苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达

目的：神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路。方法：以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞, MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测MYCN基因mRNA表达受抑制情况。结果：苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强。1.00 mg/mL作用72 h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%。结论：应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

荧光定量RT-PCR 检测神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA的表达

目的：MYCN基因表达对神经母细胞瘤的治疗及预后评估有指导意义,目前国内对于MYCN基因mRNA的定量检测未见报道,该研究拟采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ(SYBR GREEN Ⅰ) 实时检测的逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,检测神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞 MYCN基因mRNA的表达,并对其可行性及实用性进行研究,力争探索出微量瘤标本的MYCN基因mRNA定量检测的可行方法。方法：提取神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 细胞总RNA,采用SYBR GREEN I 实时检测的RT-PCR检测其MYCN基因mRNA的表达,并用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,将MYCN基因的mRNA拷贝数与GAPDH的拷贝数相除,结果为单细胞MYCN基因mRNA的表达水平。结果：反应标准曲线有良好的相关性( R2>0.99), PCR 产物特异, 神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达水平为17.4±1.2。结论：只要严格控制PCR 反应条件,SYBR GREEN Ⅰ定量RT-PCR 法可以作为一种良好的定量PCR方法对神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达进行检测,此方法为临床微量神经母细胞瘤瘤组织的MYCN基因mRNA的定量检测提供了可能。［中国当代儿科杂志,2007,9（1）：47-50］     

5-氮杂胞苷增强阿霉素对神经母细胞瘤细胞的抗瘤活性

目的：许多神经母细胞瘤细胞系及肿瘤组织标本中caspase-8表达缺失, caspase-8基因沉寂的主要原因是其启动子区域高度甲基化。该文探讨去甲基化药物5-氮杂胞苷对caspase-8表达及对化疗药阿霉素抗人神经母细胞瘤细胞作用的影响及其影响机制。方法：应用RT-PCR方法检测5-氮杂胞苷作用前后SH-SY5Y细胞中caspase-8 mRNＡ水平变化。MTT分析研究5-氮杂胞苷与化疗药阿霉素联合应用前后人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的存活率,以及加入caspase-8活性抑制剂后存活率的变化。结果：RT-PCR方法发现SH-SY5Y细胞株不表达caspase-8 mRNA, 5-氮杂胞苷作用3 d后可检测到 caspase-8 mRNA表达,5 d后表达较第3天增加; 5-氮杂胞苷与不同浓度阿霉素(0.05, 0.1, 0.25, 0.5 μg/mL)联合应用后SH-SY5Y细胞存活率为(77.61±7.30)%,（57.35±6.64）%,（46.25±4.46）%,（35.59±5.12）%,同一浓度单独应用阿霉素组细胞存活率为（94.89±4.15）%,（80.60±8.50）%,（64.48±4.92）%,（52.32±6.71）%,5-氮杂胞苷与阿霉素联用组细胞存活率明显低于单用阿霉素组,差异均有显著性。Caspase-8抑制剂组与同一浓度的5-氮杂胞苷+阿霉素组比较,细胞存活率明显增加,依次为（92.95±3.48）%,（78.39±4.28）%,（62.31±6.50）%,（49.92±5.77）%,差异均有显著性。结论：阿霉素对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y具有增殖抑制作用,5-氮杂胞苷可以增强阿霉素的抗瘤活性。其发生机制可能是通过上调caspase-8 mRNA的表达而实现的。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：577-579］     

