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全长cDNA文库是目前基因鉴定、基因启动子区确定和功能基因组研究的必要工具,为快速、高效获得完整的基因全序列信息提供了有效途径。高质量的全长cDNA文库要求较高比例的大片段全长cDNA克隆。Vector-Capping正是一种简单而有效的构建高质量全长cDNA文库的方法。在此重点阐述Vector-Capping法的建库依据、技术流程、特点和应用进展。 相似文献
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目的分析IRM-2小鼠全长cDNA文库的cDNA序列。方法根据IRM-2小鼠的21条EST,从IRM-2小鼠全长cDNA文库测定基于该21条EST序列PCR扩增的全长cDNA序列,通过与GenBank基因库同源序列信息比对,分析全长cDNA序列和性质。结果根据21对引物PCR产物的拼接,获得5条全长cDNA序列,与小鼠已知基因不同源,而且得到了可能编码蛋白质的氨基酸序列和蛋白质的性质。结论 5条全长cDNA序列提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础。 相似文献
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一种广州管圆线虫新基因——胶原蛋白全长cDNA的克隆和鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
目的克隆和鉴定广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis)新基因——胶原蛋白(collagen,COL)全长cDNA序列。方法根据表达序列标签(expressionsequencetag,EST)中部分序列和文库载体序列设计引物,采用PCR技术从广州管圆线虫幼虫的cDNA文库中分段扩增cDNA序列,用DNAMAN软件拼接分段扩增的序列以得到全长cDNA序列;利用多种生物信息学软件对cDNA全长序列进行同源性搜索与结构分析。根据cDNA全长序列,设计新的引物从文库中扩出包含胶原蛋白全长开放阅读框(openreadingframe,ORF)的cDNA片段,PCR产物纯化后克隆到pMD18-T载体上并测序。重组T载体经双酶切后切下的新基因AcCOL亚克隆到原核表达质粒pET32a( )中。结果克隆一个广州管圆线虫新基因全长cDNA序列;序列比对、蛋白结构域搜索及结构分析结果显示,该新基因所编码的是一种胶原蛋白。构建的新基因重组质粒经双酶切后证明含有与目的片段长度相符的插入片段。结论克隆并鉴定了广州管圆线虫新胶原蛋白编码基因全长,成功构建了该基因的原核表达重组质粒pET32a( )-AcCOL。 相似文献
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目的:克隆胸腺细胞发育相关新基因。方法:本研究建立了抑制性差减杂交技术(SSH)、构建了胸腺基质细胞系cDNA差减杂交文库。应用cDNA末端快速扩增方法(RACE)进一步克隆新基因的cDNA全长序列。结果:筛选两个不同胸腺基质细胞系的差异表达基因,获得了新基因cDNA片段C91,应用RACE成功克隆新基因TMBP-1cDNA全长序列。它拥有一个969bp的开放读码框架,编码323个氨基酸。同源序列 比较发现,它编码一个未知功能的膜结合蛋白。Northem杂交分析显示,mRNA转录本长度为1.5kb;在两种胸腺基质细胞系中均有表达。新基因的cDNA全长序列。已被GenBank所接受。结论:抑制性差减杂交技术是克隆新基因片的有效方法;成功克隆新基因TMBP-1的cDNA全长序列。 相似文献
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全长cDNA是研究基因功能的关键,获得全长cDNA也是基因组研究的重要内容之一,本文概述了近年来国内外获取未知基因cDNA全长的理论及其应用。 相似文献
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目的建立新的连翘花蕾全长cDNA文库构建方法。方法应用GeneRacer^TM试剂盒,采用改良RNA连接酶介导的快速扩增cDNA末端(RNA ligase-mediated rapid amplication of cDNA ends,RLM—RACE)技术构建连翘花蕾全长的cDNA文库,通过计算菌落数、蓝白斑数、酶切鉴定、序列分析等手段评价文库质量。结果通过增加模板用量的方法成功构建了连翘花蕾全长cDNA文库,该文库容量为3.47×10^5,重组率为81.6%,插入片段多集中在500—1000bp之间,所占比例为71%;随机测序的cDNA克隆中均含有完整开放阅读框的全长cDNA序列。结论应用RACE法成功构建了连翘花蕾全长cDNA文库。 相似文献
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mdr—1基因转移可提高肺癌细胞对阿霉素的抗性 总被引:1,自引:0,他引:1
以逆转录病毒介导,将人全长mdr-1cDNA导入人肺腺癌细胞系GLC82中,经G418和阿霉素筛选,挑选出3个阳性克隆。用mdr-1cDNA的一种特异引物在3个克隆中都扩增到1条167bp的带,表明mdr-1基因cDNA已稳定地整合在染色体基因组中。原位杂交显示转染细胞的mdr-1转录升高,免疫细胞化学发现转染细胞中P170糖蛋白呈弱阳性。MTT药敏实验表明3个克隆对阿霉素的抗药性分别是GLC细胞的6.4、7.0和8.8倍。提示在mdr-1基因cDNA转染的细胞中,mdr-1基因低表达足以大大提高细胞对药物的耐受性。 相似文献
