性高、纯度大于95%,抗体效价保持良好,抗体总回收率达73%,且具有明显的抗促凝作用。结论:建立的单克隆抗体纯化方法简便、高效,所得mAb的纯度高、生物学活性好。     

亲和层析法纯化肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体

应用小鼠抗大鼠Ｋａｐｐａ轻链单克隆抗体亲和层析系统，对抗肾综合征出血热病毒大鼠ＭｃＡｂ进行了纯化研究，使用该系统具有ＭｃＡｂ回收率好，纯度高，能较好地保持ＭｃＡｂ免疫学活性，操作，快速，可一步除去腹水中宿主杂蛋白，并能适应不同类别ＭｃＡｂ纯化的特点，此外还对自制盐析纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ柱与进口亲和纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ柱进行了比较和探讨。     

金属螯合亲和层析法对抗HBs Fab段的纯化

为了对大肠杆菌表达的Ｆａｂ段进行简便有效的纯化，在Ｆａｂ段表达载体上插入了一段编码６个组氨酸的ＤＮＡ片段，使所表达的Ｆａｂ段在Ｆｄ段的羧基端带有６个连续的组氨酸，通过锌离子金属螯合亲和层析法对大肠杆菌表达的Ｆａｂ段进行纯化，利用不同ｐＨ梯度缓冲液洗脱，一步即可达到９５％以上纯度的纯化，为基因工程抗体的制备开发提供了有效手段。     

前列腺特异性抗原的纯化及其单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的:制备抗人前列腺特异性抗原(Prostate specific antigen,PSA)单克隆抗体.方法:利用盐析、离子交换和凝胶过滤的方法,从人精液中纯化前列腺特异性抗原,采用SDS-PAGE和游离前列腺特异性抗原定量试剂盒联合检测目的蛋白的纯度和含量,用纯化的PSA抗原免疫BALB/c小鼠,按常规的细胞融合与杂交瘤细胞的筛选方法,并对杂交瘤细胞产生的抗体进行了亚型、亲和力、特异性鉴定.结果:获得分泌抗-PSA单克隆抗体的杂交瘤细胞系15株,亲和力高,特异性和稳定性较好,亚型鉴定一株为IgG2a,其余均为IgG1.结论:本次制备的前列腺特异抗原单克隆抗体可用于临床PSA-ELISA诊断试剂的研发.     

用膜亲和层析法纯化小鼠腹水中的单克隆抗体

目的 用膜亲和层析法（MAC）纯化小鼠腹水中单克隆抗体（mAb)。方法 采用尼龙滤膜ZBM作为介质吸附抗人血清白蛋白（HSA）,将含mAb的腹水滤过此ZBM,再将吸附于ZBM上的mAb解离下来,获得纯化的mAb。结果 直径50mm吸附了HSA的ZＢＭ。经１０mL腹水循环滤过两次,即可达到最大mAb结合量。从ＺＢＭ上解离mAb,仅需解离液滤过１次就可完成,纯化的mAb经ＰＡＧＥ检测,只显示１条带。用纯化的mAb做金标记斑点免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）检测ＨＳＡ标准品时,其灵敏度较用未纯化的腹水时提高了２０倍,结论 用尼龙滤膜ＺＢＭ改进的膜亲和层析法,可用于纯化中的单克隆抗体 且简便、省时、有效。     

疏水层析法和凝胶过滤法分离H147抗CD20F（ab’）2之比较

目的比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化H147抗CD20F(ab’)2的优缺点。方法采用亲和层析柱protein-G对发酵菌体裂解液进行粗纯化，分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD20F(ab’)2的分离纯化：疏水层析采用梯度洗脱，80％B液洗脱20min，100％B液洗脱30min；凝胶过滤以50mmol／L PB缓冲液(pH7．0)，0．8ml/min洗脱4h。结果粗纯化产物主要含F(ab’)2、Fab’，含量分别为19．6％、59．7％。采用疏水层析法1h即可完成分离，F(ab’)2回收率为67％，纯度为89．3％；凝胶过滤4h完成分离，F(ab’)2回收率为65％，纯度为90．5％。FACS结果表明，两者结合Raji细胞的阳性率分别为99．93％和99．97％。结论疏水层析分离纯化抗CD20 F(ab’)2简单、快速、回收率高、纯度高，适用于大规模的工业化生产。     

用e抗原阳性血清制备抗-HBe单克隆抗体及其鉴定

目的：为了解决多克隆抗HBe抗体的来源困难和单克隆抗体的配对问题。方法：用人的e抗原阳性血清，经过提纯后免疫BALB／c小鼠，用杂交瘤技术获得8株能分泌抗HBe单抗的细胞株。结果：7株单抗为IgG1,1株11E8为IgG2a，8株单抗标酶后能与基因工程抗原制备的包被单抗配对的只有11E8，11E8酶标单抗的效价为1∶6400，并且仅与HBeAg起反应，与HBsAg，HBcAg，正常人血清均不发生交叉反应，用于临床标本检测中与多克隆抗HBe酶标抗体的结果一致。结论：血源性的单克隆抗HBe-HRP，可以替代多克隆抗HBe-HRP制备诊断试剂盒，克服了多克隆抗HBe来源困难问题。     

疏水层析法和凝胶过滤法分离HI47抗CD20 F(ab'''')2之比较

目的　比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI4 7抗CD2 0F(ab’) 2 的优缺点。方法　采用亲和层析柱protein G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD2 0F(ab’) 2 的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80 %B液洗脱2 0min ,10 0 %B液洗脱30min ;凝胶过滤以5 0mmol LPB缓冲液(pH 7.0 ) ,0 .8mL min洗脱4h。结果　粗纯化产物主要含F(ab’) 2 、Fab’,含量分别为19.6 %、5 9.7%。采用疏水层析法1h即可完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 7% ,纯度为89.3% ;凝胶过滤4h完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 5 % ,纯度为90 .5 %。FACS结果表明,两者结合Raji细胞的阳性率分别为99.93%和99.97%。结论　疏水层析分离纯化抗CD2 0F(ab’) 2 简单、快速、回收率高、纯度高,适用于大规模的工业化生产。