Foxp3在神经母细胞瘤LA-N-6细胞的表达及化疗药物对其影响

目的：研究神经母细胞瘤细胞是否表达免疫逃逸相关分子Foxp3及其对化疗药物的敏感性。方法：体外培养神经母细胞瘤细胞株LA-N-6;MTT试验明确化疗药物环磷酰胺（CTX）、盐酸吡柔比星(THP)对LA-N-6的效应剂量,流式细胞术(FACS)及实时定量PCR（RT-PCR）测定Foxp3在LA-N-6中的表达和CTX、THP对LA-N-6中Foxp3表达的影响。结果：FACS结果显示LA-N-6细胞高表达Foxp3,加入 CTX、THP后显著降低了LA-N-6上Foxp3的表达（P<0.05）;RT-PCR显示CTX显著降低了LA-N-6细胞中Foxp3的表达（P<0.05）,THP加药组与对照组比较差异无统计学意义。结论：肿瘤逃逸相关转录因子Foxp3高表达于神经母细胞瘤细胞LA-N-6;CTX、THP能分别在蛋白或基因水平降低Foxp3分子在LA-N-6的表达,提示CTX、THP可能通过抑制Foxp3分子的表达而抗肿瘤的作用。 ［中国当代儿科杂志,2010,12（5）：386-389］     

Livin反义寡核苷酸对K562细胞增殖、凋亡和耐药的影响

目的 探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡和耐药的影响.方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体(Lip)介导转染K562细胞,实验分为Lip-ASODN组、Lip-MSODN组、Lip对照组和细胞对照组4组,采用反转录-PCR法检测Livin mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法与膜联蛋白V异硫氰酸荧光素法检测Livin ASODN与K562细胞增殖、凋亡及与高三尖杉酯碱(HHT)耐药的关系.结果 Livin ASODN可显著抑制K562细胞增殖(P<0.01),且作用具有时间和浓度依赖性.终浓度为600 nmol·L-1的Lip-ASODN能明显降低Livin mRNA表达,细胞凋亡率达(36.89±1.08)% (P<0.01),而Lip-MSODN组、Lip对照组与细胞对照组之间差异均无统计学意义(Pa>0.05).Livin ASODN可增加K562细胞对HHT的耐药性,半数抑制质量浓度为(0.37±0.02)mg·L-1;与HHT及小剂量阿糖胞苷联合应用可显著抑制细胞增殖(P<0.01).结论 Livin ASODN可下调Livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,增加K562细胞凋亡及其对HHT的敏感性.     

RNA干扰抑制神经母细胞瘤细胞MYCN基因的初步研究

目的对RNA干扰抑制神经母细胞瘤细胞（LAN-5）MYCN基因表达进行初步研究。方法体外化学合成针对MYCN基因的小干扰RNA（siRNA），经脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染神经母细胞瘤细胞，以无关siRNA和未转染的细胞为对照，采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测siRNA的抑制效果。结果脂质体转染siRNA效率可达84.83％，化学合成的siRNA可抑制神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA表达，转染72h后抑制率达58．3％。结论化学合成的siRNA可以有效抑制神经母细胞瘤MYCN基因的表达，为神经母细胞瘤基因治疗开辟了新的途径。     

Apollon反义寡核苷酸对K562细胞增殖、凋亡和耐药的影响

目的 探讨Apollon反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡及耐药的影响.方法 设计合成特异性的Apollon硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(missense oligonucleotide,MSODN),脂质体介导转染K562细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测K562细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞的凋亡,并用MTT法检测K562细胞对依托泊苷、长春新碱及联合用ASODN的耐药性.结果 Apollon ASODN对K562细胞的生长抑制作用随浓度和时间增加而增加.Apollon ASODN在终浓度为600nmoL/L作用K562细胞时,能明显抑制其增殖,K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),联合用药组对细胞的半数抑制浓度低于单药组.结论 Apollon ASODN可下调Apollon基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞的凋亡,Apollon ASODN与依托泊苷和长春新碱联合作用可降低细胞生存率,降低细胞耐药性.     

