抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅲ、单克隆抗体的体外中和作用及动物体内保护作用

单克隆抗体(McAb)具有高度特异性,在病毒性疾病的诊断、防治及研究中具有广阔的应用前景。作者曾报道建立了产生抗单纯疱疹病毒(HSV)McAb的杂交瘤细胞系,并在临床检测HSV抗原中应用抗HSV McAb,发现其具有特异性强、敏感度高等优点。本文报道抗HSV McAb在体外及动物体内HSV感染中的中和作用及保护作用,旨在为研究抗HSV McAb的免疫学特性及临床治疗应用提供实验证据。     

单克隆抗体在研究绿脓杆菌表面抗原中的应用

McAb与各种免疫化学技术结合,用于分析细胞表面抗原。在交叉免疫电泳中,应用两种不同脂多糖特异的McAb,揭示了在一株绿脓杆菌内存在LPS亚群。为确定微孔蛋白F的表面位置,这种蛋白特异性的四株McAb都显示出能与完整绿脓杆菌细胞作用,在间接免疫荧光试验中产生高强度荧光。在小鼠中,一种F蛋白特异的McAb成功地显示了对绿脓杆菌感染的保护,表明F蛋白是能在活菌内表达的。采用免疫荧光,显示脂蛋白H_2书异的McAb只是在O抗原缺陷的绿脓杆菌变株中能与该蛋白作用。蛋白F特异性McAb能与溴化氰裂解或胰酶及链酶蛋白酶消化的F蛋白片段反应,这充分证明McAb在抗原分析中可用作特异性试剂。根据肽段分析,可测定F蛋白独特抗原决定区域的化学性。     

腹水中单克隆抗体蛋白的定量

由于单克隆抗体(McAb)的高特异性和可无限量生产,其用途不仅大有取代多克隆抗体之势,且可在许多领域中发挥其独特的作用。随着发展的需要,不论是对McAb的检定和应用,还是深入研究方面,测定McAb的含量都很必要,为此亟待建立一个腹水中McAb的定量法。测定抗体的方法很     

家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备与鉴定

以家鼠型HFRS病毒R22株免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14融合,获得了23株能稳定分泌HFRS病毒特异性McAb的杂交瘤细胞系。以18株不同型别的HFRS病毒株进行分析,结果表明上述McAb中有些为HFRS病毒组特异性的,有些为家鼠型特异性的。有2株McAb对家鼠型HFRS病毒株具有较高的中和活性,对HFRS病毒R22株感染乳鼠也有明显的保护作用。     

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗O1群小川型霍乱弧菌(VibriocholeraeO1serotypeOgawa)特异性单克隆抗体(McAb),为霍乱的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法以灭活的O1群小川型霍乱弧菌免疫Balbc小鼠,通过杂交瘤技术制备针对O1群小川型霍乱弧菌的McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行筛选,分析其亚类,检测其效价及相对亲和力,以间接ELISA和Westernblot鉴定McAb特异性,并进行McAb结合表位分析。结果融合了602株能分泌抗O1群小川型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,最后得到5株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其抗体亚类分别为3株IgG1,1株IgG2b,1株IgG3;腹水效价均达1×10-6;亲和常数在1×108～1×109之间。间接ELISA法及Westernblot证实所获的McAb可与O1群小川型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示除有2株McAb识别相同的抗原表位外,其余均识别不同的抗原表位。结论获得霍乱弧菌O1群小川型特异性McAb,为O1群小川型霍乱早期快速诊断和发病机理的研究提供基础。     

小鼠杂交瘤腹水、实体瘤及血清中单抗滴度观察

<正> 单克隆抗体(McAb)的生产常规都是将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱发其产生腹水而获得。但在制备腹水的过程中,常可见到小鼠腹腔生长成大量实体瘤而影响腹水的产生。为了能及时获得所需的McAb,我们在制备抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)McAb腹水的过程中,比较了实体瘤与相应鼠腹水和血清中所含特异性McAb的滴度。     

Annexin A2单克隆抗体制备及初步鉴定

制备Annexin A2特异性单克隆抗体(McAb),为Annexin A2的体内外功能的研究提供有力的抗体工具。以原核表达的全长p36蛋白(Annexin A2单体)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对Annexin A2的McAb。以间接ELISA法筛选出目的杂交瘤细胞株并进行染色体计数;分析McAb的亚型,检测其效价、浓度及亲和常数;以细胞荧光染色,Western blot和RT-PCR鉴定McAb特异性。结果得到1株能稳定分泌特异性针对p36的McAb的细胞株F8,其抗体亚类重链为IgG2a,轻链为κ型;腹水纯化后效价为1∶4 000;亲和常数为3.4×109L/mol。成功获得了能稳定分泌AnnexinA2特异性McAb的细胞株。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

抗白血病患者IgM同种型和独特型McAb识别抗原表位的分析

本文应用间接ELISA试验,混合ELISA夹心试验,ELISA抑制试验对抗B-CLL患者血清IgM同种型和独特型McAb的特异性和亲和力进行了分析。并采用ELISA双抗体相加试验,检测了McAb识别抗原的表位。试验结果表明,14株McAb中10株为抗独特型McAb,4株为抗同种型McAb。对ELISA双抗体相加试验测得结果经微机集群处理分析,可将4株抗同种型McAb分成2组,10株抗独特型McAb分成4组。ELISA相加试验结果与间接混合ELISA抑制试验结果一致。结果提示,14株McAb至少可以识别6个不同的抗原表位。     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