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目的探讨基因新异构体的剪接特征及生物学意义.方法对人肾上腺组织cDNA文库作大规模EST分析及全长cDNA克隆.结果发现7条由不同剪接方式形成的新的异构体,其中4个剪接特点不符合经典的gt-ag规律,且剪接方式多样,人类固醇5a还原酶跨越两个外显子,KIAA0971的异构体与KIAA0971比较,有两段缺失,且造成编码框架移动,均按gt-ag方式.人17.9kd蛋白与从基因组序列预测的cDNA比较增加一个新外显子,人甲状腺激素受体相互作用蛋白15的第5号外显子端具有2个-ag的接点.结论表明体内mRNA成熟过程中剪接方式呈现多样性及复杂性. 相似文献
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基因新异构体的剪接特征及其生物学意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨基因新异构体的剪接特征及生物学意义。方法 对人肾上腺组织cDNA文库作大规模DST分析及全长cDNA克隆。结果 发现7条由不同剪接方式形成的新的异构体,其中4个剪接特点不符合经典的gt-ag规律,且剪接方式多样,人类固醇5α还原酶跨越两个外显子,KIAA0971的异构体与KIAA0971比较,有两段缺失,且造成编码框架移动,均按gt-at方式。人17.9kd蛋白与从基因组序列预测的cDNA比较增加一个新外显子,人甲状腺素受体相互作用蛋白15的第5号外显子端具有2个-ag的接点。结论 表明体内mRNA成熟过程中剪接方式呈现多样性及复杂性。 相似文献
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王革玲 《湖北民族学院学报(医学版 )》2002,19(2):22-23
目的 观察米索前列醇(以下简称米索)对晚期足月妊娠引产的有效性。方法 选择有引产指征,无引产禁忌的单胎,无米索过敏及胎膜完整的足月孕妇96例,随机分为A组48人(阴道放置米索25μg),B组48人(催产素静脉点滴),观察两组孕妇临产发动平均时间,平均总产程,剖宫产率。结果 米索组产妇的临产发动平均时间,平均总产程和剖宫产率均较催产素短,两者差异显著(P<0.05),而产后出血及新生儿窒息发生率则无明显差异(P>0.05)。结论:米索阴道放置用药是足月妊娠引产有效而安全的方法。 相似文献
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介绍ProQuest Medical Library 全文数据库及检索系统功能。 相似文献
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0 引言 建立 c DNA文库并从中筛选出目的基因是一种十分有效的寻找未知基因的手段 . c DNA文库的构建过程可粗分为总 RNA的提取 ,m RNA的纯化 ,c DNA的合成以及将c DNA克隆入载体等几个主要步骤 ,其中 c DNA的合成是其中最复杂也是文库建立成败的关键步骤 .我们在建立肝癌细胞 c DNA文库时经历了多次 c DNA的合成过程 ,对其中的某些条件作了比较研究 ,得到了一些有益的经验 .1 材料和方法1.1 材料 合成 c DNA所用 m RNA是从肝癌细胞系 HHCC提取 ;禽源反转录酶 AMV系 Promega公司产品 ;基因工程反转录酶 Expand TMRev… 相似文献
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目的探讨妊娠足月剖宫产仰卧位综合症的发病及防治。方法 2012年10月至2013年10月妊娠足月行剖宫产结束分娩的354例产妇,其中出现仰卧位低血压综合征22例,分析孕妇年龄、麻醉方式、剖宫产平卧时间、体位对足月孕妇发生仰卧位低血压综合征的影响。结果妊娠足月行剖宫产结束分娩的354例产妇,发生仰卧位低血压综合征的有22例,初产妇13例(占59.1%),经产妇(包括二次剖宫产患者)9例(占40.9%)。接受腰硬联合麻醉的是3例(占13.6%),接受硬膜外麻醉的是19例(占86.4%)。5例发生在麻醉前(占22.7%),17例发生于麻醉后待麻醉奏效期间(占77.3%)。结论妊娠足月剖宫产期间仰卧时间长、平卧位、硬膜外麻醉易引起妊娠足月剖宫产仰卧位低血压综合征。 相似文献
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本文对138例12~31周正常胎儿的顶臀长及阑尾长度进行测量,发现二者间存在着正相关关系。将测得的原始数据进行处理后,求出由阑尾长推算顶臀长的回归方程为:顶臀长估计值=80.55+4.31x(阑尾长)。 相似文献
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用人肝细胞cDNA文库制备Dig-Fas探针 总被引:7,自引:1,他引:7
为探索SLE发生、发展与Fas表达的关系 ,本文采用降落PCR技术、分子克隆技术和Fas特异性引物 ,将从人肝细胞cDNA文库中扩增的FascDNA插入T -easyvector中 ,转染JM10 9,经耐药性和lacZ插入失活筛选 ,快速细胞裂解法、限制性内切酶酶切片段和PCR扩增试验分析鉴定 ,确证获阳性转化子。然后采用地高辛化学连接标记和查见方法 ,标记扩增、分离和纯化的FascDNA ,经斑点免疫实验证实获高滴度Dig -FascDNA探针 相似文献