脂质体介导S100A4基因反义寡核苷酸对神经母细胞瘤细胞的作用效率及其稳定性的研究

目的：S100A4基因在神经母细胞瘤早期转移中发挥重要作用。该研究以脂质体介导S100A4基因反义寡核苷酸转染体外培养的神经母细胞瘤细胞,观察其作用效率及稳定性。方法：以脂质体包裹5’端带有FAM荧光标记的S100A4基因反义寡核苷酸转染体外培养的神经母细胞瘤细胞,用无脂质体包裹的反义寡核苷酸为对照,在激光共聚焦显微镜下观察荧光强度变化、作用效率及存留时间。结果：经脂质体介导的S100A4基因反义寡核苷酸可以高效进入神经母细胞瘤细胞,荧光强度转染后8 h达最高值173,24 h后仍高达135,作用效率达68%,稳定表达72 h以上;无脂质体包裹的反义寡核苷酸荧光强度在转染后6 h达最高值90,作用效率35%,稳定表达仅12 h。结论：脂质体介导的S100A4基因反义寡核苷酸作用于神经母细胞瘤细胞效率高、时间持久,值得在神经母细胞瘤基因治疗中进一步探讨。     

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察Survivin基因反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法靶向Survivin基因的反义寡核苷酸经脂质体介导转染骨肉瘤MG63细胞系，倒置显微镜观察转染后细胞形态学变化、半定量RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达，噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况，吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。结果转染反义寡核苷酸后，MG63细胞中Survivin基因mRNA水平表达显著下降；细胞增殖受到显著抑制，抑制率达61％；倒置显微镜显示细胞变圆，漂浮细胞增多；吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变。结论Survivin基因的反义寡核苷酸可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。     

熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响

目的实验研究熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株（SH—SY-5Y）,对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响,探讨熊果酸对儿童神经母细胞瘤的治疗的作用。方法以终浓度为4uM／L、8uM／L、12uM／L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH—SY-5Y,WST-1法检测SH—SY-5Y细胞增殖情况,流式细胞术检测SH—SY-5Y细胞凋亡情况,采用RealtimePCR方法检测MYCNmRNA的表达情况。结果熊果酸对SH—SY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强;熊果酸对SHSY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性,随剂量的增加,促进凋亡效果逐渐加强;熊果酸对SH—SY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性,随剂量的增加,抑制效果逐渐加强。12uM／L作用72h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98．3％,MYCN基因mRNA表达抑制率达52．37％。结论应用熊果酸在体外环境作用SH—SY-5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCNmRNA的表达。     

血管内皮生长因子小分子干扰RNA体外实验对缺氧视网膜微血管内皮细胞的影响

目的 探讨血管内皮生长因子小分子干扰RNA(VEGFsiRNA)体外实验对缺氧视网膜微血管内皮细胞(RMECs)的影响.方法 原代培养未足月胎儿的视网膜微血管内皮细胞,用氯化钴模拟缺氧生长状态.设计、合成VEGFsiRNA并转染缺氧培养的细胞,分为VEGFsiRNA转染组(实验组)、缺氧组(空白对照组)和阴性siRNA转染组(阴性对照组),用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后VEGF表达的变化,噻唑蓝比色法(MTT法)观察细胞的生长增殖情况.结果 转染VEGFsiRNA-脂质体复合物后24 h、48 h、72 h,hRMECs VEGFmRNA表达水平较对照组分别下降21.05%、79.67%和90.48%.hRMECs VEGF蛋白的表达水平较对照组分别下降14.58%、66.97%和81.61%.转染后12 h、24 h、48 h及72 h hRMEC8的增殖分别被抑制达15.0%、42.9%、78.3%和65.9%.结论 VEGFsiRNA能下调未足月胎儿缺氧视网膜微血管内皮细胞VEGF的表达,抑制视网膜微血管内皮细胞增殖,是基因治疗早产儿视网膜病变的一个研究方向.     