单克隆抗体

(1)高度特异性追踪单克隆抗体(McAb)已在医学中取得成效,本文介绍了这种免疫防御武器的应用可能性和限度。Kohler应用细胞杂交瘤技术,将致敏的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,可按照人们的意愿生产大量纯的McAb。Kohler和Milstein由于发展了生产McAb的技术于1984年获诺贝尔医学奖金。目前McAb已广泛应用于医学领域。     

抗鼻疽菌单克隆抗体的应用研究——Ⅰ.免疫荧光间接法对鼻疽菌的诊断

本文应用抗鼻疽菌单克隆抗体(McAb)代替免疫动多价血清(PolyAb)作荧光抗体间接染色法(IFA)检测鼻疽菌。对McAb的敏感性特异性进行了测定,对一些疽鼻病料进行了检测,征明McAb对鼻疽菌的诊断敏感性高,特异性强,具有实际应用价值,可取代PolyAb,作为对鼻疽菌检测的一种新试剂。     

抗可溶性抗原鼠单克隆抗体的特性分析和鉴定

<正> 随着小鼠B淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体(McAb)技术的发展,预计今后80％左右的常规动物多克隆抗体(PcAb)将被McAb取代。McAb在分子结构、亲和力、稳定性、效价和抗原位点(或称决定簇)特异性方面都与PcAb不同,因而在实际工作中必须对获得的McAb进行更多的鉴定,以使成为更加稳定、标准和特异的制剂。近几年来,我们研究室     

致有丝分裂原和淋巴因子在单克隆抗体产生中的作用

杂交瘤单克隆抗体(McAb)本来具有均质性、特异性和滴度高等特点,但在某些试验中,仍希望应用滴度更高的抗体。为此如何提高McAb 的产量仍然是一个重要问题。我们在生产流行性出血热病毒单克隆抗体(EHFV-McAb)的实验中加入了ConA、PHA 和r-IFN、IL-2。结果提高了McAb 的产量.     

不同ELISA法对筛选单克隆抗体的影响

单克隆抗体(McAb)的筛选方法要求敏感性高、特异性强、快速简便。ELISA目前已成广为接受的一种筛选方法,其中以固相抗原筛选相应的McAb最常用。但一些文献指出当抗原吸附于固相载体表面时,那些位于和固相载体结合处的某些抗原决定簇由于未能暴露,因而就不可能筛选出识别这些抗原决定簇的McAb。我们在抗CEA McAb的筛选中,为了避免上述可能发生的漏选,采用固相多克隆CEA抗体,结合CEA抗原后,再用于筛选McAb的方     

抗人白细胞间素-2多克隆及单克隆抗体的生物学特征

利用人工合成的白细胞间素2(IL-2)多肽片段,用中和试验、竞争ELISA和染色IL-2分泌细胞的碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标技术,对己制备的抗人IL-2多克隆抗体及单克隆抗体(McAb)的表位特异性、中和活性、亲和常数及杭天然IL-2的反应性进行了全面鉴定。结果表明:利用多种免疫方案、融合前强化加强免疫及多个脾脏混合融合制备策略所获得的McAb,在生物学特征上表现出多样化,即这些McAb的表位特异性、中和活性、亲和力及抗天然IL-2活性各不相同。其中抗IL-2 C末端的McAb为首次报道。这组McAb适用于对IL-2研究的不同目的。     

三种简便ELISA法分析单克隆抗体表位特异性的比较

作者采用单克隆抗体(McAb)相加试验、竞争抑制法以及双抗体夹心法3种简便的ELISA,分析抗甲胎蛋白(AFP)的McAb识别表位的特异性,获得一致的结果。证实4株抗AFP的McAb中(B1、B8、F11和E12),可分别识别两种不同的表位,B1     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞,制备抗原,免疫BALB/c小鼠,取其牌细胞与Sp2/0-Ag14细胞融合,建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B_6杂交瘤细胞株。3B_6McAb经鉴定属于IgG_3亚类。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B_6McAb在加有豚鼠血清后可阻止HCMV感染后细胞病变的出现。3B_6 McAb经间接免疫荧光法检测中,晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原,在68例标本中有一例为阳性,阳性率为1.47％。该法方便,快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

单克隆抗体分析西安地区单纯疱疹病毒的抗原性

应用15种抗HSV型共同性和2种分别抗HSV-1和HSV-2型特异性McAb,分析了自西安地区分离出的43株HSV临床株的抗原性。间接免疫荧光试验的结果表明,从宫颈炎病人中分离出的15株HSV除1株为HSV-1外,14株为HSV-2。从口唇、眼部感染分离出的28株HSV均为HSV-1。用15种型共同性McAb对HSV的抗原性分析表明,6种McAb对所有临床株均呈阳性反应,另外9株McAb仅与部分HSV毒株呈阳性反应。43株HSV分离株中22株(51.2％)可与所有型共同性McAb反应,21株(48.8％)仅与部分McAb反应。比较HSV-1和HSV-2分离株与型共同性McAb反应的结果发现,HSV-2毒株的抗原性改变仅发生于3个抗原位点上,而HSV-1毒株的抗原性改变可发生于9个抗原位点上。同时对3株HSV参考株的抗原性分析表明,HSV-2参考株333仅与7种型共同性McAb反应且不与抗HSV-2型特异性McAb反应。研究结果表明,由同一地区分离出的HSV在抗原性上有明显差异,对造成这种抗原性差异的原因有待进一步研究。     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞，制备抗原，锣疲BALB／c小鼠，．取其脾细胞与Sp2／0-Ag14细胞融合，建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B0杂交瘤细胞株。3B0McAb经鉴定属于IgG3亚娄。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B0McAb在加有豚鼠血清后可阻止HcMV感染后细胞病变的出现。3B0McAb经间接免疲荧光法检测中，晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原，在68例标本中有一例为阳性，阳性率为1．47％。该法方便，快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。