胰高血糖素样肽-2对小鼠肠黏膜干细胞LGR5表达的影响及对肠道黏膜的保护作用

目的 研究LGR5肠道干细胞在内毒素血症肠黏膜损伤修复中的作用,是否可以通过调节干细胞的增殖分化来促进肠黏膜的修复.方法 21日龄健康Wistar幼鼠,随机分成对照组、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组和胰高血糖素样肽-2（glucagon-like peptides 2,GLP-2）组.LPS组及GLP-2组腹腔注射LPS 5 mg/kg,GLP-2组腹腔注射LPS 1 h后腹腔注射GLP-2 250 μg/kg;对照组腹腔注射生理盐水1 ml/kg;在LPS注射后6h、24 h及72 h取末端回肠.光镜及电镜观察各组回肠上皮结构改变,免疫组织化学、RT-PCR方法检测肠道干细胞标记物LGR5的表达.结果 LPS注射后6h,LPS组及GLP-2组大体可见肠管充血、水肿.光镜下可见绒毛断裂、倒伏,炎性细胞浸润,腔内可见渗出液,24h及72h LPS组及GLP-2组肠黏膜损伤逐渐修复,绒毛逐渐生长,GLP-2组较LPS组修复明显,72h GLP-2组上皮基本恢复正常.免疫组织化学可见LGR5抗体标记在隐窝内,LPS组及GLP-2组在绒毛底部及绒毛处可见LGR5抗体标记,GLP-2组表达多于LPS组.RT-PCR检测,LPS组LGR5 mRNA表达6 h（0.13±0.05）、24h（0.16±0.05）、72 h（0.16±0.04）均明显高于对照组（0.12 ±0.03）,差异均有统计学意义（P均＜0.05）;GLP-2组LGR5 mRNA表达6h（0.52±0.09）、24 h（0.73 ±0.14）、72 h（0.48 ±0.24）,明显高于LPS组,差异均有统计学意义（P均＜0.05）.结论 内毒素血症肠上皮黏膜炎症损伤后,肠上皮干细胞增殖分化,可能参与修复炎症损伤后的肠黏膜;外源性给予GLP-2可促进内毒素血症肠黏膜损伤的修复.     

反义Survivin对血管瘤内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨脂质体转染Survivin反义寡核苷酸(ASODN)对体外培养的增生期血管瘤内皮细胞增殖、凋亡的影响.方法 人工合成Survivin ASODN,通过脂质体转染到体外培养的增生期血管瘤内皮细胞,光镜和倒置相差显微镜观察转染后细胞形态变化;用四氮唑盐(MTT)法观察转染后48 h不同浓度Survivin ASODN对细胞生长抑制的影响;RT-PCR、Western-blot及免疫组化法检测转染后内皮细胞Survivin mRNA水平、蛋白水平表达及Caspase-3蛋白表达.结果 不同浓度的Survivin ASODN作用后内皮细胞多数变圆、变小、脱落,胞膜皱褶、卷曲,细胞核固缩、碎裂,核被染成深蓝色或蓝黑色,以600 nmol/L作用72 h改变最明显.细胞生长受到明显抑制,600 nmol/LSurvivin ASODN时细胞生长抑制率最高,可达70.5%.与对照组相比,实验组Survivin mRNA、蛋白水平表达均明显下调,Caspase-3蛋白表达明显上调.结论 在体外RNA干扰靶向抑制Survivin基因可以显著抑制增生期血管瘤内皮细胞增殖,促进细胞凋亡;Survivin可能是控制血管瘤内皮细胞增殖或凋亡的关键基因之一.

Abstract：

Objective To evaluate the effects of survivin on cell proliferation and apoptosis in proliferative hemangioma endothelial cells. Methods Hemangioma endothelial cells were cultured in vitro and transfected with Survivin antisense oligonucleotides. The morphological changes were assessed with light microscopy and inverted phase contrast microscopy and electron microscopy. MTT assay was carried out to determine cell proliferation in proliferative hemangioma endothelial cells treated with antisense compounds. By using RT-PCR and Western blot, the expression levels of survivin mRNA and proteins were quantified. Active caspase-3 was evaluated by immunohistochemistry. Results Some morphological changes (e. g. round endothelial cells, reduced cell volume, folded cell membrane and condensed nuclei ) were revealed after transfection with increasing concentration of survivin ASODN, and these changes were most significant at the dose of 600nM at 72 hours. Endothelial cell growth was suppressed at the concentration of 600nmol/L Survivin ASODN. Survivin mRNA, protein were down-regulated significantly and Caspase-3 was up-regulated significantly in the experimental groups. Conclusions Down-regulation of survivin expression induced by the antisense compounds reduces cell growth potential, promotes apoptosis in proliferative hemangioma endothelial cells. Survivin protein is a key molecule associated with proliferation and apoptosis,and antisense oligonucleotides targeting survivin could be used as a potential therapy of proliferative hemangioma.     

S100A4反义核酸抑制神经母细胞瘤细胞侵袭的作用

目的　探讨S10 0A4基因在神经母细胞瘤 (NB)细胞侵袭和转移中的作用及其可能机制。方法　将S10 0A4反义核酸转染NB细胞系LA N 6,RT PCR检测S10 0A4、基质金属蛋白酸 (MMP 2 )mRNA水平 ,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。结果　转染反义核酸的LA N 6细胞S10 0A4、MMP 2mRNA表达与对照组相比 ,分别下调 3 5.6%和 2 5.5% ,趋化和侵袭细胞数较对照组明显减少 (P均 <0 .0 5)。结论　反义封闭S10 0A4基因可抑制LA N 6细胞迁移和侵袭力 ,伴MMP 2mRNA表达减低 ,因此 ,S10 0A4基因在NB侵袭转移过程中发挥作用 ;其作用机制可能与增加瘤细胞运动能力 ,调节MMP 2表达有关     

紫外线在低氧条件下对急性早幼粒白血病细胞增殖的影响及机制研究

目的 观察280 nm波长紫外发光二极管照射在低氧条件下对急性早幼粒白血病细胞（HL-60）增殖的影响,并探讨发生机制。方法 取对数生长期的HL-60细胞为研究对象,分为对照组、低氧组、紫外线组及低氧+紫外线组。低氧组给予氯化钴（终浓度150 μmol/L）处理,紫外线组用30 J/m²能量的280 nm波长紫外发光二极管照射,低氧+紫外线组在氯化钴处理基础上用30 J/m²能量的280 nm波长紫外发光二极管照射,48 h后收集细胞于倒置显微镜下观察细胞形态变化。采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Annexin-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测Bcl-2基因mRNA的表达量。上述各实验均独立重复3次。结果 与对照组相比,各实验组细胞皱缩、透亮度降低、排列紊乱,随着培养时间延长,细胞数量减少。各组细胞增殖抑制率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P < 0.01）,其中低氧组+紫外线组细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用最强,紫外线组次之,低氧组最弱。与对照组比较,低氧组、紫外线组及低氧+紫外线组Bcl-2 mRNA的表达逐渐下调,且低氧+紫外线组Bcl-2 mRNA表达量较低氧组和紫外线组下调更明显（P < 0.05）。结论 低氧和紫外线作用均可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,紫外线在低氧条件下对细胞的增殖抑制及凋亡作用较常氧条件下更明显,其机制可能与Bcl-2基因表达下调有关。     

亚低温对脓毒症大鼠肝肺组织的保护作用

目的 测定亚低温（MHT）情况下脓毒症大鼠肝组织能量代谢和肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达的变化, 并结合肝细胞和肺组织超微结构的改变，初步探讨MHT能否减轻脓毒症大鼠组织损伤的程度。方法 24只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组) 、内毒素组(LPS组) 和MHT组 ,应用高效液相色谱法及生化法分别测定各组肝组织腺嘌呤核苷酸及乳酸水平，应用RT PCR方法分别测定各组肺组织TNF α mRNA表达变化，并在透射电镜下观察肝细胞、肺组织超微结构的变化。结果 LPS组大鼠肝组织（湿重）腺苷酸水平为ATP (4.093±0.424) μmol·g-1,ADP （1.331±0.136）μmol·g-1 ,AMP （1.331±0.312)μmol·g-1；MHT组大鼠肝组织（湿重）腺苷酸水平为ATP（.519±0.028）μmol·g-1,ADP(1.483±0.108)μmol·g-1,AMP(1.544±0.301)μmol·g-1；LPS组和MHT组均较NC组腺苷酸水平ATP (4.990±0.455)μmol·g-1, ADP(1.632±0.181)μmol·g-1,AMP (1.737±0.407)μmol·g-1降低, 尤以LPS组明显。MHT组肝组织腺苷酸水平较LPS组明显升高；MHT组肝乳酸含量为每克蛋白(1.424±0.213)mmol，明显低于LPS组的每克蛋白（1.676±0.267）mmol（P<0.05）,而与NC组差异无统计学意义［vs 每克蛋白（1.379±0.314） mmol,P>0.05］。LPS组大鼠肺组织TNF-α mRNA 1、2和3 h表达分别为（1.029±0.055）、（1.132±0.068）和（1.107±0.044）；MHT组大鼠肺组织相应时点TNF-α mRNA表达分别为（0.835±0.041）、（1.056±0.037）和（1.056±0.032），均较NC组肺组织相应各时点TNF-α mRNA 表达(0.625±0.009，0.631±0.007，0.612±0.011)明显增加（P<0.05）,尤以LPS组明显。MHT组肺组织TNF-α mRNA较LPS组表达明显减少（P<0.05）。透射电镜下可见MHT组肝细胞及肺组织超微结构损伤明显轻于LPS组。结论 可减缓脓毒症大鼠肝组织能量的消耗，减轻肝组织损伤，还可减少脓毒症大鼠肺组织TNF-α mRNA的表达，减轻肺组织炎性损伤，MHT可作为防治脓毒症的一种新方法。     

儿童晚期神经母细胞瘤自身造血干细胞移植疗效评估

目目的评价自身造血干细胞移植（ASCT）和CD34+细胞分选的ASCT对晚期神经母细胞瘤（NB）的疗效。方法回顾性分析2001年6月至2007年4月 在上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心诊断为Ⅲ、Ⅳ期NB并完成治疗随访8个月以上患儿的临床资料,比较传统化疗与ASCT和CD34＋细胞 未分选移植与分选移植的疗效。用荧光定量PCR方法检测CD34+细胞分选前后酪氨酸羟化酶（TH）mRNA表达,监测NB的微小残留（MRD）,并评估 分选效果。结果55例NB患儿入组,其中Ⅲ期14例,Ⅳ期41例。Ⅲ期中的9/14例和Ⅳ期中的18/41例接受传统化疗;Ⅲ期中的5/14例和Ⅳ期中的 23/41例接受ASCT。Ⅳ期13/23例接受ASCT治疗患儿移植物经CliniMACS行CD34＋细胞分选处理。所有移植患儿均以卡铂、依托泊苷和美法仑行预 处理,平均采得有核细胞（7.1±2.5）×108·kg-1 ,CD34+细胞（4.0±1.5）×106·kg-1,无一例因移植相关并发症死亡。随访患儿的生存 时间及复发率：①Ⅲ期NB：化疗组平均随访33.5个月,3/9例（33％）复发;移植组平均随访37.0个月,1/5例（20％）复发,两组的中位无病 生存时间差异无统计学意义,(37.0±15.7)个月 vs (18.0±29.9)个月,P=0.446。②Ⅳ期NB：化疗组平均随访20个月,13/18例（72％）复发 ;移植组平均随访29个月,14/23例（61％）复发,两组的中位无病生存时间差异有统计学意义,（24.0±5.4)个月 vs (36.0±2.8)个月, P=0.006。③CD34＋细胞分选移植：未分选组平均随访27.8个月, 7/10例（70％）复发;CD34＋细胞分选组平均随访30.0个月,7/13例（54％） 复发,两组的中位无病生存时间差异无统计学意义,（34.0±11.8）个月 vs （36.0±5.1）个月,P=0.722。4例移植患儿CD34+细胞分选前后 的标本同时进行TH MRD检测,结果显示移植前TH阳性的2例标本经分选后全部转阴。结论ASCT能显著延长Ⅳ期NB患儿的长期生存时间,但对Ⅲ期 NB患儿的疗效不显著。CD34＋细胞分选能达到纯化NB细胞的作用,但可能因病例数较少,尚不能显示出ASCT临床优势。